Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Protokół badania regulacji Honokiolu sygnalizacji transformującego czynnika wzrostu beta 1/SMAD w modelach fotostarzenia skóry indukowanych ultrafioletem A

208 wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/70099

⸱

8 maja 2026

 ,  ,  , 
1Plastic Surgery Center, the 988th Hospital of Joint Logistic Support Force of Chinese People's Liberation Army

W tym artykule

Podsumowanie

Protokół ten bada, czy honokiol łagodzi fotostarzenie wywołane UVA w ludzkich fibroblastach dermalnych i skórze myszy poprzez aktywację szlaku TGF-β1/Smad oraz redukcję ekspresji MMP.

Streszczenie

Honokiol (HNK), kluczowy składnik pochodzący z Magnolia officinalis, ma potencjał leczenia chorób skóry. Obecnie wpływ i mechanizm działania HNK na fotouszkodzenia skóry wywołane przez ultrafiolet A (UVA) są niejasne. Model uszkodzeń fotostarzenia komórek HDF i bezwłosej skóry myszy został skonstruowany przez indukcję UVA. Wpływ HNK na żywotność normalnych komórek HDF oraz komórek HDF indukowanych przez UVA został zbadany za pomocą testu żywotności komórek. Poziomy SOD, GSH, CAT i MDA w komórkach HDF mierzono różnymi zestawami, a poziomy ROS za pomocą DCFH-DA i dihydroetydu. Barwienie SA-β-galaktozydazy i TUNEL wykazało starzenie i apoptozę w komórkach HDF, a cytometria przepływowa oceniała postęp cyklu komórkowego. Histopatologiczne uszkodzenia skóry oceniono za pomocą patologicznego barwienia. Ponadto do oceny poziomu białek związanych z szlakiem matrycowego (MMP) oraz szlaku TGF-β1/Smad wykorzystano immunofluorescencję i Western blot. Leczenie HNK (2,5-10 μM) nie miało negatywnego wpływu na prawidłową żywotność komórek HDF, ale osłabiło uszkodzenia komórek HDF wywołane przez UVA, zmniejszając stres oksydacyjny i apoptozę. UVA indukowało starzenie komórek HDF, indukowało zatrzymanie fazy S, obniżenie poziomu Ki67, obniżenie zawartości kolagenu oraz zwiększenie ekspresji MMP, podczas gdy HNK skutecznie tłumiło te nieprawidłowości wywołane przez UVA. Ponadto UVA powodowała głębsze zmarszczki, obniżała zawartość wody i kolagenu oraz zwiększała grubość nabłonka u skóry myszy, podczas gdy podskórne wstrzykiwanie HNK zmniejszało patologiczne uszkodzenia tkanki skóry oraz zwiększało zawartość wody i kolagenu. Ponadto HNK aktywował szlak TGF-β1/Smad, a inhibitor TGF-β1 SB431542 osłabił ochronny efekt HNK przed uszkodzeniami fotostarzeniami w komórkach HDF. Podsumowując, HNK ma potencjał, by być lekiem łagodzącym uszkodzenia związane ze starzeniem się w świetle poprzez zmniejszenie ekspresji MMP poprzez aktywację szlaku TGF-β1/Smad, hamując tym samym fotostarzenie wywołane przez UVA w komórkach HDF i skórze myszy.

Wprowadzenie

Proces starzenia się skóry jest złożony i dzieli się na dwie główne formy: naturalne starzenie się oraz foto-starzeniesię 1. Badania wskazują, że nawet 80% do 90% starzenia się skóry jest spowodowane czynnikami obcymi środowiska (np. promieniowaniem ultrafioletowym, zanieczyszczeniem powietrza), z czego najpoważniejsze skutki ma długotrwałe fotostarzenie wywołane promieniowaniem ultrafioletowym 2,3. Promieniowanie ultrafioletowe dzieli się na UVC, UVB i UVA. Ponieważ UVC nie przenika warstwy ozonowej, obecne badania nad foto-starzeniem koncentrują się na UVA (320-400 nm) oraz UVB (280-320 nm)4,5,6. W porównaniu z UVB, UVA ma mniej energii, ale jest bardziej przenikliwa, przechodzi przez naskórek i sięga głęboko w skórę, co jest ważną przyczynąpoważnego starzenia się skóry. Poprzednie badania wykazały, że uszkodzenia spowodowane napromieniowaniem UVB o promieniowaniu UVA o stężeniu 57 mJ/cm2 na komórkach HaCaT są porównywalne8. Foto-starzenie się skóry powoduje zmiany w funkcji i strukturze skóry, które objawiają się wiskiem tkanek powierzchniowych, pogłębianiem zmarszczek, utratą kolagenu oraz widocznym gołym okiem szarym kolorem skóry; W ciężkich przypadkach mogą wystąpić różne łagodne, przednowotworowe zmiany i guzy 9,10. Wraz ze wzrostem badań nad starzeniem się i przeciwstarzeniem, ryzyko zdrowotne związane z fotografowaniem stało się jednym z najważniejszych problemów zdrowotnych na świecie. Dlatego kluczowe jest badanie procesów patofizjologicznych leżących u podstaw uszkodzeń wywołanych przez UVA w wyniku fotostarzenia, z myślą o opracowaniu nowych opcji terapeutycznych w leczeniu.

Pozyskiwany z magnolii officinalis, tradycyjnego chińskiego zioła leczniczego, Honokiol (HNK) jest istotnym związkiem bioaktywnym o wzorze chemicznym C18H18O211. HNK wykazuje różne właściwości farmakologiczne, a jego grupa fenolowa hydroksylowa jest bardzo podatna na utlenianie i ma silne działanie antyoksydacyjne oraz wolne rodniki12. Ponadto HNK ma działanie farmakologiczne antybakteryjne, przeciwzapalne, przeciwwirusowe, przeciwnowotworowe, przeciwdepresyjne, neuroochronne oraz przeciwwczesne niewydolność jajników(13,14,15,16. Doustny HNK został uznany za zasadniczo bezpieczny w badaniach na zwierzętach i badaniach klinicznych, a nie stwierdzono istotnych skutków niepożądanych 17,18,19. Najnowsze badania wykazały, że HNK zapobiega rakowi skóry wywołanemu UVB20 oraz hamuje reakcję zapalną skóry wywołaną UVB i hipermetylację DNA, co sugeruje jego potencjalne zastosowanie w leczeniu schorzeń skóry. W porównaniu z szeroko stosowanymi środkami przeciwstarzeniowymi, w tym witaminą C i resweratrolem, HNK ma charakterystyczne i lepsze właściwości: jego lipofilowa struktura zapewnia lepszą przepuszczalność przezskórną niż hydrofilowa witaminaC22; a także wykazuje wyższą fotostabilność i biodostępność in vivo niż resweratrol23. Te przedkliniczne odkrycia potwierdzają tezę, że HNK ma obiecujący potencjał translacyjny jako bezpieczny i skuteczny kandydat do produktów do pielęgnacji skóry oraz interwencji klinicznych przeciwko fotouszkodzeniom skóry wywołanemu promieniowaniem ultrafioletem. Jednak wpływ leczenia HNK na uszkodzenia spowodowane fotostarzeniem skóry spowodowane przez UVA nie został jeszcze zgłoszony.

Transformujący czynnik wzrostu-β1 (TGF-β1) to wielofunkcyjna cytokina kluczowa dla wzrostu i rozwoju komórek, naprawy i regeneracji tkanek oraz wzrostu i rozwoju komórek, tkanek i narządów24,25. Wykazano, że TGF-β1 wysyła sygnały do komórki głównie za pośrednictwem członków rodziny białek Smad, co prowadzi do specyficznej regulacji transkrypcji genów docelowych w dalszej fazie. Gdy sygnalizacja TGF-β1 zostaje aktywowana, powoduje fosforylację Smad2 i Smad326,27. Najnowsze badania wykazały silny związek między szlakiem TGF-β1/Smad a włóknieniem skóry a foto-starzeniemsię 28,29. Zgłoszono, że ssakowy cel rapamycyny aktywuje szlak TGF-β1/Smad w tkankach skóry szczurów, co z kolei sprzyja syntezie ceramidów, które są ważne dla utrzymania wilgoci skóry i utrzymania barieryskórnej 30. Warto zauważyć, że HNK modulował szlak TGF-β1/Smad w komórkach wątrobowych gwiaździstych, co z kolei złagodziło włóknienie wątroby31. W związku z tym opracowano modele komórkowe i mysie urazów fotostarzeniowych wywołanych UVA, z leczeniem 2,5–10 μM HNK w komórkach HDF oraz interwencją 5 mg/kg lub 10 mg/kg HNK u bezwłosych myszy, aby zbadać wpływ HNK na uszkodzenia związane z fotostarzeniem się i jego potencjalną rolę w modulacji szlaku TGF-β1/Smad. Celem tego badania było opracowanie nowych strategii terapeutycznych w zakresie fotouszkodzeń skóry wywołanych przez UVA.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Wszystkie eksperymenty z hodowlą komórek przeprowadzano zgodnie z wytycznymi instytucjonalnego biobezpieczeństwa i w warunkach laboratoryjnych poziomu 2 (BSL-2). Eksperymenty na zwierzętach przeprowadzono po uzyskaniu zgody Komitetu Etyki Zwierząt 988. Szpitala Połączonych Sił Wsparcia Logistycznego Chińskiej Armii Ludowo-Wyzwoleńczej (numer zatwierdzenia: 2023-089).

Wszystkie procedury eksperymentalne przeprowadzano w ścisłej zgodności z instytucjonalnymi i krajowymi wytycznymi dotyczącymi opieki i wykorzystania zwierząt laboratoryjnych. Na koniec eksperymentu myszy zostały uśpione przez przedawkowanie pentobarbitalu sodu (100 mg/kg, iniekcja dootrzewnowna). Podjęto wszelkie wysiłki, aby zminimalizować cierpienie zwierząt podczas zakwaterowania, leczenia i pobierania próbek. Odczynniki, chemikalia, sprzęt i oprogramowanie używane w protokole są wymienione w Tabeli Materiałów.

1. Hodowla i przetwarzanie komórek

  1. Hodować ludzkie fibroblasty skórne (HDF) w pożywce fibroblastowej. Utrzymuj hodowle w temperaturze 37 °C w środowisku o nasyconej wilgotności z 5%CO2.
  2. Wymieniaj podłoże hodowlane co 3 dni i przepuszczaj HDF w proporcji 1:3 podczas łączenia się roślin.
  3. Napromieniuj włókno wysokiej energii lampami UVA (spektrum emisyjne: 320-400 nm) przy dawce 5 J/cm2.
  4. Uzupełnij świeżym medium natychmiast po 30 minutach napromieniowania UVA. Powtarzaj napromieniowanie UVA raz dziennie przez 8 kolejnych dni,32.
  5. Lecz HDF dawką 2,5, 5, 10, 20 lub 40 μM HNK przez 24 godziny lub 48 godzin w eksperymentach dawkowo-przesiewowych33. Traktuj HDF 2,5, 5 lub 10 μM HNK przez 24 godziny, a następnie napromieniowanie UVA (5 J/cm2) w kolejnych eksperymentach.
  6. Wystaw się HDF na 10 μM HNK przez 4 godziny, następnie inkubuj inhibitorem TGF-β1 o stężeniu 10 μM SB431542 przez 24 godziny, a na końcu napromieniuj UVA (5 J/cm2) w grupie HNK+SB431542.

2. Ocena żywotności komórek

  1. Zaszczep HDF do 96-dołkowych płytek hodowli komórkowych o gęstości 1×10 4 komórek /dołek.
  2. Po różnych zabiegach należy do każdego odwiertu dodać 10 μL 10% w wodzie rozpuszczalnego w wodzie odczynnika z solą tetrazolową do końcowej objętości 100 μL na odwiert i inkubować komórki w temperaturze 37°C przez 1,5 godziny w ciemności.
  3. Zmierz wartości OD450 komórek za pomocą czytnika mikropłyt.

3. Określenie poziomów dysmutazy nadtlenkowej (SOD), malondialdehydu (MDA), katalazy (CAT) i glutationu (GSH)

  1. Przemyj HDF 1 mL wstępnie schłodzonego PBS (0,01 M, pH 7,4), dodaj 200 μL roztworu do przygotowania próbek SOD (z zestawu do testów SOD) do limfocytów na lodzie przez 15 minut.
  2. Wiruj lizat w 8000 × g przez 5 minut w temperaturze 4 °C i pobieraj supernatant jako próbkę testową.
  3. Użyj zestawu do testowania białka BCA (kwasu bicinchoninowego), aby określić stężenie białka w supernatancie, a próbkę dostosuj do 50 μg całkowitego białka w objętości 50 μL.
  4. Wymieszaj próbkę białka o pojemności 50 μg z buforem SOD do końcowej objętości reakcji 200 μL, inkubuj mieszaninę w temperaturze 37 °C przez 30 minut w ciemności, a następnie zmierz wartość OD450.
  5. Weź ten sam nadnadatnik lizatu komórkowego, który był używany w testie SOD, zmierz poziomy CAT, GSH i MDA za pomocą odpowiednich zestawów testowych.

4. Pomiar poziomów ROS komórkowych

  1. Lecz komórki HDF w różnych warunkach, dwukrotnie przepłucz PBS 500 μL i dobrze wymieszaj z 500 μL 10 μM reaktywnych źródeł tlenu fluorescencyjnych i inkubuj w 37 °C przez 20 minut z dala od światła.
  2. Wiruj w 1000 × g przez 5 minut w temperaturze pokojowej, aby zebrać komórki, a następnie dwukrotnie przepłukuj 500 μL PBS.
  3. Ponownie zawiesz komórki w pożywce hodowli 500 μL, a następnie analizuj barwienie za pomocą cytometrii przepływowej.
  4. Rejestruj intensywność fluorescencji za pomocą oprogramowania do analizy cytometrii przepływowej, a następnie obliczaj poziomy ROS na podstawie intensywności fluorescencji, która wyższa odpowiada silniejszej zielonej fluorescencji.

5. Barwienie β-galaktozydazy (SA-β-galaktozydaza) związane ze starzeniem

  1. Siej HDF na płytkach hodowli komórek 6-dołkowy o gęstości 1×106 komórek/ dołek i hoduj do przylegania. Po różnych zabiegach myj HDF raz z 2 mL PBS.
  2. Dodaj 1 ml utrwalacza β-galaktozydazy do każdej jamki i inkubuj komórki w temperaturze pokojowej z utrwalaczem przez 15 minut.
  3. Przemyj komórki 3 razy 2 mL PBS, dodaj 1 ml roztworu roboczego do każdego dołku, a następnie inkubuj w temperaturze 37°C przez noc w ciemności.
  4. Obserwuj i fotografuj komórki za pomocą mikroskopu świetlnego (komórki starzejące wyglądają na niebieskie).

6. Test cyklu komórkowego

  1. Zasiewaj HDF do płytek 6-dołkowych przy 1×106 komórek /dołek; po różnych zabiegach płucz komórki dwukrotnie 2 mL PBS.
  2. Wiruj w 1000 × g przez 5 minut w temperaturze pokojowej, aby zebrać komórki, dodaj 1 ml 70% etanolu (utrwalacz komórek) i delikatnie wymieszaj przez pipetowanie. Umieść stałe ogniwa w lodówce o temperaturze 4°C na 12 godzin.
  3. Przygotuj 500 μL na próbkę roztworu barwienia komórkowego, mieszając jodek propidiu (PI, stężenie końcowe 50 μg/mL) i RNaseA (końcowe stężenie 200 μg/mL) w PBS. Wystaw komórki na 500 μL roztworu barwiącego, inkubuj w ciemności w temperaturze 37°C przez 30 minut.
  4. Oceń intensywność fluorescencji za pomocą cytometrii przepływowej. Wykonaj analizę cyklu komórkowego za pomocą cytometru przepływowego.

7. Barcowanie TUNELU

  1. Komórki włókna wysokiej węgla z różnych grup zabiegowych wystawiaj na 1 mL 4% paradehydu i inkubuj w temperaturze pokojowej przez 30 minut.
  2. Dodaj do komórek 1 mL PBS zawierającego 0,3% Triton X-100 i inkubuj w temperaturze pokojowej przez 5 minut.
  3. Przemyj komórki dwukrotnie PBS, a następnie dodaj roztwór TUNEL 500 μL kropelowo, aby równomiernie pokryć komórki. Inkubuj w temperaturze 37°C w ciemności przez 1,5 godziny.
  4. Dodaj 200 μL roztworu barwienia DAPI, aby pokryć komórki, i inkubuj z dala od światła przez 10 minut w temperaturze 25 °C.
  5. Uszczelnij komórki medium mocującym sygnał fluorescencyjny, a następnie obserwuj i fotografuj je mikroskopem fluorescencyjnym (komórki TUNEL-pozytywne wykazują zieloną fluorescencję).

8. Barwienie immunofluorescencyjne

  1. Rozsiewaj komórki HDF z różnych grup zabiegowych do płytek z 12 dołkami. Gdy gęstość komórek osiągnie 50%-60%, poddaj komórki 1 mL 4% paraformaldehydu i inkubuj w temperaturze pokojowej przez 25 minut.
  2. Dodaj 1 ml 5% prowincji surowicy bydłej (BSA) krople, aby zablokować powierzchnię komórki, i inkubuj w temperaturze pokojowej przez 30 minut.
  3. Dodaj 500 μL przeciwciał pierwotnych Ki67 (1:300), kolagen I (1:100), metaloproteinazę macierzową (MMP)-1 (1:50) lub MMP-3 (1:100) kroplami i inkubuj w temperaturze 4°C przez noc.
  4. Następnego dnia inkubuj komórki 500 μL przeciwciała wtórnego znakowanego izotiocyanianem fluoresceiny (FITC) (1:100) w temperaturze 37°C z dala od światła przez godzinę.
  5. Dodaj 200 μL roztworu barwienia DAPI, aby pokryć komórki, inkubuj z dala od światła przez 10 minut, obserwuj za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego i analizuje za pomocą oprogramowania do analizy obrazów (komórki z pozytywnym kolagenem I i MMP-1 wykazują czerwoną fluorescencję, komórki pozytywne Ki67 i MMP-3 wykazują zieloną fluorescencję).

9. ELISA

  1. Dodaj 100 μL supernatantu hodowli komórek HDF do studni z płytkami zestawu MMP-1 lub MMP-3 ELISA i inkubuj w temperaturze 37°C przez 2 godziny.
  2. Przemyj studnie 3 razy 200 μL PBS, następnie dodaj 100 μL odpowiadającego przeciwciała do każdego odwiertu i inkubuj w 37 °C w ciemności przez 1 godzinę.
  3. Przepłucz studnie 3 razy 200 μL buforu do płukania (dostarczonego w zestawie), strząśnij nadmiar roztworu i inkubuj próbki 100 μL streptawidyny-HRP przez 30 minut w temperaturze 37°C w ciemności.
  4. Po płukaniu PBS dodaj 100 μL podłoża A i B zgodnie z instrukcją zestawu i inkubuj w temperaturze 37°C w ciemności przez 10 minut.
  5. Dodaj 50 μL roztworu zakończenia, dobrze wymieszaj, ocenij wartość OD450 za pomocą czytnika mikropłyt i oblicz stężenie.

10. Konstrukcja modelu myszy z uszkodzeniami fotostarzenia

  1. Trzymaj samice bezwłosych myszy SKH1 o jakości SPF (15-20 g, 4-5 tygodni) w temperaturze 22 °C i wilgotności 55%-60% oraz umożliwiają autonomiczny dostęp do jedzenia i wody. Dezynfekuj regularnie obiekty, w tym pojemniki na jedzenie, butelki na wodę i wylewy do picia.
  2. Losowo przypisz myszy do grupy kontrolnej (n=6) oraz grupy modelowej (n=18). Myszy z grupy modelowej Irradiate z UVA przy 0,35 J/cm2 przez 8 tygodni34; Myszy grupy kontrolnej w tym samym środowisku bez promieniowania UVA.
  3. Podziel myszy z grupy modelowej równo na 3 podgrupy (n=6 każda).
  4. Podawaj podskórne zastrzyki HNK w dawce 5 mg/kg lub 10 mg/kg w objętości 100 μL dwa razy w tygodniu do dwóch podgrup podczas napromieniania UVA (rejestrowane jako grupa 5 mg/kg HNK i grupa 10 mg/kg HNK). Podawanie podskórnych zastrzyków 100 μL soli fizjologicznej dwa razy w tygodniu trzeciej podgrupie podczas napromieniowania UVA (zarejestrowane jako grupa UVA).
  5. Oceń powstawanie zmarszczek na skórze i zawartość wody po udanym modelowaniu35.
  6. Uśpiewa myszy pentobarbitalem sodu (100 mg/kg) dootrzewkowo, a następnie zbiera tkanki skóry grzbietowej do dalszych eksperymentów.

11. Pomiar zawartości kolagenu I w skórze

  1. Zbierz 50 mg tkanek skóry grzbietowej myszy, dokładnie je zmiel w ciekłym azocie i lizuj za pomocą 500 μL wcześniej schłodzonego bufora RIPA przez 30 minut na lodzie.
  2. Wiruj lizatan w dawce 8000 × g przez 5 minut w 4 °C, pobierz supernatant i zmierz zawartość kolagenu za pomocą zestawu do testowania peptydów prokolagenu IC zgodnie z instrukcjami producenta.

12. Barwienie hematoksylyną i eozyną (HE)

  1. Utrwalić tkanki skóry myszy w 10 mL 4% paradehydu w temperaturze pokojowej przez 24 godziny, suszyć w etanolu gradientowym (50%, 75%, 95%, 100%, każdy przez 5 minut), zanurzyć w parafinie i pokroić na plasterki o objętości 4 μm.
  2. Piecz plasterki w 65°C przez 8 godzin, odparaffinuj w ksylenie dwa razy przez 10 minut każdy, a następnie nawilżaj w etanolu gradientowym w temperaturze pokojowej.
  3. Barwić plasterki roztworem hematoksyliny przez 8 minut, przepłukiwać bieżącą wodą z kranu przez 1 minutę, różnicować roztworem różnicującym przez 30 sekund i barwić eozyną przez 1 minutę w temperaturze pokojowej.
  4. Susz zabarwione plastry w gradientowym etanolu, przezroczystym w ksylenie, zamykaj medium montażowym i obserwuj pod mikroskopem (jądro komórki wygląda na niebiesko-fioletowe, podczas gdy cytoplazma, włókna kolagenowe i erytrocyty różowe w różowym stopniu).

13. Barwienie Massona

  1. Barwij parafinowe fragmenty tkanek skóry myszy za pomocą zestawu do barwienia trichromowego Masson36. Odparaffiniuj fragmenty parafiny w ksylenie dwa razy przez 10 minut każda, dodaj roztwór barwienia żelaza Heoksylyny Weigerta i barw przez 10 minut.
  2. Różnicuj roztworem różnicowania etanolu kwasowego przez 30 sekund, płukaj bieżącą wodą z kranu przez 5 minut, a następnie barw roztworem barwiącym Ponceau-fuchsin kroplą przez 10 minut w temperaturze pokojowej. Wykonaj odwrotne niebieskie roztwory Masson's blue, a następnie spłukuj wodą destylowaną przez 1 minutę.
  3. Przygotuj słaby roztwór kwasowy w stosunku wody destylowanej: słaby roztwór kwasowy (dostępny w zestawie) = 2:1; Dodaj 1 mL słabego roztworu kwaśnego kroplami i myj przez 30 sekund w temperaturze pokojowej.
  4. Wylej nadmiar płynu, dodaj 1 ml roztworu kwasu fosfolibdykowego kroplami i traktuj przez 2 minuty w temperaturze pokojowej. Dodaj 1 ml słabego roztworu kwaśnego krople, a następnie myj przez 30 sekund.
  5. Wylej nadmiar płynu, dodaj 1 ml roztworu do barwienia anilinowego, krople i bejcuj przez 1 minutę. Dodaj 1 ml słabego roztworu kwaśnego kroplami i myj przez 30 sekund.
  6. Szybko odsusz w 95% etanolu przez 2 sekundy. Susz w absolutnym etanolu dwa razy, po 10 sekund za każdym razem.
  7. Po wyschnięciu oczyszcz fragmenty ksylenem i zamontuj z neutralną gumą. Obserwuj pod mikroskopem rozkład włókien kolagenowych w każdej grupie (włókna kolagenowe wydają się niebieskie, włókna mięśniowe, cytoplazma i erytrocyty są jaskrawoczerwone, a jądra komórkowe wyraźnie niebiesko-czarne).

14. Pomiar poziomów ROS tkanki skóry

  1. Weź zamrożone fragmenty tkanki skóry myszy (przygotowane w ciągu 1 godziny od wycięcia), rozprowadz 1 ml roztworu czyszczącego kroplami na całą powierzchnię sekcji i pozostaw w temperaturze pokojowej przez 10 minut.
  2. Strząśnij roztwór płuczący, a następnie dodaj 1 mL 10 μM reaktywnego tlenu sondą kroplą, aby równomiernie pokryć przekroje; Inkubuj w temperaturze 37 °C z dala od światła przez 30 minut.
  3. Przepłukać przekroje dwukrotnie PBS, dodać pokrywy i obserwować za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego (obszary ROS wykazują czerwoną fluorescencję; im niższy poziom ROS, tym słabszy czerwony sygnał fluorescencji).

15. Testowanie wskaźników biochemicznych

  1. Zbieraj surowicę myszy i przygotowuj odczynniki wykrywające zgodnie z instrukcjami odpowiednich zestawów testowych.
  2. Zmierz aktywność transaminazy asparagianowej (AST) i transaminazy alaninowej (ALT) w surowicy mysi za pomocą odpowiednich zestawów.
  3. Określ poziomy azotu mocznika we krwi (BUN) i kreatyniny (CRE) w surowicy mysi, korzystając z odpowiednich zestawów.

16. Western blot

  1. Pobierz 50 mg tkanek lub 1×106 komórek , lizuj próbki na lodzie przez 30 minut za pomocą 200 μL buforu lizy RIPA, aby uzyskać białka.
  2. Wiruj w 8000 × g przez 5 minut w 4 °C i zbieraj supernatant. Oceń zawartość białek w komórkach i tkankach za pomocą zestawu do testowania stężenia białek BCA.
  3. Wykonaj elektroforezę białek próbek na żelu 12% SDS-PAGE oraz przenieś rozdzielone białka do błon PVDF w temperaturze 4 °C.
  4. Blokuj membrany PVDF z 5% BSA przez 3 godziny w temperaturze pokojowej. Płukaj błony TBST (zawiera 20 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl i 0,1% Tween-20) trzykrotnie, a następnie inkubuj przez noc w temperaturze 4°C z pierwotnymi przeciwciałami: P53 (1:1000), P21 (1:1000), P16 (1:100), kolagen I (1:1000), Cyklina A2 (1:500), kinaza zależna od cykliny 2 (CDK2, 1:1000), MMP-1 (1:500), MMP-3 (1:1000), TGF-β1 (1:1000), Smad2 (1:100), Smad3 (1:1000), p-Smad2 (1:1000) lub p-Smad3 (1:1000).
  5. Drugiego dnia myj błony 3 razy TBST, a następnie inkubuj z 1 mL koziego IgG antykróliczego (1:10000) w temperaturze pokojowej przez 2 godziny. Równomiernie nałóż 500 μL odczynnika o zwiększonej chemiluminescencji (ECL) na błony, a następnie skanuj je za pomocą systemu obrazowania żelowego.
  6. Wykonaj analizę wartości szarości za pomocą oprogramowania do analizy obrazów. Relatywny poziom wyrażenia wyrażamy jako stosunek jego wartości szarości do wartości GAPDH.

17. Analiza statystyczna

  1. W testach in vitro na komórkach wszystkie eksperymenty są niezależnie powtarzane trzy razy (n=3, biologiczne replikacje).
  2. W eksperymentach in vivo na zwierzętach uwzględnia się 6 myszy na grupę (n=6), co jest zgodne z zasadami 3R dotyczących dobrostanu zwierząt laboratoryjnych i etyki.
  3. Wszystkie wyniki wyrażane są jako średnia ± odchylenie standardowe. Wykonuj analizę statystyczną za pomocą oprogramowania do analizy statystycznej. Normalność danych została przetestowana za pomocą testu Shapiro-Wilka.
  4. Dla danych rozproszonych o normalnym rozkładzie użyj jednokierunkowej ANOVA do porównania wielogrupowego, a następnie testu post-hoc Tukeya do porównań parowych między grupami. Dla danych o rozkładzie nienormalnym zastosuj nieparametryczny test Kruskala-Wallisa. P< 0,05 wskazuje na istotną różnicę.
  5. Generuj wykresy za pomocą oprogramowania do tworzenia wykresów.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

HNK łagodzi uszkodzenia wywołane stresem oksydacyjnym w komórkach HDF spowodowane przez UVA
Wpływ różnych stężeń HNK podczas traktowania przez 24 h lub 48 h na żywotność komórek HDF zbadano za pomocą testu żywotności komórek w celu wyłonienia odpowiedniego stężenia i czasu ekspozycji. Wyniki wykazały, że stężenia 2,5, 5 i 10 µM HNK nie wpłynęły znacząco na żywotność prawidłowych komórek HDF po 24 h lub 48 h traktowania, co dowodzi, że HNK jest nietoksyczny dla prawidłowych komórek w tych dawkach. Co ...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Światło ultrafioletowe jest jednym z czynników środowiskowych, które szkodzą komórkom i organizmom. Wcześniejsze badania wykazały, że promieniowanie UVA, ze względu na swoją wysoką zdolność przenikania, jest głównym rodzajem światła ultrafioletowego docierającym do powierzchni Ziemi38. Fibroblasty są istotnymi komórkami funkcjonalnymi skóry właściwej, a ich starzenie się może bezpośrednio lub pośrednio prowadzić do starzenia się skóry39. Model uszkodzeń fotostarzeniowych in...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy potwierdzają, że nie mają żadnych finansowych konfliktów interesów.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Zestaw do analizy aktywności ALTBeyotime Biotechnology, Szanghaj, ChinyP2711MZestaw do wykrywania aktywności transaminazy alaninowej
Zestaw do testowania Amplex Red CREBeyotime Biotechnology, Szanghaj, ChinyS0291SZestaw do wykrywania kreatyniny
Medium montażowe AntiFadeBeyotime Biotechnology, Szanghaj, ChinyP0126Medium montażowe do zachowania sygnału fluorescencyjnego
Zestaw do analizy aktywności ASTBeyotime Biotechnology, Szanghaj, ChinyP2715SZestaw do wykrywania aktywności transaminazy asparagianowej
Zestaw do testowania białka BCABeyotime Biotechnology, Szanghaj, ChinyP0012Zestaw do określania stężenia białka
BSASigma-Aldrich, St. Louis, MO, USAV900933Czynnik blokujący wiązanie niespecyficzne
Zestaw do testowania BUNBeyotime Biotechnology, Szanghaj, ChinyS0574SZestaw do wykrywania azotu z mocznika we krwi
Zestaw do testowania CATBeyotime Biotechnology, Szanghaj, ChinyS0051Zestaw do wykrywania aktywności katalazy
Odczynnik CCK-8Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA96992Roztwór do testu żywotności komórek, który jest rozpuszczalną w wodzie solą tetrazolową
Przeciwciało CDK2Invitrogen, Carlsbad, CA, USAPA5-79024Przeciwciało główne do wykrywania CDK2
Chemiluminescencyjny środek ECLMedChemExpress, Monmouth Junction, NJ, USAHY-K1005Ulepszony odczynnik wykrywający chemiluminescencję
Przeciwciało IInvitrogen, Carlsbad, CA, USAPA1-26204Główne przeciwciało do wykrywania kolagenu I
Przeciwciało cykliny A2Invitrogen, Carlsbad, CA, USAPA5-34682Główne przeciwciało do wykrywania cykliny A2
Roztwór barwienia DAPISigma-Aldrich, St. Louis, MO, USAD9542Barwnik do barwienia jądrowego
Fluorescencyjna sonda DCFH-DAMedChemExpress, Monmouth Junction, NJ, USAHY-D0940Reaktywna sonda fluorescencyjna z gatunkami tlenu
Rozwiązanie różniczkowaniaBeyotime Biotechnology, Szanghaj, ChinyC0161Odczynnik do etapu różnicowania hematoksyliny
Sonda dihydroetydowaBeyotime Biotechnology, Szanghaj, ChinyS0063Sonda reaktywnych składników tlenu
Medium hodowlane fibroblastówSunncell Biotechnology Co., Ltd., Wuhan, Hubei, ChinySNPM-H342Kompletne podłoże hodowlane do wzrostu fibroblastów
IgG antykrólikowy z oznaczeniem FITCInvitrogen, Carlsbad, CA, USAF-2765Przeciwciało wtórne znakowane izotiocyanianem fluoresceiny (FITC)
Cytometria przepływowaBD nauki biologiczne, San Jose, CA, USABD FACSCaliburTMCytometr przepływowy
Oprogramowanie FlowJoBD nauki biologiczne, San Jose, CA, USAv10.8Oprogramowanie do analizy cytometrii przepływowej
Mikroskop fluorescencyjnyLeica, Heidelberg, NiemcyDM IL PROWADZIŁMikroskop do obrazowania fluorescencyjnego
Przeciwciało GAPDHInvitrogen, Carlsbad, CA, USAPA1-987Przeciwciało kontroli wewnętrznej do normalizacji białek
System obrazowania żelowegoInvitrogen, Carlsbad, CA, USAiBright CL1500System obrazowania do wykrywania białek
kozy antykrólikowe IgGInvitrogen, Carlsbad, CA, USA31460Przeciwciało wtórne do immunodetekcji
Oprogramowanie Graphpad Prism 9.0Oprogramowanie GraphPad, San Diego, CA, USAPrism 9.0Oprogramowanie do grafowania
Zestaw do testowania GSHBeyotime Biotechnology, Szanghaj, ChinyS0053Zestaw do wykrywania zawartości glutationu
Zestaw do bejcowania HEBeyotime Biotechnology, Szanghaj, ChinyC0105SZestaw do barwienia histologicznego do analizy morfologii tkanek
HNKMedChemExpress, Monmouth Junction, NJ, USAHY-N0003Honokiol, związek bioaktywny
Ludzkie fibroblasty skórneSunncell Biotechnology Co., Ltd., Wuhan, Hubei, ChinySNP-H342Pierwotne komórki fibroblastu skóry u człowieka
Oprogramowanie IBM SPSS Statistics 26.0IBM Corporation, Armonk, NY, USAIBM SPSS Statystyki 26.0Oprogramowanie do analizy statystycznej
Oprogramowanie ImageJWayne Rasband, Narodowy Instytut Zdrowia Psychicznego, USAWersja 1.54hOprogramowanie do analizy obrazów
Przeciwciało Ki67Invitrogen, Carlsbad, CA, USAMA5-14520Główne przeciwciało do wykrywania markerów proliferacji komórek
Mikroskop świetlnyLeica, Heidelberg, NiemcyDM3000Mikroskop optyczny do obrazowania w jasnym polu
Zestaw do barwienia trichrom MassonSolarbio, Pekin, ChinyG1340Zestaw do barwienia kolagenu i tkanki łącznej
Zestaw do testowania MDABeyotime Biotechnology, Szanghaj, ChinyS0131SZestaw do wykrywania poziomu malondialdehydu (marker peroksydacji lipidów)
Czytnik mikropłytThermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA1410101Urządzenie do pomiaru absorpcji do testów komórkowych
Przeciwciało MMP-1Invitrogen, Carlsbad, CA, USAPA5-27210Główne przeciwciało do wykrywania metaloproteinazy-1 w macierzu
Zestaw MMP-1 ELISABiotechnologia powiązana z enzymami, Szanghaj, Chinyml038199ilościowe wykrywanie MMP-1 w próbkach biologicznych
Przeciwciało MMP-3Abcam, Cambridge, MA, USAab52915Główne przeciwciało do wykrywania metaloproteinazy-3 w macierzu
Zestaw MMP-3 ELISABiotechnologia powiązana z enzymami, Szanghaj, Chinyml105322ilościowe wykrywanie MMP-3 w próbkach biologicznych
Guma neutralnaBeyotime Biotechnology, Szanghaj, ChinyC0173Medium montażowe
Przeciwciało P16Invitrogen, Carlsbad, CA, USAPA5-20379Główne przeciwciało do wykrywania białka p16
Przeciwciało P21Invitrogen, Carlsbad, CA, USAMA5-14949Główne przeciwciało do wykrywania białka p21
Przeciwciało P53Abcam, Cambridge, MA, USAab131442Główne przeciwciało do wykrywania białka p53
ParaformaldehydSolarbio, Pekin, ChinyP1110Odczynnik do utrwalania komórek i tkanek
PIBeyotime Biotechnology, Szanghaj, ChinyST512jodek propidiu do barwienia DNA w analizie cyklu komórkowego
Zestaw do testowania peptydów prokolagenu I CTAKARA, Tokio, JaponiaMK101Zestaw do wykrywania syntezy kolagenu
Przeciwciało p-Smad2Invitrogen, Carlsbad, CA, USA44-244GGłówne przeciwciało do wykrywania fosforylowanego Smad2
Przeciwciało p-Smad3Invitrogen, Carlsbad, CA, USA44-246GGłówne przeciwciało do wykrywania fosforylowanego Smad3
Membrany PVDFInvitrogen, Carlsbad, CA, USA88520Błona transferowa białek do western blottingu
Bufor lizy RIPABeyotime Biotechnology, Szanghaj, ChinyP0013BBufor do ekstrakcji białek dla lizatów komórkowych i tkankowych
RNaseABeyotime Biotechnology, Szanghaj, ChinyST579rybonukleaza do usuwania RNA podczas barwienia DNA
Zestaw do barwienia SA-β-galaktozydazyBeyotime Biotechnology, Szanghaj, ChinyC0602Zestaw do wykrywania starzenia komórkowego
SB431542MedChemExpress, Monmouth Junction, NJ, USAHY-10431TGF i beta; 1 Inhibitor szlaku sygnalizacyjnego
Żele SDS-PAGEInvitrogen, Carlsbad, CA, USAWG1403BX10Żele poliakrylamidowe do elektroforezy białek
Bezwłose myszy SKH1Vitalriver, Pekin, ChinyModel zwierzęcy do badań foto-starzenia skóry
Przeciwciało Smad2Invitrogen, Carlsbad, CA, USA51-1300Główne przeciwciało do wykrywania Smad2
Przeciwciało Smad3Invitrogen, Carlsbad, CA, USA51-1500główne przeciwciało do wykrywania Smad3
Zestaw do testowania SODBeyotime Biotechnology, Szanghaj, ChinyS0101SZestaw do wykrywania aktywności dysmutazy nadtlenkowej
TGF i beta; 1 przeciwciałoAbcam, Cambridge, MA, USAab215715pierwotne przeciwciało dla TGF i beta; 1 Wykrywanie
Triton X-100Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USAX-100Niejonowy detergent do przepuszczania błon komórkowych
Rozwiązanie testu TUNELBeyotime Biotechnology, Szanghaj, ChinyC1086Odczynnik wykrywający apoptozę w przypadku fragmentacji DNA
KsylenSigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA247642Rozpuszczalnik organiczny do deparafinizacji tkanek

Bibliografia

  1. Gu, Y., Han, J., Jiang, C., Zhang, Y. Biomarkers, oxidative stress and autophagy in skin aging. Ageing Res Rev. 59, 101036 (2020).
  2. Chaudhary, M., Khan, A., Gupta, M. Skin ageing: pathophysiology and current market treatment approaches. Curr Aging Sci. 13 (1), 22-30 (2020).
  3. Lephart, E. D. Equol’s anti-aging effects protect against environmental assaults by increasing skin antioxidant defense and ECM proteins while decreasing oxidative stress and inflammation. Cosmetics. 5 (1), 16 (2018).
  4. Gromkowska-Kępka, K. J., Puścion-Jakubik, A., Markiewicz-Żukowska, R., Socha, K. The impact of ultraviolet radiation on skin photoaging—review of in vitro. studies. J Cosmet Dermatol. 20 (11), 3427-3431 (2021).
  5. Tsai, T. Y., et al. Djulis supplementation against oxidative stress and ultraviolet radiation-induced cell damage: the influence of antioxidant status and aging of skin in healthy subjects. J Cosmet Dermatol. 21 (7), 2945-2953 (2022).
  6. McCormick, E., et al. Topical nanoencapsulated cannabidiol cream as an innovative strategy combating UV-A-induced nuclear and mitochondrial DNA injury: a pilot randomized clinical study. J Am Acad Dermatol. 91 (5), 855-862 (2024).
  7. Ansary, T. M., Hossain, M. R., Kamiya, K., Komine, M., Ohtsuki, M. Inflammatory molecules associated with ultraviolet radiation-mediated skin aging. Int J Mol Sci. 22 (8), 3974 (2021).
  8. Deng, H., et al. Pterostilbene's protective effects against photodamage caused by UVA/UVB irradiation. Pharmazie. 73 (11), 651-658 (2018).
  9. Ho, C. Y., Dreesen, O. Faces of cellular senescence in skin aging. Mech Ageing Dev. 198, 111525 (2021).
  10. Bocheva, G., et al. Protective role of melatonin and its metabolites in skin aging. Int J Mol Sci. 23 (3), 1238 (2022).
  11. Rauf, A., et al. Honokiol: a review of its pharmacological potential and therapeutic insights. Phytomedicine. 90, 153647 (2021).
  12. Cardullo, N., Monti, F., Muccilli, V., Amorati, R., Baschieri, A. Reaction with ROO• and HOO• radicals of honokiol-related neolignan antioxidants. Molecules. 28 (2), (2023).
  13. Prasher, P., et al. Honokiol and its analogues as anticancer compounds: current mechanistic insights and structure-activity relationship. Chem Biol Interact. 386, 110747 (2023).
  14. Xin, L., et al. Honokiol alleviates radiation-induced premature ovarian failure via enhancing Nrf2. Am J Reprod Immunol. 90 (4), e13769 (2023).
  15. Faysal, M., et al. Neuropharmacological potential of honokiol and its derivatives from Chinese herb Magnolia species: understandings from therapeutic viewpoint. Chin Med. 18 (1), 154 (2023).
  16. Fan, X. X., et al. Honokiol improves depression-like behaviors in rats by HIF-1α-VEGF signaling pathway activation. Front Pharmacol. 13, 968124 (2022).
  17. Du, E., et al. Dietary honokiol supplementation improves antioxidant capacity, enhances intestinal health, and modulates cecal microbial composition and function of broiler chickens. Poult Sci. 103 (7), 103798 (2024).
  18. Sarrica, A., Kirika, N., Romeo, M., Salmona, M., Diomede, L. Safety and toxicology of magnolol and honokiol. Planta Med. 84 (16), 1151-1164 (2018).
  19. Zhuang, Q., et al. A validated ultra-HPLC-MS/MS method for determination of honokiol in human plasma and its application to a clinical pharmacokinetic study. Bioanalysis. 11 (11), 1085-1098 (2019).
  20. Guillermo, R. F., et al. Time- and dose-response effects of honokiol on UVB-induced skin cancer development. Drug Discov Ther. 6 (3), 140-146 (2012).
  21. Prasad, R., Singh, T., Katiyar, S. K. Honokiol inhibits ultraviolet radiation-induced immunosuppression through inhibition of ultraviolet-induced inflammation and DNA hypermethylation in mouse skin. Sci Rep. 7 (1), 1657 (2017).
  22. Dikalov, S., Losik, T., Arbiser, J. L. Honokiol is a potent scavenger of superoxide and peroxyl radicals. Biochem Pharmacol. 76 (5), 589-596 (2008).
  23. Shen, C. Y., Jiang, J. G., Yang, L., Wang, D. W., Zhu, W. Anti-ageing active ingredients from herbs and nutraceuticals used in traditional Chinese medicine: pharmacological mechanisms and implications for drug discovery. Br J Pharmacol. 174 (11), 1395-1425 (2017).
  24. Kim, K. K., Sheppard, D., Chapman, H. A. TGF-β1 signaling and tissue fibrosis. Cold Spring Harb Perspect Biol. 10 (4), (2018).
  25. Lodyga, M., Hinz, B. TGF-β1—a truly transforming growth factor in fibrosis and immunity. Semin Cell Dev Biol. 101, 123-139 (2020).
  26. Liu, H., et al. TGF-β/Smads signaling pathway, Hippo-YAP/TAZ signaling pathway, and VEGF: their mechanisms and roles in vascular remodeling-related diseases. Immun Inflamm Dis. 11 (11), e1060 (2023).
  27. Huang, Y., et al. HIF-1α switches the functionality of TGF-β signaling via changing the partners of Smads to drive glucose metabolic reprogramming in non-small cell lung cancer. J Exp Clin Cancer Res. 40 (1), 398 (2021).
  28. Xie, X., et al. Iguratimod inhibits skin fibrosis by regulating TGF-β1/Smad signalling pathway in systemic sclerosis. Eur J Clin Invest. 52 (8), e13791 (2022).
  29. Guo, K., et al. Compound collagen peptide powder improves skin photoaging by reducing oxidative stress and activating TGF-β1/Smad pathway. Photochem Photobiol. 100 (6), 1874-1893 (2024).
  30. Yamane, T., et al. mTOR inhibition by rapamycin increases ceramide synthesis by promoting transforming growth factor-β1/Smad signaling in the skin. FEBS Open Bio. 6 (4), 317-325 (2016).
  31. Kataoka, S., et al. Honokiol acts as a potent anti-fibrotic agent in the liver through inhibition of TGF-β1/SMAD signaling and autophagy in hepatic stellate cells. Int J Mol Sci. 22 (24), 13678 (2021).
  32. Jang, H. Y., et al. Fisetin inhibits UVA-induced expression of MMP-1 and MMP-3 through the NOX/ROS/MAPK pathway in human dermal fibroblasts and human epidermal keratinocytes. Int J Mol Sci. 24 (24), 16212 (2023).
  33. Zheng, X., et al. Honokiol attenuates mitochondrial fission and cell apoptosis by activating Sirt3 in intracerebral hemorrhage. Chin Med J (Engl). 136 (6), 719-731 (2023).
  34. Xia, Y., Zhang, H., Wu, X., Xu, Y., Tan, Q. Resveratrol activates autophagy and protects from UVA-induced photoaging in human skin fibroblasts and the skin of male mice by regulating the AMPK pathway. Biogerontology. 25 (4), 649-664 (2024).
  35. Kim, J., Lee, N., Chun, Y. S., Lee, S. H., Ku, S. K. Krill oil's protective benefits against ultraviolet B-induced skin photoaging in hairless mice and in vitro. experiments. Mar Drugs. 21 (9), (2023).
  36. Zhang, C., et al. Combination of lyophilized adipose-derived stem cell concentrated conditioned medium and polysaccharide hydrogel in the inhibition of hypertrophic scarring. Stem Cell Res Ther. 12 (1), 23 (2021).
  37. Sun, G., et al. Panax ginseng Meyer cv. Silvatica phenolic acids protect DNA from oxidative damage by activating Nrf2 to protect HFF-1 cells from UVA-induced photoaging. J Ethnopharmacol. 302 (Pt A), 115883 (2023).
  38. Fadadu, R. P., Wei, M. L. Ultraviolet A radiation exposure and melanoma: a review. Melanoma Res. 32 (6), 405-410 (2022).
  39. Wlaschek, M., Maity, P., Makrantonaki, E., Scharffetter-Kochanek, K. Connective tissue and fibroblast senescence in skin aging. J Invest Dermatol. 141 (4 Suppl), 985-992 (2021).
  40. Duan, Y., et al. Handelin reduces ultraviolet A-induced photoaging by inhibiting reactive oxygen species generation and enhancing autophagy. Tohoku J Exp Med. 259 (3), 189-198 (2023).
  41. Liu, S., et al. Oral supplementation of sea cucumber and its hydrolysate mitigates ultraviolet A-induced photoaging in hairless mice. J Sci Food Agric. 102 (5), 1987-1994 (2022).
  42. Liu, S., et al. Gly-Pro protects normal human dermal fibroblasts from UVA-induced damages via MAPK-NF-κB signaling pathway. J Photochem Photobiol B. 237, 112601 (2022).
  43. Lu, Z., et al. Hesperetin attenuates UVA-induced photodamage in human dermal fibroblast cells. J Cosmet Dermatol. 21 (11), 6261-6269 (2022).
  44. Michel, P., et al. Anti-inflammatory, antioxidant and photoprotective activity of standardised Gaultheria procumbens L. leaf, stem, and fruit extracts in UVA-irradiated human dermal fibroblasts. J Ethnopharmacol. 319 (Pt 2), 117219 (2024).
  45. Fu, H., et al. Tremella fuciformis polysaccharides inhibit UVA-induced photodamage of human dermal fibroblast cells by activating and up-regulating Nrf2/Keap1 pathways. J Cosmet Dermatol. 20 (12), 4052-4059 (2021).
  46. Park, C., et al. Honokiol ameliorates oxidative stress-induced DNA damage and apoptosis of C2C12 myoblasts by regulating ROS generation and the mitochondrial pathway. Anim Cells Syst. 24 (1), 60-68 (2020).
  47. Chen, Q., et al. Metformin attenuates UVA-induced skin photoaging by suppressing mitophagy and the PI3K/AKT/mTOR pathway. Int J Mol Sci. 23 (13), 6969 (2022).
  48. Wang, M., Guo, Y., Wan, M., Chen, Z., Zhong, J. L. TAZ reduces UVA-mediated photoaging through regulation of cell proliferation in skin fibroblasts. Photochem Photobiol. 99 (1), 153-159 (2023).
  49. Han, S., et al. Inhibitory effect of seawater pearl hydrolysate on UVA-induced photoaging of human skin fibroblasts. Evid Based Complement Alternat Med. 2022, 1558288 (2022).
  50. Alam, A., et al. Computational development of new inhibitors for apoptosis stimulating protein of p53 (iASPP) using pharmacophore modeling, docking, and MD simulation approaches. J Cancer Biomol Ther. 1 (2), 1-9 (2024).
  51. Bai, G. L., et al. Rapamycin protects skin fibroblasts from UVA-induced photoaging by inhibition of p53 and phosphorylated HSP27. Front Cell Dev Biol. 9, 633331 (2021).
  52. Zhang, J., Yu, H., Man, M. Q., Hu, L. Aging in the dermis: fibroblast senescence and its significance. Aging Cell. 23 (2), e14054 (2024).
  53. Liu, H., Dong, J., Du, R., Gao, Y., Zhao, P. Collagen study advances for photoaging skin. Photodermatol Photoimmunol Photomed. 40 (1), e12931 (2024).
  54. Fisher, G. J., et al. Skin aging from the perspective of dermal fibroblasts: the interplay between adaptation to the extracellular matrix microenvironment and cell autonomous processes. J Cell Commun Signal. 17 (3), 523-529 (2023).
  55. Li, F., et al. Discovery of matrix metalloproteinase inhibitors as anti-skin photoaging agents. Eur J Med Chem. 267, 116152 (2024).
  56. Song, M. J., et al. Downregulation of carnitine acetyltransferase by promoter hypermethylation regulates ultraviolet-induced matrix metalloproteinase-1 expression in human dermal fibroblasts. J Dermatol Sci. 116 (2), 70-77 (2024).
  57. Choi, S. I., et al. Eisenia bicyclis extract repairs UVB-induced skin photoaging in vitro and in vivo.: photoprotective effects. Mar Drugs. 19 (12), (2021).
  58. Kim, M. K., et al. Dual role of enhancer of zeste homolog 2 in the regulation of ultraviolet radiation-induced matrix metalloproteinase-1 and type I procollagen expression in human dermal fibroblasts. Matrix Biol. 119, 112-124 (2023).
  59. Xue, N., Liu, Y., Jin, J., Ji, M., Chen, X. Chlorogenic acid prevents UVA-induced skin photoaging through regulating collagen metabolism and apoptosis in human dermal fibroblasts. Int J Mol Sci. 23 (13), (2022).
  60. Meng, L., et al. NPRC deletion attenuates cardiac fibrosis in diabetic mice by activating PKA/PKG and inhibiting TGF-β1/Smad pathways. Sci Adv. 9 (31), eadd4222 (2023).
  61. Li, W., et al. Echinacoside exerts anti-tumor activity via the miR-503-3p/TGF-β1/Smad axis in liver cancer. Cancer Cell Int. 21 (1), 304 (2021).
  62. Xiang, D., et al. Physalin D attenuates hepatic stellate cell activation and liver fibrosis by blocking TGF-β/Smad and YAP signaling. Phytomedicine. 78, 153294 (2020).
  63. Jiang, H., Zhou, X., Chen, L. Asiaticoside delays senescence and attenuates ROS generation in UV-exposed cells through regulation of the TGF-β1/Smad pathway. Exp Ther Med. 24 (5), 667 (2022).
  64. Tong, T., Park, J., Moon, Y., Kang, W., Park, T. α-Ionone protects against UVB-induced photoaging in human dermal fibroblasts. Molecules. 24 (9), 1688 (2019).
  65. Liu, X. Y., Hwang, E., Park, B., Xiao, Y. K., Yi, T. H. Photoprotective and anti-inflammatory properties of vina-ginsenoside R7 ameliorate ultraviolet B-induced photodamage in normal human dermal fibroblasts. Appl Biochem Biotechnol. 189 (3), 729-744 (2019).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Sygnalizacja TGF-betaszlak Smadkomórki HDFstres oksydacyjnytest żywotności komórekWestern blotcytometria przepływowa
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki korzystania z usługi

Zasady

Prawa autorskie © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.