Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
W artykule zbadano wpływ muskonu, głównego składnika piżma, na proliferację i apoptozę komórek Schwanna. Wyniki wstępnie ilustrują potencjalny mechanizm zmniejszania aktywności szlaku NF-κB przez piżmo poprzez hamowanie IL-1R1 w celu osłabienia uszkodzeń spowodowanych stresem oksydacyjnym w porażeniu Bella.
Podstawowy mechanizm leczenia porażenia Bella przez naturalne piżmo nie jest jasny. Badanie to ma na celu ujawnienie potencjalnego mechanizmu działania piżma w leczeniu uszkodzeń nerwów obwodowych in vitro. Aby to osiągnąć, stworzono model uszkodzenia spowodowanego stresem oksydacyjnym w komórkach Schwanna (SC) przy użyciu chlorku kobaltu (CoCl2). Aby ocenić ochronne działanie Muscone (Mus) na to uszkodzenie i zbadać jego mechanizm, zastosowano testy żywotności komórek, transfekcję siRNA, testy immunoenzymatyczne (ELISA), ilościową reakcję łańcuchową polimerazy z odwrotną transkrypcją (qRT-PCR), western blotting, barwienie immunofluorescencyjne i analizę ultrastrukturalną komórek. W rezultacie wskazuje się, że interwencja Mus zwiększyła proliferację SC i mRNA S-100b w warunkach niedotlenienia, jednocześnie redukując reaktywne formy tlenu (ROS) i podnosząc poziom dysmutazy ponadtlenkowej (SOD). Mus łagodził stres oksydacyjny i stan zapalny w niedotlenionych SC poprzez redukcję IL-1β i TNF-α. Ponadto Mus modulował kluczowe wskaźniki zaangażowane w metabolizm tlenu, naprawę komórek i neurometabolizm, w tym C-JUN i GDNF. IL-1R1, zlokalizowana na błonie SC, była regulowana w górę przez niedotlenienie, ale znacznie obniżona po interwencji Mus. Mus hamował również ekspresję składników szlaku NF-κB (IRAK1, IKK, p65, p50) i zwiększał IκB-α. Co najważniejsze, zniesienie ekspresji IL-1R1 poprzez knockdown siRNA wykazało spójny efekt z Mus. Stwierdzono, że poprzez tłumienie IL-1R1, Mus osłabiał stan zapalny w niedotlenionych SC poprzez hamowanie szlaku NF-κB. Badanie to wykazało rolę IL-1R1 w dysfunkcji SC wywołanej niedotlenieniem. Co więcej, Mus może być potencjalnie skutecznym lekiem w leczeniu porażenia Bella.
Muscone (Mus), 3-metylocyklopentadekanon, został wyizolowany z naturalnego ekstraktu piżma jelenia już w 1906roku1. Piżmo, cenna i skuteczna tradycyjna medycyna chińska (TCM), ma rozległe działanie lecznicze, takie jak detumescencja, działanie przeciwzapalne, resuscytacja i wspomaganie krążenia krwi2. TCM zawierający piżmo jest stosowany w wielu powszechnych chorobach, w tym w chorobie ośrodkowego układu nerwowego3, detoksykacji4, nowotworach przewodu pokarmowego5, wirusowym zapaleniu wątroby6 i chorobie niedokrwiennej serca
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
To eksperymentalne badanie zostało przeprowadzone za zgodą Instytucjonalnego Komitetu ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt (numer zatwierdzenia: LL-240077).
Hodowla komórkowa i interwencja farmakologiczna
Szczurze komórki Schwanna (SC) hodowano w pożywce Schwanna Cell Balance, składającej się z podłoża podstawowego, 5% płodowej surowicy bydlęcej, 1% suplementu wzrostu komórek Schwanna, 1% penicyliny i 1% streptomycyny. Wszystkie komórki utrzymywano w atmosferze 5% CO2 w temperaturze 37 °C. Gdy pozwolono im dorastać do zagęszczenia 70-80%, SC podzielono na cztery grupy (n = 5 na grupę): (1) grupa NC; (2) Grupa N....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Ochronne działanie Mus na uszkodzenia komórek Schwanna spowodowane stresem oksydacyjnym in vitro
Ekspresja HIF-1α wykazywała zmiany w odpowiedzi na zmiany w warunkach niedotlenienia20. Aby modelować niedotlenienie, SC wystawiono na działanie CoCl2, który skutecznie wywołał niedotlenienie, co potwierdza podwyższony poziom białka HIF-1α, kanonicznego markera niedotlenienia, za pośrednictwem western blotting (Figura 2A
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Porażenie Bella to idiopatyczne porażenie obwodowych nerwów twarzowych charakteryzujące się jednostronnym osłabieniem twarzy. Osłonka mielinowa pełni różne kluczowe funkcje w efektywnym funkcjonowaniu neuronów23. Zapewnia sprawne przewodzenie impulsów nerwowych, wspiera neurony, dostarczając czynników odżywczych, a także wspomaga proces regeneracji24 . W związku z tym utrata mieliny w obwodowym układzie nerwowym może powodować neuropatie demielinizacyjne, które mogą powodow.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Autorzy oświadczają, że nie mają sprzecznych interesów.
Wszyscy autorzy pragną przekazać swoje podziękowania organom finansującym, którymi są Program Talentów Komisji Zdrowia Dystryktu Baoshan (Doskonali Liderzy Akademiccy) (BSWSYX-2024-02), Program Budżetu Wydatków Uniwersytetu Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Szanghaju (2021LK003), Program Doskonałej Młodzieży (Yucai) Komisji Zdrowia Dystryktu Baoshan (BSWSYC-2024-02) oraz Projekt Uprawy Klasy B w Głównych Dyscyplinach Medycznych i Charakterystycznych Markach, Komisja Zdrowia Dystryktu Baoshan w Szanghaju (BSZK-2023-BP07). Te organy finansujące nie odegrały żadnej roli w opracowaniu badania ani w podjęciu decyzji o złożeniu manuskryptu do publikacji.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| 0,25% roztwór do trawienia trypsyny (bez EDTA) | Serwis bio | Klasa g4002 | |
| 10x TBS | Eubiotechnologia | Zobacz materiał BF0153 | |
| 10-180 KDPrebarwiany marker białkowy koloru | Eubiotechnologia | Zobacz materiał P0069 | |
| 5% odtłuszczonego mleka w proszku | Beyotime Biotechnology, Chiny | P0216-300g | |
| przeciwciało anty-C-JUN | Sygnalizacja komórkowa, USA | #9165T | |
| przeciwciało anty-GAPDH | abcam, Wielka Brytania | ab245355 powiedział: | |
| przeciwciało anty-GDNF | Sygnalizacja komórkowa, USA | #47808 | |
| anty-HIF-1 i alfa; przeciwciało | Sygnalizacja komórkowa, USA | #14179 | |
| przeciwciało anty-IKK | Sygnalizacja komórkowa, USA | #2682 | |
| przeciwciało anty-IL-1R1 | Sygnalizacja komórkowa, USA | #6775 | dla balansu bieli |
| przeciwciało anty-IL-1R1 | Technologia białkowa | 84094-6-RR | do immunofluorescencji |
| przeciwciało anty-IRAK1 | Sygnalizacja komórkowa, USA | #4395 | |
| anty-Iκ B-&alfa; przeciwciało | Sygnalizacja komórkowa, USA | #8943 | |
| Przeciwciało anty-P50 | abcam, Wielka Brytania | ab305263 powiedział: | |
| Przeciwciało anty-P65 | abcam, Wielka Brytania | ab16502 powiedział: | |
| przeciwciała przeciw szczurom IL-1R1 mAb | Beyotime Biotechnology, Chiny | AF7212 powiedział: | |
| przeciwciało anty-β-aktyny | Biblioteka ABCAM | ab179467 powiedział: | |
| Zestaw do oznaczania ilościowego białka BCA | Eubiotechnologia | WB2123 powiedział: | |
| Odczynnik do liczenia komórek Set-8 (CCK-8) | Beyotime Biotechnology, Chiny | Zobacz materiał C0048M | |
| Chlorek kobaltu (CoCl2) | Macklin, Chińska Republika Ludowa | C804815 | |
| Gwiazda EuECL | Eubiotechnologia | WB2131 powiedział: | |
| Surowica płodowa bydlęca (FBS) | Bergolin, Chiny | PWL001 | |
| Kozia igG przeciw królikom znakowana Fitc | Serwis bio | GB22303 | |
| Mikroskop fluorescencyjny | Nikon | ||
| Odczynnik do transfekcji hieff Trans in vitro siRNA/miRNA | YEASEN, Chińska Republika Ludowa | Numer katalogowy 40806ES01 | |
| Przeciwciała drugorzędowe sprzężone z peroksydazą chrzanową (HRP) Kozia IgG znakowana Hrp | Servicebio, Chińska Republika Ludowa | GB23301 | |
| Zestaw IL-1β, TNF-α, ROS i SOD ELISA | BOSTER, Chińska Republika Ludowa | BES1762K, BES0481K, BES5018K, BES2920K | |
| Stożek (Mus) | Aladyn, Chińska Republika Ludowa | M141496 | |
| Bufor PBS | Serwis bio | Zobacz materiał G4202 | |
| Roztwór penicyliny i streptomycyny, 100x | Komórka Procell | PB180120 | |
| Membrany z polifluorku winylidenu (PVDF) | Millipore, Stany Zjednoczone Ameryki | IPFL00010 | |
| Komórki Schwanna szczura (SC) | Procell Nauki przyrodnicze & Technologia Chiny | CM-M111 | |
| Bufor do lizy RIPA | Eubiotechnologia | WB2116 powiedział: | |
| Pożywka komórkowa Schwanna | ScienCell, Stany Zjednoczone | 1701 | |
| Bufor ładowania SDS-PAGE | Beyotime Biotechnology, Chiny | Zobacz materiał P0015 | |
| SDS-PAGE Białko l Bufor ładujący, 5x | Eubiotechnologia | WB2122 powiedział: | |
| si-IL-1R1 | Gen uniwersalny | RX0114371 | |
| Elektroforeza w żelu poliakryloamidowym dodecylosiarczanu sodu (SDS-PAGE) Zestaw przygotowawczy | Eubiotechnologia | WB2118 powiedział: | |
| Mieszanka SYBR qPCR | Beyotime Biotechnology, Chiny | Zobacz materiał D7260 | |
| Zestaw do ekstrakcji białka całkowitego | Beyotime Biotechnology, Chiny | Zobacz materiał PP123-01 | |
| Transmisyjny mikroskop elektronowy | Hitachi | HT7800 | |
| Trizol | Beyotime Biotechnology, Chiny | Czynnik R0011 | |
| Tween-20 (Kanał Telewizyjny) | Eubiotechnologia | WB2114 powiedział: | |
| Rozpuszczalne w wodzie środki montażowe | Absin, Chiny | ABS9240 powiedział: | |
| Zachodni bufor transferowy | Eubiotechnologia | WB2129 powiedział: |
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.