Protokół ten demonstruje metodę tworzenia pełnogrubych okrągłych ran skórnych u szczurów oraz wspomagania ich gojenia za pomocą elastycznej miedzianej cewki wytwarzającej pulsujące pole elektromagnetyczne.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
* These authors contributed equally
Protokół ten demonstruje metodę tworzenia pełnogrubych okrągłych ran skórnych u szczurów oraz wspomagania ich gojenia za pomocą elastycznej miedzianej cewki wytwarzającej pulsujące pole elektromagnetyczne.
Przewlekłe i duże rany skórne stanowią poważne wyzwania kliniczne ze względu na opóźnione gojenie i wysokie ryzyko infekcji. Terapia impulsowym polem elektromagnetycznym (PEMF) to nieinwazyjne podejście, które może wspierać naprawę tkanek. Badanie opisuje powtarzalny protokół modelu rany szczura z wykorzystaniem elastycznej plastry miedzianej cewki podłączonej do niestandardowego kontrolera PCB, aby zapewnić lokalną stymulację PEMF do pełnogrubych ran grzbietowych. Rana przeciwległa służyła jako nieleczona kontrola. Postęp gojenia oceniano za pomocą regularnej fotografii i pomiarów powierzchni ran. Protokół zapewnia praktyczny, elastyczny system oceny i optymalizacji terapii opartych na PEMF in vivo w różnych schorzeniach, ze szczególnym uwzględnieniem lokalnych zastosowań i dostosowania parametrów w medycynie regeneracyjnej. Dobór parametrów opierał się na ortogonalnym przesiewie CCK-8 dotyczącym proliferacji fibroblastów, który wykazał 0,25-1,3 mT, 10-40 Hz oraz 30-90 min/dzień; Analiza głównych efektów wykazała 1,3 mT, 30 Hz i 60 min/dzień jako optymalne poziomy, które zostały przyjęte do testów in vivo .
Przewlekłe rany skórne (takie jak wrzody cukrzycowe) stanowią narastający problem zdrowotny, często prowadzący do upośledzenia gojenia, infekcji lub amputacji1. Tradycyjne leczenie może być długotrwałe i kosztowne, co wzbudza zainteresowanie terapiami pomocniczymi, które mogą przyspieszyć naprawę tkanek2. Terapia polem elektromagnetycznym jest jednym z takich podejść, które jest nieinwazyjne i wykazało działanie prolecznicze zarówno w warunkach przedklinicznych, jak i klinicznych 2,3,4,5. Impu....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wszystkie procedury na zwierzętach zostały zatwierdzone przez Komitet ds. Opieki i Wykorzystania Zwierząt Instytucjonalnych (IACUC) Uniwersytetu Jiangnan (JN. Nr 2025-0630S0360-915[408]). Wdrożyliśmy protokół na samcach szczurów SD (6-8 tygodni wieku, około 200-250 g). Przed eksperymentami szczury były indywidualnie trzymane z dostępem do jedzenia i wody, utrzymywane w cyklu światła i ciemności co 12 godzin, zgodnie z Przewodnikiem dotyczącym opieki i wykorzystania zwierząt laboratoryjnych.
1. Tworzenie pełnogrubych ran wyciętych
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
W tym modelu rany szczura o pełnej grubości codzienna terapia PEMF za pomocą elastycznej plastry spiralnej skutkowała znacznie szybszym zamknięciem rany w porównaniu do grup kontrolnych. Aby rygorystycznie ocenić efekt, szczury podzielono na trzy grupy na podstawie projektu eksperymentalnego opisanego w sekcji Protokołu: grupę kontrolną wewnątrz osoby (gdzie każdy szczur miał jedną ranę leczoną PEMF i jedną przeciwpoboczną nieleczoną, dane zebrane do analizy), fikcyjną grupę kontrolną (PATCH: rana pokryta niezasilaną cew.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Kluczowe kroki obejmują tworzenie symetrycznych ran o pełnej grubości, zapewnienie, że plastra cewki leży płasko na sterylnej barierze bez szczelin oraz utrzymanie stałego codziennego narażania; Odchylenia mogą zmniejszać wydajność w polu i zwiększać zmienność wyników leczenia.
Prace te mają kilka ograniczeń, które należy uwzględnić przy interpretacji wyników i ocenie potencjału translacyjnego. Po pierwsze, protokół został wykazany u zdrowych samców szczurów SD (6-8 tygodni, 200-250 g) z ostry.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Autorzy deklarują, że nie mają konfliktu interesów ani interesów finansowych w produktach lub urządzeniach używanych w tym badaniu. Opisane niestandardowe urządzenie PEMF służy celom badawczym i nie jest powiązane komercyjnie.
Dziękujemy dr Zhangowi za wnikliwe dyskusje oraz dr Fu za pomoc w opiece nad zwierzętami i histologii. Prace te były wspierane przez (2022YFC3006200) Narodowy Kluczowy Program R&D Chin. Autorzy dziękują również pracownikom Wuxi School of Medicine, Jiangnan University Animal Facility za wsparcie podczas eksperymentów in vivo .
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Płytki hodowli komórkowych z 96 dołkami | BaiDi | H908002 | Do testu CCK-8 |
| SZKIEŁKA MIKROSKOPU ADHEZYJNEGO | CITOTESTO | P/N.80312-3161 | Wyposażenie dla H& Bejcowanie E/Masson |
| Środek przeciwnagetyczny (zastrzyk lidokainy chlorowodorkowo) | HUAMU | 70011657 | Opioidowy środek przeciwbólowy, 4 mg/kg (na ból) |
| Aparat do znieczulenia | Nauki o życiu z napędem na tylne koła (Shenzhen, CN) | R520-ISO | Vaporizer izofluranowy z dostępem tlenu |
| Zautomatyzowana maszyna do barwienia immunohistochemicznego | Leica | 21.2201 | automatyczne barwienie immunohistochemiczne |
| Cios biopsji (20 mm) | Integra Miltex | #33-37 | Okrągły punch skórny, średnica 2 cm |
| Aparat, cyfrowy | Huawei Mate 70 Pro | Nie ma | ≥ 12 MP do obrazowania ran |
| Przeciwciało CD31 | Abcam | ab182981 | Marker śródbłonkowy dla IHC (Rysunek 4B) |
| Przeciwciało CD34 | Abcam | ab81289 | Marker śródbłonkowy dla IHC (Rysunek 4B) |
| Zestaw do Liczenia Komórek-8 (CCK-8) | Biosharp | BS350B | Stosowany do in vitro testowania parametrów PEMF (OD450) |
| Naczynie do hodowli komórek (10 cm) | BaiDi | H802004 | 10 cm (100 mm) naczynia do hodowli tkanek do hodowli fibroblastów i nbsp; |
| Pożywka do hodowli komórek (np. DMEM + FBS) | BaiDi | L100-500 | Do hodowli fibroblastów w przesiewowym CCK-8 |
| Inkubator CO2 | Thermo | BB150-2TCS-L | Dla hodowli fibroblastów |
| Cewka, elastyczna miedź | Produkcja na zamówienie (wewnętrzna) | Nie ma | Spirala drukowana spiralnie (średnica 5 cm, poliimid) |
| Płytka sterująca (generator PEMF) | Budowa na zamówienie (projekt wewnętrzny) | Nie ma | Niestandardowa płytka PCB, napędy cewki o częstotliwości 30 Hz, ~1,3 mT |
| Elektryczna maszynka do włosów | Wahl lub Oster (pielęgnacja zwierząt) | Model 9160 | Maszynka do pielęgnacji zwierząt do golenia sierści |
| Elżbietańska obroża (gryzoń) | MukeBio | MK-EC-01 | Zapobieganie interferencjom ran |
| Stacja osadzania | Epredia HistoStar | A81000002 | Przetwarzanie do histologii (jeśli jest wykonywane) |
| Maska na twarz | Vedeng | V531596 | Utrzymuj znieczulenie |
| Fibroblasty (linia komórkowa L929) | Procell | CL-0137 | Komórki używane do przesiewania proliferacji CCK-8 |
| Oprogramowanie do symulacji elementów skończonych (np. COMSOL Multiphysics) | COMSOL | CM010004 | Symulacja pola magnetycznego (rysunek 5B-C) |
| Elastyczna aluminiowa szyna | deargo | 1592 | Wsparcie zapobiegające przesunięciu cewki |
| Kleszcze | Majestatyczne | 01625 | Do obsługi skóry i opatrunków podczas operacji |
| Hematoksylina i Eosin (H& E) Automatyczne barwienie i uszczelnianie unii | DRS-Prisma-P+FILM | 61770249 | Materiały do rutynowego barwienia histologicznego |
| Oprogramowanie do analizy obrazów | Narodowe Instytuty Zdrowia | Wersja 1.54 | Do pomiaru powierzchni rany (np. ImageJ) |
| Oprogramowanie do analizy obrazów | Narodowe Instytuty Zdrowia | Wersja 1.54 | Do pomiaru powierzchni rany (np. ImageJ) |
| Komora indukcyjna | Nauki o życiu z napędem na tylne koła (Shenzhen, CN) | 802-00132-00 | Indukcja znieczulenia izofluranowego |
| Kamera termowizyjna na podczerwień | HIKMICRO | H11 | Temperatura powierzchni cewki monitorującej (rysunek 5A) |
| Dezynfekcja z jodem Povidonem 10% | HYNAUT | Nie ma | Środek antyseptyczny skóry (jodofor) |
| Izofluran | Nauki o życiu z napędem na tylne koła (Shenzhen, CN) | 20037015 | Znieczulenie inhalacyjne (klasa USP) |
| Zastrzyk lidokainy 10% | SANMA | Nie ma | W przypadku analgezji pooperacyjnej |
| Zestaw do trójbarwnego barwienia Massona | BASO | C250202 | Materiały do wizualizacji kolagenu/ECM |
| Medyczny marker skóry i linijka | Tondaus | Nie ma | Uwzględnij skalę w zdjęciach ran |
| Czytnik mikropłyt | Thermo | A51119500C | Do pomiaru OD450 w teście CCK-8 |
| Mikrotom | Epredia HM 340E | 23900670 | Przecięcie do histologii/IHC (jeśli jest wykonywane) |
| Polimeryw tkankowy z poliformaldehydem | share-bio | SB-C009 | Utrwalanie próbek tkanek zwierzęcych |
| Klatka dla szczurów | FengQiao | CP-JM | Standardowa klatka dla szczurów do indywidualnych domów. |
| Rats, Sprague Dawley (mężczyzna, 6– 8 tygodni) | WeiJingyu SUZHOU | SCXK2024-0004 | 200– 250 g; mieszkał indywidualnie; Zastosowanie zatwierdzone przez IACUC. |
| Skalpel | Jinhuan | 35W0602 | Do tworzenia ran wyciętych |
| Półprzepuszczalne opatrunki foliowe | ZD | Q20189 | Alternatywna bariera ran |
| Oprogramowanie do analizy statystycznej (np. GraphPad Prism lub R) | Oprogramowanie Mackeiv | 10.6.9(890) | Dwukierunkowe porównania ANOVA i post hoc wielokrotne porównania |
| Gaza sterylna | ZD | 3141626 | Opatrunki/bariera ochronna |
| Sterylne zasłony chirurgiczne | ZD | V271617 | Do zasłonienia pola chirurgicznego po przygotowaniu skóry |
| Nożyczki chirurgiczne | Majestatyczne | 01627 | Do tworzenia ran wyciętych |
| Strzykawki i igły | MINANK | 20193141643 | Do podskórnego podawania środków przeciwbólowych |
| Skaner całej zjeżdżalni | 3DHISTECH | Nie ma | Cyfrowe skanowanie preparatów |
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.