Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł badawczy

Działanie przeciwzapalne i przeciwzapalne preparatu powłokowego Xueshan Jinluohan oraz jego mechanizm przezskórny

231 wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/70480

⸱

30 kwietnia 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Qingdao Academy of Chinese Medicinal Sciences, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, 2State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, School of Ethnic Medicine, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 3Tibet Rhodiola Pharmaceutical Holding Co. Ltd, 4State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, School of pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 5Laboratory of Epigenetics and Immunology, West China Institute of Women and Children's Health, NHC Key Laboratory of Chronobiology, Department of Obstetric and Pediatric, Key Laboratory of Birth Defects and Related Diseases of Women and Children of MOE, State Key Laboratory of Biotherapy, West China Second University Hospital, Sichuan University

* These authors contributed equally

W tym artykule

Podsumowanie

Niniejsze badanie przedstawia zintegrowane podejście do oceny działania przeciwbólowego i przeciwzapalnego preparatu Xueshan Jinluohan Pain-Relief Coating. Efekty zależały od obszaru i czasu, a analiza transdermalna wykazała benzoylaconinę jako główny składnik przenikający z kontrolowanym uwalnianiem dyfuzyjnym.

Streszczenie

Miejscowe preparaty medycyny chińskiej (TCM) są szeroko stosowane w leczeniu stanów zapalnych i związanych z bólem, ponieważ zapewniają lokalne efekty terapeutyczne, jednocześnie potencjalnie zmniejszając ogólnoustrojowe reakcje niepożądane. Jednak cechy farmakodynamiczne i mechanizmy transdermalne leżące u podstaw wielu klinicznie stosowanych formuł pozostają niewystarczająco scharakteryzowane. Xueshan Jinluohan Pain-Relief Coating Agent (XJCA), formuła leku tybetańskiego, jest powszechnie przepisywana w leczeniu bólu zapalnego, jednak wpływ obszaru aplikacji, czasu działania oraz względny wkład efektów miejscowych i ogólnoustrojowych nie zostały systematycznie ocenione. Niniejsze badanie ustanawia zintegrowane ramy metodologiczne in vivo i in vitro do badania tych parametrów. Do oceny centralnej i obwodowej aktywności analgetycznej oraz ostrych odpowiedzi zapalnych zastosowano wiele komplementarnych modeli zwierzęcych, umożliwiając ocenę efektów zależnych od obszaru, czasu oraz lokalnego kontra systemowego. Równolegle zastosowano system komórek dyfuzji Franza sprzężony z ultrawysokowydajną chromatografią cieczową i tandemową spektrometrią mas (UPLC-MS/MS), aby scharakteryzować kinetykę wchłaniania przezskórnego dwóch głównych alkaloidów, benzoylaconiny i akonytyny. XJCA wykazała istotne zależne od obszaru i czasu działanie przeciwzapalne i przeciwzapalne, a większe obszary zastosowań wiązały się z większym ogólnoustrojowym wkładem w skuteczność leków przeciwbólowych. Analiza kinetyczna transdermalna wykazała, że benzoylakonina wykazywała znacznie wyższy strumień w stanie ustalonym i podążała za kontrolowanym uwalnianiem dyfuzyjnym, zgodnym z modelem Higuchi, podczas gdy akonytyna wykazywała niższą przepuszczalność i bardziej złożony profil uwalniania. Wyniki te łączą zachowania transdermalne z obserwowanymi efektami farmakodynamicznymi i dostarczają uporządkowanych ram do oceny i optymalizacji miejscowych formuł TCM.

Wprowadzenie

Stan zapalny i ból to powiązane ze sobą reakcje fizjologiczne i patologiczne, które odgrywają kluczową rolę w obronie organizmu przed urazem i infekcją1. Jednak uporczywe lub nadmierne zapalenie i ból, takie jak choroba zwyrodnieniowa stawów, reumatoidalne zapalenie stawów czy ból pourazowy, mogą prowadzić do uszkodzenia tkanek, co poważnie zaburza funkcjonowanie fizyczne i zdrowie psychiczne pacjentów 2,3. Obecnie kliniczne leczenie stanu zapalnego i bólu opiera się głównie na niesteroidowych lekach przeciwzapalnych (NLPZ) (np. diklofenak, ibuprofen) oraz opioidach. Chociaż NLPZ są szeroko stosowane ze względu na działanie przeciwzapalne i przeciwbólowe, podawanie doustne często powoduje podrażnienia przewodu pokarmowego, uszkodzenia nerek oraz ryzyko sercowo-naczyniowe4. Opioidy, choć silne środki przeciwbólowe, są powiązane z uzależnieniami, depresją oddechową i innymi poważnymi skutkami ubocznymi 5,6. W konsekwencji rośnie kliniczne zapotrzebowanie na bezpieczniejsze alternatywy. Preparaty miejscowe, które dostarczają leki bezpośrednio do miejsca działania, oferują strategiczne rozwiązanie łagodzące te ogólnoustrojowe skutki uboczne7. Jednak ich skuteczność w dużej mierze zależy od zdolności leku do pokonania bariery skórnej, co może ograniczać możliwość przekładania wyników przedklinicznych, szczególnie dla większych cząsteczek lub osób o słabej lipofiliczności 8,9. Dlatego opracowywanie bezpiecznych i skutecznych alternatywnych terapii, zwłaszcza preparatów miejscowych o lokalnym działaniu i minimalnej ekspozycji ogólnoustrojowej, stało się obszarem badań farmakologicznych.

Preparaty miejscowe TCM mają długą historię stosowania w leczeniu stanu zapalnego i bólu. Ich zalety obejmują bezpośrednie działanie na miejsce zmiany, zmniejszenie skutków ubocznych ogólnoustrojowych oraz przedłużone uwalnianie leku10,11. XJCA to stosowany klinicznie żel formujący film TCM, składający się z wielu składników ziołowych. Jest szeroko stosowany w Chinach do łagodzenia bólu i stanu zapalnego spowodowanego chorobą zwyrodnieniową stawów, urazami tkanek miękkich oraz neuralgią 12,13,14. Jednak naukowe dowody na skuteczność są ograniczone, a kluczowe cechy farmakodynamiczne, takie jak związek między obszarem zastosowania a skutecznością, przebieg działania oraz różnica między efektami lokalnymi a ogólnoustrojowymi, pozostają niejasne. Te luki utrudniają racjonalne kliniczne zastosowanie XJCA.

Wchłanianie transskórne jest kluczowym czynnikiem wpływającym na terapeutyczne działanie preparatów miejscowych. Jako główna bariera skóra ogranicza przenikanie leków do krążenia ogólnoustrojowego lub lokalnych tkanek15,16. Dla XJCA zrozumienie właściwości wchłaniania przezskórnego składników aktywnych jest kluczowe, aby wyjaśnić jego działanie farmakodynamiczne i zoptymalizować formę dawkowania. Wcześniejsze badania nad preparatami TCM wykazały, że alkaloidy (np. pochodne akonytyny) są ważnymi aktywnymi składnikami o działaniu przeciwzapalnym i przeciwbólowym17,18. Benzoylaconina i akonytyna to dwa główne alkaloidy w XJCA 19,20, a ich zawartość i zachowanie transskórne mogą bezpośrednio wpływać na skuteczność XJCA. Nie ma jednak raportu na temat transdermalnego wchłaniania tych dwóch składników w XJCA ani ich właściwości kinetycznych i mechanizmów uwalniania.

Aby wypełnić tę lukę badawczą, celem tego badania jest opracowanie i zweryfikowanie systematycznych ram metodologicznych oceny miejscowych formuł TCM, wykorzystując XJCA jako studium przypadku. Celem było zaprezentowanie zintegrowanego podejścia do oceny, które obejmuje: (1) farmakodynamiczne modele in vivo zaprojektowane do analizy skutków miejsca aplikacji, długości leczenia oraz lokalnego i systemowego podawania leku na skuteczność; oraz (2) transdermalną ocenę kinetyczną in vitro z wykorzystaniem komórek dyfuzyjnych Franza oraz UPLC-MS/MS do pomiaru perkutnej absorpcji i uwalniania kluczowych aktywnych alkaloidów. Wysunęliśmy hipotezę, że skuteczność XJCA in vivo, szczególnie jego zależność od obszaru i czasu, jest przede wszystkim napędzana przez kinetykę przezskórną jego kluczowych składników. Łącząc parametry skuteczności in vivo z odpowiadającymi danymi kinetycznymi in vitro, podejście to zapewnia mechanistyczne zrozumienie, jak podawanie przezskórne wpływa na farmakodynamikę miejscowych preparatów TCM.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Badanie to zostało przeprowadzone zgodnie z Wytycznymi dotyczącymi Etycznego Przeglądu Dobrostanu Zwierząt Laboratoryjnych (GB/T 35892-2018) oraz Opiniami Przewodnimi na temat Humanitarnego Traktowania Zwierząt Laboratoryjnych. Wszystkie procedury na zwierzętach zostały zatwierdzone przez Komitet Etyki Eksperymentalnych Zwierząt Uniwersytetu Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Chengdu (Nr Zatwierdzenia TCM-09-315).

Zwierzęta doświadczalne i zakwaterowanie
Użyto myszy Kunming wolnych od patogenów specyficznych (SPF) (20~25 g, samce/samice = 1:1) oraz szczurów SPF Sprague-Dawley (SD) (180~200 g). Zwierzęta były trzymane w warunkach kontrolowanych: 12-godzinny cykl światła/ciemności, temperatura 23 ± 2 °C oraz wilgotność 60% ± 5%, z swobodnym dostępem do jedzenia i wody. Aby kompleksowo ocenić profil przeciwbólowy i przeciwzapalny XJCA, zastosowano zestaw modeli myszy in vivo. Test na gorącej płytce oceniał próg bólu o centralnym pośredniczeniu; test formaliny rozróżniał ból neurogenny (faza I) i ból zapalny (faza II); Test na obrzęk ucha wywołany ksylenem ocenił ostrą aktywność przeciwzapalną; a test wicia się wywołany kwasem octowym modelował ból zapalny trzewny. Należy zauważyć, że XJCA to gotowy do użycia żel do formowania filmu. Nie jest wymagane dodatkowe przygotowanie przed złożeniem wniosku.

Wpływ obszaru aplikacji na skuteczność przeciwbólową i przeciwzapalną
Myszy Kunming z SPF zostały losowo podzielone na 4 grupy (samice/samice = 1:1): normalna grupa kontrolna (NC), XJCA małoobszarowa (1×1 cm, 1 cm2) grupa (XJCASAAG), XJCA średnia (1×2 cm, 2 cm2) grupa (XJCAMAAG) oraz XJCA duża (1,5×2 cm, 3 cm2) (XJCALAAG). XJCA stosowano w dawce 0,015 g/cm2 (0,15 mL na mysz) przez 7 kolejnych dni. Grupa NC otrzymała sól fizjologiczną w ten sam sposób. 120 minut po ostatnim podaniu oceniono skuteczność leku przeciwbólowego za pomocą testów na gorącej płytce i z formaliną.

W teście na gorącej płytce myszy zostały wstępnie przesiewane, umieszczając je na stałej temperaturze płyty utrzymywanej w temperaturze 55 ± 0,5 °C. Zarejestrowano opóźnienie wycofania łapy (PWL), a wybrano tylko myszy z bazowym PWL między 5 a 30 sekundami (n = 40, samica/samica = 1:1). Po 7 dniach leczenia PWL mierzono w odstępach 30 minut 3 razy i odnotowano średnią wartość. Zastosowano czas graniczny 60 sekund, aby zapobiec uszkodzeniom tkanek.

W teście na formalinę (n = 40, mężczyzna/kobieta = 1:1), po 7 dniach leczenia podskórnie wstrzykiwano 1% formaliny (1 mL/kg) do prawej tylnej łapy. Bezpośrednio po podaniu myszy umieszczono w indywidualnych komorach obserwacyjnych. Zachowania związane z bólem (lizanie, podnoszenie i ucieczka) były rejestrowane podczas fazy I (0–10 minut, ból neurogenny) oraz fazy II (15–30 minut, ból zapalny). Skuteczne wstrzyknięcie potwierdzono widocznym obrzękiem łapy.

Ocena skuteczności przeciwbólowych i przeciwzapalnych zależna od czasu
Sto dwadzieścia myszy z Kunming o SPF zostało losowo podzielonych na trzy grupy (n = 10 w punkcie czasowym, samice/samice = 1:1): grupę kontrolną modelową (MC), grupę XJCALAAG (1,5×2 cm, 3 cm2) oraz grupę pozytywną kontrolną z emulgelem diklofenakiem dietylaminowym (DDE). XJCA (0,015 g/cm2, 0,15 mL/mysz) i DDE (0,016 g/cm2, 0,15 mL/mysz) były stosowane przez 7 kolejnych dni, podczas gdy grupa MC otrzymywała prawidłową sól fizjologiczną. W 2, 4, 6 i 8 godzinach po ostatnim podaniu przeprowadzono zarówno test obrzęku ucha wywołanego ksylenem, jak i test wicia się wywołany kwasem octowym.

W teście na obrzęk ucha wywołany ksylenem podano 30 μL ksylenu po obu stronach prawego ucha (grupa MC otrzymała prawidłową sól fizjologiczną), a po 60 minutach myszy zostały znieczulone pentobarbitalem sodowym (30 mg/kg, doskołka) i poświęcone introtom; następnie przebijano i ważono dyski uszne (średnica 8 mm). Stopień obrzęku ucha obliczono jako masę dysku prawego ucha minus masę dysku lewego ucha, a tempo hamowania obrzęku jako [(stopień obrzęku grupy MC – stopień obrzęku grupy leczenia) / stopnia obrzęku grupy MC] × 100%. Wykonano okrągły dziurcz do uszu (średnica 8 mm) z tej samej pozycji na lewym i prawym uszu, a tkankę ucha ważono za pomocą elektronicznej wagi.

W teście wywołanym kwasem octowym wstrzykiwano 0,6% roztworu kwasu octowego (0,1 mL / 10 g) wewnątrzotrzewkowo, a czasy reakcji na wygięcie (wyprostowanie kończyn tylnych, skurcz brzucha i skręcenie tułowia) odnotowano w ciągu 20 minut. Bezpośrednio po wstrzyknięciu kwasu octowego myszy umieszczano w indywidualnych klatkach obserwacyjnych. Tempo hamowania wicia obliczono według następującego wzoru: [(czas wicia się w grupie z MC – czas wicia się w grupie leczonej)/czas wicia w grupie MC]×100%.

Porównanie skuteczności przeciwbólowej miejscowej i ogólnoustrojowej
Aby oddzielić lokalnie ograniczone środki przeciwbólu od efektów wynikających z wchłaniania transdermalnego i systemowej dystrybucji, opracowaliśmy dwa schematy podawania z jasnymi definicjami operacyjnymi. Efekt lokalny odnosi się do działania leku w miejscu zlokalizowanym w tkankach bezpośrednio pod lub obok miejsca aplikacji, przy minimalnym udziale krążącego leku. Efekt ogólnoustrojowy natomiast odnosi się do analgezji pośredniczonej przez lek, który dostał się do krwi i działa w centralnych lub peryferyjnych miejscach oddalonych od miejsca aplikacji. Bezpośrednio przetestowaliśmy hipotezę, że zwiększenie obszaru zastosowania prowadzi do większego systemowego przyjmowania leku, a tym samym powoduje efekty przeciwbólowe silniejsze niż te wynikające wyłącznie z działania lokalnego, utrzymując stałą dawkę na jednostkę powierzchni przy jednoczesnym zróżnicowaniu całkowitej objętości leczonej powierzchni. Ten projekt umożliwia ilościowe określenie, w jaki skala przestrzenna narażenia determinuje systemową biodostępność oraz wynikający z tego wkład systemowo pośredniczonych efektów.

Trzydzieści myszy z Kunming z SPF (z PWL 5~30 s w teście na gorącej płytce) zostało losowo podzielonych na 3 grupy (n = 10 na grupę, samiec/samica = 1:1): grupa NC, grupa miejscowa (TMG) oraz grupa ogólnoustrojowa (SMG). XJCA podawano w stałej dawce 0,015 g/cm2, o objętości 0,15 mL, przez 7 kolejnych dni.

W przypadku TMG formuła została zastosowana na zlokalizowanym obszarze skóry kończyn tylnych. W przypadku SMG, aby zasymulować zwiększone wchłanianie układowe, formuła została zastosowana na połączonym obszarze obejmującym oba tylne kończyny i skórę pleców, przy zachowaniu tej samej dawki na jednostkę powierzchni (0,015 g/cm2). Ten projekt zapewnił, że całkowita ilość XJCA zastosowana w grupie SMG była proporcjonalnie wyższa niż w grupie TMG, co ułatwiało większy potencjał transdermalnej absorpcji do krążenia układowego. 120 minut po ostatnim podaniu PWL zmierzono testem na grzewcy (3 razy co 30 minut, średnia wartość zarejestrowana). Porównując TMG (dominujący efekt lokalny) i SMG (efekt miejscowy + ogólnoustrojowy), mogliśmy rozłożyć na czynniki pierwsze wkład ogólnoustrojowego rozkładu leków w ogólną analgezję.

Badanie transdermalnego wchłaniania in vitro
Badanie wykorzystało komórki dyfuzyjne Franza o efektywnej powierzchni dyfuzji 1,76625 cm2. Ogniwo dyfuzyjne Franza jest złotym standardem oceny wchłaniania przezskórnego. System składa się z komory dawcy (zawierającej formułę testową), komory receptorowej (wypełnionej buforem fizjologicznym) oraz wyciętej skóry umieszczonej pomiędzy nimi. Cząsteczki leku dyfundują przez skórę do roztworu receptorowego, a próbki są zbierane w czasie, aby ilościowo określić kinetykę przenikania. Skóra brzucha usunięta przez szczury SD znieczulone pentobarbitalem sodowym (30 mg/kg, i.p.) była starannie przygotowywana przez usunięcie tłuszczu podskórnego, spłukana solą fizjologiczną i moczona w soli fizjologicznej przez 24 godziny. Ochrona integralności warstwy rogówki jest niezbędna. Nie rozciągaj, nie składaj ani nie dotykaj powierzchni naskórka. Przepuszczalność skóry jest w dużym stopniu uzależniona od jej nawilżenia. Czas nawodnienia daje powtarzalne rezultaty.

Przygotowana skóra była umieszczona pomiędzy komorą dawcy i receptorem, z warstwą rogówki skierowaną do komory dawcy. Strona dawcy otrzymała 200 μL XJCA (równowartość 0,06 g surowego leku), natomiast komora receptorowa została wypełniona 15 mL roztworu odbiorczego (30% etanolu: 70% PBS, odgazowanego przez sonikację przez 15 minut), utrzymywanego w temperaturze 32 ± 0,5 °C przy ciągłym mieszaniu magnetycznym przy 350 r·min⁻1. Roztwór odbierający powinien być odgazowany przez sonikację przez 15 minut przed użyciem, aby zapobiec powstawaniu pęcherzyków podczas eksperymentu.

Z komory receptorowej pobrano jedną próbkę mL po 2, 4, 6, 8, 10, 12, 20 i 24 godzinach, za każdym razem uzupełnianą równą objętością wcześniej podgrzanego (32 °C) świeżego roztworu odbiorczego.

Uwaga: Roztwór zastępczy musi mieć tę samą temperaturę, aby uniknąć wahań temperatury, które mogłyby wpływać na kinetykę dyfuzji. Zebrane próbki zostały przefiltrowane przez mikroporowate błony o średnicy 0,22 μm, a następnie przeanalizowane przez UPLC-MS/MS w ciągu 24 godzin. Ze względu na niestabilność akonytyny, próbki należy przeanalizować w ciągu 24 godzin od pobrania lub dodać stabilizatory. Jeśli natychmiastowa analiza nie jest możliwa, należy aliquotować próbki i przechowywać je w temperaturze -80 °C, ale przed kontynuacją należy potwierdzić ich stabilność w tych warunkach.

Warunki UPLC-MS/MS
Analizę chromatograficzną przeprowadzono przy użyciu kolumny Agilent ZORBAX SB-C18 (2,1 × 100 mm, 1,8 μm) utrzymywanej w temperaturze 40 °C, przepływu 0,3 mL/min i objętości wtrysku 2 μL. Faza mobilna składała się z roztworu acetonitrylu (A) i 0,1 mol/L octana amonu zawierającego 0,5 mL/L kwasu octowego lodowcowego (B), stosując następujący program gradientu: 0–5 min (26%–45% A), 5–7 min (45%–74% A), 7–10,1 min (74%–90% A), 10,1–12 min (90% A), 12–12,1 min (90%–26% A) oraz 12,1–15 min (26% A).

Detekcja spektrometryczna mas została przeprowadzona z użyciem źródła jonizacji elektroroztryskowej (ESI) w trybie dodatnich jonów przy następujących ustawieniach: temperatura gazu suszącego 500 °C, przepływ gazu wysychającego 5 L/min, ciśnienie w nebulizatorze 50 psi, temperatura gazu w otoczce 500 °C, przepływ gazu w osłonie 11 L/min, napięcie kapilarne 5500 V oraz akwizycja danych w trybie monitorowania wielokrotnych reakcji (MRM). Przejścia i parametry MRM zostały ustawione następująco: akonytyna (m/z 646,6→586,4, czas zatrzymania 100 ms, DP 102,930 V, CE 49,810 V) oraz benzoylakonina (m/z 604,4→105,1, czas zatrzymania 100 ms, DP 105,120 V, CE 74,270 V).

Walidacja metod i analiza danych
Walidacja metod przeprowadzono poprzez ocenę swoistości, liniowości, precyzji, stabilności i powtarzalności. Specyficzność została zweryfikowana poprzez analizę roztworu przyjmującego puste elementy, roztworu standardowego oraz roztworu próbki, aby potwierdzić brak interferencji ze strony substancji endogennych. Dla liniowości standardowe krzywe zostały skonstruowane przez narysowanie powierzchni szczytów względem stężenia przy użyciu metody regresji najmniejszych kwadratów. Precyzja była oceniana zarówno za pomocą testów wewnątrzdniowych (6 replikacji), jak i międzydniowych (2 repliki w ciągu 3 dni) z użyciem roztworu standardowego 50 ng/mL, wyrażonego jako względne odchylenie standardowe (RSD) obszarów szczytowych. Stabilność oceniano poprzez określenie szczytowej powierzchni RSD roztworów próbek w godzinach 0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 18 i 24 godzin. Powtarzalność potwierdzono poprzez pomiar RSD powierzchni szczytowej z sześciu równoległych preparatów próbek. Standardowe roztwory wywarte przygotowywano przez dokładne ważenie po 2,5 mg benzoylaconiny i akonytyny, a następnie rozpuszczenie ich w mieszaninach izopropanol:dichlorometan (1:1), aby uzyskać końcowe stężenie 25 μg/mL. Do roztworu testowego odpowiednia ilość próbki była przenoszona do rurki wirówki i poddawana wirowaniu o wysokiej prędkości w stężeniu 12 000 x g przez 5 minut, po czym pobierano supernatant do analizy.

Skumulowana ilość przenikliwości (Qn, ng/cm 2) w każdym punkcie czasowym została obliczona według następującego wzoru:

Qn = [(Cn × V + ΣCi × Vi) / A]

Gdzie:
Pytanien: Skumulowana ilość przeniknienia w czasie n-tego próbkowania (ng/cm2).
Cn: Stężenie leku w roztworze przyjmującym w czasie n-tego pobierania próbek (ng/mL).
Ci: Stężenie leku w roztworze przyjmującym w czasie i-tego pobierania próbek (ng/mL).
V: Objętość roztworu odbierającego (15 mL).
Vi: Objętość próbkowania w każdym punkcie czasowym (1 mL).
O: Efektywna powierzchnia dyfuzji komórki dyfuzyjnej Franza (1,76625 cm2).

Krzywa skumulowanej permeacji i czasu ilościowego (Q-t) została wykreślona z Qn jako orzędnym, a czasem (t, h) jako cizą. Liniowa część krzywej Q-t została poddana regresji liniowej, a nachylenie równania regresji przyjmowano jako strumień transdermalny w stanie stacjonarnym (Js, ng/cm2/h).

Krzywa Q-t została dopasowana do modelu zerowego rzędu (Q = kt + b), modelu pierwszego rzędu (ln(Qmax - Q) = -kt + lnQmax) oraz modelu Higuchiego (Q = kt1/2 + b), gdzie Qmax to maksymalna skumulowana ilość przenikliwości, k to stała szybkości, a b to przecięcie. Dopasowanie oceniano za pomocą współczynnika korelacji (R2), przy czym wyższy R2 wskazywał na lepsze dopasowanie.

Analiza statystyczna
Dane surowe dla wszystkich testów behawioralnych in vivo oraz surowe dane chromatograficzne UPLC-MS/MS dla badania permeacji in vitro są udostępnione odpowiednio jako Pliki Uzupełniające 1 i 2. Wszystkie dane eksperymentalne zostały przedstawione jako średnia ± odchylenie standardowe (x̄ ± SD). Analiza statystyczna została przeprowadzona przy użyciu GraphPad Prism 9.0. Do porównania różnic grupowych zastosowano jednokierunkową analizę wariancji (ANOVA), a następnie test wielokrotnych porównań Dunnetta. P < 0,05 uznano za istotne statystycznie.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Zależność skuteczności przeciwbólowej i przeciwzapalnej od miejsca zastosowania
XJCA wykazało dodatną korelację między obszarem aplikacji a skutecznością przeciwbólową/przeciwzapalną w modelach mysich, po 7 kolejnych dniach stosowania przy stałej dawce 0,03 g/cm2. W teście na gorącej płytce grupa NC wykazała najkrótszą średnią PWL, co wskazuje na najsilniejszą reakcję bólową. Dla porównania, grupy leczone XJCA wykazywały wydłużenie PWL zależne od obszaru: grupy XJCASAAG, XJCAMAAG i XJCALA...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Stan zapalny i ból to złożone procesy patologiczne obejmujące wiele szlaków sygnałowych. Preparaty miejscowe są coraz częściej preferowane, ponieważ mogą dokładnie działać na zmiany i minimalizować ogólnoustrojowe reakcje niepożądane21,22. Badanie to z powodzeniem ustanowiło i zweryfikowało systematyczne ramy metodologiczne do oceny miejscowych formuł TCM, wykorzystując XJCA jako przypadek demonstracyjny. Zintegrowane podejście, łączące strategicznie zaprojektowa...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy nie mają żadnych konfliktów interesów do zgłoszenia.

Podziękowania

Badanie to zostało wsparte przez Program Stypendialnych Taishan prowincji Shandong (tsqn20250730), Uniwersytet (Uniwersytet Syczuan)-Enterprise (Tibet Rhodiola Pharmaceutical Holding Co., Ltd.) Projektu Współpracy (24H0764, 24H1043) oraz programu naukowego Bian Que Uniwersytetu Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Shandong.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
0,22 μ m filtrów błonowych mikroporowatychMilliporeSigma, Burlington, MA, USAGSWP04700
Kwas octowyCNW Technologies GmbHN3800060Stopień chromatograficzny
AcetonitrylMerck KGaAI1241129242Klasa spektrometrii mas
AkotynynaChengdu Lemeitian Pharmaceutical Technology Co., Ltd.DSTDW00060220 mg, ≥ 98% czystości
Kolumna Agilent ZORBAX SB-C18Agilent2.1 & razy; 100 mm, 1,8 μ m
Octan amonuODCZYNNIK OGÓLNYP1492146Poziom analityczny
BenzoylaconinaChengdu Lemeitian Pharmaceutical Technology Co., Ltd.DSTDB00550220 mg, ≥ 98% czystości
DichlorometanCINC Chemical Co., Ltd.P3048495Poziom analityczny
Emulgel dietyloaminy diklofenakowej (DDE)Novartis Pharma Beijing Co., Ltd.H20020176
Roztwór formalinySinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.10010061
Komórki dyfuzyjne FranzaShenzhen Ruituo Analytical Instruments Co., Ltd.RT806
Oprogramowanie GraphPad Prism 9.0GraphPad Software, Inc.Wersja 9.0
IzopropanolODCZYNNIK OGÓLNY0530240601DStopień chromatograficzny
Sól fizjologiczna normalnaSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.SY15931
Pentobarbital sodowySigma-Aldrich, St. Louis, MO, USAP3761
Woda oczyszczonaGuangzhou Watson's Food and Beverage Co., Ltd.Numer serii 20240717C
Myszy Kunming z SPFChengdu Enswell Biotechnology Co., Ltd.Licencja: SYXK (Syczuan) 2019-049
Szczury SPF Sprague-DawleyBeijing Speifu Biotechnology Co., Ltd.Licencja: SYXK (Pekin) 2024-0010
System UPLC-MS/MSAgilent Technologies, Santa Clara, CA, USAAgilent 1260 Infinity
Środek powłokowy Xueshan Jinluohan Przeciwbólowy (XJCA)Tibet Pharmaceutical Co., Ltd.Z20010095
KsylenSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.10023418

Bibliografia

  1. Kang, S. Y., Ryu, Y. Editorial: Chronic inflammation and related diseases: From mechanisms to therapies. Int J Mol Sci. 24 (13), (2023).
  2. Liu, Y., et al. The analgesic effects of Yu-Xue-Bi tablet (YXB) on mice with inflammatory pain by regulating LXA4-FPR2-TRPA1 pathway. Chin Med. 19 (1), 104(2024).
  3. Lara, C. O., Burgos, C. F., Moraga-Cid, G., Carrasco, M. A., Yévenes, G. E. Pentameric ligand-gated ion channels as pharmacological targets against chronic pain. Front Pharmacol. 11, 167(2020).
  4. Yang, E. L., et al. Abietane-type diterpenoids from Nepeta bracteata Benth and their anti-inflammatory activity. Front Chem. 10, 944972(2022).
  5. Allen, H. N., Hestehave, S., Duran, P., Nelson, T. S., Khanna, R. Uncoupling the CRMP2-Ca(V)2.2 interaction reduces pain-like behavior in a preclinical osteoarthritis model. bioRxiv. , (2024).
  6. Ochandarena, N. E., Niehaus, J. K., Tassou, A., Scherrer, G. Cell-type specific molecular architecture for mu opioid receptor function in pain and addiction circuits. Neuropharmacology. 238, 109597(2023).
  7. Singh, S., Awasthi, R. Berberine HCl and diacerein loaded dual delivery transferosomes: Formulation and optimization using Box–Behnken design. ADMET DMPK. 12 (3), 553-580 (2024).
  8. Madawi, E. A., et al. Polymeric nanoparticles as tunable nanocarriers for targeted delivery of drugs to skin tissues for treatment of topical skin diseases. Pharmaceutics. 15 (2), (2023).
  9. Li, L., et al. Evaluation of physical and chemical modifications to drug reservoirs for stimuli-responsive microneedles. Drug Deliv Transl Res. 15 (7), 2390-2414 (2025).
  10. Wang, Q., et al. Naturally derived anti-inflammatory compounds from Chinese medicinal plants. J Ethnopharmacol. 146 (1), 9-39 (2013).
  11. Kheoane, P. S., et al. Anti-inflammatory effects of orally and topically administered nanoformulations of Malva parviflora root extracts, and Prunus persica and Cupressus sempervirens exudates. Pharmacol Res Mod Chin Med. 17, 100685(2025).
  12. Zhenping, W., Yanxiu, L., Kun, G., Lei, Z. Clinical observation of Xueshan Jinluohan plastic for relieving pain in the treatment of 66 patients with osteoarthritis. J Clin Med Pract. , (2013).
  13. Kui, S., Guiming, L. Xueshan Jinluohan odynolysis plastics for postherpetic neuralgia: Observation of clinical efficacy. China Pharm. , (2007).
  14. Hai-Yan, W., Lei, Z., Ya-Fang, Z., Xue, J. Clinical observation on Xueshan Jinluohan analgesic film in treating 66 patients with rheumatoid arthritis with syndrome of blood stasis and obstructive arthralgia. Tianjin J Tradit Chin Med. , (2014).
  15. Zhao, L., et al. Topical drug delivery strategies for enhancing drug effectiveness by skin barriers, drug delivery systems and individualized dosing. Front Pharmacol. 14, 1333986(2023).
  16. Kathe, K., Kathpalia, H. Film forming systems for topical and transdermal drug delivery. Asian J Pharm Sci. 12 (6), 487-497 (2017).
  17. Xue, M., et al. Illumination on chemical compounds from Qufeng Zhitong capsule and its potential pharmacological mechanism against rheumatoid arthritis based on UHPLC/Q-Orbitrap-MS combined with network pharmacology analysis. Int J Anal Chem. 2022, 7863435(2022).
  18. Zhao, P., et al. Aconitine and its derivatives: Bioactivities, structure-activity relationships and preliminary molecular mechanisms. Front Chem. 12, 1339364(2024).
  19. Ling-Li, L., Lan-Xia, W., Ling, N., Xi, Y. Determination of safflower glucoside I and gentiopicrin in Xueshan Jinluohan pain-relief liniment by HPLC. Chin Tradit Pat Med. 34 (3), 499-502 (2012).
  20. Xiang, G., Guo, S., Wu, C., Wang, S., Zhang, Y. Deciphering the mysteries of Aconitum pendulum: Unique identification of various processed products and characteristic chemical markers. Arab J Chem. 17 (2), 105585(2024).
  21. Yang, C., et al. Development and evaluation of a Chinese herbal gel for analgesic and anti-inflammatory effects. Pak J Pharm Sci. 36 (4 Suppl), 1261-1269 (2023).
  22. Zhang, W., et al. Nicotine in inflammatory diseases: Anti-inflammatory and pro-inflammatory effects. Front Immunol. 13, 826889(2022).
  23. Zhan, M. X., et al. Ulinastatin exhibits antinociception in rat models of acute somatic and visceral pain through inhibiting the local and central inflammation. J Pain Res. 14, 1201-1214 (2021).
  24. Liu, C., et al. Investigation of the permeation enhancer strategy on benzoylaconine transdermal patch: The relationship between transdermal enhancement strength and physicochemical properties of permeation enhancer. Eur J Pharm Sci. 138, 105009(2019).
  25. Jiang, Z., Liu, S., Li, Y., Yuan, S. Study on the absorption mechanism of glucocorticoids in the stratum corneum. Colloids Surf B Biointerfaces. 256 (Pt 1), 114984(2025).
  26. Fabbrocini, G., et al. Skin needling to enhance depigmenting serum penetration in the treatment of melasma. Plast Surg Int. 2011, 158241(2011).
  27. Costa, R., Costa Lima, S. A., Gameiro, P., Reis, S. On the development of a cutaneous flavonoid delivery system: Advances and limitations. Antioxidants (Basel). 10 (9), (2021).
  28. Li, Z., et al. Analgesic and neuroprotective effects of Baimai ointment on diabetic peripheral neuropathy. J Ethnopharmacol. 292, 115122(2022).
  29. Lei, Y., et al. Formulation and evaluation of a drug-in-adhesive patch for transdermal delivery of colchicine. Pharmaceutics. 14 (10), (2022).
  30. Sirisha Mulukuri, N. V. L., et al. Statistical modeling, optimization and characterization of andrographolide loaded emulgel for its therapeutic application on skin cancer through enhancing its skin permeability. Saudi Pharm J. 32 (6), 102068(2024).
  31. Cohen, E., Lee, Y. C. A mechanism-based approach to the management of osteoarthritis pain. Curr Osteoporos Rep. 13 (6), 399-406 (2015).
  32. Boehnke, K. F., Gagnier, J. J., Matallana, L., Williams, D. A. Cannabidiol product dosing and decision-making in a national survey of individuals with fibromyalgia. J Pain. 23 (1), 45-45 (2022).
  33. Pan, S. Y., et al. New perspectives on Chinese herbal medicine (Zhong-Yao) research and development. Evid Based Complement Alternat Med. 2011, 403709(2011).
  34. Sana, E., et al. Topical delivery of curcumin-loaded transfersomes gel ameliorated rheumatoid arthritis by inhibiting NF-κB pathway. Nanomedicine (Lond). 16 (10), 819-837 (2021).
  35. Ya-Nan, H., et al. New understanding of aconitine hydrolysis pathway: Isolation, identification and toxicity evaluation based on intermediate products. Arab J Chem. 15 (11), 104255(2022).
  36. Shakeel, F., et al. Investigating antiarthritic potential of nanostructured clove oil (Syzygium aromaticum) in FCA-induced arthritic rats: Pharmaceutical action and delivery strategies. Molecules. 26 (23), (2021).
  37. Zhou, C., et al. Benzoylaconine modulates LPS-induced responses through inhibition of toll-like receptor-mediated NF-κB and MAPK signaling in RAW264.7 cells. Inflammation. 44 (5), 2018-2032 (2021).
  38. Jin, X., et al. Aconitine – a promising candidate for treating cold and mechanical allodynia in cancer-induced bone pain. Biomed Pharmacother. 161, 114284(2023).
  39. Tao, H., et al. Pharmacokinetics and pharmacology of aminoalcohol-diterpenoid alkaloids from Aconitum species. J Ethnopharmacol. 301, 115726(2023).
  40. Teaima, M. H., et al. Enhanced transdermal delivery of bisoprolol hemifumarate via combined effect of iontophoresis and chemical enhancers: Ex vivo permeation/in vivo pharmacokinetic studies. Pharmaceutics. 13 (5), (2021).
  41. Liu, X., et al. The inhibition of PPARα protein degradation alleviates the cardiotoxicity of Tiebangchui by regulating fatty acid metabolism. J Ethnopharmacol. 348, 119838(2025).
  42. Abdella, S., Afinjuomo, F., Song, Y., Upton, R., Garg, S. Mucoadhesive buccal film of estradiol for hormonal replacement therapy: Development and in vivo performance prediction. Pharmaceutics. 14 (3), (2022).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Dzia ania przeciwb lowemiejscowe TCMwch anianie przezsk rnekomora dyfuzyjna FranzUPLC MS MSbenzoilakoninaakonityna
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki Korzystania

Zasady

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.