Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Stosując podejście farmakologii sieciowej, badanie wykazało, że proszek ermiao działa terapeutycznie przeciwko zapaleniu prostaty poprzez hamowanie czynników zapalnych i powiązanych szlaków sygnalizacyjnych. Kolejne eksperymenty in vitro wykazały również, że ekstrakt wodny znacząco hamował ekspresję kluczowych cytokin zapalnych w modelu komórek nabłonka prostaty indukowanego LPS.
Protokół ten przedstawia połączone podejście farmakologii sieciowej i eksperymentalnej walidacji w celu zbadania mechanizmu działania proszku Ermiao (EMP) w leczeniu zapalenia prostaty. Workflow przebiega według etapowego projektu: (i) przesiewanie aktywnych związków i celów oparte na bazie danych, (ii) konstrukcja i analiza sieci interakcji oraz (iii) walidacja eksperymentalna in vitro . Najpierw z bazy TCMSP pobrano aktywne składniki EMP i ich odpowiadające im cele, natomiast cele związane z zapaleniem prostaty uzyskano z bazy GeneCards. Do identyfikacji kluczowych celów terapeutycznych wykorzystano przecięcie celów EMP i chorób. Po drugie, skonstruowano sieć "Lek–Składnik–Cel–Choroba" przy użyciu Cytoscape. Analiza interakcji białko-białko (PPI) oraz wzbogacenie szlaków szlaków Kioto encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) zostały przeprowadzone na kluczowych celach, ujawniając, że czynniki zapalne takie jak IL6 i TNF pełniły rolę głównych celów, a szlaki takie jak PI3K/AKT i MAPK zostały istotnie wzbogacone. Na koniec walidacja in vitro została przeprowadzona przy użyciu modelu zapalnego komórek nabłonka prostaty indukowanego przez LPS. Leczenie EMP istotnie zmniejszyło uwalnianie czynników prozapalnych IL-6 i TNF-α w porównaniu z grupą leczoną LPS (p < 0,05), co potwierdza przeciwzapalną skuteczność EMP. To integracyjne podejście zapewnia powtarzalne ramy, które można dostosować do badania innych wielokomponentowych systemów terapeutycznych. Podsumowując, to badanie wstępnie wyjaśnia, że EMP wywiera swoje działanie przeciwprostatowe poprzez mechanizm wieloskładnikowy, wielocelowy i wieloszlakowy, ściśle związany ze tłumieniem odpowiedzi zapalnych, co stanowi naukową podstawę dla jego zastosowania klinicznego.
Zapalenie prostaty, szczególnie przewlekłe niebakteryjne zapalenie prostaty, stanowi powszechne zaburzenie urologiczne charakteryzujące się złożoną etiologią i brakiem wysoce skutecznych terapii, co znacząco obniża jakość życia pacjentów 1,2,3. Obecne kliniczne leczenie zapalenia prostaty stosuje zintegrowane podejście, obejmujące antybiotyki, blokery α-receptorów oraz niesteroidowe leki przeciwzapalne 4,5,6. Główne wyzwania obejmują brak terapii specyficznych dla etiologii oraz złoż....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Nie wymagała się tego badania etycznego zatwierdzenia, ponieważ nie obejmowało on uczestników ludzkich ani próbek klinicznych. Wszystkie procedury dotyczące linii komórkowych były przeprowadzane zgodnie z wytycznymi i przepisami dotyczącymi biobezpieczeństwa instytucjonalnego. Linia komórkowa nabłonka prostaty użyta w tym badaniu została pozyskana od certyfikowanego dostawcy komercyjnego.
UWAGA: Wszystkie odczynniki, instrumenty i oprogramowanie używane w tym badaniu są wymienione w Tabeli Materiałów. Schemat blokowy tego badania przedstawiono na Rysunku 1.
1. ....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Identyfikacja związków aktywnych i prognozowanie celów
Wyniki te pokazują skuteczność naszej zintegrowanej farmakologii sieciowej oraz podejścia in vitro w identyfikacji i walidacji celów terapeutycznych EMP w zapaleniu prostaty. Przeszukiwanie bazy danych TCMSP wykazało 46 bioaktywnych składników z ziół składowych EMP, co odpowiada 178 potencjalnym celom. Z bazy danych Genecards pozyskano 13 960 celów związanych z zapaleniem prostaty. 162 cele wspólne dla obu zestawó.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół ten integruje farmakologię sieciową z walidacją eksperymentalną, tworząc systematyczne ramy do badania wielokomponentowych mechanizmów terapeutycznych. Kluczowe kroki obejmują dokładne przesiewanie związków aktywnych przy użyciu określonych progów (OB ≥ 30%, DL ≥ 0,18), niezawodną konstrukcję sieci oraz odpowiedni wybór eksperymentalnych modeli walidacyjnych. Staranny dobór parametrów w analizach bioinformatycznych oraz ścisła kontrola warunków eksperymentalnych są niezbędne dla zapewnienia powtarzalności.
<.......Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Autorzy nie zgłaszają konfliktów interesów w tej pracy.
Badanie to zostało wsparte przez Projekt Młodzieżowy Szpitala Przyjaźni Chiny-Japonia (nr 2020-1-QN-8), fundusz naukowy Szpitala Centrum Kosmicznego (nr YN202530).
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Ludzki IL-6 ELISA KIT | 4Abio | CHE0009 | |
| Ludzki TNF i alfa; ELISA KIT | 4Abio | CHE0019 | |
| Suplementy K-SFM | Procell | CM-0200 | |
| Lipopolisacharydy | Solarbio | L8880 | |
| MTS | Promega | G1111 | |
| System transkrypcji odwrotnej | Promega | A3500 | |
| RWPE-1 | Procell | CL-0200 | RRID:CVCL_EQ24 |
| Kompletne medium komórki RWPE-1 | Procell | CM-0200 | |
| SYBR Green Realtime PCR Master Mix | Toyobo | QPK-201 | |
| Odczynnik Trizol | Thermo Fisher Scientific (Invitrogen) | 15596026 | |
| trypsyna-EDTA | Gibco (Thermo Fisher) | 25200072 |
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.