Artykuł metodologiczny

Znormalizowany protokół wczesnej oceny kardiometabolicznej w stłuszczeniowej chorobie wątroby związanej z dysfunkcją metaboliczną

0 wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/70593

⸱

29 września 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Clinical Research Department, Experimental Metabolism and Clinical Research Laboratory, 2Instituto de Seguridad y Servicios Sociales de los Trabajadores del Estado (ISSSTE), Laboratory of Biochemistry and Experimental Medicine, 3Cardiology Department, Instituto de Seguridad y Servicios Sociales de los Trabajadores del Estado (ISSSTE), 4Facultad de Enfermería y Nutrición, Universidad Autónoma de San Luis Potosí, 5Centro de Investigación en Ciencia Aplicada y Tecnología Avanzada (CICATA), Instituto Politécnico Nacional (IPN)

W tym artykule

Podsumowanie

Niniejszy protokół opisuje zestandaryzowany schemat wczesnej oceny kardiometabolicznej u osób dorosłych z metaboliczną stłuszczeniową chorobą wątroby (MASLD), integrujący ocenę stanu zapalnego związanego z dietą, biomarkery biochemiczne, echokardiografię oraz ultrasonografię tętnic szyjnych, wraz ze zestandaryzowanymi procedurami akwizycji, kontroli jakości i walidacji danych w celu poprawy powtarzalności.

Streszczenie

Stłuszczeniowa choroba wątroby związana z dysfunkcją metaboliczną (MASLD) wiąże się z przewlekłym stanem zapalnym o niskim nasileniu oraz zwiększonym ryzykiem chorób sercowo-naczyniowych. Wczesna identyfikacja subklinicznych zmian kardiometabolicznych pozostaje wyzwaniem, ponieważ ograniczone są zestandaryzowane protokoły łączące ocenę stanu zapalnego związanego z dietą z obiektywnym obrazowaniem sercowo-naczyniowym. Niniejszy protokół opisuje powtarzalny schemat postępowania w celu oceny związku między potencjałem zapalnym diety a wczesnymi zmianami kardiometabolicznymi u dorosłych osób z potwierdzoną MASLD. Uczestnicy są rekrutowani zgodnie ze zestandaryzowanymi kryteriami kwalifikacji, a stłuszczenie wątroby jest potwierdzane za pomocą ultrasonografii. Spożycie pokarmów oceniane jest za pomocą zwalidowanego, półilościowego kwestionariusza częstotliwości spożycia żywności (FFQ), na podstawie którego oblicza się wskaźnik zapalny diety (Dietary Inflammatory Index, DII) przy użyciu oryginalnej metodologii opracowanej w literaturze. Ocena kardiometaboliczna obejmuje pomiary antropometryczne, biochemiczne analizy na czczo, obliczenie stosunku triglicerydów do cholesterolu lipoprotein wysokiej gęstości (TG/HDL-C) oraz wskaźnika aterogennego osocza (AIP), ilościowe oznaczenie biomarkerów zapalnych metodą enzymoosączania (ELISA), echokardiograficzną ocenę funkcji rozkurczowej lewej komory za pomocą wskaźnika E/e′ uzyskanego z dopplerowskiego obrazowania tkanek oraz obustronną ultrasonografię tętnic szyjnych w celu pomiaru grubości kompleksu intima-media tętnic szyjnych (CIMT). Aby zapewnić spójność metodologiczną i powtarzalność, włączono zestandaryzowane procedury pozyskiwania danych, zdefiniowane punkty kontroli jakości oraz etapy walidacji danych. Reprezentatywne wyniki demonstrują zestandaryzowane dane generowane przez protokół, w tym klasyfikację DII, profile biomarkerów zapalnych, wskaźniki echokardiograficzne i pomiary CIMT, i nie implikują potwierdzonych powiązań biologicznych. Niniejszy protokół zapewnia szczegółowe, powtarzalne ramy metodologiczne do prowadzenia badań klinicznych i translacyjnych nad związkiem między obciążeniem zapalnym wynikającym z diety a wczesnymi zmianami kardiometabolicznymi u dorosłych z MASLD.

Wprowadzenie

Stłuszczeniowa choroba wątroby związana z dysfunkcją metaboliczną (MASLD) jest najpowszechniejszą przewlekłą chorobą wątroby na świecie, dotykającą około jednej trzeciej populacji dorosłych. Poza postępującym uszkodzeniem wątroby, MASLD charakteryzuje się przewlekłym stanem zapalnym o niskim nasileniu, insulinoopornością, dysfunkcją śródbłonka oraz przyspieszoną miażdżycą1,2. Choroby układu sercowo-naczyniowego są główną przyczyną zachorowalności i śmiertelności wśród osób z MASLD, co podkreśla potrzebę stosowania wiarygodnych metod identyfikacji wczesnych zaburzeń kardiometabolicznych, zanim rozwinie się klinicznie jawna choroba sercowo-naczyniowa3,4. Celem niniejszego protokołu jest przedstawienie ustandaryzowanego i powtarzalnego schematu zintegrowanej oceny dietetycznego obciążenia zapalnego, ogólnoustrojowego stanu zapalnego oraz wczesnej subklinicznej dysfunkcji sercowo-naczyniowej u dorosłych z MASLD. Protokół ten jest przeznaczony do badań klinicznych i translacyjnych nad wczesnym ryzykiem kardiometabolicznym poprzedzającym klinicznie istotne choroby układu sercowo-naczyniowego w tej populacji.

Narastające dowody wskazują, że dieta odgrywa kluczową rolę w inicjacji i progresji MASLD. Wzorce żywieniowe charakteryzujące się wysokim spożyciem żywności wysokoprzetworzonej, nasyconych kwasów tłuszczowych, rafinowanych węglowodanów i dodanych cukrów sprzyjają stresowi oksydacyjnemu, dysfunkcji śródbłonka, aktywacji immunologicznej oraz przewlekłemu systemowemu zapaleniu5,6. Z kolei wzorce żywieniowe bogate w błonnik, polifenole, kwasy tłuszczowe omega-3 i antyoksydacyjne mikroskładniki łagodzą szlaki zapalne związane z dysfunkcją metaboliczną i chorobami układu sercowo-naczyniowego6,7.

Dietarny Indeks Zapalny (DII) został opracowany w celu oszacowania potencjału zapalnego rutynowego spożycia diety przy użyciu systemu punktacji opartego na literaturze, bazującego na wpływie 45 komponentów dietetycznych na biomarkery stanu zapalnego, w tym białko C-reaktywne (CRP), interleukinę (IL)-1β, IL-4, IL-6, IL-10 oraz czynnik martwicy nowotworów-α (TNF-α)8. Wyższe wyniki DII powiązano ze zwiększonym poziomem krążących mediatorów stanu zapalnego, insulinoopornością, zespołem metabolicznym, cukrzycą typu 2 oraz chorobami układu sercowo-naczyniowego w różnych populacjach9,10.

Choć wskaźnik DII wiąże się z niekorzystnymi skutkami metabolicznymi, stosunkowo niewiele badań integrowało ocenę stanu zapalnego diety z obiektywnym obrazowaniem układu sercowo-naczyniowego w celu wykrycia wczesnych zmian sercowo-naczyniowych u osób z MASLD4,11. Do najwcześniejszych przejawów uszkodzeń kardiometabolicznych należą subkliniczna dysfunkcja rozkurczowa lewej komory, oceniana za pomocą stosunku E/e′ uzyskanego z Dopplera tkankowego, który odzwierciedla podwyższone ciśnienie napełniania lewej komory i stanowi wczesną cechę kardiomiopatii cukrzycowej i metabolicznej12,13, oraz grubość kompleksu intima-media tętnic szyjnych (CIMT), będąca uznanym markerem zastępczym subklinicznej miażdżycy, który niezależnie pozwala przewidzieć przyszłe zdarzenia sercowo-naczyniowe14,15.

W porównaniu z konwencjonalną oceną kardiometaboliczną, opierającą się głównie na pomiarach antropometrycznych, rutynowych badaniach biochemicznych i izolowanych czynnikach ryzyka sercowo-naczyniowego, niniejszy protokół integruje ocenę stanu zapalnego indukowanego dietą, profilowanie biomarkerów zapalnych, echokardiograficzną ocenę funkcji rozkurczowej oraz ultrasonografię tętnic szyjnych w ramach jednego, zestandaryzowanego procesu. To zintegrowane podejście umożliwia jednoczesną ocenę ekspozycji dietetycznej, zapalenia systemowego oraz subklinicznego remodelingu sercowo-naczyniowego z wykorzystaniem nieinwazyjnych technik, które są powszechnie dostępne w warunkach badań klinicznych. Chociaż zaproponowano podejścia multimodalne w celu lepszej charakterystyki wczesnej dysfunkcji sercowo-naczyniowej w chorobach metabolicznych, zestandaryzowane protokoły ich wdrażania pozostają ograniczone.

Aby uzupełnić konwencjonalną ocenę profilu lipidowego, niniejszy protokół uwzględnia również stosunek tryglicerydów do cholesterolu lipoprotein o wysokiej gęstości (TG/HDL-C) oraz indeks aterogenny osocza (AIP), obliczany jako log (TG/HDL-C). AIP odzwierciedla równowagę między lipoproteinami aterogennymi a antyaterogennymi i stał się markerem zastępczym dla małych, gęstych cząsteczek lipoprotein o niskiej gęstości (LDL), insulinooporności, dysfunkcji śródbłonka oraz rezydualnego ryzyka sercowo-naczyniowego. W konsekwencji AIP zapewnia bardziej kompleksową ocenę dyslipidemii aterogennej i wykazuje dobrą zdolność dyskryminacyjną w identyfikacji osób o zwiększonym ryzyku sercowo-naczyniowym, w szczególności pacjentów z zaburzeniami metabolicznymi, takimi jak MASLD16,17.

Ponadto protokół ten obejmuje panel krążących biomarkerów stanu zapalnego, aby dokładniej scharakteryzować mechanizmy biologiczne łączące potencjał zapalny diety z uszkodzeniami kardiometabolicznymi w MASLD. Biomarkery te wybrano ze względu na ich kluczową rolę w rekrutacji leukocytów, aktywacji odporności wrodzonej, sygnalizacji pro- i przeciwzapalnej, dysfunkcji śródbłonka oraz insulinooporności. Jednoczesna ocena tych mediatorów zapewnia bardziej kompleksową charakterystykę systemowego stanu zapalnego niż samo CRP i pogłębia wgląd w mechanizmy zależności między zapalnym obciążeniem dietetycznym a wczesnymi uszkodzeniami układu sercowo-naczyniowego w MASLD1,18,19.

W związku z tym niniejszy protokół zapewnia ustandaryzowaną i powtarzalną metodologię oceny związku między zapalnym potencjałem diety a wczesnymi zmianami kardiometabolicznymi u osób dorosłych z MASLD, integrując ocenę diety, profilowanie biomarkerów zapalnych, analizy biochemiczne, echokardiografię oraz ultrasonografię tętnic szyjnych. Dzięki zastosowaniu ustandaryzowanych procedur pomiarowych i zdefiniowanych punktów kontroli jakości, schemat postępowania ten został zaprojektowany w celu ułatwienia powtarzalności badań przez różnych badaczy i w różnych ośrodkach, wspierając jednocześnie badania kliniczne i translacyjne nad wczesnym ryzykiem kardiometabolicznym w MASLD.

Protokół

Protokół badania został zatwierdzony przez Instytucjonalne Komitety ds. Badań i Etyki Badań Narodowego Centrum Medycznego „20 de Noviembre”, Instituto de Seguridad y Servicios Sociales de los Trabajadores del Estado (ISSSTE) w Mieście Meksyk w Meksyku (Identyfikator zatwierdzenia: 04-118-2025). Wszystkie procedury należy przeprowadzać zgodnie z Deklaracją Helsińską oraz obowiązującymi przepisami krajowymi regulującymi badania z udziałem ludzi. Przed włączeniem do badania należy uzyskać pisemną świadomą zgodę od wszystkich uczestników. Poufność danych uczestników należy chronić poprzez stosowanie zakodowanych identyfikatorów badania dla wszystkich danych klinicznych, laboratoryjnych, dietetycznych i obrazowych.

1. Rekrutacja uczestników i ocena kwalifikowalności

  1. Rekrutacja uczestników
    1. Zrekrutować osoby dorosłe w wieku ≥18 lat z podejrzeniem stłuszczeniowej choroby wątroby związanej z dysfunkcją metaboliczną (MASLD) w latach 2025–2026.
    2. Wyjaśnić cele badania, procedury, potencjalne ryzyka oraz środki zachowania poufności przed włączeniem do badania.
    3. Uzyskać pisemną świadomą zgodę od każdego uczestnika przed przeprowadzeniem jakiejkolwiek procedury badawczej.
  2. Potwierdzenie MASLD
    1. Wykonać ultrasonografię jamy brzusznej zgodnie ze znormalizowanymi procedurami instytucjonalnymi.
    2. Potwierdzić stłuszczenie wątroby poprzez zidentyfikowanie zwiększonej echogeniczności wątroby w stosunku do kory nerek wraz z tylnym tłumieniem akustycznym.
    3. Zdiagnozować MASLD poprzez potwierdzenie stłuszczenia wątroby oraz obecności co najmniej jednego kardiometabolicznego czynnika ryzyka zgodnie z aktualnymi kryteriami konsensusu.
      UWAGA: Wszystkie badania ultrasonograficzne należy przeprowadzić zgodnie z tym samym protokołem akwizycji i, w miarę możliwości, przez tego samego doświadczonego radiologa, aby zminimalizować zmienność zależną od operatora.
  3. Ocena kwalifikowalności
    1. Włączyć uczestników, którzy spełniają wszystkie zdefiniowane kryteria kwalifikowalności i wyrazili pisemną świadomą zgodę.
    2. Wykluczyć uczestników z istotnym spożyciem alkoholu.
    3. Wykluczyć uczestników z wirusowym zapaleniem wątroby (HBV lub HCV), autoimmunologicznymi chorobami wątroby, uszkodzeniem wątroby indukowanym lekami, dziedzicznymi chorobami wątroby, ciążą, aktywnym procesem nowotworowym, niewydolnością serca w fazie dekompensacji lub innymi przewlekłymi chorobami wątroby, które mogą zakłócić ocenę kardiometaboliczną.
      UWAGA: Należy chronić poufność danych uczestników poprzez przypisanie każdemu z nich zakodowanego identyfikatora badania, usunięcie nazwisk, numerów dokumentacji medycznej i innych danych osobowych z baz danych badawczych oraz przechowywanie obrazów echokardiograficznych i ultrasonografii tętnic szyjnych w zabezpieczonej bazie danych instytucjonalnych.

2. Kwestionariusz częstotliwości spożycia żywności

  1. Wybór narzędzia do oceny diety
    1. Wybierz zwalidowany, półilościowy kwestionariusz częstotliwości spożycia żywności (FFQ), odpowiedni dla populacji badanej.
      UWAGA: Należy stosować FFQ wcześniej zwalidowane w odniesieniu do powtarzalnych 24-godzinnych wywiadów żywieniowych lub dzienniczków żywieniowych. W niniejszym protokole do oceny habitualnego spożycia w ciągu ostatnich 7 dni wykorzystano półilościowy FFQ ENSANUT zawierający 140 pozycji20,21.
  2. Przygotowanie do oceny diety
    1. Przed rekrutacją uczestników przeszkol wszystkich ankieterów zgodnie ze standaryzowanymi instrukcjami pisemnymi.
    2. Ujednolic sposób przeprowadzania ankiet, szacowania wielkości porcji, interpretacji odpowiedzi oraz zapisywania danych przez wszystkich ankieterów.
  3. Przeprowadzenie FFQ
    1. Przeprowadź ankietę FFQ podczas wywiadu twarzą w twarz.
    2. Poleć uczestnikom zgłoszenie habitualnego spożycia żywności i napojów w okresie referencyjnym określonym w FFQ.
    3. Uwzględnij produkty spożywane zarówno w dni powszednie, jak i w weekendy.
    4. Wyklucz tymczasowe zmiany w diecie związane z ostrymi chorobami, hospitalizacją lub krótkotrwałymi interwencjami terapeutycznymi.
  4. Rejestracja spożycia diety
    1. Zapisz spożycie żywności, korzystając z predefiniowanych kategorii częstotliwości w FFQ.
    2. Oszacuj wielkość porcji, używając standaryzowanych naczyń domowych, modeli żywności, fotografii lub referencyjnych przewodników po wielkości porcji.
    3. Wyjaśnij nieznane produkty, wielkości porcji lub kategorie częstotliwości, nie wpływając na odpowiedzi uczestnika.
      UWAGA: Zweryfikuj jakość danych, przeglądając każdy wypełniony kwestionariusz FFQ bezpośrednio po wywiadzie. Zidentyfikuj brakujące odpowiedzi lub odpowiedzi niespójne i wyjaśnij rozbieżności bezpośrednio z uczestnikiem przed wprowadzeniem danych do bazy danych badania.
  5. Obliczanie dziennego spożycia składników diety
    1. Przelicz zgłoszone częstotliwości spożycia na średnie spożycie dzienne (porcje/dzień).
    2. Przelicz wielkość porcji na gramy lub mililitry na dzień zgodnie z instrukcją FFQ.
    3. Oblicz dzienne spożycie składników odżywczych, korzystając z odpowiedniej bazy danych składu żywności oraz oprogramowania do analizy żywieniowej.
    4. Zastosuj tę samą procedurę obliczania składników odżywczych dla wszystkich uczestników.
      PUNKT PRZERWANIA: Po weryfikacji jakości bezpiecznie przechowuj wypełnione kwestionariusze FFQ, a następnie przetwórz je w celu analizy składników odżywczych i obliczenia Wskaźnika Dietetycznego Stanu Zapalnego (DII).

3. Szacowanie dietetycznego indeksu zapalnego

UWAGA: Dietetyczny Indeks Zapalny (DII) to opracowany na podstawie literatury algorytm, który szacuje potencjał zapalny habitualnego spożycia produktów spożywczych na podstawie danych zebranych za pomocą zwalidowanego narzędzia oceny diety8.

  1. Przygotowanie danych dotyczących spożycia pokarmów
    1. Przelicz wszystkie odpowiedzi z FFQ na dzienne spożycie składników odżywczych, korzystając ze zstandardizowanej bazy danych składu żywności i oprogramowania do analizy żywieniowej.
    2. Zastosuj tę samą procedurę obliczania wartości odżywczych dla wszystkich uczestników.
  2. Wybór komponentów diety
    1. Zidentyfikuj komponenty diety dostępne do obliczenia DII.
    2. Oblicz DII, wykorzystując wyłącznie te komponenty diety, które zostały rzetelnie zarejestrowane za pomocą wybranego FFQ i bazy danych składu żywności.
    3. Zastosuj ten sam zestaw komponentów diety dla wszystkich uczestników.
      UWAGA: Nie przypisuj wartości zero do komponentów diety, które nie zostały zmierzone.
  3. Obliczanie wyników zestandaryzowanych
    1. Porównaj spożycie każdego komponentu diety z odpowiadającą mu globalną średnią referencyjną i odchyleniem standardowym opisanym w oryginalnej metodologii DII8.
    2. Oblicz wynik zestandaryzowany, korzystając z następującego równania:
    3. Wynik zestandaryzowany = (Spożycie uczestnika − Globalna średnia referencyjna) ÷ Globalne odchylenie standardowe referencyjne
  4. Obliczanie centrowanych percentyli
    1. Przelicz każdy wynik zestandaryzowany na centrowany percentyl zgodnie z oryginalną metodologią DII.
    2. Oblicz centrowany percentyl, korzystając z następującego równania:
    3. Centrowany percentyl = (Percentyl × 2) − 1
  5. Obliczanie wyników DII dla poszczególnych komponentów
    1. Pomnóż centrowany percentyl przez wynik efektu zapalnego przypisany do każdego komponentu diety w oryginalnej bazie danych DII8.
    2. Powtórz obliczenia dla wszystkich dostępnych komponentów diety.
    3. Wynik DII komponentu = Centrowany percentyl × Wynik efektu zapalnego
  6. Obliczanie ogólnego Wskaźnika Zapalnego Diety (DII)
    1. Zsumuj wyniki DII komponentów, aby uzyskać ogólny wynik DII dla każdego uczestnika.
    2. Wartości ujemne interpretuj jako model diety o silniejszym działaniu przeciwzapalnym.
    3. Wartości dodatnie interpretuj jako model diety o silniejszym działaniu prozapalnym.
  7. Klasyfikacja uczestników
    1. Uporządkuj uczestników rankingowo według ich wyników DII.
    2. Podziel uczestników na kwartyle w oparciu o rozkład w populacji badanej.
  8. Kontrola jakości
    1. Dla wszystkich uczestników stosuj ten sam FFQ, bazę danych składu żywności, oprogramowanie do analizy żywieniowej oraz metodę obliczania DII.
    2. Przed analizą przejrzyj wszystkie zapisy żywieniowe pod kątem brakujących informacji, nieprawdopodobnego spożycia energii oraz błędów w wprowadzaniu danych.
    3. Niezależnie przelicz DII dla losowej próby uczestników, aby zweryfikować dokładność obliczeń.
    4. Udokumentuj wszystkie komponenty diety uwzględnione w obliczeniach DII i zgłoś komponenty, które były niedostępne.

4. Ocena MASLD

  1. Potwierdzić stłuszczenie wątroby zgodnie z opisem w punkcie 1.2.2.
    UWAGA: W miarę możliwości wszystkie badania powinny być wykonane przez tego samego doświadczonego radiologa przy użyciu identycznych parametrów akwizycji, aby zminimalizować zmienność zależną od operatora.
  2. Ocenić spożycie alkoholu
    1. Ocenić spożycie alkoholu za pomocą ustandaryzowanego wywiadu klinicznego.
    2. Wykluczyć uczestników, których spożycie alkoholu przekracza aktualne progi diagnostyczne dla MASLD.
  3. Wykluczyć wtórne przyczyny stłuszczenia wątroby
    1. Wykluczyć uczestników z przewlekłym wirusowym zapaleniem wątroby (HBV lub HCV).
    2. Wykluczyć uczestników z autoimmunologicznymi chorobami wątroby, uszkodzeniem wątroby indukowanym lekami, dziedzicznymi chorobami wątroby, w stanie ciąży, z aktywnym nowotworem złośliwym lub innymi przewlekłymi zaburzeniami wątroby, które mogą zakłócić ocenę kardiometaboliczną.
  4. Ocenić czynniki ryzyka kardiometabolicznego
    1. Ocenić wskaźnik masy ciała (BMI) i zaklasyfikować nadwagę lub otyłość jako BMI ≥25 kg/m2.
    2. Ocenić cukrzycę typu 2 na podstawie poziomu glukozy w plazmie na czczo >125 mg/dL.
    3. Ocenić rozregulowanie metaboliczne poprzez potwierdzenie obecności co najmniej dwóch z następujących kryteriów: zwiększony obwód pasa, ciśnienie tętnicze ≥130/85 mmHg, triglicerydy ≥150 mg/dL, HDL-C <40 mg/dL u mężczyzn lub <50 mg/dL u kobiet, poziom glukozy w plazmie na czczo 100–125 mg/dL lub HbA1c 5,7%–6,4% lub podwyższone markery insulinooporności, takie jak HOMA-IR.
  5. Zdiagnozować MASLD w przypadku potwierdzenia stłuszczenia wątroby wraz z co najmniej jednym czynnikiem ryzyka kardiometabolicznego zgodnie z aktualnymi kryteriami konsensusu.

5. Ocena ryzyka kardiometabolicznego

  1. Zebranie pomiarów demograficznych i antropometrycznych
    1. Zapisanie wieku uczestnika, płci, historii choroby, aktualnie przyjmowanych leków oraz zdiagnozowanych chorób kardiometabolicznych, w tym cukrzycy typu 2 i nadciśnienia tętniczego.
    2. Pomiar wzrostu i masy ciała przy użyciu skalibrowanego sprzętu.
    3. Obliczenie wskaźnika masy ciała (BMI) poprzez podzielenie masy ciała (kg) przez kwadrat wzrostu (m2).
    4. Pomiar obwodu talii w połowie odległości między dolnym brzegiem ostatniego żebra a grzbietem kostki biodrowej za pomocą nierozciągliwej taśmy mierniczej.
  2. Określenie biochemicznych markerów ryzyka kardiometabolicznego przy użyciu rutynowych zautomatyzowanych metod laboratoryjnych.
    1. Pobranie próbek krwi na czczo zgodnie z procedurami laboratoryjnymi instytucji.
    2. Pomiar markerów biochemicznych, w tym cholesterolu całkowitego, HDL-C, LDL-C, trójglicerydów, glukozy w osoczu na czczo, HbA1c oraz insuliny na czczo, przy użyciu rutynowych zautomatyzowanych badań laboratoryjnych.
      UWAGA: Zautomatyzowane badania laboratoryjne zazwyczaj określają poziom cholesterolu całkowitego i trójglicerydów za pomocą enzymatycznych testów kolorymetrycznych; HDL-C i LDL-C za pomocą bezpośrednich jednorodnych enzymatycznych testów kolorymetrycznych; glukozę w osoczu na czczo metodą enzymatyczną z użyciem heksokinazy; HbA1c za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC); a insulinę na czczo za pomocą referencyjnego immunoanalizy chemiluminescencyjnej.
    3. Obliczenie wskaźnika HOMA-IR (Homeostatic Model Assessment for Insulin Resistance).
    4. Obliczenie stosunku trójglicerydów do cholesterolu HDL (TG/HDL-C).
    5. Obliczenie indeksu aterogennego osocza (AIP) według wzoru:
      AIP = log (TG/HDL-C)
  3. Pomiar zapalnych biomarkerów osocza
    UWAGA: Materiały biologiczne pochodzenia ludzkiego należy traktować zgodnie z instytucjonalnymi przepisami dotyczącymi bezpieczeństwa biologicznego i standardowymi środkami ostrożności. Należy stosować odpowiednie Środki Ochrony Indywidualnej (PPE), używać sterylnych materiałów i technik aseptycznych, transportować próbki w szczelnych pojemnikach i utylizować odpady biologiczne zgodnie z przepisami instytucjonalnymi.
    1. Pozyskanie i opracowanie próbek krwi
      1. Pobranie 15 mL krwi żylnej na czczo z żyły łokciowej techniką sterylną do odpowiednich probówek z antykoagulantem.
      2. ostrożne odwrócenie probówek 8–10 razy. Wirowanie przy 2 000 × g przez 10 min w temperaturze 4 °C.
      3. Przelanie nadosadów osocza do opisanych sterylnych probówek i przygotowanie alikwotów zgodnie z potrzebami. Przechowywanie alikwotów w temperaturze −80 °C do momentu analizy.
    2. Wykonanie testu ELISA
      1. Przygotowanie standardów i rozcieńczeń próbek. Dodanie 100 µL standardów, kontroli i odpowiednio rozcieńczonych próbek osocza w dubletach do wyznaczonych dołków powlekanych przeciwciałami.
      2. Inkubacja przez 2,5 h w temperaturze pokojowej przy łagodnym mieszaniu. Odessanie zawartości i 3-krotne przemycie dołków 300 µL buforu PBS zawierającego 0,05% polisorbatu 20 (PBST), pH 7,2–7,4, z usunięciem resztek cieczy po ostatnim przemyciu.
      3. Dodanie 100 µL przeciwciała detekcyjnego i inkubacja przez 1 h w temperaturze pokojowej. Przemycie płytki, dodanie 100 µL streptawidyny-HRP i inkubacja przez 30–60 min w temperaturze pokojowej. Powtórzenie etapu przemywania.
      4. Dodanie 100 µL substratu TMB w celu rozwoju barwy. Inkubacja przez 20–30 min w temperaturze pokojowej w ciemności. Dodanie roztworu stopującego.
      5. Pomiar absorbancji przy 450 nm za pomocą czytnika płytek mikrotitracyjnych. Obliczenie stężeń analitycznych na podstawie krzywej standardowej.
      6. Analiza każdej próbki osocza w dubletach i obliczenie wartości średniej do analizy statystycznej.
      7. Włączenie standardów kalibracyjnych i próbek kontroli jakości do każdego cyklu analitycznego.
      8. Weryfikacja, czy pomiary w dubletach spełniają zdefiniowane kryterium współczynnika zmienności. Powtórzenie pomiarów w przypadku przekroczenia kryterium lub wykrycia błędów technicznych.
      9. Zapisanie końcowych wyników przy użyciu zakodowanych identyfikatorów uczestników. Zachowanie anonimowości próbek podczas całej analizy laboratoryjnej.
  4. Ocena rozkurczowej funkcji lewej komory za pomocą echokardiografii
    1. Przygotowanie uczestnika i sprzętu
      1. Zapewnienie uczestnikowi odpoczynku w spokoju przez co najmniej 10 min przed akwizycją obrazów.
      2. Ułożenie uczestnika w pozycji bocznej lewej i podłączenie elektrod EKG w celu synchronizacji z cyklem serca.
      3. Pozyskiwanie wszystkich obrazów podczas spokojnego oddychania przy jednoczesnym minimalizowaniu ruchów oddechowych.
      4. Użycie wysokorozdzielczego systemu ultradźwiękowego wyposażonego w głowicę fazową 2–5 MHz z możliwością obrazowania Dopplera falowego i Dopplera tkankowego.
      5. Zachowanie identycznego sprzętu USG, ustawień głowicy i parametrów akwizycji w trakcie całego badania, o ile to możliwe.
        UWAGA: Wszystkie badania należy przeprowadzać zgodnie z aktualnymi zaleceniami American Society of Echocardiography oraz European Association of Cardiovascular Imaging12,22.
    2. Pozyskanie standardowych obrazów echokardiograficznych
      1. Wykonanie standardowych widoków: przysternowego osi podłużnej, przysternowego osi krótkiej, apikalnego czterojamowego, apikalnego dwujamowego oraz apikalnego osi podłużnej.
      2. Optymalizacja wzmocnienia, głębokości, szerokości sektora i częstotliwości odświeżania klatek przed akwizycją Dopplera.
    3. Pomiar dopływu przez zastawkę mitralną
      1. Ustawienie objętości próbkowania Dopplera falowego pomiędzy krawędziami płatków zastawki mitralnej w widoku apikalnym czterojamowym.
      2. Zapis prędkości wczesnego (E) i późnego (A) dopływu przez zastawkę mitralną.
      3. Pozyskanie co najmniej trzech następujących po sobie cykli serca do analizy.
    4. Wykonanie obrazowania Dopplera tkankowego
      1. Aktywacja obrazowania Dopplera tkankowego falowego w widoku apikalnym czterojamowym.
      2. Kolejne ustawianie objętości próbkowania w obrębie pierścienia mitralnego po stronie przegrody oraz po stronie bocznej.
      3. Utrzymanie wiązki ultradźwiękowej jak najbardziej równolegle do ruchu mięśnia sercowego.
      4. Zapis trzech następujących po sobie cykli serca w każdej pozycji pierścienia.
    5. Obliczenie prędkości pierścienia
      1. Pomiar prędkości e′ w obrębie przegrody i ściany bocznej.
      2. Wyciągnięcie średniej z trzech cykli serca dla każdej lokalizacji pierścienia.
      3. Obliczenie średniej prędkości e′ pierścienia.
    6. Obliczenie stosunku E/e′
      1. Obliczenie średniego stosunku E/e′ poprzez podzielenie prędkości E zastawki mitralnej przez średnią prędkość e′ pierścienia.
      2. Osobne raportowanie stosunków E/e′ dla przegrody i ściany bocznej, jeśli są dostępne.
        UWAGA: W celu kontroli jakości należy pozyskać co najmniej trzy następujące po sobie cykle serca podczas stabilnego oddechu i wyciągnąć średnią z trzech niezależnych pomiarów dla każdej zmiennej echokardiograficznej. Wszystkie obrazy cyfrowe należy przechowywać do analizy offline przeprowadzonej przez co najmniej dwóch przeszkolonych operatorów oślepionych na dane laboratoryjne i dietetyczne, a przed końcową analizą danych należy ocenić powtarzalność międzyoperatorową.
  5. Ocena subklinicznej aterogenezy poprzez pomiar grubości kompleksu intima-media tętnic szyjnych
    1. Przygotowanie uczestnika i sprzętu
      1. Wykonanie ultrasonografii tętnic szyjnych za pomocą wysokorozdzielczego systemu ultradźwiękowego wyposażonego w naczyniową głowicę liniową 7–15 MHz.
      2. Zapewnienie uczestnikowi odpoczynku w pozycji leżącej na plecach przez co najmniej 10 min przed akwizycją obrazów.
      3. Ułożenie szyi w lekkim wyproście i obrócenie głowy o około 30–45° w stronę przeciwną do badanej strony.
      4. Unikanie nadmiernego obrotu głowy w celu zachowania geometrii naczyń i optymalizacji jakości obrazu.
      5. Stosowanie tego samego systemu USG, głowicy, ustawień akwizycji i oprogramowania analitycznego dla wszystkich uczestników, o ile to możliwe.
    2. Wykonanie ultrasonografii tętnic szyjnych
      1. Niezależne badanie prawej i lewej tętnicy szyjnej.
      2. Identyfikacja wspólnej tętnicy szyjnej, zatoki szyjnej, wewnętrznej tętnicy szyjnej i zewnętrznej tętnicy szyjnej w płaszczyźnie poprzecznej.
      3. Obrócenie głowicy w celu uzyskania obrazu podłużnego z wyraźnie zdefiniowanymi interfejsami światło–intima oraz media–adventitia.
      4. Optymalizacja głębokości obrazu, strefy ogniskowania i ogólnego wzmocnienia przed wykonaniem pomiarów.
    3. Pomiar grubości intima-media tętnic szyjnych
      1. Zdefiniowanie CIMT jako odległości między przednią krawędzią interfejsu światło–intima a przednią krawędzią interfejsu media–adventitia.
      2. Wybór wolnego od blaszki miażdżycowej odcinka tylnej ściany dystalnej części wspólnej tętnicy szyjnej, około 10 mm proksymalnie od zatoki szyjnej.
        UWAGA: Nie należy włączać zatoki szyjnej ani wewnętrznej tętnicy szyjnej do podstawowego pomiaru CIMT wspólnej tętnicy szyjnej, chyba że regiony te są zdefiniowane jako wyniki badania.
    4. Obliczanie CIMT
      1. Wykonanie co najmniej trzech pomiarów dla każdej tętnicy szyjnej.
      2. Obliczenie średniego CIMT oddzielnie dla prawej i lewej tętnicy szyjnej.
      3. Obliczenie całkowitej średniej CIMT jako średniej z wartości dla strony prawej i lewej.
      4. Zapisanie maksymalnej wartości CIMT w odcinku wolnym od blaszek po każdej stronie jako wtórnej zmiennej opisowej.
    5. Interpretacja CIMT
      1. Analiza CIMT przede wszystkim jako zmiennej ciągłej.
      2. Stosowanie zdefiniowanego dla badania progu CIMT (<0,7 mm lub ≥0,7 mm) wyłącznie w reprezentatywnych analizach kategorycznych, gdy jest to odpowiednie.
      3. Zapisywanie obecności blaszki w tętnicy szyjnej oddzielnie od pomiarów CIMT.
        UWAGA: Próg CIMT ≥0,7 mm należy stosować wyłącznie w analizach reprezentatywnych; jeśli są dostępne, należy używać wartości referencyjnych specyficznych dla wieku i płci. Kontrolę jakości należy zapewnić poprzez zaangażowanie przeszkolonych sonografów, stosowanie zakodowanych obrazów oraz oślepioną niezależną analizę wykonaną przez co najmniej dwóch badaczy. Należy ocenić niezawodność między- i wewnątrzobserwacyjną za pomocą ICC z 95% przedziałami ufności i powtórzyć pomiary, gdy interfejsy tętnicze nie są odpowiednio widoczne.

6. Analiza statystyczna

  1. Oszacowanie wielkości próby
    1. Oszacuj wymaganą wielkość próby zgodnie z głównym celem badania i oczekiwaną wielkością efektu.
    2. Przyjmij poziom istotności (α) wynoszący 0,05 oraz moc statystyczną na poziomie co najmniej 80%.
  2. Oceń rozkład zmiennych ciągłych za pomocą odpowiedniego testu normalności, np. testu Shapiro–Wilka.
  3. Wybór testów statystycznych
    1. Zmienne ciągłe o rozkładzie normalnym analizuj za pomocą testu t Studenta.
    2. Zmienne ciągłe o rozkładzie innym niż normalny analizuj za pomocą testu U Manna–Whitneya.
    3. W przypadku porównywania więcej niż dwóch grup zastosuj jednoczynnikową analizę wariancji (ANOVA) lub test Kruskala–Wallisa, w zależności od potrzeb.
    4. Zmienne kategoryczne analizuj za pomocą testu chi-kwadrat lub dokładnego testu Fishera.
    5. Zależności między zmiennymi o rozkładzie normalnym oceniaj za pomocą analizy korelacji Pearsona.
    6. Zależności między zmiennymi o rozkładzie innym niż normalny oceniaj za pomocą analizy korelacji rang Spearmana23,24,25.
  4. Korekta o zmienne zakłócające
    1. W razie potrzeby przeprowadź wieloczynnikowe analizy regresji, aby ocenić niezależny związek między dietetycznym indeksem stanu zapalnego (Dietary Inflammatory Index) a wynikami kardiometabolicznymi.
    2. Skoryguj modele regresji o klinicznie istotne zmienne zakłócające, w tym wiek, płeć, wskaźnik masy ciała (BMI), obwód talii, choroby współistniejące, status palenia, aktywność fizyczną oraz leki, które mogą wpływać na biomarkery stanu zapalnego26.
  5. Za istotne statystycznie uznaj dwustronną wartość p <0,05.
  6. Raportowanie analiz statystycznych
    1. Zmienne ciągłe przedstaw jako średnią ± odchylenie standardowe lub medianę (rozstęp międzykwartylowy), w zależności od potrzeb.
    2. Zmienne kategoryczne przedstaw w postaci liczebności i procentów.
    3. Podawaj szacunki efektu wraz z odpowiadającymi im 95% przedziałami ufności, jeśli jest to możliwe.

Wyniki

U wszystkich uczestników zdiagnozowano MASLD, co potwierdzono w standardowym badaniu ultrasonograficznym wątroby. Populacja badawcza została dopasowana pod względem wieku i płci, a najczęstszymi chorobami współistniejącymi były cukrzyca typu 2, nadciśnienie tętnicze układowe oraz dyslipidemia, co podsumowano w Tabeli 1. Surowe dane stanowiące podstawę analiz reprezentatywnych znajdują się w Pliku uzupełniającym 1.

Jako reprezentatywne zastosowanie protokołu, przeanalizowano Dietetyczny Indeks Zapalny (DII) jako wskaźnik zapalnego potencjału diety. Analizy eksploracyjne wykazały umiarkowaną dodatnią korelację między DII a stosunkiem E/e′ (ρ Spearmana = 0,50, p < 0,05), podczas gdy nie zaobserwowano istotnej korelacji między DII a CIMT (ρ Spearmana = 0,40, p = 0,81; Rysunek 1). W związku z tym korelację DII–CIMT należy interpretować jako eksploracyjny, nieistotny wynik.

Reprezentatywne analizy biochemiczne wykazały, że u uczestników z MASLD stwierdzono wyższy poziom glukozy w osoczu, HbA1c oraz stężenie triglicerydów, a także większe ryzyko sercowo-naczyniowe, o czym świadczyły podwyższone stosunki triglicerydów do cholesterolu HDL (TG/HDL-C) oraz indeks aterogenny osocza. Miażdżycę subkliniczną oceniono dodatkowo poprzez stratyfikację uczestników według CIMT. Reprezentatywne analizy wykazały, że zwiększone CIMT nie było powiązane z masą ciała, indeksem masy ciała ani obwodem talii, lecz wiązało się z obecnością MASLD (Tabela 2).

Zastosowalność protokołu została dodatkowo zilustrowana poprzez predefiniowane kryteria klasyfikacji uczestników. Uczestnicy przypisani do najwyższego kwartyla DII (Q4) reprezentowali podgrupę z największym zapalnym obciążeniem dietetycznym, podczas gdy osoby przypisane do Q1 reprezentowały najniższą ekspozycję zapalną. Analogicznie, uczestników z CIMT ≥0.7 mm zaklasyfikowano jako osoby z nasiloną subkliniczną miażdżycą, natomiast wartości E/e′ >14 wskazywały na podwyższone ciśnienie napełniania lewej komory oraz dysfunkcję rozkurczową. Te predefiniowane progi stanowią zestandaryzowane ramy interpretacji wyników dietetycznych, naczyniowych i kardiologicznych oraz ułatwiają powtarzalne porównania ryzyka kardiometabolicznego pomiędzy grupami uczestników.

figure-results-1
Rycina 1: Reprezentatywne zależności między dietetycznym indeksem stanu zapalnego a wczesnymi parametrami kardiometabolicznymi. (A) Korelacja między dietetycznym indeksem stanu zapalnego (DII) a stosunkiem E/e′, który jest echokardiograficznym markerem ciśnienia napełniania lewej komory. (B) Korelacja między DII a grubością kompleksu intima-media tętnic szyjnych (CIMT), analizowaną jako zmienna ciągła. Predefiniowany próg CIMT wynoszący 0.7 mm został wykorzystany wyłącznie do reprezentatywnych analiz kategorycznych i nie powinien być interpretowany jako uniwersalna wartość odcięcia diagnostycznego. Kliknij tutaj, aby wyświetlić większą wersję tej ryciny.

bez MASLDZ MASLDwartość p
(n = 10)(n = 15)
Wiek (lata) 42 (37 – 48)41 (39 – 43)0.37
Płeć męska n (%)4 (40.0)8 (53.3)0.4
Glukoza na czczo (mg/dL)88 (83 – 94)105 (98 – 125)0.01
HbA1c5.9 (5.5 - 6.1)6.4 (6.0 – 7.2)0.02
TG (mg/dL)120 (74 – 147)219 (108 – 297)0.02
HDL-C (mg/dL)41 (37 – 46)48 (30 – 57)0.43
stosunek TG/HDL-C2.5 (1.8 – 4.9)5.1 (2.6 – 6.7)0.04
AIP0.32 (0.24 – 0.41)0.42 (0.35 – 0.62)0.04
CRP (mg/dL)0.8 (0.4 – 1.0)1.1 (0.2 – 1.3)0.23

Tabela 1: Reprezentatywne cechy demograficzne, biochemiczne i kardiometaboliczne w zależności od statusu MASLD. Wyjściowe cechy demograficzne oraz reprezentatywne parametry biochemiczne i kardiometaboliczne u uczestników bez MASLD oraz z MASLD. Zmienne ciągłe przedstawiono jako medianę (rozstęp międzykwartylowy), a zmienne kategoryczne jako n (%). Porównania grup przeprowadzono przy użyciu testu t Studenta lub testu U Manna–Whitneya dla zmiennych ciągłych oraz dokładnego testu Fishera dla zmiennych kategorycznych. Skróty: MASLD = metabolic dysfunction-associated steatotic liver disease; HbA1c = hemoglobina glikowana; TG = triglicerydy; HDL-C = cholesterol lipoprotein wysokiej gęstości; AIP = Atherogenic Index of Plasma; CRP = białko C-reaktywne.

Wczesna aterogenezaZaawansowana aterogenezawartość p
CIMT < 0.7 (n = 18)CIMT ≥ 0.7 (n = 7)
Masa ciała (kg) 73.4 ± 18.070.0 ± 10.60.4
BMI (kg/m2) 30.0 ± 5.2429.0 ± 4.430.46
Obwód talii (cm)90.5 ± 7.596.5 ± 2.890.48
MASLD8 (44.4)7 (100)0.01

Tabela 2: Reprezentatywne cechy antropometryczne w zależności od grubości kompleksu intima-media tętnicy szyjnej. Reprezentatywne cechy antropometryczne oraz rozpowszechnienie MASLD w podziale według grubości kompleksu intima-media tętnicy szyjnej (CIMT). Uczestników zaklasyfikowano do grupy z wczesną subkliniczną miażdżycą (CIMT <0.7 mm) lub zwiększoną subkliniczną miażdżycą (CIMT ≥0.7 mm). Zmienne ciągłe przedstawiono jako średnia ± odchylenie standardowe, a zmienne kategoryczne jako n (%). Porównania grup przeprowadzono przy użyciu testu t Studenta, testu U Manna–Whitneya lub testu chi-kwadrat, w zależności od charakteru danych. Skróty: BMI = wskaźnik masy ciała; WC = obwód talii; CIMT = grubość kompleksu intima-media tętnicy szyjnej.

Plik uzupełniający 1: Surowe dane wykorzystane w analizach opisanych w niniejszym badaniu. Kliknij tutaj, aby pobrać ten plik.

Dyskusja

Opisane tutaj metody zapewniają standaryzowany schemat postępowania w celu zbadania, czy obciążenie kardiometaboliczne i aterogenne jest powiązane z metaboliczną stłuszczeniową chorobą wątroby (MASLD), w oparciu o hipotezę, że metaboliczne zaburzenia funkcji wątroby przyczyniają się do wczesnej aterogenezy27,28. Proponowany schemat ustala standaryzowane procedury wyboru uczestników, oceny diety, ilościowego oznaczania biomarkerów, obrazowania układu sercowo-naczyniowego, kontroli jakości oraz walidacji danych w celu poprawy spójności metodologicznej i powtarzalności. W miarę możliwości wszystkie pomiary są wykonywane przy użyciu identycznego sprzętu, standaryzowanych parametrów akwizycji, przez przeszkolony personel, z weryfikacją w dubletach oraz przy pomocy ślepej analizy obrazów, aby zminimalizować zmienność zależną od operatora pomiędzy badaczami i instytucjami. Ocena diety z wykorzystaniem ustrukturyzowanego kwestionariusza częstotliwości spożycia żywności (FFQ) wspieranego obrazami jest kluczowym elementem, ponieważ obliczenie DII zależy od dokładności samoistnie zgłaszanego spożycia pokarmów. Stosowanie standaryzowanych porcji referencyjnych i pomocy wizualnych redukuje błąd przypominania i poprawia porównywalność międzyosobniczą29,30. Podobnie, szacowanie Wskaźnika Zapalnego Diety (DII) przy użyciu globalnej bazy referencyjnej 45 parametrów dietetycznych umożliwia standaryzowaną ocenę potencjału zapalnego diety w różnych populacjach8,9. Błędna klasyfikacja spożycia pokarmów na tym etapie może osłabić powiązania z wynikami kardiometabolicznymi. Ponadto integracja markerów biochemicznych, echokardiograficznej oceny funkcji rozkurczowej lewej komory (E/e′) oraz grubości kompleksu intima-media tętnic szyjnych (CIMT) zapewnia kompleksową ocenę wczesnego ryzyka kardiometabolicznego. Ścisłe przestrzeganie protokołów zalecanych w wytycznych minimalizuje zmienność zależną od operatora i zapewnia wiarygodne oraz powtarzalne pomiary sercowo-naczyniowe12,15,22.

Należy podkreślić, że wskaźnik DII ma na celu charakterystykę zmienności międzyosobniczej w zakresie potencjału zapalnego diety, a nie diagnozowanie MASLD lub niezależne przewidywanie chorób kardiometabolicznych. W konsekwencji nie u wszystkich osób z MASLD oczekuje się podwyższonych wyników DII, a wysoki wskaźnik DII nie musi wskazywać na zaawansowane nieprawidłowości kardiometaboliczne. Zamiast tego, niniejszy protokół wykorzystuje DII jako zmienną stratyfikacyjną, aby zbadać, czy wzrost zapalnego obciążenia diety wiąże się z postępującymi subklinicznymi zmianami sercowo-naczyniowymi w całym spektrum MASLD. Aby zwiększyć wykonalność, protokół zawiera dostosowany do populacji kwestionariusz FFQ, który ułatwia wdrożenie w warunkach klinicznych. Chociaż kompleksowe narzędzia dietetyczne obejmują szerszy zakres składników odżywczych, uproszczone kwestionariusze FFQ wykazały akceptowalną trafność w szacowaniu DII oraz wzorców zapalnych związanych z dietą31.

Protokół obejmuje również zestandaryzowane procedury kontroli jakości w celu poprawy powtarzalności podczas analiz laboratoryjnych i obrazowych. Zastandaryzowany pobór krwi, terminowe przetwarzanie próbek, odpowiednie warunki przechowywania, kodowana identyfikacja próbek, powtórne pomiary laboratoryjne oraz włączenie próbek kontrolnych minimalizują zmienność analityczną. Podobnie, zestandaryzowane ułożenie pacjenta, dopasowanie Dopplera, płaszczyzny akwizycji i uśrednianie wielu cykli serca zmniejszają zmienność w pomiarach echokardiograficznych, natomiast obustronna ocena CIMT z wykorzystaniem zestandaryzowanego, wolnego od blaszek miażdżycowych segmentu ściany dalekiej tętnicy szyjnej wspólnej oraz niezależna, ślepa ocena obrazów poprawia powtarzalność pomiarów naczyniowych. Ten schemat postępowania można dostosować do różnych środowisk badawczych, co pozwala ośrodkom z ograniczoną infrastrukturą laboratoryjną na wdrożenie oceny diety, oceny antropometrycznej i oceny sercowo-naczyniowej opartej na ultradźwiękach przed wprowadzeniem dodatkowych biomarkerów molekularnych lub zapalnych, w zależności od dostępnych zasobów i celów badania.

Dodatkowym atutem tego schematu postępowania jest możliwość zidentyfikowania uczestników o rozbieżnych fenotypach, takich jak osoby z silnie prozapalnym wzorcem żywieniowym, ale bez oznak zaburzeń kardiometabolicznych lub, przeciwnie, osoby z relatywnie niskimi wartościami DII mimo stwierdzonych zaburzeń kardiometabolicznych. Takie wyniki mogą dostarczyć wiedzy na temat złożonych interakcji między wzorcami żywieniowymi, wrażliwością na insulinę, otocznością trzewną, aktywnością fizyczną, czynnikami genetycznymi i epigenetycznymi, terapią farmakologiczną, jakością snu oraz innymi środowiskowymi determinantami zdrowia kardiometabolicznego. Badania podłużne realizujące ten ustandaryzowany protokół mogą w dalszym stopniu wyjaśnić związek między zapalnym obciążeniem dietetycznym a progresją chorób kardiometabolicznych w przebiegu MASLD.

Należy wziąć pod uwagę kilka ograniczeń niniejszego protokołu. Przekrojowy charakter badania wyklucza wnioskowanie przyczynowe dotyczące związku między dietetycznym potencjałem zapalnym a uszkodzeniami kardiometabolicznymi. Ponadto DII odzwierciedla utrwalone wzorce żywieniowe, a nie ostre odpowiedzi zapalne, a ocena diety oparta na deklaracjach uczestników jest podatna na błąd przypominania32. Poleganie na białku C-reaktywnym (CRP) jako systemowym markerze stanu zapalnego może prowadzić do niedoszacowania subtelnych zmian zapalnych w porównaniu z szerszym profilowaniem cytokin33. Podobnie, powtarzalność CIMT zależy od ocenianego odcinka tętnicy, wyboru ściany, czasu w cyklu serca oraz liczby wykonanych pomiarów. Dlatego preferowana jest ciągła analiza CIMT oraz interpretacja oparta na percentylach specyficznych dla danej populacji, natomiast próg ≥0,7 mm zastosowany w wynikach reprezentatywnych należy traktować jako zdefiniowany dla tego badania punkt odcięcia analitycznego, a nie jako uniwersalny próg kliniczny. Co ważne, niniejszy protokół jest przeznaczony jako schemat wczesnej oceny ryzyka kardiometabolicznego, a nie jako algorytm diagnostyczny lub prognostyczny. W przeciwieństwie do konwencjonalnych metod przesiewowych w kierunku zaburzeń kardiometabolicznych u pacjentów z MASLD, które opierają się głównie na pomiarach antropometrycznych, ocenie ciśnienia tętniczego, statusie glikemicznym, biochemicznych testach wątrobowych i profilu lipidowym w celu oszacowania ryzyka sercowo-naczyniowego34,35, niniejszy schemat integruje pięć komplementarnych obszarów: (i) obciążenie dietetyczne zapaleniem ilościowo określone przez DII, (ii) biochemiczne profilowanie kardiometaboliczne, (iii) krążące biomarkery stanu zapalnego, (iv) echokardiograficzną ocenę funkcji rozkurczowej lewej komory z wykorzystaniem stosunku E/e′ oraz (v) CIMT jako marker wczesnej subklinicznej miażdżycy. Wspólnie te uzupełniające się oceny zapewniają zestandaryzowane, nieinwazyjne i powtarzalne ramy identyfikacji wczesnych zmian metabolicznych i naczyniowych przed wystąpieniem klinicznie jawnej choroby sercowo-naczyniowej, stanowiąc uzupełnienie, a nie zastępstwo dla konwencjonalnego przesiewu kardiometabolicznego1,3,12,15,34,35,36,37,38,39.

Oświadczenia

Autorzy nie zgłaszają żadnych konfliktów interesów.

Podziękowania

Autorzy dziękują za wsparcie finansowe z programu instytucjonalnego E015.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Zestaw do testu ELISA Abcamab65328Zestawy do testów ELISA, kolorymetryczne, Abcam do płytek 96-dołkowych
Czytnik mikropłytek do pomiaru absorbancji, SunriseTecan 30190079Tryb detekcji: Absorbancja; Zakres długości fal: 340 nm - 750 nm; Długość fali filtra: 405 nm, 450 nm, 492 nm, 620 nm; Format płytki: płytki 96-dołkowe
SfigmomanometrHomecareANEROIDE 1000100% bawełniana opaska samoregulowana z haczykiem, mankiet z wskaźnikiem tętnicy dla dorosłych.
Urządzenie do ultrasonografii do pomiaru CIMTPhilips EPIQ7L12-3 Broadband Linear Array TransducerPrzetwornik liniowy (Broadband Linear Array Transducer)

Bibliografia

  1. Rinella ME, et al. A multisociety Delphi consensus statement on new fatty liver disease nomenclature. J Hepatol. 2023;79(6):1542-1556.
  2. Younossi ZM, et al. The global epidemiology of nonalcoholic fatty liver disease and nonalcoholic steatohepatitis: a systematic review. Hepatology. 2023;77(4):1335-1347.
  3. Byrne CD, Targher G. NAFLD: a multisystem disease. J Hepatol. 2015;62(1 Suppl).
  4. Paik JM, et al. Changes in the global burden of chronic liver diseases from 2012 to 2017: the growing impact of NAFLD. Hepatology. 2020;72(5):1605-1616.
  5. Monteiro CA, Cannon G, Lawrence M, Costa Louzada ML. Ultra-processed foods, diet quality, and health using the NOVA classification system. Food and Agriculture Organization of the United Nations; Rome; 2019.
  6. Schwingshackl L, et al. Adherence to healthy dietary patterns and risk of chronic diseases: an updated umbrella review of meta-analyses of prospective cohort studies. Nutrients. 2021;13(10):3395.
  7. Medina-Remón A, et al. Polyphenol intake from a Mediterranean diet decreases inflammatory biomarkers related to atherosclerosis: a substudy of the PREDIMED trial. Br J Clin Pharmacol. 2017;83(1):114-128.
  8. Shivappa N, et al. Designing and developing a literature-derived, population-based Dietary Inflammatory Index. Public Health Nutr. 2014;17(8):1689-1696.
  9. Shivappa N, et al. Dietary inflammatory index and cardiovascular risk and mortality: a meta-analysis. Nutrition. 2019;59:56-64.
  10. Vissers LET, et al. The relationship between the Dietary Inflammatory Index and risk of cardiovascular disease, cardiovascular mortality, and all-cause mortality: a prospective cohort study. Am J Clin Nutr. 2017;105(5):1113-1119.
  11. Mazidi M, et al. Dietary inflammatory index and cardiometabolic risk in US adults. Atherosclerosis. 2018;276:23-27.
  12. Nagueh SF, et al. Recommendations for the evaluation of left ventricular diastolic function by echocardiography: an update from the American Society of Echocardiography and the European Association of Cardiovascular Imaging. J Am Soc Echocardiogr. 2016;29(4):277-314.
  13. Paulus WJ, Tschöpe C. A novel paradigm for heart failure with preserved ejection fraction: comorbidities drive myocardial dysfunction and remodeling through coronary microvascular endothelial inflammation. J Am Coll Cardiol. 2013;62(4):263-271.
  14. Lorenz MW, et al. Prediction of clinical cardiovascular events with carotid intima-media thickness: a systematic review and meta-analysis. Circulation. 2007;115(4):459-467.
  15. Touboul PJ, et al. Mannheim carotid intima-media thickness and plaque consensus (2004-2006-2011): an update on behalf of the Advisory Board of the 3rd, 4th and 5th Watching the Risk Symposia. Cerebrovasc Dis. 2012;34(4):290-296.
  16. Dobiásová M. Atherogenic index of plasma [log(triglycerides/HDL-cholesterol)]: theoretical and practical implications. Clin Chem. 2004;50(7):1113-1115.
  17. Niroumand S, et al. Atherogenic index of plasma: a marker of cardiovascular disease. Med J Islam Repub Iran. 2015;29:240.
  18. Tilg H, Moschen AR. Evolution of inflammation in nonalcoholic fatty liver disease: the multiple parallel hits hypothesis. Hepatology. 2010;52(5):1836-1846.
  19. Francque SM, et al. Non-alcoholic fatty liver disease: a patient guideline. JHEP Rep. 2021;3(5):100322.
  20. Denova-Gutiérrez E, et al. Validity of a food frequency questionnaire to assess food intake in Mexican adolescent and adult population. Salud Publica Mex. 2016;58(6):617-628.
  21. Denova-Gutiérrez E, et al. Relative validity of a food frequency questionnaire to identify dietary patterns in an adult Mexican population. Salud Publica Mex. 2016;58(6):608-616.
  22. Lang RM, et al. Recommendations for cardiac chamber quantification by echocardiography in adults: an update from the American Society of Echocardiography and the European Association of Cardiovascular Imaging. Eur Heart J Cardiovasc Imaging. 2015;16(3):233-270.
  23. Cohen J. Statistical power analysis for the behavioral sciences. 2nd ed. Lawrence Erlbaum Associates; Hillsdale, NJ; 1988.
  24. Shapiro SS, Wilk MB. An analysis of variance test for normality: complete samples. Biometrika. 1965;52(3-4):591-611.
  25. Benjamini Y, Hochberg Y. Controlling the false discovery rate: a practical and powerful approach to multiple testing. J R Stat Soc Series B Stat Methodol. 1995;57(1):289-300.
  26. Greenland S, Pearce N. Statistical foundations for model-based adjustments. Annu Rev Public Health. 2015;36:89-108.
  27. Targher G, et al. Increased prevalence of cardiovascular disease in type 2 diabetic patients with non-alcoholic fatty liver disease. Diabet Med. 2006;23(4):403-409.
  28. Lonardo A, et al. Hypertension, diabetes, atherosclerosis and NASH: Cause or consequence J Hepatol. 2018;68(2):335-352.
  29. Willett W. Nutritional epidemiology. 3rd ed. Oxford University Press; New York; 2013.
  30. Thompson FE, Subar AF. Dietary assessment methodology. In: Coulston AM, Boushey CJ, Ferruzzi MG, Delahanty LM, editors. Nutrition in the prevention and treatment of disease. 4th ed. Academic Press; London; 2017:5-48.
  31. Cavicchia PP, et al. A new dietary inflammatory index predicts interval changes in serum high-sensitivity C-reactive protein. J Nutr. 2009;139(12):2365-2372.
  32. Freedman LS, et al. Pooled results from 5 validation studies of dietary self-report instruments using recovery biomarkers for energy and protein intake. Am J Epidemiol. 2014;180(2):172-188.
  33. Pearson TA, et al. Markers of inflammation and cardiovascular disease: application to clinical and public health practice: a statement for healthcare professionals from the Centers for Disease Control and Prevention and the American Heart Association. Circulation. 2003;107(3):499-511.
  34. European Association for the Study of the Liver, European Association for the Study of Diabetes, European Association for the Study of Obesity. EASL-EASD-EASO clinical practice guidelines on the management of metabolic dysfunction-associated steatotic liver disease. J Hepatol. 2024;81(3):492-542.
  35. Arnett DK, et al. 2019 ACC/AHA guideline on the primary prevention of cardiovascular disease: a report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Clinical Practice Guidelines. Circulation. 2019;140(11).
  36. Ruiz-Canela M, Bes-Rastrollo M, Martínez-González MA. The role of dietary inflammatory index in cardiovascular disease, metabolic syndrome and mortality. Curr Cardiol Rep. 2016;18(7):60.
  37. Targher G, Day CP, Bonora E. Risk of cardiovascular disease in patients with nonalcoholic fatty liver disease. N Engl J Med. 2010;363(14):1341-1350.
  38. Calder PC, et al. Dietary factors and low-grade inflammation in relation to overweight and obesity. Br J Nutr. 2011;106(Suppl 3).
  39. Estruch R, et al. Primary prevention of cardiovascular disease with a Mediterranean diet supplemented with extra-virgin olive oil or nuts. N Engl J Med. 2018;378(25).

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Dietary Inflammatory Index (DII)stłuszczenie wątrobyultrasonografia tętnic szyjnychocena echokardiograficznabiomarkery stanu zapalnegostosunek trójglicerydów do HDLwskaźnik aterogenny

Ten artykuł został opublikowany

Film wkrótce dostępny

Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki korzystania z usługi

Zasady

Prawa autorskie © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.