Artykuł badawczy

Poprawa progresji eksperymentalnego zapalenia przyzębia za pośrednictwem CD44 u myszy z osteoporozą za pomocą glicyteiny

DOI:

10.3791/69067

⸱

24 października 2025

 ,  ,  ,  , 
1The First School of Clinical Medicine, Lanzhou University, 2School of Stomatology Lanzhou University, 3Stomatology Center of Gansu Provincial Hospital, 4Department of Endocrinology, Gansu Provincial Hospital

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

CD44 ułatwia patogenezę choroby poprzez koordynację kaskad zapalnych i różnicowanie osteoklastów poprzez aktywację szlaku PI3K/Akt. Glicyteina wywiera działanie terapeutyczne na objawy osteoporozy współistniejącej (OP) + zapalenia przyzębia (PD) poprzez ukierunkowane tłumienie sygnalizacji za pośrednictwem CD44.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Badanie to wyjaśnia krytyczne determinanty molekularne związane ze współwystępowaniem osteoporozy (OP) i zapalenia przyzębia (PD) poprzez profilowanie proteomiczne, jednocześnie określając funkcję regulacyjną CD44 w eksperymentalnym zapaleniu przyzębia w mysim modelu OP. Faza I polegała na pobraniu próbek surowicy od pacjentów z OP+PD (n = 3) i zdrowych osób z grupy kontrolnej (n = 6) poddawanych rutynowym ocenom stanu zdrowia w naszej instytucji w celu porównawczej analizy proteomicznej. Późniejszą walidację translacyjną genów o zróżnicowanej ekspresji (DEG) i związanych z nimi kaskad sygnalizacyjnych przeprowadzono na próbkach klinicznych i mysich modelach OP+PD. Aby mechanistycznie scharakteryzować rolę CD44 w progresji choroby Parkinsona w warunkach osteoporotycznych, wygenerowano mysi model OP poprzez obustronną owariektomię, a następnie eksperymentalną indukcję PD poprzez umieszczenie ligatury. Kompleksowa ocena obejmowała zmiany histomorfometryczne poprzez barwienie hematoksyliną-eozyną, analizę mikroarchitektoniczną kości w okolicy pierwszych zębów trzonowych szczęki za pomocą mikrotomografii komputerowej oraz ocenę immunologiczną składników szlaku fosfoinozytolo-3-kinazy (PI3K)/Akt. Przeprowadzono równoległe sieciowe badania farmakologiczne w połączeniu z symulacjami dokowania molekularnego w celu zidentyfikowania bioaktywnych składników Angelica sinensis o potencjale terapeutycznym. Badanie proteomiczne zidentyfikowało CST3, A2M, CD44, CDH13, CETP i VWF jako kandydatów na mediatory patogenne w patogenezie OP + PD. W naszych rękach analiza wzbogacenia zestawu genów wykazała, że sygnalizacja PI3K/Akt działa jako główny mediator progresji choroby OP + PD. Ilościowa walidacja PCR z odwrotną transkrypcją potwierdziła znaczącą regulację w górę CD44 zarówno w klinicznych, jak i eksperymentalnych kohortach OP+PD. Modulacja in vivo poprzez supresję CD44 znacząco przywróciła integralność tkanek przyzębia, zmniejszyła naciek komórek zapalnych i wzmocniła mikroarchitekturę kości wyrostka zębodołowego u myszy OP, przy jednoczesnym hamowaniu szlaku PI3K / Akt. Farmakologia sieciowa ujawniła, że glicyteina jest głównym bioaktywnym fitozwiązkiem w Angelica sinensis, a CD44 został zidentyfikowany jako jej centralny cel molekularny. Glicyteina poprawiła strukturę kości wyrostka zębodołowego u myszy OP + PD, zwiększając frakcję objętości kości (BV / TV), grubość beleczkowo (Tb.Th), gęstość mineralną kości (BMD) i zmniejszając liczbę beleczkową (Tb.N), stosunek powierzchni kości do objętości kości (BS / BV), co wskazuje na zdrowszą jakość kości, mechanistycznie przypisywaną tłumieniu osi sygnalizacyjnej CD44.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Zapalenie przyzębia (PD) jest złożoną, mieszaną chorobą mikrobiologiczną spowodowaną odkładaniem się patologicznych biofilmów w bruździe dziąsła1. Charakteryzuje się brakiem równowagi w środowisku mikroekologicznym, który wyzwala patologiczną kaskadę zapalną w organizmie gospodarza, ostatecznie prowadząc do nieodwracalnego, postępującego uszkodzenia cementu, więzadła przyzębia i kości wyrostka zębodołowego, które są składnikami układu przyczepu przyzębia. Może to spowodować rozchwianie zębów, a nawet ich utratę2. Ilość została ustandaryzowana w celu porównania, a najnowsze dane epidemiologiczne3 wskazują, że ponad 1,066 miliarda osób na całym świecie cierpi na ciężkie zapalenie przyzębia, z częstością występowania standaryzowaną według wieku wynoszącą około 12,5%, co podkreśla znaczne różnice w populacjach międzynarodowych.

Osteoporoza (OP), układowa choroba kości, charakteryzuje się znacznym pogorszeniem mikrostruktury kości i systematyczną utratą masy kostnej 4,5. Ryzyko złamań jest znacznie zwiększone przez to osłabienie strukturalne, zwłaszcza u osób starszych. Warto zauważyć, że osoby w wieku 65 lat i starsze w Japonii miały większą częstość występowania chorób przyzębia niż dorośli w wieku od 30 do 64 lat. Kobiety po menopauzie częściej zapadają na choroby przyzębia i często doświadczają innych problemów zdrowotnych 6,7. Badanie przewiduje, że w latach 2005-2025 obciążenie chorobami wzrośnie o ponad 50%, a koszty ekonomiczne mają wzrosnąć z 17 miliardów dolarów do 25 miliardów dolarów. Badanie przewiduje, że w latach 2005-2025 obciążenie chorobami wzrośnie o ponad 50%, a koszty ekonomiczne mają wzrosnąć z 17 miliardów dolarów do 25 miliardów dolarów. Tendencja ta podkreśla znaczący wpływ społeczno-ekonomiczny tych chorób przyzębia. Ponadto u pacjentek z chorobami przyzębia i zapaleniem dziąseł istnieje wyraźna dodatnia korelacja między czasem trwania choroby a jej przewlekłością a zwiększonym ryzykiem zdrowotnym8.

Wcześniejsze badania wykazały, że OP może sprzyjać rozwojowi PD i odwrotnie ze względu na wspólne czynniki ryzyka obu chorób, takie jak starzenie się, palenie tytoniu i niewystarczające spożycie wapnia i witaminy D. W populacji kobiet po menopauzie ciężkiemu OP może towarzyszyć zmniejszona zawartość minerałów w żuchwie, co może być związane z niedoborem poziomu przyczepu przyzębia9. Wykazano, że zmniejszona gęstość kości związana z OP może przyspieszać resorpcję kości wyrostka zębodołowego wywołaną przez PD, sprzyjając w ten sposób inwazji patogenów przyzębia10. Wśród szeregu wyzwań zdrowotnych związanych z wiekiem i zmianami fizjologicznymi, PD i OP są szczególnie widoczne w związku z przyspieszeniem starzenia się światowej populacji i znacznym wzrostem liczby kobiet w okresie menopauzy. W związku z tym wyjaśnienie odpowiednich wskaźników i ich powiązań ma kluczowe znaczenie dla zapobiegania chorobom, leczenia i oceny prognostycznej. Motywowani tymi aspektami, w badaniu tym wykorzystano proteomikę do badań przesiewowych kluczowych białek, z naciskiem na sygnalizację PI3K/Akt za pośrednictwem CD44, w rozwoju OP+PD, badając role regulacyjne i możliwe mechanizmy kluczowych białek przy użyciu eksperymentalnego modelu PD u myszy OP. Dalsze badania przesiewowe celowanych środków terapeutycznych obecnych w Angelica sinensis - tradycyjnym chińskim ziole leczniczym szeroko stosowanym w praktyce klinicznej ze względu na swoje właściwości przeciwzapalne i chroniące kości, a wcześniej zgłaszane jako łagodzące utratę masy kostnej i modulujące reakcje zapalne w osteoporozie i chorobach przyzębia. Kierując się farmakologią sieciową i dokowaniem molekularnym, glicyteina została zidentyfikowana jako główny bioaktywny fitochemiczny i racjonalny kandydat do interwencji OP+PD.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wszystkie doświadczenia na zwierzętach przeprowadzono zgodnie z instytucjonalnymi wytycznymi dotyczącymi opieki i wykorzystania zwierząt laboratoryjnych. Protokół badania został zweryfikowany i zatwierdzony przez Komisję Etyki Zwierząt. Dołożono wszelkich starań, aby zminimalizować cierpienie zwierząt.

Badanie to ma na celu ocenę roli regulacji szlaku PI3K/Akt za pośrednictwem CD44 w różnicowaniu osteoklastów i progresji stanu zapalnego podczas współistniejącej osteoporozy i zapalenia przyzębia (OP+PD) oraz określenie, czy glicyteina, bioaktywny związek z Angelica sinensis, może terapeutycznie modulować te efekty. Uzasadnienie wynika z pojawiających się dowodów łączących nadekspresję CD44 z patologiczną resorpcją kości i dysregulacją immunologiczną w OP+PD 11,12,13. Integrując proteomikę, modelowanie in vivo i farmakologię sieciową, protokół systematycznie bada mechanizmy molekularne i interwencje terapeutyczne w celu złagodzenia postępu choroby14.

Wielkość próby do eksperymentów in vivo została oparta na wcześniejszych badaniach i analizie mocy, w wyniku czego n = 6 na grupę, co zapewnia odpowiednią moc statystyczną do wykrycia istotnych różnic (P < 0,05) między warunkami leczenia. Glicyteinę podawano w dawkach 50 mg/kg i 100 mg/kg, zawieszoną w 5% DMSO w oliwie z oliwek i podawaną przez codzienny zgłębnik doustny. Myszy monitorowano przez 8 tygodni po indukcji PD. Założenie podwiązki w celu wywołania zapalenia przyzębia wykorzystywało nić jedwabną 5-0, a obustronną owariektomię wykonano w 0,3% znieczuleniu pentobarbitalem sodowym (0,5 ml / 100 g)15. Ponadto testy molekularne, w tym RT-qPCR, western blot i ELISA, przeprowadzono przy użyciu zwalidowanych protokołów16, a oceny histologiczne, takie jak barwienie hematoksyliną-eozyną (H&E) i błękitem metylenowym, przebiegały zgodnie z ustalonymi terminami i czasem trwania barwienia.

Wszystkie procedury eksperymentalne z udziałem odczynników chemicznych, środków barwiących i próbek biologicznych zostały przeprowadzone zgodnie ze standardowymi protokołami bezpieczeństwa biologicznego w celu zminimalizowania zagrożeń dla zdrowia. Z materiałami niebezpiecznymi, takimi jak formalina, EDTA, błękit metylenowy i kwaśna fuksyna, obchodzono się przy użyciu środków ochrony osobistej (PPE), w tym rękawiczek, masek i okularów ochronnych. Wszystkie materiały odpadowe, w tym zużyte odczynniki i skażone materiały jednorazowego użytku, zostały zebrane w wyznaczonych pojemnikach na zagrożenia biologiczne i zutylizowane przez certyfikowane firmy zajmujące się utylizacją odpadów niebezpiecznych zgodnie z wytycznymi dotyczącymi bezpieczeństwa instytucjonalnego i środowiskowego. Rysunek 1 przedstawia ogólny eksperymentalny przepływ pracy.

Gromadzenie danych klinicznych
W naszym badaniu systematycznie zbieraliśmy i kompleksowo analizowaliśmy wyjściowe dane kliniczne oraz szczegółowe historie medyczne trzech pacjentów z OP+PD i sześciu osób z grupy kontrolnej, w tym czynniki demograficzne i styl życia, a także profile anatomiczne i przerzutowe. Ponadto wykonano rygorystyczne potwierdzenie wyniku testu na zakażenie HPV (pozytywny lub negatywny). Szczegółowo rejestrowano stopień progresji lub wzrok nawrotu zmian przerzutowych. W ciągu pierwszych 7 dni immunoterapii próbki krwi pacjentów były systematycznie pobierane i standaryzowane, w tym wskaźniki biochemiczne, takie jak rutynowe badania krwi. Rutynowe badania krwi wykonywano w ścisłej zgodności ze standardowymi procedurami, aby dokładnie ocenić kluczowe parametry, takie jak płytki krwi, limfocyty i neutrofile. Albuminy w surowicy mierzono równolegle, a czynność wątroby oceniano za pomocą analizy ilościowej wskaźnika stężenia globulin.

Pacjentów
Ocena gęstości mineralnej kości i stratyfikacja uczestników
Przeprowadziliśmy systematyczne porównanie pomiarów gęstości kości w odcinku lędźwiowym i szyjce kości udowej. Wszystkie badania zostały wykonane przez doświadczonych radiologów na naszym oddziale, przy użyciu precyzyjnego sprzętu do dokładnego określenia wartości gęstości kości. Aby zapewnić standaryzowane pobieranie próbek, uczestnicy byli zobowiązani do poszczenia przez co najmniej 8 godzin przed pobraniem próbki. Integrując dane dotyczące gęstości kości z kompleksowymi danymi z oceny przyzębia, ściśle podzieliliśmy badanych na grupę osteoporozy z zapaleniem przyzębia (OP+PD) lub zdrową grupę kontrolną (HC), zapewniając, że stosunek płci był idealnie dopasowany między obiema grupami. Dopasowanie płci odnosi się do równego rozkładu samic między OP+PD a zdrowymi grupami kontrolnymi. Jednak tylko uczestniczki zostały włączone do tego badania, aby skupić się na osteoporozie pomenopauzalnej; W żadnej z grup nie było mężczyzn. Badanie było zgodne z wytycznymi etycznymi Deklaracji Helsińskiej, a wszyscy uczestnicy podpisali formalne formularze świadomej zgody, w pełni chroniąc swoje prawa.

Parametry diagnostyczne
Osteoporoza została zdefiniowana zgodnie z chińskimi wytycznymi dotyczącymi diagnozowania i leczenia osteoporozy pierwotnej (2022)17, z progami diagnostycznymi ustalonymi na poziomie T-score ≤ -2,5 odchylenia standardowego (SD) dla BMD odcinka lędźwiowego (L1-L4) lub biodra. Stopień zaawansowania zapalenia przyzębia był zgodny z klasyfikacją chorób przyzębiaŚwiatowych Warsztatów z 2018 r. 18, z włączeniem ograniczonym do przypadków stopnia A, stadium II-III. Kryteria włączenia: kobiety po menopauzie w wieku 50-65 lat, podwójne rozpoznanie OP i PD spełniające powyższe kryteria, brak zaburzeń autoimmunologicznych, brak historii nowotworów złośliwych, prawidłowa czynność krążeniowo-oddechowa, wątroby i nerek. Kryteria wyłączenia: Odrzucenie udziału przez pacjenta lub rodzinę, niedawna (≤6 miesięcy) farmakoterapia OP lub PD.

Profilowanie proteomiczne próbek surowicy
Próbki surowicy pobrano od trzech pacjentów z OP+PD i sześciu osób kontrolnych do analizy proteomicznej. Względną kwantyfikację białek osiągnięto za pomocą standardowych procedur, a białka o zróżnicowanej ekspresji zdefiniowano jako białka o P < 0,05 i krotnej zmianie > 1,519.

Analiza wzbogacenia zestawu genów (GSEA)
GSEA wykorzystano do identyfikacji kluczowych szlaków sygnałowych rozregulowanych między kohortami kontrolnymi a kohortami OP+PD. Surowe dane transkryptomiczne zostały najpierw przekształcone przy użyciu konwersji log2 i znormalizowane za pomocą normalizacji kwantylu w celu usunięcia efektów wsadowych. Zestawy genów o wielu funkcjach biologicznych zostały przebadane z bazy danych sygnatur molekularnych (MSigDB), a istotność statystyczna oceniono za pomocą nieparametrycznego testu sumy rang Wilcoxona. Wyniki wzbogacania przedstawiono przy użyciu znormalizowanych wyników wzbogacania i współczynników fałszywych odkryć (FDR < 0,25).

Ważona analiza sieci koekspresji genów (WGCNA)
WGCNA wykorzystano do identyfikacji modułów genów istotnie związanych z fenotypami OP+PD. Aby uzyskać bezskalową topologię sieci, wybrano moc miękkiego progu 12 (R2 > 0,85), a do oceny relacji między genami własnymi modułów a cechami klinicznymi wykorzystano analizę korelacji Pearsona. Przeprowadzono analizy wzbogacenia funkcjonalnego w celu odkrycia istotnych szlaków biologicznych w silnie skorelowanych modułach.

Opracowanie mysich modeli osteoporotycznych wywołanych owariektomią
W badaniu tym wzięło udział 116 samic myszy klasy SPF. Przed eksperymentami zwierzęta były trzymane w kontrolowanych warunkach temperatury i wilgotności przez 7-dniową fazę adaptacji, podczas której podawano im standaryzowaną karmę dla gryzoni i wodę destylowaną. Wszystkie procedury obchodzenia się ze zwierzętami ściśle przestrzegały protokołów etycznych zatwierdzonych przez Komitet Etyki Centrum Nauk o Zdrowiu Uniwersytetu Xi'an Jiaotong, pod numerem zatwierdzenia ID 0609. Badanie zostało zarejestrowane pod numerem projektu [2024-054].

Protokół chirurgiczny obustronnej wycięcia jajników (OVX):
Myszy znieczulono poprzez dootrzewnowe wstrzyknięcie 0,3% pentobarbitalu sodu (0,5 ml/100 g masy ciała). Sierść grzbietowa została poddana chirurgicznej depilacji, a zwierzęta umieszczono w pozycji leżącej grzbietowej na podgrzewanej, sterylnej platformie chirurgicznej. Po aseptycznym przygotowaniu z 75% etanolem wykonano obustronne nacięcia przykręgowe (1 cm bocznie od kręgosłupa) na poziomie poduszek tłuszczowych nerek. Kaletka jajnika została zeksteriorowana, a jajowód podwiązano proksymalnie do jajnika za pomocą jedwabnych szwów 5-0, a następnie wycięto obustronne jajniki, związaną tkankę tłuszczową i częściowe struktury jajowodowe. Warstwy mięśniowo-powięziowe i skórne zamykano kolejno szwami wchłanialnymi 4-0. Pooperacyjną antyseptykę wykonano z użyciem 75% etanolu.

Kontrole chirurgii pozorowanej:
Myszy operowane pozorami przeszły identyczne etapy zabiegu, w tym odsłonięcie jajników i resekcję tkanki tłuszczowej okołojajnikowej, bez wykorzeniania jajników.

Postępowanie pooperacyjne:
Odzyskanie postanestetyki było ułatwione za pomocą poduszek grzewczych z wodą obiegową, aż do pełnego poruszania się. Analgezja była utrzymywana poprzez podskórne podawanie karprofenu (5 mg/kg dziennie) przez 72 godziny po operacji, uzupełnione profilaktyczną penicyliną G (50 000 IU/kg) przez 48 godzin w celu zapobiegania zakażeniom miejsca operowanego. Masę ciała monitorowano co tydzień podczas 6-tygodniowej fazy modelowania osteoporotycznego, z kryteriami wykluczenia stosowanymi do zwierząt wykazujących >20% utratę masy ciała lub stres kliniczny.

Budowa eksperymentalnego modelu zwierzęcego OP+PD
Eksperymentalny model PD został opracowany w oparciu o wcześniej ustalony model zwierzęcy OP. Aby uniknąć zerwania nici i zapewnić płynne wprowadzenie między zęby trzonowe, do podwiązania użyto nici jedwabnej 5-0. Podczas zabiegu kącik ust myszy został delikatnie cofnięty, a nić została chwycona kleszczami i ostrożnie umieszczona w okolicy szyjki macicy między pierwszym a drugim zębem trzonowym. Drut i końcówka kleszczy były utrzymywane poziomo, aby zminimalizować uraz błony śluzowej policzka, zmniejszając w ten sposób ryzyko krwawienia lub śmiertelności. Druga ręka delikatnie pociągnęła za przeciwległy koniec drutu, prowadząc go stopniowo do przestrzeni międzyzębowej między zębami trzonowymi. Po prawidłowym ułożeniu nici odcinek w pobliżu strony policzkowej został zaciśnięty kleszczami i ostrożnie przepuszczony między drugim a trzecim zębem trzonowym przy użyciu tej samej techniki. Delikatna przyczepność w dół zapewniała płynne przejście jedwabiu. Na koniec nić została bezpiecznie zawiązana wokół drugiego zęba trzonowego w środkowej części szyjki macicy. Myszy pozwolono następnie wyzdrowieć.

Ilościowa reakcja łańcuchowa polimerazy z odwrotną transkrypcją (RT-qPCR)
Tabela materiałów zawiera listę specyficznych sekwencji starterów do przodu i do tyłu dla RT-qPCR ukierunkowanych na geny związane ze stanem zapalnym, krzepnięciem i adhezją komórek, w tym CD44, CDH13, VWF i GAPDH. Sekwencje starterów stosowane do analizy RT-qPCR podsumowano w Tabeli 1.

Analiza Western blot
Charakterystyki ekspresji kluczowych białek szlaku sygnałowego w tkankach przyzębia były systematycznie badane za pomocą western blotting. Tkanki przyzębia poddano homogenizacji zamrażalno-rozmrażającej przy użyciu buforu RIPA, zawierającego inhibitory proteazy i fosfatazy, w celu efektywnej ekstrakcji białka całkowitego. Po odwirowaniu z dużą prędkością (12 000 × g, 4 °C, 10 min) w celu oddzielenia lizatu, supernatant został użyty do dokładnego pomiaru stężenia białka za pomocą zestawu BCA, dostarczając wiarygodnych danych do kolejnych eksperymentów.

Dla każdej grupy eksperymentalnej załadowano 30 μg białka ogółem i oddzielono je za pomocą 10% systemu SDS-PAGE. Rozwiązane białka przeniesiono następnie na błony PVDF za pomocą metody półsuchego blottingu. Aby zminimalizować zakłócenia tła, membrany zostały zablokowane 5% beztłuszczowym mlekiem w proszku przez godzinę w temperaturze otoczenia. Następnie membrany utrzymywano w temperaturze 4 °C w stabilnym środowisku w celu dalszej obróbki.

Błony inkubowano następnie ze specyficznymi przeciwciałami pierwszorzędowymi (patrz tabela materiałów) przez 2 godziny w temperaturze °C. Następnego dnia bufor TBST użyto do dokładnego mycia, a następnie membrany potraktowano przeciwciałami drugorzędowymi sprzężonymi z HRP w rozcieńczeniu 1:10 000 przez 1,5 godziny w temperaturze pokojowej. Wszystkie etapy immunodetekcji zostały przeprowadzone w ścisłej zgodności ze znormalizowanymi protokołami, aby zapewnić spójność i trafność analizy szlaku sygnałowego20.

Dzięki zastosowaniu substratów o wzmocnionej chemiluminescencji (ECL) do przechwytywania sygnałów oraz sprzętu do obrazowania o wysokiej rozdzielczości do precyzyjnego lokalizowania prążków białkowych, wartości gęstości optycznej prążków poddano analizie ilościowej za pomocą oprogramowania ImageJ. Ostatecznie, poprzez systematyczne porównywanie względnych poziomów ekspresji białek docelowych/β-aktyny w każdej grupie z grupą kontrolną, dokładnie oceniono stopień aktywacji i dynamiczne zmiany szlaku PI3K/Akt pod różnymi interwencjami.

Test immunoenzymatyczny (ELISA)
Korzystając z zestawów ELISA (patrz tabela materiałów), w badaniu tym uzyskano precyzyjną ocenę ilościową różnych cytokin zapalnych, w tym TNF-α, IL-6, IL-1β i IL-4, w próbkach surowicy. Oceniono również stężenia TRAP5b, ALP i TGF-β jako markerów aktywności osteoklastów. 96-dołkową płytkę wstępnie pokrytą przeciwciałami wychwytującymi inkubowano w temperaturze 25 °C z próbkami surowicy rozcieńczonymi w stosunku 1:10 w PBS przez 2 godziny, umożliwiając specyficzne wiązanie się antygenów z unieruchomionymi przeciwciałami wychwytującymi. Po inkubacji niezwiązane substancje usunięto przez trzy płukania przy użyciu PBS-T (sól fizjologiczna buforowana fosforanami z Tween-20). Następnie dodano przeciwciała detekcyjne znakowane biotyną i inkubowano przez 1 godzinę w tej samej temperaturze. Następnie wprowadzono streptawidynę-HRP w celu związania biotynylowanych przeciwciał, a mieszaninę inkubowano przez dodatkowe 20 minut w temperaturze pokojowej w warunkach ochrony przed światłem. Reakcję enzymatyczną zakończono następnie za pomocą roztworu zatrzymującego, a absorbancję zmierzono przy 450 nm za pomocą czytnika mikropłytek w celu określenia stężeń cytokin.

Barwienie hematoksyliną i eozyną (H&E)
Do przeprowadzenia barwienia H&E na zatopionych w parafinie odcinkach tkanki przyzębia zastosowano standardowe metody w celu analizy zmian mikrostrukturalnych. Proces przygotowania próbki obejmował wstępne utrwalanie w 4% roztworze paraformaldehydu przez 24 godziny, a następnie stopniowe odwadnianie etanolu (70%, 80%, 95% i 100%) i oczyszczanie w ksylenie, a na koniec zatapianie w parafinie w celu uzyskania odcinków o grubości 4 μm21. Po odparafinowaniu w ksylenie próbki ponownie uwodniono poprzez malejące stężenia etanolu (od 100% do 70%). Proces barwienia rozpoczął się od 5-minutowego zanurzenia w hematoksylinie (Meisnera), po czym nastąpiło płukanie pod bieżącą wodą, różnicowanie w 1% kwaśnym alkoholu w etanolu i kolejne płukanie. Skrawki były następnie barwione 0,5% eozyną przez 10 sekund, aby wypełnić protokół.

Po barwieniu szkiełka zostały ponownie odwodnione w serii sortowanego etanolu, oczyszczone w ksylenie i uszczelnione środkiem montażowym. Obserwacje prowadzono pod mikroskopem wyposażonym w obiektywy 10x i 40x do pozyskiwania obrazów o wysokiej rozdzielczości. W analizie histologicznej oceniono integralność strukturalną tkanki łącznej przyzębia, naciek komórek zapalnych i morfologię resorpcji kości wyrostka zębodołowego. Poziom stanu zapalnego oceniano za pomocą ulepszonego wskaźnika Loe-Silness, przy czym dwóch patologów zaślepiło się na tożsamość próbki, niezależnie oceniając próbki za pomocą skali półilościowej, aby zapewnić obiektywność i odtwarzalność22.

Barwienie błękitem metylenowym
W badaniu tym zastosowano metodę barwienia błękitem metylenowym na standaryzowanych, przetworzonych odcinkach kości wyrostka zębodołowego szczęki w celu ilościowego określenia stopnia resorpcji kości. Procedura eksperymentalna rozpoczęła się od utrwalenia tkanek: tkanki przyzębia utrwalono w 10% obojętnym roztworze formaliny przez 24 godziny, a następnie przeprowadzono 21-dniowy zabieg odwapnienia w 10% roztworze EDTA (pH 7,4). Po odwapnieniu próbki zatopiono w parafinie i przygotowano do skrawków tkanek o grubości 4 μm, które następnie zamontowano na silanizowanych szkiełkach. Proces obróbki wstępnej sekcji obejmował odparafinowanie ksylenu, gradientowe uwodnienie etanolu i inkubację w łaźni wodnej o temperaturze 60 °C. Szkiełka następnie barwiono 0,1% roztworem błękitu metylenowego przez 15 minut.

Po barwieniu skrawki myto przez 1 minutę przy użyciu wody destylowanej, która została wstępnie podgrzana do 60 °C, co zapewniło skuteczne usunięcie nadmiaru barwnika bez uszkadzania struktury tkanki. Następnie barwiono ich przeciwstawnie 0,1% kwaśną fuksyną przez 5 minut, aby zwiększyć kontrast między strukturami tkankowymi. Ten protokół barwienia zapewnił spójną i wiarygodną wizualizację do analizy ilościowej resorpcji kości wyrostka zębodołowego23. Na koniec szkiełka odwodniono przy użyciu stopniowanego etanolu, oczyszczono z ksylenu i zamontowano. Wybarwioną tkankę kostną analizowano pod mikroskopem w polu świetlnym i uzyskano obrazy o wysokiej rozdzielczości w celu precyzyjnej oceny resorpcji krawędzi kości wyrostka zębodołowego w celu późniejszej oceny morfologicznej.

Analiza mikrotomografii komputerowej (Micro-CT)
Skan mikro-CT przeprowadzono w celu oceny zmian mikrostrukturalnych 3D w kości wyrostka zębodołowego myszy modelu OP+PD, w szczególności ukierunkowanego na pierwszy obszar trzonowy szczęki. Po 8 tygodniach monitorowania pooperacyjnego myszy zostały humanitarnie poddane eutanazji poprzez wdychanie CO2 , metody odpowiedniej do zachowania struktur szczękowo-twarzowych. Próbki szczęki zostały następnie zebrane i utrwalone w 4% paraformaldehydzie w temperaturze 4 °C przez 48 godzin24.

Analizę mikrotomografii komputerowej przeprowadzono na podstawie zrekonstruowanych obrazów DICOM okolicy szczęki zaimportowanych do oprogramowania poprzez wybór zestawu danych odpowiadającego zeskanowanym próbkom. Standardowy obszar zainteresowania (ROI) zdefiniowano ręcznie jako mezjalną policzkową jedną trzecią części korzenia pierwszego zęba trzonowego szczęki poprzez zarysowanie struktury kości wyrostka zębodołowego w widoku strzałkowym i koronalnym, a około 50 kolejnych plasterków było zwykle dołączanych, aby w pełni pokryć region.

Aby oddzielić kość beleczkową od otaczających tkanek miękkich i tła, zastosowano próg gęstości 180-220 mgHA/cm3 . Następnie przeprowadzono segmentację w celu wygenerowania struktury binarnej reprezentującej tylko kość beleczkową. Analizę morfometryczną przeprowadzono przy użyciu Modułu Morfometrii Kostnej w oprogramowaniu. Parametry zostały obliczone automatycznie, w tym frakcja objętości kości (BV/TV), grubość beleczka (Tb.Th), liczba beleczkowa (Tb.N), stosunek powierzchni kości do objętości kości (BS/BV) oraz gęstość mineralna kości (BMD). Po przeprowadzeniu analizy wyniki numeryczne zostały wyeksportowane w postaci arkuszy kalkulacyjnych.

Pomiary te wykorzystano do oceny stopnia uszkodzeń mikrostrukturalnych kości wyrostka zębodołowego związanych ze stanem patologicznym OP+PD oraz do oceny skuteczności terapeutycznej glicyteiny w przywracaniu jakości kości. Podejście to pozwoliło na uzyskanie wysokiej rozdzielczości, powtarzalnej i ilościowej oceny integralności strukturalnej w środowisku kości przyzębia, oferując kluczowe informacje morfologiczne na temat wyników leczenia.

Sieciowe profilowanie farmakologiczne
Aby systematycznie badać bioaktywne składniki tradycyjnej medycyny chińskiej (TCM), które mogą modulować kluczowe szlaki biologiczne istotne dla współistniejącej osteoporozy i zapalenia przyzębia (OP+PD), w badaniu tym zastosowano podejście farmakologiczne sieciowe do analizy Angelica sinensis. Roślina ta została wybrana na podstawie jej historycznego zastosowania w TCM do leczenia zaburzeń związanych z kośćmi i stanami zapalnymi, w tym objawów związanych zarówno z osteoporozą, jak i przewlekłą chorobą dziąseł. W fazie badań przesiewowych związków aktywnych Angelica sinensis pobrano za pomocą baz danych TCMSP i TCMID [szczegóły bazy danych przeniesiono do ToM] i przefiltrowano przy użyciu kryteriów biodostępności po podaniu doustnym (OB) ≥ 30% i podobieństwa do leku (DL) ≥0,18. Interakcje między związkiem a celem przewidywano za pomocą STITCH, a walidację miejsca docelowego przeprowadzono za pomocą DisGeNET i OMIM. Analizę wzbogacenia szlaków przeprowadzono przy użyciu platformy DAVID 2021 w celu zidentyfikowania szlaków sygnałowych KEGG potencjalnie modulowanych przez wybrane związki. Aby zobrazować oddziaływania molekularne, skonstruowano sieć "związek-cel-szlak" w oparciu o wskaźniki topologiczne (centralność stopnia, centralność między). Analiza zidentyfikowała glicyteinę, naturalny flawonoid, jako związek o korzystnych właściwościach farmakokinetycznych i silnym połączeniu z CD44, co sugeruje potencjalne znaczenie terapeutyczne w OP+PD. Jednak glicyteina nie została klinicznie zatwierdzona do leczenia osteoporozy lub zapalenia przyzębia; Wyniki te opierają się na przewidywaniach in silico i stanowią ramy teoretyczne dla późniejszych eksperymentów walidacyjnych in vivo 25.

Walidacja dokowania molekularnego
Struktury białkowe CD44 (PDB ID: 1UUH) i PI3K (PDB ID: 4L23) zostały pobrane z Banku Danych Białkowych RCSB (https://www.rcsb.org). Struktury ligandów (glicyteina, ligustylid) zostały zoptymalizowane poprzez minimalizację energii za pomocą molekularnego pola siłowego. Symulacje dokowania przeprowadzono za pomocą algorytmu genetycznego przy następujących parametrach: 100 przebiegów, wielkość populacji 150 i oceny energetyczne 25×106 . Kieszenie wiążące wyznaczono na podstawie współrzędnych liganda krystalograficznego (CD44: 20×20×20 Å3; PI3K: 25×25×25 Å3). Wynikowe pozycje dokowania uszeregowano według energii wiązania (ΔG, kcal/mol), a odtwarzalność zweryfikowano przy użyciu progu odchylenia średniej kwadratowej (RMSD) wynoszącego <2,0 A.

Ocena terapeutyczna gycyteiny w mysich modelach OP+PD
Glicyteina (czystość ≥ 98%) została uzyskana od certyfikowanego dostawcy biochemicznego w klasie analitycznej do eksperymentów in vivo , jest naturalnym izoflawonem, o którym wiadomo, że jest obecny w Angelica sinensis, o zgłoszonych właściwościach przeciwzapalnych i osteoprotekcyjnych26. Osteoporotyczne zapalenie przyzębia wywołano u 11-tygodniowych samic myszy C57BL/6 poprzez obustronną owariektomię (OVX) i zapalenie przyzębia wywołane ligaturą. Myszy zostały losowo przydzielone do czterech kohort (n = 6 na grupę):

Pozorna operacja + nośnik (5% dimetylosulfotlenku [DMSO] w oliwie z oliwek, codzienny zgłębnik doustny)
OP+PD: Model choroby + nośnik
OP+PD + Niska dawka glicyteiny (50 mg/kg): Model choroby + zawiesina glicyteiny w pojeździe
OP+PD + Wysoka dawka glicyteiny (100 mg/kg): Model choroby + zawiesina glicyteiny w nośniku

Analiza statystyczna
Przeprowadzono wnioskowane testy statystyczne i stworzono wizualne reprezentacje danych do generowania wykresów i wizualizacji danych. Dane liczbowe wyrażono jako średnią ± SD. Porównania grup oceniano za pomocą dwustronnych niesparowanych testów t, uznając wartości o wartości &l 0,05 za statystycznie istotne. Metody te zapewniły solidność danych i zwiększyły wiarygodność późniejszych wyników analiz.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Profilowanie proteomiczne kohort OP+PD
Ilościowa analiza proteomiczna surowicy pacjentów z OP+PD (n = 3) i zdrowych osób z grupy kontrolnej (n = 6) zidentyfikowała rozregulowane białka zaangażowane w patogenezę choroby. Analiza porównawcza ujawniła dziewięć białek o obniżonej regulacji (APOL1, CST3, IGLV3-27, IGHV3-33, PF4, CLEC3B, SRGN, C6, SELL) i sześć białek o podwyższonej regulacji (IGLV9-49, A2M, VWF, CETP, CD44, CDH13) w surowicach OP + PD w porównaniu z kontrolami (Figura ...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

W badaniu tym zaproponowano ramy badań translacyjnych, które łączą profilowanie proteomiczne, walidację ekspresji genów, modelowanie zwierząt in vivo i farmakologię sieciową w celu zbadania mechanizmów molekularnych leżących u podstaw współwystępowania osteoporozy i zapalenia przyzębia (OP+PD). Główną hipotezą jest to, że CD44 moduluje oś sygnalizacyjną PI3K / Akt, nasilając w ten sposób zapalny ubytek kości w warunkach OP + PD, a glicyteina, flawonoid z Angelica sinensis, może osłabić ten proces poprze...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy nie mają do zadeklarowania konfliktu interesów.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Badanie to było wspierane przez Fundację Nauki i Technologii dla Przemysłu Opieki Zdrowotnej w prowincji Gansu w Chinach (grant nr 1). GSWSKY2020-77), Gansu Provincial Natural Science Foundation (granty nr 25JRRA314 i 21JR7RA620), Gansu Provincial Talent Program oraz Youth Incubation Research Program Szpitala Prowincjonalnego Gansu (grant nr 23GSSYF-35).

Wkład autora:
Jing Qi przeprowadził większość prac eksperymentalnych i analizy danych. Yunqing Pang przyczynił się do zbierania próbek, selekcji danych i analizy statystycznej. Yu Wang pomagał w projektowaniu eksperymentalnym i zapewniał wsparcie techniczne. Dawei Hou i Jing Wang wspólnie nadzorowali projekt, dokonali krytycznej korekty manuskryptu pod kątem ważnych treści intelektualnych i zatwierdzili ostateczną wersję. Wszyscy autorzy przeczytali i zatwierdzili ostateczną wersję manuskryptu.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Zestawy ELISABiotechnologia Shanghai Enzyme LinkKwantyfikacja cytokin zapalnych (TNF-α, IL-6, IL-1β, IL-4, ALP, TRAP5b, TGF-β, VWF, CD44)
Zestaw do ekstrakcji RNABiotechnologia Yesheng w SzanghajuEkstrakcja RNA z surowicy
Zestaw do syntezy cDNABiotechnologia Yesheng w SzanghajuOdwrotna transkrypcja o wysokiej aktywności
Zestaw qPCRBiotechnologia Yesheng w SzanghajuIlościowa amplifikacja PCR
Przeciwciała (pierwszorzędowe/wtórne)Technologia sygnalizacji komórkowej / Abcam / Hangzhou Xianli Biotechnology / Beijing Zhongshan Jinqiao BiotechnologySpecyficzne przeciwciała pierwszorzędowe; β-aktyna kontrola wewnętrzna; kozie przeciwciało anty-królicze IgG
Odczynniki histologiczneBeyotime Biotechnology / Szanghaj ShangshangHematoksylina– barwienie eozyną i błękitem metylenowym
Podłoże chemiluminescencyjneYakken BiotechnologiaWykrywanie Western blot
System mikro-tomografii komputerowejScanco Medical AG (Viva CT40)Analiza mikrostrukturalna o wysokiej rozdzielczości
System LC-MS/MSThermo Scientific Q Exactive HF-XAnaliza proteomiczna o wysokiej rozdzielczości
Oprogramowanie: MaxQuant (v2.1.0), AndromedaSzeroki InstytutWstępne przetwarzanie danych proteomicznych
Oprogramowanie: GSEA (v4.3.2)Szeroki InstytutAnaliza wzbogacania ścieżek
Oprogramowanie: R (v4.0.3), WGCNA (v1.73), pheatmap (v1.0.12)Fundacja RObliczenia statystyczne, analiza sieciowa, klastrowanie, mapy cieplne
Oprogramowanie: AutoDock 4.2, AutoDockTools 1.5.7Instytut Badawczy ScrippsDokowanie molekularne i definicja siatki
Oprogramowanie: Open Babel 3.1.1Projekt Open BabelOptymalizacja struktury ligandów
Oprogramowanie: PyMOL 2.5.2Schrö dinger, Sp. z o.o.Wizualizacja dokowania molekularnego

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Demmer, R. T., Papapanou, P. N. Epidemiologic patterns of chronic and aggressive periodontitis. Periodontol 2000. 53, 28-44 (2000).
  2. Kumar, S. Evidence-based update on diagnosis and management of gingivitis and periodontitis. Dent Clin. 63 (1), 69-81 (2019).
  3. Nascimento, G. G., et al. Burden of severe periodontitis and edentulism in 2021, with projections up to 2050: The Global Burden of Disease 2021 study. J Periodontal Res. 59, 823-867 (2024).
  4. Genco, R. J. Current view of risk factors for periodontal diseases. J Periodontol. 67 (10 Suppl), 1041-1049 (1996).
  5. Eke, P. I., et al. Periodontitis in US adults: National Health and Nutrition Examination Survey 2009-2014. J Am Dent Assoc. 149 (7), 576-588 (2018).
  6. Reginster, J. Y., Burlet, N. Osteoporosis: a still increasing prevalence. Bone. 38 (2 Suppl 1), S4-S9 (2006).
  7. Kawai, M., Mödder, U. I., Khosla, S., Rosen, C. J. Emerging therapeutic opportunities for skeletal restoration. Nat Rev Drug Discov. 10 (2), 141-156 (2011).
  8. Burge, R., et al. Incidence and economic burden of osteoporosis-related fractures in the United States, 2005-2025. J Bone Miner Res. 22 (3), 465-475 (2007).
  9. Groen, J. J., Duyvensz, F., Halsted, J. A. Diffuse alveolar atrophy of the jaw (non-inflammatory form of paradental disease) and pre-senile osteoporosis. Gerontol Clin. 2, 68-86 (1960).
  10. Armitage, G. C. Development of a classification system for periodontal diseases and conditions. Northwest Dent. 79 (6), 31-35 (2000).
  11. Dong, N., Yang, Z. Glycitein exerts neuroprotective effects in rotenone-triggered oxidative stress and apoptosis in a Parkinson's disease cell model. Acta Biochim Pol. 69 (2), 447-452 (2022).
  12. Zang, Y. Q., et al. Glycitein induces ROS-dependent apoptosis and G0/G1 arrest via MAPK/STAT3/NF-κB pathway in human gastric cancer cells. Drug Dev Res. 80 (5), 573-584 (2019).
  13. Dong, W., et al. PTX3 promotes osteogenic differentiation by triggering HA/CD44/FAK/AKT feedback loop in inflammation. Bone. 154, 116231(2022).
  14. Thanee, M., et al. CD44 modulates metabolism and ROS-Akt signaling promoting cholangiocarcinoma progression. PLoS ONE. 16 (3), e0245871(2021).
  15. Lee, J. H., et al. Standardized micro-CT assessment for alveolar bone in preclinical models of periodontitis. Bone Rep. 17, 101624(2022).
  16. Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections. CSH Protoc. 2008, (2008).
  17. Chinese Society of Osteoporosis and Bone Mineral Research. Guidelines for the diagnosis and treatment of primary osteoporosis. Chin J Osteoporos Bone Miner Res. 15 (6), 573-611 (2022).
  18. Guo, S., Liu, Q., Ding, Y. A brief introduction of the new classification scheme for periodontal and peri-implant diseases and conditions. Int J Stomatol. 46 (2), 125-134 (2019).
  19. Wang, H., et al. Therapeutic potential of Angelica sinensis in bone metabolic disorders: Evidence from network pharmacology and experimental models. Phytomedicine. 102, 154200(2022).
  20. Wu, Y., et al. Modified methylene blue-acid fuchsin staining enhances bone resorption assessment in periodontal models. Front Physiol. 13, 856712(2022).
  21. Tian, L., et al. QizhiKebitong Formula ameliorates diabetic osteoporosis via PI3K/Akt/NF-κB pathway. Biomed Res Int. 2022, 4469766(2022).
  22. Hoare, A., Soto, C., Rojas-Celis, V., Bravo, D. Chronic inflammation as a link between periodontitis and carcinogenesis. Mediators Inflamm. 2019, 1029857(2019).
  23. Wang, L., et al. Role of PI3K in bone resorption of apical periodontitis. BMC Oral Health. 22 (1), 345(2022).
  24. Johnston, C. B., Dagar, M. Osteoporosis in older adults. Med Clin North Am. 104 (5), 873-884 (2020).
  25. Tabatabaei, M. S., Ahmed, M. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Cancer Cell Biology: Methods Mol Biol. , Springer US. New York, NY. 115-134 (2022).
  26. Huang, J., et al. Standardized histological assessment in periodontal models. J Tissue Eng. 13, 20417314221090381(2022).
  27. Wang, R. P., et al. IL-1β and TNF-α play an important role in modulating the risk of periodontitis and Alzheimer's disease. J Neuroinflammation. 20 (1), 71(2023).
  28. Mesrati, M. H., et al. CD44: a multifunction mediator of cancer progression. Biomolecules. 11 (12), 1850(2021).
  29. Sun, C., et al. A2M inhibits inflammatory mediators of chondrocytes by blocking IL-1β/NF-κB pathway. J Orthop Res. 41 (1), 241-248 (2023).
  30. Shao, Y., et al. CDH13 is a prognostic biomarker and a potential therapeutic target for patients with clear cell renal cell carcinoma. Am J Cancer Res. 12 (10), 4520-4544 (2022).
  31. Li, Z., Du, Y. CST3 alleviates bilirubin-induced neurocyte damage by promoting autophagy. Transl Neurosci. 14 (1), 20220314(2023).
  32. Chen, Z. Z., Gerszten, R. E. Metabolomics and proteomics in type 2 diabetes. Circ Res. 126 (11), 1613-1627 (2020).
  33. Dubin, R. F., Rhee, E. P. Proteomics and metabolomics in kidney disease, including insights into etiology, treatment, and prevention. Clin J Am Soc Nephrol. 15 (3), 404-411 (2020).
  34. Wu, P. Y., et al. Morinda officinalis polysaccharide regulates rat bone mesenchymal stem cell osteogenic-adipogenic differentiation in osteoporosis via miR-21 and PI3K/AKT pathway activation. Kaohsiung J Med Sci. 38 (7), 675-685 (2022).
  35. Kang, W. Q., et al. Inhibitory effects of prepared Radix Rehmanniae combined with Radix Astragali on osteoporosis via PI3K-Akt pathway. Acta Cir Bras. 37 (11), e371101(2023).
  36. Wang, S., et al. miR-21 promotes osteoclastogenesis via activation of PI3K/Akt signaling by targeting PTEN in RAW264.7 cells. Mol Med Rep. 21 (3), 1125-1132 (2020).
  37. Zhang, Y., et al. PSMC6 promotes osteoblast apoptosis by inhibiting PI3K/AKT signaling in ovariectomy-induced osteoporosis. J Cell Physiol. 235 (7-8), 5511-5524 (2020).
  38. Xu, Y., et al. Epimedin C alleviates glucocorticoid-induced suppression of osteogenic differentiation via PI3K/AKT/RUNX2 signaling. Front Pharmacol. 13, 894832(2022).
  39. Go, X., et al. Glipizide alleviates periodontitis pathogenicity by inhibiting angiogenesis, osteoclastogenesis and M1/M2 macrophage ratio. Inflammation. 46 (5), 1917-1931 (2023).
  40. Cui, J., et al. Triptolide prevents bone loss by inhibiting osteoclastogenesis through PI3K-AKT-NFATc1 pathway. J Cell Mol Med. 24 (11), 6149-6161 (2020).
  41. Chen, X., et al. LY3023414 inhibits osteogenesis and osteoclastogenesis through PI3K/Akt/GSK3 signaling pathway. Bone Joint Res. 10 (4), 237-249 (2021).
  42. Hao, S., et al. Identification of key immune genes of osteoporosis using bioinformatics and machine learning. Front Endocrinol. 14, 1118886(2023).
  43. Gong, L., et al. Modified inflammatory scoring systems for periodontal tissue. Sci Rep. 11 (1), 18701(2021).
  44. Zhang, Y., et al. Establishment of ovariectomy-induced osteoporosis model and its application in oral bone loss studies. Bone Rep. 15, 101113(2021).
  45. Eke, P. I., et al. Periodontitis in U.S. adults: National Health and Nutrition Examination Survey. J Periodontol. , (2022).
  46. Guo, X., et al. Integrating network pharmacology and experimental evaluation to investigate the therapeutic mechanism of herbal compounds in periodontitis. Heliyon. 10 (5), e37942(2024).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Sygnalizacja CD44leczenie glicyteinszlak PI3K Aktprofilowanie proteomiczneko jamki z bopodniebiennejAngelica Sinensismikroarchitektura ko ciinfiltracja kom rek zapalnych

Powiązane artykuły