Artykuł metodologiczny

Model myszy noworodkowej nekrotyzującego enterokolitu i izolacji lamina propria w celu profilaktyki komórek odpornościowych

DOI:

10.3791/69233

⸱

19 września 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Division of Neonatal-Perinatal Medicine, Department of Pediatrics, University of North Carolina at Chapel Hill, 2Division of Pediatric Gastroenterology, Department of Pediatrics, University of North Carolina at Chapel Hill

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ten protokół opisuje noworodkowy model mysiego nektyzującego enterokolitisu (NEC) oraz późniejsze izolację komórek odpornościowych z blaszki właściwej jelita cienkiego noworodków.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nekrotyzujące zapalenie jelit (NEC) to ciężka choroba zapalna jelit noworodków, dotykająca głównie niedorozwiniętych płodów. NEC charakteryzuje się uszkodzeniem nabłonka, dysbiozą mikrobiomu i dysregulowanym odpowiedzią immunologiczną, często prowadzącymi do martwicy jelit i ogólnoustrojowego stanu zapalnego. Eksperymentalne modele na myszach, które odzwierciedlają kluczowe aspekty ludzkiej choroby, odegrały istotną rolę w poszerzaniu naszego rozumienia mechanizmów choroby i informowaniu rozwoju terapii. Ten protokół opisuje dobrze ugruntowany noworodkowy model myszy z nekrotyzującym zapaleniem jelit (NEC) wykorzystujący karmienie mieszanką, okresową niedotlenię, doustne podawanie lipopolisacharydu (LPS) oraz bakterie jelitowe hodowane z organizmu niemowlęcia z NEC. To połączenie niezawodnie wywołuje cechy histologiczne, transkrypcyjne i immunologiczne zgodne z NEC u ludzkich niemowląt i było fundamentem wielu kluczowych odkryć w tej dziedzinie. Dodatkowo, ten protokół opisuje izolację komórek immunologicznych z blaszki właściwej jelita cienkiego noworodków myszy. Izolacja komórek blaszki właściwej umożliwia szczegółowe profilowanie komórek immunologicznych poprzez cytometrię przepływową, ułatwiając analizę zarówno komórek naturalnych, jak i adaptacyjnych populacji wewnątrz jelit.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nekrotyzujące zapalenie jelit (NEC) to ciężka choroba zapalna jelit, która prawie wyłącznie dotyka wcześniaków. Około 7%-8% niemowląt z bardzo niską masą urodzeniową (mniej niż 1500 g) zostanie dotkniętych NEC, a wskaźniki śmiertelności związanej z chorobą mogą sięgać 50% u noworodków, które wymagają interwencji chirurgicznej1. Patogeneza NEC pozostaje niedostatecznie zrozumiana; jednakże, obecne dowody sugerują, że NEC powstaje z połączenia wielu czynników, w tym niedojrzałej bariery jelitowej, dysregulacji sygnalizacji immunologicznej i dysbiozy mikrobiomu2,3,4. Zbieżność tych czynników może inicjować i zaostrzyć reakcje zapalne w jelitach, najbardziej zauważalne poprzez aktywację receptora podobnego do Toll 4 (TLR4), prowadząc do uszkodzenia nabłonka i różnych rodzajów śmierci komórkowej, w tym apoptozy i nekrozy5,6. Celem tego protokołu jest przedstawienie reprodukowalnego i fizjologicznie odpowiedniego modelu NEC u myszy, który naśladuje zapalenie jelit i pneumatosis intestinalis (gaz w ścianie jelita) obserwowane u ludzkich noworodków, umożliwiając badanie mechanizmu patogenezy choroby. Ponadto, ten protokół opisuje izolację komórek odpornościowych z blaszki właściwej jelita cienkiego noworodków myszy, umożliwiając badaczom przeprowadzenie profilu komórek odpornościowych poprzez cytometrię przepływową.

W porównaniu z większymi modelami zwierzęcymi, takimi jak noworodki szczurów czy świń7,8, noworodkowe modele mysze oferują kilka wyraźnych zalet, w tym niższy koszt, większy dostęp do zwierząt transgenicznych i możliwość przeprowadzania eksperymentów na większych kohortach. Murynowe modele NEC głównie wykorzystują kombinację karmienia mieszankami, stresu zimna i niedotlenienia, aby symulować złożoną patofizjologię NEC obserwowaną u ludzkich pacjentów7,8,9. Jednakże, wiele muzynych modeli NEC jest ograniczone przez ich uzależnienie od szerokiego spektrum czynników mikrobiologicznych lub sztucznych zmian mikrobiomu, co może obniżyć ich znaczenie kliniczne. W przeciwieństwie do tego, model opisany w tym protokole przeciwdziała tym ograniczeniom poprzez integrację kilku kluczowych czynników zaangażowanych w patogenezę NEC u ludzkich niemowląt10,11. Konkretnie, ten model łączy stres hipoksyczny, który został zaangażowany w zakłócenie integralności bariery jelitowej3,12, z doustnym podaniem mieszanek dla niemowląt uzupełnionych lipopolisacharydem (LPS), dobrze scharakteryzowanym ligandem TLR4, który indukuje zapalenie jelit, jak również klinicznie istotną dysbiozę mikrobiomu z enterycznymi bakteriami hodowlanymi od pacjenta z NEC totalis, najcięższej postaci choroby, charakteryzującej się opanowującą martwicą jelit10,13. Poprzez integrację tych klinicznie istotnych i specyficznych dla choroby czynników stresowych, nasz model dokładnie odzwierciedla kliniczne i molekularne cechy NEC. Ponadto, aby zapewnić badaczom ramę do badania mechanizmów pośredniczących w odpowiedzi immunologicznej leżących u podstaw patogenezy NEC, ten protokół opisuje izolację komórek blaszki właściwej z jelita cienkiego noworodków myszy do analizy cytometrii przepływowej. Jako główne miejsce aktywności immunologicznej błony śluzowej jelit, blaszka właściwa zawiera dynamiczny repertuar komórek odpornościowych stałych i napływowych, które odgrywają centralną rolę w zapaleniu związanym z NEC14. Cytometria przepływowa zapewnia solidną i skalowalną platformę do charakteryzacji tych populacji komórek odpornościowych z wysoką rozdzielczością, umożliwiając szczegółową analizę fenotypu komórek, ilościową ocenę odpowiedzi immunologicznych i identyfikację podpisów immunologicznych zaangażowanych w patogenezę NEC15.

Muzyny model NEC opisany w tym protokole uzupełnia modele in vitro poprzez umożliwienie badania interakcji gospodarz-mikrobiom, odpowiedzi immunologicznych i sygnalizacji zapalnej w złożonym środowisku jelita noworodków. Odtwarza kluczowe aspekty patogenezy NEC, które nie mogą być modelowanie in vitro, co czyni go cennym narzędziem do wyjaśniania mechanizmów choroby i oceny strategii terapeutycznych. Mimo że gatunkowe różnice specyficzne dla gatunku pozostają ograniczeniem, ten model oferuje solidną i dostępną platformę do poszerzenia naszego zrozumienia NEC i przyspieszenia rozwoju ukierunkowanych interwencji.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wszystkie metody zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi etycznymi określonymi przez Komitet ds. Opieki nad Zwierzętami i Wykorzystywania (IACUC) na Uniwersytecie Karoliny Północnej w Szkole Medycznej w Chapel Hill. Myszy były hodowane, utrzymywane i przetrzymywane zgodnie z procedurami opisanymi w Przewodniku po Opiece nad Zwierzętami Laboratoryjnymi zgodnie z wnioskiem zgłoszeniowym zatwierdzonym przez IACUC (protokół nr 24-114) Uniwersytetu Karoliny Północnej w Szkole Medycznej w Chapel Hill. Do wszystkich eksperymentów opisanych w niniejszym badaniu wykorzystano myszy C57BL/6J. Szczenięta rozpoczęto w modelu w 4. dniu po urodzeniu, ważące między 1,8-2,3 g; zwierzęta spoza tego zakresu wagi zostały wykluczone. Wszystkie eksperymentalne grupy miały zrównoważoną dystrybucję płci, przy czym samce i samice stanowiły około 50% traktowanych zwierząt. Stosowany sprzęt i materiały są wymienione w Tabeli Materiałów.

1. Murzyński model NEC

UWAGA: Bakteryjne zasoby są produkowane poprzez uzyskanie treści jelitowych od niemowlęcia, które miało najcięższą formę NEC, NEC totalis13,16. Treść jelitowa jest hodowana w temperaturze 1 x g przez 16 h w 37 °C, następnie wirowana w temperaturze 3000 x g przez 10 min w 4 °C i ponownie zawieszana w 50% glicerolu. Alikwoty 20 μL są nakłuwane do kriowialek i przechowywane w temperaturze -80 °C w celu długotrwałego przechowywania. Wybrane czasy hodowli w tym protokole zostały wybrane ze względu na efektywność przepływu pracy. Te punkty czasowe mogą być dostosowywane w razie potrzeby, aby dostosować się do indywidualnych harmonogramów laboratorium bez wpływu na ogólny model. Ponadto ten protokół został zoptymalizowany dla maksymalnej pojemności 40 myszy, ale może być skalowany w razie potrzeby.

  1. Przygotowywanie hodowli bakteryjnej
    1. W 0. dniu eksperymentu o godzinie 15:00 dodać alikwot 20 μL hodowli bakteryjnej uzyskany od niemowlęcia z NEC totalis do 15-mililitrowej kultury zawierającej 2 mL bulionu Luria-Bertani (LB). Hodować hodowlę bakteryjną z pokrywką rury otwartą w pozycji wentylacji w agitatorze orbitalnym w 37 °C, 1 x g, przez 16 h, i hodować rurkę kultury zawierającą tylko 2 mL bulionu LB równolegle jako kontrolę, aby ocenić ewentualne zanieczyszczenie LB.
      1. Wizualnie potwierdzić hodowle z poprzedniego dnia, porównując mętność między hodowlą bakteryjną a czystym kontrolnym LB; postępować tylko jeśli hodowla bakteryjna wygląda mętnie, a kontrola pozostaje czysta.
    2. W 1. dniu eksperymentu o godzinie 07:00 nakłuć 125 μL inokulowanej hodowli z poprzedniego dnia do kolby kultury komórkowej T75 z wentylowaną pokrywką zawierającej 25 mL bulionu LB. Przygotować łącznie cztery kolby T75 i inkubować je w pozycji pionowej w agitatorze orbitalnym w 37 °C, 1 x g, przez 2 h, aby rozszerzyć hodowlę bakteryjną.
      UWAGA: Hodowle z poprzedniego dnia są przygotowywane w 0., 1. i 2. dniu eksperymentu modelu NEC.
  2. Przydzielanie szczeniąt do grup eksperymentalnych
    1. W 1. dniu eksperymentu o godzinie 07:00 ważyć szczenięta w 4. dniu po urodzeniu.
      ​UWAGA: Optymalny zakres wagi to między 1,8-2,3 g, a odstępy powinny zostać usunięte z eksperymentu.
    2. Podzielić eksperymentalne myszy na grupy karmione mieszanką i karmione mlekiem matki i obliczyć średnią wagę myszy karmionych mieszanką. Oddzielić wyznaczone myszy karmione mieszanką od matki i umieścić je w nowej klatce umieszczonej w inkubatorze niemowlęcym nagrzanym do 37 °C. Utrzymać szczenięta karmione mlekiem matki w oryginalnej klatce z matką.
      UWAGA: Noworodki myszy są szczególnie wrażliwe na zmiany temperatury otoczenia. Aby utrzymać stabilną regulację temperatury po oddzieleniu od matki, myszy karmione mieszanką są przechowywane w kontrolowanej temperaturowo inkubatorze niemowlęcym ustawionym na 37 °C. To podejście jest zgodne z ustalonymi protokołami NEC, które zachowują fizjologiczną temperaturę bez użycia dodatkowych interwencji termicznych11,17,18,19.
    3. Powtórzyć w 2. i 3. dniu eksperymentu, ważąc myszy karmione mieszanką i obliczając średnią wagę przed godziną 07:00 codziennie.
  3. Pomiar gęstości optycznej (OD) hodowli bakteryjnej
    1. Po 2 h inkubacji w 37 °C i 1 x g usunąć cztery kolby T75 z rozszerzoną hodowlą z agitatora orbitalnego w 1., 2. i 3. dniu eksperymentu. Połączyć zawartość czterech

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Neonatalny model mysi NEC opisany w tym protokole rekonstruuje kluczowe cechy choroby. Analiza przeżywalności Kaplana-Meiera (Rysunek 1A) ujawniła znaczące zmniejszenie przeżywalności w grupie leczonych NEC w porównaniu z kontrolami karmionymi przez matki (9/21 vs. 8/8; p = 0,0063). Ogólne sprawdzenie jelit myszy poddanych modelowi (Rysunek 1B) wykazało charakterystyczne cechy NEC, w tym rozdęcie jelit, bąbelki powietrza i widoczne pneumatosis intes...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ten protokół integruje fizjologicznie odpowiedni noworodkowy mysi model NEC z izolacją komórek odpornościowych z blaszki właściwej, zapewniając kompleksową platformę do badania odpowiedzi immunologicznych błony śluzowej podczas stanu zapalnego jelit. Łącząc klinicznie istotne ekspozycje, takie jak mikrobiom jelitowy z przypadków ludzkiej NEC, stres hipoksyczny i karmienie mieszankami, model ten odwzorowuje złożoną i wieloczynnikową patogenezę obserwowaną w chorobie u ludzi10,

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy deklarują, że nie ma żadnego konfliktu interesów związanego z tym pismem.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Niniejszy rękopis został wsparty przez R01DK124614, R01HD105301, DP1DK140012, Grant Inicjatywy Chan Zuckerberg o numerze 2022-316749, Nagrodę Yang Biomedical Scholar oraz Wydział Pediatrii Uniwersytetu Karoliny Północnej w Chapel Hill.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
1 mL Syringe-Tuberculin Slip TipBecton Dickinson309659Strzykawka do karmienia preparatem
1.5 mL semi-micro Disposable CuvettesBRAND GMBH + CO KG759085D
1.7 ml Microtubes ClearAxygen - Corning Inc.MCT-175-CNonpryogenic & Rnase-/Dnase-free
5% Oxygen, Balance Nitrogen Certified Reference Material, Size 200 High Pressure Steel Cylinger, CGA 580AirgasX02NI95C2003186
Anti-Mo CD16/CD32 Purified Clone: 93eBioscience Inc. 14-0161-85
Anti-Mouse CD16/CD32 Purified Clone: 93eBioscience Inc. 14-0161-86
APC anti-mouse Ly-6C Clone: HK1.4 Isotype: Rat IgGcBioLegend128015
autoMACS Rinsing SolutionMiltenyi Biotec130-091-222
BB515 Rat Anti-CD11b Clone: M1/70BD Biosciences564455
BB700 Rat Anti-Mouse CD4 Clone: RM4-5BD Biosciences566408
BD Microtainer SSTBecton Dickinson365867Serum Tube
BIOTIX Rainin LTS Compatible Racked Filter Tips, p1200Fisher Scientific12-111-365
BIOTIX Rainin LTS Compatible Racked Filter Tips, p20Fisher Scientific12-111-366
BIOTIX Rainin LTS Compatible Racked Filter Tips, p200Fisher Scientific12-111-362
Brilliant Stain BufferBD Biosciences563795
BUV615 Rat Anti-Mouse Ly-6G Clone: 1A8BD Biosciences751263
BV650 Rat Anti-Mouse I-A/I-E Clone: M5/114.15.2BD Biosciences563415
C57BL/6J Neonatal MiceThe Jackson Laboratory000664
CD45-VioGreen mouseMiltenyi Biotec 130-102-412
CD64 Antibody, anti-mouse, PE-Vio 770, REAfinity Clone REA286Miltenyi Biotec 130-119-659
CFX Opus Real-Time PC Systems Bio-Rad12011319
Collagenase Type 4Worthington Biochemical Corporation LS004188
DL-dithiothreitol SigmaD9779-5g
eBioscience FOXP3/Transcription Factor Staining Buffer SetLife Technologies Corp. 00-5523-00
EDTA (0.5M), pH 8.0Quality Biological Inc351-027-721
Esbilac Puppy Milk ReplacerPet-Ag, Inc.99502-1Puppy Milk
Fisherbrand Disposable CuvettesFisher Scientific14-955-127
Fisherbrand Sterile Polystyrene Disposable Serological Pipets with Magnifier Stripe (paper/plastic wrap), 10mLFisher Scientific13-678-11E
Fisherbrand Sterile Polystyrene Disposable Serological Pipets with Magnifier Stripe (paper/plastic wrap), 25mLFisher Scientific13-678-11
Fisherbrand Sterile Polystyrene Disposable Serological Pipets with Magnifier Stripe (paper/plastic wrap), 50mLFisher Scientific13-678-11F
Fisherbrand Sterile Polystyrene Disposable Serological Pipets with Magnifier Stripe (paper/plastic wrap), 5mLFisher Scientific13-678-11D
Genie Temp-Shaker 300USA Scientific, Inc.SI-G1600
gentleMACS Dissociator (protocol; m_intestine-01)Miltenyi Biotec 130-093-235
gentleMACS  C TubesMiltenyi Biotec 130096334
Ghost Dye Red 780 Viability DyeTonbo Biosciences13-0865-T100
Glycerol ReagentPlusSigma-AldrichG7757-500ML
GraphPad Prims Software, Version 10.0GraphPadN/A
Greiner Bio-One Round Bottom Polypropylene Culture Tube with Two-Position Vent StopperFisher Scientific07-000-212
Handi+ Oxygen analyzerMaxtecN/A
Hanks' Balanced Salt SolutionGibco141650-095
HEPES BufferMediatech, Inc. 25-060-CI
Hypoxia ChamberBillups-Rothenburg, Inc.N/A
ImageJSchneider et al., 2012N/A
Integra Miltex MeisterHand Iris Scissors, 10.2cmFisher Scientific12-460-655
Integra Miltex MeisterHand Iris Scissors, 9cmFisher Scientific12-460-598
Integra Miltex™ Swiss Jeweler-Style ForcepsFisher Scientific12-460-110
Isolette Infant IncubatorAir-Shields VickersC100-200-2 Series 02Incubator for mice
Kimtech Science Kimwipes Delicate Task WipesKimberly-Clark34120
LPSSigma-AldrichL3129-10mg
Luria Broth Broth, Miller Molecular Genetics PowderFisher ScientificBP1426-500
MACS BSA Stock SolutionMiltenyi Biotec 130-091-376
MACSmix Tube RotatorMiltenyi Biotec 130-090-753
Microcentrifuge TubesThermo Scientific34511.5 ml, clear, graduated, sterile
NanoDrop OneC Microvolume UV-Vis SpectrophotometerThermoFisher ScientificND-ONEC-W
Ohaus scout portable balanceFisher Scientific30253024
ParaformaldehydeThermo

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Alsaied, A., Islam, N., Thalib, L. Global incidence of necrotizing enterocolitis: A systematic review and meta-analysis. BMC Pediatr. 20 (1), 344(2020).
  2. Warner, B. B., Tarr, P. I. Necrotizing enterocolitis and preterm infant gut bacteria. Semin Fetal Neonatal Med. 21 (6), 394-399 (2016).
  3. Rose, A. T., Patel, R. M. A critical analysis of risk factors for necrotizing enterocolitis. Semin Fetal Neonatal Med. 23 (6), 374-379 (2018).
  4. Tanner, S. M., et al. Pathogenesis of necrotizing enterocolitis: Modeling the innate immune response. Am J Pathol. 185 (1), 4-16 (2015).
  5. Leaphart, C. L., et al. A critical role for TLR4 in the pathogenesis of necrotizing enterocolitis by modulating intestinal injury and repair1. J Immunol. 179 (7), 4808-4820 (2007).
  6. Hackam, D. J., Sodhi, C. P. Toll-like receptor-mediated intestinal inflammatory imbalance in the pathogenesis of necrotizing enterocolitis. Cell Mol Gastroenterol Hepatol. 6 (2), 229-238.e1 (2018).
  7. Sulistyo, A., Rahman, A., Biouss, G., Antounians, L., Zani, A. Animal models of necrotizing enterocolitis: Review of the literature and state of the art. Innov Surg Sci. 3 (2), 87-92 (2018).
  8. Lopez, C. M., et al. Models of necrotizing enterocolitis. Semin Perinatol. 47 (1), 151695(2023).
  9. Jilling, T., et al. The roles of bacteria and TLR4 in rat and murine models of necrotizing enterocolitis. J Immunol. 177 (5), 3273-3282 (2006).
  10. Mihi, B., Lanik, W. E., Gong, Q., Good, M. A mouse model of necrotizing enterocolitis. Methods Mol Biol. 2321, 101-110 (2021).
  11. Nolan, L. S., Gong, Q., Hofmeister, H. N., Good, M. A protocol for the induction of experimental necrotizing enterocolitis in neonatal mice. STAR Protoc. 2 (4), 100951(2021).
  12. Kaplina, A., et al. Necrotizing enterocolitis: The role of hypoxia, gut microbiome, and microbial metabolites. Int J Mol Sci. 24 (3), 2471(2023).
  13. Good, M., et al. Lactobacillus rhamnosus hn001 decreases the severity of necrotizing enterocolitis in neonatal mice and preterm piglets: Evidence in mice for a role of TLR9. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 306 (11), G1021-G1032 (2014).
  14. Denning, T. L., Bhatia, A. M., Kane, A. F., Patel, R. M., Denning, P. W. Pathogenesis of nec: Role of the innate and adaptive immune response. Semin Perinatol. 41 (1), 15-28 (2017).
  15. Yu, Y. -R. A., et al. A protocol for the comprehensive flow cytometric analysis of immune cells in normal and inflamed murine non-lymphoid tissues. PLOS ONE. 11 (3), e0150606(2016).
  16. Mihi, B., et al. Interleukin-22 signaling attenuates necrotizing enterocolitis by promoting epithelial cell regeneration. Cell Rep Med. 2 (6), 100320(2021).
  17. Bautista, G. M., Cera, A. J., Chaaban, H., Mcelroy, S. J. State-of-the-art review and update of in vivo models of necrotizing enterocolitis. Front Pediatr. 11, 1161342(2023).
  18. Sodhi, C. P., et al. The human milk oligosaccharides 2'-fucosyllactose and 6'-sialyllactose protect against the development of necrotizing enterocolitis by inhibiting toll-like receptor 4 signaling. Pediatr Res. 89 (1), 91-101 (2021).
  19. Blum, L., Vincent, D., Boettcher, M., Knopf, J. Immunological aspects of necrotizing enterocolitis models: A review. Front Immunol. 15, 1434281(2024).
  20. Nolan, L. S., et al. Indole-3-carbinol-dependent aryl hydrocarbon receptor signaling attenuates the inflammatory response in experimental necrotizing enterocolitis. Immunohorizons. 5 (4), 193-209 (2021).
  21. Valle-Noguera, A., Gómez-Sánchez, M. J., Girard-Madoux, M. J. H., Cruz-Adalia, A. Optimized protocol for characterization of mouse gut innate lymphoid cells. Front Immunol. 11, 563414(2020).
  22. Booth, J. S., et al. Characterization and functional properties of gastric tissue-resident memory T cells from children, adults, and the elderly. Front Immunol. 5, 294(2014).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

zapalenie jelitcytometria przep ywowaizolacja kom rek odporno ciowychuszkodzenie nab onkadysbioza mikrobiologicznakom rki odporno ci adaptacyjnej

Powiązane artykuły