Atakie rdzeniowo-móżdżkowe poliglutaminowe są spowodowane ekspansjami CAG prowadzącymi do tworzenia białek predysponowanych do agregacji. Ten protokół opisuje produkcję wektorów, stereotaksyczne wprowadzenie oraz analizę inkluzji i utraty markerów neuronowych, zapewniając kontrolowaną platformę do badania mechanizmów i oceny ukierunkowanych terapii chorób neurodegeneracyjnych.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Choroba zwojów wzrokowych wywołana wirusem lentywirusowym jako prekliniczny model poliglutaminowyej rdzeniowo-móżdżkowej ataksji
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Ataksje rdzeniowo-móżdżkowe z poliglutaminą to grupa sześciu chorób neurodegeneracyjnych wywołanych mutacją w regionie trójnukleotydowym CAG w obrębie regionu kodującego każdego genu przyczyniającego się do choroby. Mutacja ta prowadzi do nieprawidłowego wydłużenia fragmentu poliglutaminowego w białku, co sprawia, że jest ono podatne na agregację i prowadzi do powstawania śródneuronowych inkluzji, które są charakterystyczne dla tych chorób. Mechanizmy molekularne leżące u podstaw patogenezy tych chorób są złożone i nie są w pełni rozumiane. Jak dotąd choroby te pozostają nieuleczalne. Zrozumienie mechanizmów molekularnych w podatnych regionach mózgu jest niezbędne do rozwoju terapii. Elastyczne, specyficzne dla regionów eksperymentalne platformy są potrzebne, aby szybko testować mechanizmy i interwencje bez konieczności generowania wielu linii transgenicznych, nawet jeśli nie rozwiązują one problemu selektywnej podatności. W ostatnich latach, my i inni, opracowaliśmy kilka modeli opartych na lentivirusach w celu zbadania wpływu zwiększonej ekspresji białka w określonych regionach mózgu. Modele te wykazują cechy neuropatologiczne i behawioralne, które naśladują niektóre objawy choroby, podkreślając ich znaczenie w zrozumieniu patogenezy i rozwoju nowych strategii terapeutycznych. W niniejszym artykule opisujemy opracowanie modelu zwojowego używając SCA2 jako przykładu. Podkreślamy rozwój wektorów lentivirusowych i ich produkcję oraz stereotaktyczne wstrzyknięcie wektorów wyrażających zwiększoną formę ataksyny-2 (białka wywołującego chorobę). Na koniec charakteryzujemy dwie główne neuropatologiczne cechy charakterystyczne: tworzenie inkluzji i utratę markerów neuronalnych. Dzięki zapewnieniu kontrolowanej platformy, która odtworzy te kluczowe patologiczne cechy, model ten oferuje cenne narzędzie do analizy regionowo-specyficznych mechanizmów neurodegeneracji i oceny ukierunkowanych interwencji terapeutycznych.
Wprowadzenie
Ataksie rdzeniowo-móżdżkowe poliglutaminowe (poliQ SCA) to grupa sześciu autosomalnie dominujących zaburzeń neurodegeneracyjnych spowodowanych ekspansją powtórzeń trójnukleotydowych CAG w różnych genach przyczynowych, co prowadzi do toksycznych fragmentów poliglutaminowych (poliQ) w kodowanych białkach1. Wśród nich, najczęstszymi poliQ SCA są SCA3/choroba Machado-Joseph i SCA22. Zaburzenia te wpływają głównie na komórki neuronalne w określonych obszarach mózgu, w tym w móżdżku i pniu mózgu, a także w zwojsku i innych obszarach. W konsekwencji powodują postępującą niekoordynację ruchów, zaburzenia chodu, poważną neurodegenerację i przedwczesną śmierć3.
Opracowano wiele modeli zwierzęcych w celu badania poliQ SCA i testowania podejść terapeutycznych. Za pomocą myszy transgenicznych, linii knock-in i modeli myszy z warunkowym wyrażaniem genów, udało się wyjaśnić podstawy molekularne progresji choroby oraz zaangażowane ścieżki komórkowe4,5. Jednak generowanie nowego modelu zwierzęcego choroby jest czasochłonne i kosztowne, a często nie nadaje się do badań regionalnego zaangażowania mózgu w patogenezie choroby6.
Modele mysie oparte na wirusach lentywirusowych (LV) oferują alternatywę uzupełniającą dla konwencjonalnych modeli, o niższych kosztach i możliwością badania określonych obszarów mózgu7,8. Wektory lentiwirusów umożliwiają dostarczenie dużych transgenów (do 8 kb), prowadząc do szybkiej indukcji patologii w określonych obszarach mózgu bez konieczności modyfikacji linii komórkowych, i mogą być stosowane u zwierząt w różnym wieku. Bezpośrednie wstrzyknięcie wektorów lentiwirusowych do docelowego obszaru mózgu może osiągnąć regionowo-specyficzne wyrażanie genów patogennych lub terapeutycznych o niższej immunogeniczności w porównaniu z innymi wektorami wirusowymi4. Ponadto, postnatalne podanie umożliwia uniknięcie kompensacji rozwojowej w celu zbadania mechanizmów choroby w warunkach bardziej zbliżonych do ludzkiego początku9. Poziom wyrażania można regulować poprzez dostosowanie dawki wirusa, co pozwala na uzyskanie fenotypu o kontrolowanej ciężkości i ułatwia modelowanie postępującej progresji choroby. Dodatkowo, ta metoda umożliwia wybór specyficzności dla typu komórki, w zależności od wybranego promotora4,7.
Liczne badania wykazały praktyczność i przydatność modeli mysich opartych na LV w modelowaniu poliQ SCA10,11,12,13. My i inni naukowcy opracowali modele oparte na LV dla SCA111, SCA212, SCA311,12 oraz SCA714, stanowiące platformy dla szybkiego, regionowo-specyficznego wyrażania lub wyciszenia genów chorobowych przy jednoczesnym odtwarzaniu kluczowych aspektów neuropatologii.
Podsumowując, opisane tu podejście lentiwirusowe zapewnia wszechstronne i efektywne narzędzie do modelowania patogenezy poliQ SCA. Przez pokonanie niektórych z głównych wad obecnych modeli zwierzęcych, ta metoda przyspiesza badania koncepcyjne i zapewnia większą kontrolę nad początkiem, lokalizacją i ciężkością choroby - cechy, które czynią ją bardzo przydatną do przesiewowych badań terapeutycznych i badań mechanizmów molekularnych. W tym miejscu opisujemy metodę reproduktybilną w celu generowania i charakteryzacji zwojskowego modelu lentiwirusowego ataksji rdzeniowo-móżdżkowej poliglutaminowej, umożliwiającą szczegółową analizę wczesnych zdarzeń patogennych i ocenę kandydatów terapeutycznych.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Wszystkie eksperymenty na zwierzętach przeprowadzono zgodnie z wytycznymi Animal Research: Reporting of In Vivo Experiments (ARRIVE) oraz National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. Niniejsze badanie zostało zatwierdzone przez Direção-Geral da Alimentação e Veterinária (DGAV). W badaniu tym użyto myszy C57BL/6J, które były trzymane w grupach w standardowych klatkach w cyklu 12 h światło/12 h ciemność, z pokarmem i wodą dostępnymi ad libitum.
UWAGA: Materiały użyte w tym protokoąe są szczegóĆowo opisane w Tabeli MateriaĆów.
1. Pakowanie wektorów lentiwirusowych
UWAGA: Wszystkie procedury związane z wektorami lentiwirusowymi muszą być przeprowadzane w laboratorium BSL-2 zgodnie z wytycznymi bezpieczeństwa instytucji. Użyto systemu transfekcji z 4 plazmidami ze względu na jego wyższą bezpieczność biologiczną w porównaniu z innymi systemami produkującymi lentiwirusy (zobacz Rysunek 1 na szczegóły dotyczące plazmidu transferowego).
- Odtapiaj komórki HEK 293T w kópielu wodnym i zasiej je w kolbie T75 używając poórednio zmodyfikowanego poórednia Dulbecco (DMEM) uzupeònione o 2 mM L-glutaminy, 10% FBS i 1% Pen-Strep. To poórednie DMEM byĆo uđywane we wszystkich krokach protokoąu. Używaj komórek na przeĆyciu nie wyższym niđ 10, aby zapewnić wysokie tytuły wirusa i spóåniejsze wyniki.
UWAGA: Zawsze sprawdzaj zakađenie mykoplazmą przed kontynuacją. - Kiedy komórki osiągną 80%-90% stÍpienia pokrycia, rozmnóđ je do 2 kolb T175 przez podzielenie początkowej kultury 1:2. Zasiej 20 100-mm kultur platerów 3,8 x 106 komórek na plater (ostateczny objętość 10 mL) i inkubauj je przez 24 h w temperaturze 37 °C w inkubatorze zimnym z 5% CO₂. Licz komórki metodą wykluczenia trypanowym niebieskim za pomocą hemocitometru Neubauera.
UWAGA: Rozwađ ekskluzję Pen-Strep z poórednia, aby zmniejszyć stres komórkowy, a tym samym zmaksymalizować transfekcję komórkową. - Następnego dnia przygotuj mieszaninę transfekcyjną zgodnie z Tabelą 1. Wstrząśnij i krótko wiruj w dół, aby wyhomogenizować. Inkubuuj mieszaninę w temperaturze pokojowej przez 10-20 min, aby pozwolić na utworzenie się kompleksów DNA: PEI.
- Po pozwoleniu na utworzenie się kompleksów DNA: PEI przez 15 min w temperaturze pokojowej, uzupeònij mieszaninę do 5 mL ukoño DMEM.
Usuń 5 mL poórednia z kađdego platera (poòowyca łącznej objętości) i zastąp je 5 mL mieszanki transfekcyjnej. Dzięki temu ostateczny objętość kultury utrzymuje się na poziomie 10 mL podczas transfekcji. - Transfekuj komórki trzema plazmidami pakującymi i plazmidem transferowym zgodnie z Tabelą 1.
UWAGA: Wszystkie plazmidy używane do produkcji lentiwirusów powinny być przygotowane za pomocą zestawów do czyszczenia bez endotoksyn. Co więcej, integralność plazmidów powinna być zweryfikowana za pomocą analizy enzymów restrykcyjnych, aby potwierdzić poprawność regionów LTR i kaset transgenowych przed transfekcją. - Dodaj 5 mL mieszanki transfekcyjnej kroplą do kađdego platera i inkubuj przez 6 h. Odsópnij całe poórednie i zastąp je 10 mL świeđego poórednia. Inkubuj przez 48 h.
UWAGA: Aby zwiększyć tytuł wirusa, pobierz poórednie w 48 h, dodaj 10 mL świeđego poórednia do kađdego platera i pobierz ponownie po 24 h. Pobrany wcześniej poórednie można przechowywać w temperaturze 4 °C do 24 h. Dzięki temu można skoncentrować dwa razy więcej i zwiększyć tytuł wirusa. - Filtruj wszystkie poórednie warunkowe zawierające wektory lentiwirusowe za pomocą jednostki filtra 0,22 µm.
2. Oczyszczanie i tytulacja wektorów lentiwirusowych
- Przenieć przefiltrowany nadstan do odpowiednich szkłanych rurek ultrawirówkowych i wyśrodkuj w temperaturze 4 °C przez 1 h 30 min z prędkością 65 000 x g, używając na przykład wirówki z obrotową misą.
- Ostrođnie wyrzuć nadstan i ponownie zawieđ kađdy pellet w 400 µL 1% BSA rozciägniętej w 1x PBS, unikając powstawania bąbelek
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
To badania z powodzeniem zidentyfikowały ekspresję ataxin-2 i DARPP-32 stosując obecny protokół. Po stereotaksyjnym wstrzyknięciu wektorów lentiwirusowych do zwojów czepcowych myszy C57BL/6J, po 12 tygodniach wykryto mocną ekspresję zarówno dzikiego typu jak i mutantnego ataxin-2. Wcześniej wykazaliśmy12, że konstrukty te są specyficzne dla neuronów, skutecznie transdukują średnio 20 000 neuronów na mm3. W naszych warunkach eksperymentalnych, immunobarwienie na ataxin-2 ujawnił...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Niniejszy artykuł opisuje wygenerowanie modelu mysiego z wirusowymi wektorami lentywirusowymi dla poliQ SCA. Opisuje również produkcję wysokotytułowych wektorów lentywirusowych kodujących formę dziko-rodzajową i rozszerzoną formę białka przyczynowego oraz dwustronne wstrzyknięcie LV do mózgu mysiego przez operację stereotaktyczną. Dodatkowo, opisuje procedurę pobrania mózgu, przetwarzanie histologiczne oraz oparte na obrazach określanie ilościowe znamion chorobowych. Razem, te metody umożliwiają stworzenie lenty...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy deklarują brak konfliktu interesów.
Podziękowania
Laboratorium Clévio Nóbrega's jest sfinansowanie przez projekt Cure CSB, przez Stowarzyszenie Viljem Julijan dla Dzieci z Rzadkimi Chorobami (Słowenia) oraz przez Algarve Biomedical Center Research Institute (ABC-Ri). Niektórzy z autorów tego artykułu mają stypendium doktoranckie sfinansowane przez Fundação para a Ciência e Tecnologia (FCT), z następującymi odniesieniami: Tiago Moreira-Gomes (2022.11008.BD), Inês T Afonso (2022.10161.BD) i Rafael G Costa (2022. 11973.BD).
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| 0.9% NaCl | Dostawca lokalny | — | Stosowane do przygotowania mieszanek znieczulających i antagonistów |
| 100 mm naczynia do hodowli tkankowej | SPL Life Sciences | 11090 | |
| ABC kit (Avidin-Biotin Complex) | VECTASTAIN Elite | ||
| Atipamezole (5.0 mg/mL) | Dostawca lokalny | — | Antagonista medetomidyny |
| Centryfuga stołowa | - | - | |
| Szafka biobezpieczeństwa klasy II (zgodna z BSL-2) | - | - | |
| Biotynowany przeciwciało wtórny | - | - | |
| Albumina surowicy bydlęcej (BSA) | NZYTech | MB47002 | |
| Przescinki mózgu (np. przescinki koronarne o grubości 30–40 μm) wybarwione immunochemicznie na DARPP-32 | - | - | |
| Wtyczka Cell Counter (FIJI) | Wbudowana / ImageJ | — | Narzędzie do ręcznego zliczania agregatów |
| Inkubator CO2 (37 °C, 5% CO2, nawilżony) | - | - | |
| Stanowisko komputerowe | Dostawca lokalny | — | Stosowane do przetwarzania obrazów i uruchomienia oprogramowania |
| Lejki ultrawirówkowe | Beckman Coulter | 358126 | |
| Bąbelki bawełniane | Dostawca lokalny | — | Stosowane do usuwania okostnej |
| Kryostat z uchwytem na próbki | - | - | |
| DAB (Diaminobenzydyna) | - | - | |
| Cyfrowy czytnik współrzędnych stereotaksyjnych | Stoelting/WPI | 51725 | Wyświetlacz cyfrowy do pomiaru współrzędnych |
| Modyfikowany przez Dulbecco środek Eagle (DMEM, z wysokim poziomem glukozy) | Gibco/Thermo Fisher | 11-965-092 | |
| Etanol 70, 96 i 100% | - | - | |
| Etanol, 70% | Dostawca lokalny | — | Do dezynfekcji skóry głowy |
| Fentanil (0,05 mg/mL) | Dostawca lokalny | — | Składnik znieczulenia |
| Płodowe surowce krowie (FBS), inaktywowane cieplnie | Gibco/Thermo Fisher | 10500064 | |
| FIJI (dystrybucja ImageJ) | NIH / ImageJ | https://fiji.sc/ | Oprogramowanie open source do ręcznego ilościowego pomiaru agregatów |
| Drobne kleszcze (do ściągania palców) | Dostawca lokalny | — | Do monitorowania głębokości znieczulenia |
| Flumazenil (0,1 mg/mL) | Dostawca lokalny | — | Antagonista midazolamu |
| Pęsety i skalpel | Dostawca lokalny | — | Do usuwania okostnej i ekspozycji czaszki |
| Strzykawki mikrolitrowe/szczelne Hamilton 700/1700 Series | Hamilton / Fisher Sci. | 7653-01/10550203 | Do wprowadzania roztworów wirusowych |
| Strzykawki Hamilton Small Hub Removable Needles (26G) | Hamilton / Fisher Sci. | 7804-03/ 10698205 | Do wprowadzania wirusów |
| Podgrzewacz (dla gryzoni) | Kent Scientific / SOMNI | np. 04-777-177 | Do utrzymania temperatury ciała |
| Komórki HEK 293T (≤ przelew 10, wolne od mikoplazm) | ATCC lub równoważne | CRL-3216 | |
| Nadmianok | - | - | |
| Oprogramowanie IHC AggreCount | Dostarczane na życzenie | N/A | Firmowe oprogramowanie do półautomatycznego wykrywania i ilościowego pomiaru agregatów |
| Mikroskop inwertowany (na przepływność komórek) | - | - | |
| Miksarka wirówkowa laboratoryjna | - | - | |
| Wektory lentiwirusowe (dziki typ i mutant) | W firmie / Jednostka centralna | N/A | Roztwór wirusowy do wstrzykiwań |
| L-glutamina (200 mM) | Gibco/Thermo Fisher | 25030081 | |
| Mikroskop świetlny z aparatem (jasnopolowy) | - | - | |
| Medetomidyna (1,0 mg/mL) | Dostawca lokalny | — | Składnik znieczulenia |
| Wiertło mikro (kompatybilne ze stereotaksją) | Stoelting / Dostawca lokalny | — | Do przeprowadzania przetok |
| Pompa do wstrzykiwań mikro (np. Stoelting) | Stoelting/WPI | 53210 | Zautomatyzowana pompa do wlewu wirusów |
| Mikropipety (P1000, P200, P10) i końcówki | - | - | |
| Zdjęcia mikroskopowe (przescinki IHC) | Generowane w firmie | N/A | Zdjęcia immunohistochemiczne do analizy |
| Ostrza mikrotomowe (niskie, jednorazowe) | - | - | |
| Midazolam (5,0 mg/mL) | Dostawca lokalny | — | Składnik znieczulenia |
| Środek montażowy | - | - | |
| Nalozon (0,4 mg/mL) | Dostawca lokalny | — | Antagonista fentanil |
| Trzymający igły i drobne igły do sekcjonowania | - | - | |
| Normalne surowce kozie (NGS) | - | - | |
| Związek O.C.T. | Tissue-Tek | ||
| Maść okulistyczna (Bepanthen Eye and Nose Ointment, 5% Dexpanthenol) | Bayer | 11568-0053 | Zapobiega wysychaniu rogówki podczas operacji |
| Mieszarka orbitalna | - | - |
Bibliografia
- Afonso-Reis, R., Afonso, I. T., Nóbrega, C. Current Status of Gene Therapy Research in Polyglutamine Spinocerebellar Ataxias. Int J Mol Sci. 22 (8), 4249(2021).
- Durr, A. Autosomal dominant cerebellar ataxias: polyglutamine expansions and beyond. Lancet Neurol. 9 (9), 885-894 (2010).
- McIntosh, C. S., Li, D., Wilton, S. D., Aung-Htut, M. T. Polyglutamine Ataxias: Our Current Molecular Understanding and What the Future Holds for Antisense Therapies. Biomedicines. 9 (11), 1499(2021).
- Henriques, C., et al. Viral-based animal models in polyglutamine disorders. Brain. 147 (4), 1166-1189 (2024).
- Doyle, A., McGarry, M. P., Lee, N. A., Lee, J. J. The Construction of Transgenic and Gene Knockout/Knockin Mouse Models of Human Disease. Transg Res. 21 (2), 327-349 (2012).
- Tello, J. A., Williams, H. E., Eppler, R. M., Steinhilb, M. L., Khanna, M. Animal Models of Neurodegenerative Disease: Recent Advances in Fly Highlight Innovative Approaches to Drug Discovery. Front Mol Neurosci. 15, 883358(2022).
- Moreira-Gomes, T., Nóbrega, C. Development of a gene therapy with lentiviral vectors for spinocerebellar ataxias. Methods Mol Biol. 2974, 215-225 (2026).
- Parr-Brownlie, L. C., et al. Lentiviral vectors as tools to understand central nervous system biology in mammalian model organisms. Front Mol Neurosci. 8, 14(2015).
- Zwi-Dantsis, L., Mohamed, S., Massaro, G., Moeendarbary, E. Adeno-Associated Virus Vectors: Principles, Practices, and Prospects in Gene Therapy. Viruses. 17 (2), 239(2025).
- Moreira-Gomes, T., Nóbrega, C. From the disruption of RNA metabolism to the targeting of RNA-binding proteins: The case of polyglutamine spinocerebellar ataxias. J Neurochem. 168 (8), 1442-1459 (2024).
- Matsuzaki, Y., Oue, M., Hirai, H. Generation of a neurodegenerative disease mouse model using lentiviral vectors carrying an enhanced synapsin I promoter. J Neurosci Meth. 223, 133-143 (2014).
- Marcelo, A., et al. Autophagy in Spinocerebellar ataxia type 2, a dysregulated pathway, and a target for therapy. Cell Death Dis. 12 (12), 1117(2021).
- Alves, S., et al. Striatal and nigral pathology in a lentiviral rat model of Machado-Joseph disease. Human Mol Genet. 17 (14), 2071-2083 (2008).
- Alves, S., et al. Lentiviral vector-mediated overexpression of mutant ataxin-7 recapitulates SCA7 pathology and promotes accumulation of the FUS/TLS and MBNL1 RNA-binding proteins. Mol Neurodegenerat. 11 (1), 58(2016).
- Geraerts, M., Willems, S., Baekelandt, V., Debyser, Z., Gijsbers, R. Comparison of lentiviral vector titration methods. BMC Biotechnol. 6 (1), 34(2006).
- Arrasate, A., et al. Establishment and Characterization of a Stable Producer Cell Line Generation Platform for the Manufacturing of Clinical-Grade Lentiviral Vectors. Biomedicines. 12 (10), 2265(2024).
- Nóbrega, C., et al. Overexpression of Mutant Ataxin-3 in Mouse Cerebellum Induces Ataxia and Cerebellar Neuropathology. Cerebellum. 12 (4), 441-455 (2013).
- Paxinos, G., Franklin, K. B. J. The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , Compact Second Edition, Gulf Professional Publishing. (2004).
- Bateup, H. S., et al. Distinct subclasses of medium spiny neurons differentially regulate striatal motor behaviors. Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (33), 14845-14850 (2010).
- Nóbrega, C., et al. Molecular hallmarks of neurodegeneration in polyglutamine spinocerebellar ataxias. Cell Death Dis. 16 (1), 826(2025).
- Murakami, Y., et al. AAV-based gene therapy ameliorated CNS-specific GPI defect in mouse models. Mol Ther Meth Clin Dev. 32 (1), 101176(2024).
- Wada, H., et al. AAV-based gene therapy ameliorates neurological deficits in a mouse model of childhood-onset neurodegeneration with cerebellar atrophy. Mol Ther J Am Soc Gene Ther. 33 (11), 5829-5839 (2025).
- Konno, A., Shinohara, Y., Hirai, H. Production of Spinocerebellar Ataxia Type 3 Model Mice by Intravenous Injection of AAV-PHP.B Vectors. Int J Mol Sci. 25 (13), 7205(2024).
- Jansen-West, K., et al. Plasma PolyQ-ATXN3 Levels Associate With Cerebellar Degeneration and Behavioral Abnormalities in a New AAV-Based SCA3 Mouse Model. Front Cell Dev Biol. 10, 863089(2022).
- Nóbrega, C., Mendonça, L., Matos, C. A. A Handbook of Gene and Cell Therapy. , Springer International Publishing. Cham. (2020).
- Thomas, C. E., Ehrhardt, A., Kay, M. A. Progress and problems with the use of viral vectors for gene therapy. Nat Rev Genet. 4 (5), 346-358 (2003).
- Schambach, A., Zychlinski, D., Ehrnstroem, B., Baum, C. Biosafety Features of Lentiviral Vectors. Human Gene Ther. 24 (2), 132-142 (2013).
- de Almeida, L. P., Ross, C. A., Zala, D., Aebischer, P., Déglon, N. Lentiviral-Mediated Delivery of Mutant Huntingtin in the Striatum of Rats Induces a Selective Neuropathology Modulated by Polyglutamine Repeat Size, Huntingtin Expression Levels, and Protein Length. J Neurosci. 22 (9), 3473-3483 (2002).
- Fisher, E. M. C., Bannerman, D. M. Mouse models of neurodegeneration: Know your question, know your mouse. Sci Transl Med. 11 (493), eaaq1818(2019).
- Bii, V. M., Collins, C. P., Hocum, J. D., Trobridge, G. D. Replication-incompetent gammaretroviral and lentiviral vector-based insertional mutagenesis screens identify prostate cancer progression genes. Oncotarget. 9 (21), 15451-15463 (2018).
- Alves-Cruzeiro, J. M. D. C., Mendonça, L., Pereira de Almeida, L., Nóbrega, C. Motor Dysfunctions and Neuropathology in Mouse Models of Spinocerebellar Ataxia Type 2: A Comprehensive Review. Front Neurosci. 10, 572(2016).
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
