Artykuł metodologiczny

Opracowanie zestandaryzowanego protokołu manipulacji polegającej na uciskaniu kręgosłupa dla szczurzego modelu astmy dziecięcej

0 wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/70623

⸱

1 października 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1College of Acupuncture and Massage, Nanjing University of Chinese Medicine

W tym artykule

Podsumowanie

Niniejszy artykuł przedstawia zstandaryzowany protokół manipulacji polegającej na uciskaniu kręgosłupa (SP) w młodym modelu szczura z astmą. Protokół ten złagodził stan zapalny dróg oddechowych, nadreaktywność oraz przebudowę w modelu astmy indukowanej OVA. Badanie to może stanowić podstawę do dalszych analiz mechanistycznych oraz translacji klinicznej.

Streszczenie

Astma jest najczęstszą przewlekłą zapalną chorobą dróg oddechowych u dzieci i charakteryzuje się przewlekłym zapaleniem dróg oddechowych, nadreaktywnością oskrzeli (AHR) oraz przebudową dróg oddechowych. W tradycyjnej medycynie chińskiej (TCM) manipulacja uciskowa kręgosłupa (SP) jest szeroko stosowaną techniką masażu pediatrycznego w leczeniu astmy i innych chorób wieku dziecięcego. Mimo ponad 1000-letniej historii stosowania w praktyce klinicznej, SP pozostaje w dużej mierze nieznana poza Chinami. Ponadto mechanizmy leżące u podstaw SP nie zostały jeszcze w pełni scharakteryzowane. Niniejszy artykuł opisuje wykonalny i zestandaryzowany protokół SP, który odwzorowuje kluczowe procedury stosowane w praktyce klinicznej. Zastosowanie tego protokołu poprawiło stan zapalny dróg oddechowych, zmniejszyło AHR oraz ograniczyło przebudowę dróg oddechowych w młodzieńczym modelu astmy u szczurów. W celu zwiększenia powtarzalności zestandaryzowano kluczowe parametry proceduralne, w tym nacisk palców, częstotliwość manipulacji, liczbę powtórzeń oraz czas trwania interwencji. Zestandaryzowany protokół przedstawiony w niniejszym badaniu może służyć jako punkt odniesienia dla dalszych badań nad standaryzacją SP oraz mechanizmami jej działania w eksperymentalnych modelach astmy u dzieci.

Wprowadzenie

Astma u dzieci charakteryzuje się przewlekłym zapaleniem dróg oddechowych, nadreaktywnością oskrzeli (AHR) oraz przebudową dróg oddechowych1,2. Często zaczyna się wczesnym dzieciństwem i jest najczęstszą przewlekłą chorobą wśród dzieci w wieku szkolnym. Obecne konwencjonalne metody leczenia obejmują glikokortykosteroidy wziewne, agonistów receptorów β₂-adrenergicznych, antagonistów receptorów leukotrienowych oraz terapie biologiczne3,4. Jednakże w skali światowej jedynie 44,1% dzieci i 55,4% młodzieży z astmą osiąga odpowiednią kontrolę nad chorobą5. Co więcej, powtarzane podawanie systemicznych lub wziewnych glikokortykosteroidów może przyczyniać się do zahamowania wzrostu u dzieci zastmą o słabej kontroli6.

Masaż (znany w Chinach jako tuina), będący tradycyjną terapią zewnętrzną, jest kosztowo efektywny, dobrze tolerowany i ogólnie uznawany za bezpieczny dla dzieci. Masaż od dawna jest stosowany zarówno w Chinach, jak i w krajach zachodnich w profilaktyce i leczeniu astmy u dzieci7. Przeglądy systematyczne i metaanalizy wykazały korzystne efekty masażu w leczeniu astmy u dzieci7,8. Manipulacja uciskowa kręgosłupa (SP) jest klasyczną i powszechnie stosowaną techniką w tradycyjnym chińskim masażu dziecięcym. Zgodnie z teorią tradycyjnej medycyny chińskiej (TCM), stymulacja meridianu Zarządcy (GV) oraz meridianu Pęcherza (BL) wzdłuż pleców moduluje funkcje organów Zang-Fu, utrzymując tym samym homeostazę systemową oraz zapobiegając chorobom lub je lecząc9,10,11. Wcześniejsze badania wykazały, że SP nie tylko łagodzi objawy i oznaki atopii u dzieci, ale także redukuje przewlekły stan zapalny dróg oddechowych w młodym modelu szczurzym astmy12,13,14. Oprócz zastosowania klinicznego, SP jest powszechnie praktykowane jako domowa interwencja opieki zdrowotnej11,15. Pomimo historii klinicznej obejmującej ponad tysiąc lat, SP pozostaje stosunkowo nieznane poza Chinami, a jego podstawowe mechanizmy nie zostały szeroko zbadane. Dlatego znormalizowane modele zwierzęce są niezbędne do wyjaśnienia mechanizmów działania SP oraz wsparcia jego szerszej oceny naukowej i zastosowania.

Wiele badań ustanowiło zestandaryzowane protokoły masażu dla badań na zwierzętach. Wcześniejsza praca opracowała zestandaryzowany protokół głaskania pleców lub brzucha z prędkością około 20 cm/s i ciśnieniem 100 mm H₂O w celu zahamowania pobudzeniowych reakcji sercowo-naczyniowych16. Niedawno wykazano, że powtarzalna jednokierunkowa stymulacja dotykowa kręgosłupa wzdłuż GV z użyciem stymulatora mechanicznego sprzyja przebudowie synaptycznej w przyśrodkowej korze przedczołowej w młodzieńczym modelu autyzmu u myszy. W tym protokole stosowano umiarkowany nacisk wynoszący około 30–50 g przy prędkości około 15,3 cm/s, nie powodując dyskomfortu ani obrażeń. Stymulację przeprowadzano w sposób jednokierunkowy od regionu ogonowego do karku (regionu potylicznego) dwa razy dziennie przez 10 min w okresie 21 dni17. Jednakże manipulacja manualna różni się zasadniczo od stymulacji mechanicznej i obecnie żadne urządzenie mechaniczne nie odtwarza charakterystycznych ruchów SP. Ponadto, mimo że kilka badań zbadało mechanizmy SP w modelach astmy i innych schorzeń pediatrycznych u szczurów18, nie ustanowiono zestandaryzowanego protokołu definiującego siłę i prędkość stymulacji wymaganą dla SP w badaniach na zwierzętach. Dlatego opracowanie zestandaryzowanego protokołu SP jest niezbędne w celu poprawy powtarzalności i ułatwienia badań nad mechanizmami działania.

Astma alergiczna jest najczęstszym fenotypem astmy u dzieci19. W związku z tym sensybilizacja i prowokacja owalbuminą (OVA) są najpowszechniej stosowanymi metodami tworzenia eksperymentalnego modelu astmy dziecięcej20. Szczury są szczególnie odpowiednie do badania interwencji opartych na masażu, ponieważ ich większe rozmiary ciała ułatwiają manipulacje manualne. Ponadto modele szczurze wiarygodnie odtwarzają kluczowe cechy patologiczne astmy alergicznej, w tym zapalenie z przewagą limfocytów Th2, AHR oraz przebudowę dróg oddechowych21.

Poprzednie badania wykazały, że SP łagodzi stan zapalny dróg oddechowych u młodych szczurów po sensybilizacji i prowokacji OVA11,14. W związku z tym celem niniejszego badania było opracowanie zestandaryzowanego protokołu SP dla młodzieńczego modelu astmy u szczurów, aby ułatwić przyszłe badania nad mechanizmami działania SP. Niniejszy zestandaryzowany protokół zapewnia odtwarzalne ramy eksperymentalne dla badań mechanistycznych oraz przyszłych badań translacyjnych nad SP w modelach zwierzęcych astmy dziecięcej.

Protokół

Badanie to zostało zatwierdzone przez Komitet ds. Opieki i Korzystania ze Zwierząt Uniwersytetu Medycyny Chińskiej w Nankinie (nr 202306A032). Wszystkie procedury zostały przeprowadzone zgodnie z Wytycznymi National Institutes of Health dotyczącymi opieki i wykorzystania zwierząt laboratoryjnych oraz wytycznymi ARRIVE 2.0.

Wykorzystano trzydzieści 3-tygodniowych samców szczurów linii Sprague-Dawley (SD) o masie 45–55 g, wolnych od specyficznych patogenów (SPF). Szczury przetrzymywano (po trzy w klatce) w barierowym zapleczu SPF w 12-godzinnym cyklu światło/ciemność, w temperaturze 22 ± 2 °C i wilgotności względnej 30%–40%, z wolnym dostępem do standardowej karmy i wody. Na podstawie wcześniejszych badań z wykorzystaniem młodych modeli szczurzych astmy11,14 określono wielkość próby tak, aby zminimalizować liczbę zwierząt zgodnie z zasadą redukcji 3Rs. Po 7-dniowym okresie aklimatyzacji odnotowano wyjściową masę ciała i przypisano każdemu szczurowi unikalny numer identyfikacyjny. Szczury podzielono na warstwy według wyjściowej masy ciała, a następnie w ramach każdej warstwy przydzielono je do jednej z pięciu grup za pomocą tabeli liczb losowych, stosując stosunek przydziału 1:1:1:1:1 (n = 6 na grupę): kontrolna (CN), astma (AS), astma + SP (AS+SP), astma + metyloprednizolon (AS+MP) oraz astma + SP + metyloprednizolon (AS+SP+MP). Sekwencja randomizacji i przydział do grup zostały opracowane przez badacza, który nie brał udziału w późniejszych interwencjach ani ocenach wyników.

Kryteria włączenia obejmowały zdrowe samce szczurów SD SPF w wieku 3 tygodni, o masie ciała 45–55 g w punkcie wyjściowym, wykazujące prawidłowy wzorzec oddychania oraz regularną aktywność fizyczną. Szczury wykluczano, jeśli wykazywały oznaki choroby, odchylenie masy ciała o >20% od średniej kohorty podczas aklimatyzacji lub jeśli padły przed zakończeniem fazy interwencji. Przez cały czas trwania procedury stosowano odpowiednie środki ochrony osobistej, w tym fartuch laboratoryjny, maseczkę jednorazową i rękawiczki. Zwłoki zwierząt i tkanki umieszczano w dwuwarstwowych workach na odpady biologiczne i przechowywano w temperaturze −20 °C przed utylizacją. Zanieczyszczoną ściółkę utylizowano jako stałe odpady biologiczne, a ostre narzędzia wyrzucano do zatwierdzonych, odpornych na przebicie pojemników na odpady ostre. W celu końcowego pobrania tkanek podano 20% uretan (5 mL/kg, i.p.), a głęboką anestezję potwierdzono brakiem odruchu wycofania łapy oraz brakiem odruchu rogówkowego.

1. Ustanowienie modelu astmy u młodych szczurów

UWAGA: Poniższa procedura została zastosowana w celu opracowania modelu astmy u młodych szczurów12.

  1. Przygotuj zawiesinę OVA/Al(OH)₃ bezpośrednio przed każdym wstrzyknięciem. Rozpuść 2 mg OVA klasy V bezpośrednio w 1 mL 4% żelu Al(OH)₃ i mieszaj w wortexie aż do uzyskania homogenicznej zawiesiny.
    UWAGA: Przed wstrzyknięciem upewnij się, że zawiesina jest homogeniczna. W przypadku wystąpienia wytrącania krótko wymieszaj w wortexie, aby ponownie zawiesić mieszaninę. Przechowuj zawiesinę w lodzie i zużyj w ciągu 2 h od przygotowania.
  2. Wstrzyknij 1 mL zawiesiny OVA/Al(OH)₃ doszpikowo w 1., 8. i 15. dniu eksperymentu. Szczurom w grupie CN wstrzyknij 1 mL sterylnego soli fizjologicznej (0.9% NaCl) zgodnie z tym samym harmonogramem.
  3. Poddaj szczury ekspozycji na 2% roztwór OVA klasy II od 21. do 42. dnia eksperymentu przy użyciu nebulizatora ultradźwiękowego. Dwie ostatnie kolejne ekspozycje wykonaj z użyciem 3% OVA w celu wywołania zaostrzenia po sensybilizacji.
  4. Wykonuj nebulizację co drugi dzień przez 30 min w okresie 3 tygodni. Umieść każdego szczura indywidualnie w szczelnej komorze ekspozycyjnej podłączonej do nebulizatora ultradźwiękowego (częstotliwość ultradźwięków: 1.7 MHz ± 10%; szybkość nebulizacji: ≥3 mL/min; średnica cząsteczek: <5 µm).
    UWAGA: Potwierdź pomyślne ustanowienie modelu astmy, obserwując kichanie, potrząsanie głową podczas oddychania, oddychanie przez otwarte usta, skurcze mięśni brzucha oraz świszczący oddech.

2. Obsługa i zastosowanie oprogramowania systemu Finger TPS

  1. Włóż wtyczkę czujnika pionowo do interfejsu płyty obwodów drukowanych. Podłącz płytę do komputera za pomocą kabla USB-C o długości około 40 cm, aby zapewnić odpowiednią swobodę pracy.
  2. Zdezynfekuj dłonie i nakładki ochronne na palce. Włóż prawy kciuk i palec wskazujący operatora do rękawek palcowych wyposażonych w czujniki. Umieść elastyczne czujniki na środku opuszek palców i zapewnij ściśle przylegający, pozbawiony zmarszczek kontakt ze skórą.
  3. Przeprowadź kalibrację systemu i kontrolę jakości pomiaru siły
    1. Przed każdą sesją szkolenia operatora sprawdź czujniki i kable połączeniowe oraz zweryfikuj, czy urządzenie jest prawidłowo podłączone.
    2. Wybierz „N” jako jednostkę pomiarową i ustaw zakres pomiarowy od −3,5 do 32 N.
    3. Upewnij się, że do czujników nie przykładana jest żadna siła zewnętrzna. Uruchom funkcję „Tare” (tara), aby wyzerować system.
    4. Rejestruj linię bazową bez obciążenia przez 30 s. Rozpocznij pomiar siły dopiero wtedy, gdy wariancja linii bazowej pozostanie poniżej 0,02 N.
    5. Powtarzaj procedurę zerowania za każdym razem, gdy korygowana jest pozycja czujnika lub ściśnięcie rękawki, lub gdy zaobserwowano dryft linii bazowej.
    6. Używaj systemu Finger TPS do monitorowania przykładanej siły podczas szkolenia operatora. Utrzymuj siłę 5 ± 0,6 N podczas manipulacji typu back stroking oraz 12 ± 2 N podczas SP, zachowując określoną prędkość i częstotliwość.
    7. Zaakceptuj krzywą siły tylko wtedy, gdy linia bazowa pozostaje stabilna, nie występują przerwy w sygnale ani nasycenie, a przykładana siła mieści się w określonych zakresach docelowych.
  4. Wykonuj manipulację back-stroking oraz SP, monitorując dynamiczną krzywą siły. W razie potrzeby dostosuj ściśnięcie rękawek palcowych, aż do uzyskania stabilnej krzywej siły.
  5. Ćwicz manipulacje, monitorując w czasie rzeczywistym krzywą siły. Utrzymuj siłę docelową 5 ± 0,6 N i prędkość około 5 cm/s podczas back stroking oraz siłę docelową 12 ± 2 N przy częstotliwości 6–8 powtórzeń/min podczas SP. Uznaj operatora za kompetentnego dopiero po pięciu kolejnych próbach praktycznych, które spełnią kryteria techniki manipulacji, siły nacisku palca i częstotliwości SP.
    UWAGA: Uznaj operatora za wykwalifikowanego dopiero po konsekwentnym osiąganiu docelowej siły i parametrów ruchu. Przed wykonaniem formalnej procedury SP zdejmij nakładki ochronne na palce, aby uniknąć dodatnej stymulacji dotykowej szczurów. Jednakże, żadne z testów powtarzalności międzyoperatorowej w niniejszym badaniu nie powinno być brane pod uwagę przy przyjmowaniu tego protokołu jako punktu odniesienia dla badania SP.

3. Szczegółowa procedura manipulacji polegającej na uciskaniu kręgosłupa

  1. Delikatnie utrzymaj szczura w pozycji brzusznej na jednej dłoni. Podeprzyj przednie kończyny, delikatnie obejmując kciukiem i palcem wskazującym przednie pachy, i pozwól przednim kończynom zwisać naturalnie. Upewnij się, że szczur pozostaje spokojny i ma miarowy oddech. W przypadku wystąpienia wokalizacji, walki lub defekacji, puść szczura i pozwól mu na aklimatyzację przez 2–3 min przed ponownym ustawieniem go w pozycji (Rysunek 1).
  2. Przesuń palcami dwukrotnie po grzbiecie od okolic łopatki do nasady ogona wzdłuż naczynia zarządzającego (GV), używając prawego palca wskazującego, środkowego i pierścieniowego. Zastosuj siłę około 5 N, aby uspokoić szczura przed SP.
  3. Uciśnij skórę u nasady ogona, ustawiając prawy kciuk z tyłu, a palce wskazujący i środkowy z przodu. Delikatnie unieś skórę, a następnie skręć i przesuwaj palce w kierunku głowowym wzdłuż kręgosłupa w stronę punktu Dazhui (GV14). Unikaj wywoływania wyraźnych oznak dyskomfortu. Zachowaj nacisk palców na poziomie około 12 N i wykonuj manipulację z częstotliwością 6–8 powtórzeń/min. Wykonaj 15 powtórzeń od 1. do 21. dnia eksperymentu oraz 25 powtórzeń od 22. do 44. dnia.
  4. Powtórz procedurę gładzenia grzbietu opisaną w kroku 3.2, aby zakończyć sesję terapeutyczną i uspokoić szczura.
    UWAGA: Zgodnie z teorią tradycyjnej medycyny chińskiej (TCM), SP wykonuje się wzdłuż kręgosłupa w celu stymulacji południków GV i BL (Rysunek 2). Południk GV przebiega wzdłuż linii środkowej grzbietu od nasady ogona do punktu Dazhui (GV14), natomiast południk BL znajduje się około 3–6 mm bocznie od linii środkowej, w zależności od wielkości ciała22. Punkt Dazhui (GV14) znajduje się w połowie drogi między siódmym kręgiem szyjnym a pierwszym kręgiem piersiowym. Zwiększaj liczbę powtórzeń SP wraz z wiekiem, aby odwzorować kliniczny schemat leczenia. Podczas gładzenia grzbietu upewnij się, że szczur pozostaje zrelaksowany, oddycha spokojnie i nie wykazuje zachowań obronnych. Podczas SP można spodziewać się lekkiego wyginania grzbietu i rozszerzenia wibrysów, bez występowania stresowego oddawania moczu, defekacji, gwałtownej walki, wokalizacji lub prób ucieczki.

4. Protokoły interwencyjne

  1. Przypisz szczury do grupy CN, która nie otrzyma żadnej interwencji specyficznej dla choroby. Traktuj szczury łagodnie przez ten sam czas, co w grupie AS+SP, aby kontrolować wpływ manipulacji zwierzętami. Podawaj dokanałowo sól fizjologiczną (1 mL/kg) zgodnie z tym samym harmonogramem, który stosowano w przypadku iniekcji metyloprednizolonu.
  2. Poddaj szczury z grupy AS sensytyzacji i wyzwoleniu OVA. Zastosuj te same procedury dotyczące manipulacji i kontrolnych iniekcji soli fizjologicznej, co w grupie CN.
  3. Poddaj szczury z grupy AS+SP sensytyzacji i wyzwoleniu OVA. Stosuj protokół SP raz dziennie przed indukcją modelu.
  4. Poddaj szczury z grupy AS+MP sensytyzacji i wyzwoleniu OVA. Podawaj metyloprednizolon (10 mg/kg; 2 mg/mL przygotowane w soli fizjologicznej) poprzez iniekcję dokanałową na 30 min przed każdym wyzwoleniem OVA.
  5. Poddaj szczury z grupy AS+SP+MP tym samym procedurom, co w grupie AS+MP. Stosuj protokół SP raz dziennie przed iniekcją metyloprednizolonu.
    UWAGA: Z wyjątkiem grup AS+SP i AS+SP+MP, stosuj te same procedury manipulacji we wszystkich pozostałych grupach, aby kontrolować nieswoiste efekty manipulacji. Do wszystkich iniekcji używaj sterylnych jednorazowych strzykawek, a igły utylizuj w odpornych na przebicie pojemnikach na odpady ostre. Wprowadzaj igłę do iniekcji dokanałowej bocznie w stosunku do linii środkowej brzucha, aby zminimalizować ryzyko uszkodzenia narządów wewnętrznych. Aby kontrolować stymulację dotykową w grupach bez SP, głaskaj szczury cztery razy podczas tej samej interwencji, co w grupie SP, każdego dnia. Stosuj tę samą procedurę głaskania grzbietu, co w grupach SP.

Wyniki

Masa ciała jest ważnym wskaźnikiem wzrostu u młodych szczurów. Przed rozpoczęciem leczenia doświadczalnego nie zaobserwowano istotnych różnic w masie ciała pomiędzy pięcioma grupami. Po indukcji modelu astmy, w grupie AS odnotowano istotnie niższą masę ciała niż w grupie CN (P = 0.000; Rysunek 3A). W porównaniu z grupą AS, grupa AS+SP wykazała istotnie większą masę ciała (P = 0.008; Rysunek 3A), podczas gdy w grupie AS+MP nie stwierdzono istotnych różnic (P = 0.975; Rysunek 3A). Podobnie, w grupie AS+SP+MP nie zaobserwowano istotnego wzrostu masy ciała w porównaniu z grupą AS (P = 0.925; Rysunek 3A). Wyniki sugerują, że SP sprzyja przybieraniu na wadze podczas modelowania astmy dziecięcej i leczenia metyloprednizolonem (MP) u młodych szczurów.

Po wyzwaniu OVA szczury w grupie CN nie wykazywały objawów niewydolności oddechowej, takich jak duszność, kichanie, kiwanie głową, oddychanie przez otwarte usta, skurcze mięśni brzucha lub świszczący oddech. W przeciwieństwie do nich, szczury w grupie AS prezentowały typowe objawy astmy dziecięcej, w tym duszność, kichanie, kiwanie głową oraz oddychanie przez otwarte usta. Objawy kliniczne te zostały wyraźnie złagodzone po zastosowaniu SP, MP lub ich łącznego podania.

Aby ocenić przeciwzapalne działanie SP u młodych szczurów z eksperymentalną astmą, tkanki płuc pobrano po głębokiej anestezji uretanem 20% (5 mL/kg, i.p.) zgodnie z wcześniej opisanymi procedurami12. W celu oceny przewlekłego stanu zapalnego dróg oddechowych wykonano barwienie hematoksyliną i eozyną (HE) oraz analizę ekspresji genów prozapalnych, natomiast barwienie Massona zastosowano do oceny przebudowy dróg oddechowych. Nadreaktywność dróg oddechowych (AHR) oceniono za pomocą pletyzmografii całego ciała (WBP) poprzez pomiar wzmocnionej pauzy (Penh).

Zgodnie z rutynowymi procedurami barwienia HE oraz metodą Massona23, przekroje płuc zabarwiono hematoksyliną i eozyną, a następnie oceniono stan zapalny okołubronchiolarny w zmodyfikowanej skali 0–424. W grupie z modelem astmy odnotowano istotnie wyższe wyniki stanu zapalnego niż w grupie CN (P = 0.000). W porównaniu z grupą AS, grupy AS+SP, AS+MP oraz AS+SP+MP wykazały istotnie niższe wyniki stanu zapalnego (odpowiednio P = 0.005, P = 0.006 i P = 0.000), przy czym pomiędzy trzema grupami leczonymi nie stwierdzono istotnych różnic (Rysunek 4A, Tabela 1).

Przebudowę dróg oddechowych oceniono poprzez ilościowe określenie odkładania kolagenu wokół oskrzelików z wykorzystaniem barwienia Massona. Odkładanie kolagenu wyrażono jako obszar pozytywny pod kątem kolagenu znormalizowany do obwodu błony podstawnej (µm2/µm). Grupa AS wykazała istotnie większe odkładanie kolagenu niż grupa CN (P = 0,000). W porównaniu z grupą CN grupy AS+SP i AS+MP wykazały umiarkowanie wyższe odkładanie kolagenu (odpowiednio P = 0,050 i P = 0,051), ale istotnie niższe odkładanie kolagenu niż grupa AS (P = 0,001 dla obu porównań). W grupie AS+SP+MP nie stwierdzono istotnej różnicy w stosunku do grupy CN (P = 0,105), lecz wykazano istotnie zmniejszone odkładanie kolagenu w porównaniu z grupą AS (P = 0,001). Nie zaobserwowano istotnych różnic pomiędzy trzema grupami interwencyjnymi (Rysunek 4B, Tabela 1).

Reprezentatywne krzywe siły uzyskane przy użyciu systemu Finger TPS przedstawiono na Rysunku 5. Podczas szkolenia operatora krzywa siły zarejestrowana podczas ruchu powrotnego (back stroking) pozostawała stabilna na poziomie około 5 N (Rysunek 5A), natomiast krzywa siły zarejestrowana podczas SP wykazywała powtarzające się piki siły odpowiadające manipulacji szczypaniem, przy czym siła przyłożona była utrzymywana w zdefiniowanym zakresie docelowym (Rysunek 5B). Profile siły te obrazują standaryzowane charakterystyki siły stosowane podczas szkolenia operatora.

Całkowity harmonogram eksperymentu przedstawiono na Rysunku 6. Po 7-dniowym okresie aklimatyzacji przeprowadzono uczulanie OVA zgodnie z określonym schematem, a następnie powtarzano ekspozycję na OVA. SP podawano grupom AS+SP oraz AS+SP+MP w wyznaczonym okresie interwencji, natomiast metyloprednizolon podawano przed ekspozycją na OVA w odpowiednich grupach terapeutycznych. Ocenę WBP oraz pobranie tkanek przeprowadzono po ostatniej ekspozycji (Rysunek 6).

Pletyzmografia całego ciała jest powszechnie stosowana do oceny Penh u świadomych, nieskrępowanych gryzoni, bez powodowania znacznych obrażeń lub stresu25. Chociaż Penh jest pośrednim wskaźnikiem zależnym od czasu trwania cyklu oddechowego i czynników środowiskowych, bezpośredni pomiar oporu dróg oddechowych wymaga znieczulenia i tracheostomii, co może zmienić fizjologię dróg oddechowych26. Mimo to wykazano, że Penh koreluje z inwazyjnymi pomiarami oporu płuc27. Dwadzieścia cztery godziny po ostatniej ekspozycji na OVA szczury umieszczono w komorach bez ograniczeń i poddano sekwencyjnie działaniu aerozolu PBS, a następnie acetylocholiny (Ach) w stężeniach 3,125, 6,25, 12,5, 25 i 50 mg/mL. Każda ekspozycja na aerozol trwała 2 min, po czym następował 5-minutowy okres rejestracji28. Grupa AS wykazywała znacznie wyższe wartości Penh niż grupa CN, natomiast leczenie SP, MP lub ich łączna aplikacja znacząco obniżyły wartości Penh (P = 0,005; Rysunek 3B). Wynik ten wskazał, że SP poprawiło funkcję oddechową u szczurów z astmą, co wymaga dalszej walidacji w połączeniu z bezpośrednimi pomiarami oporu dróg oddechowych (Raw).

Interleukina-4 (IL-4) inicjuje zapalenie eozynofilowe zależne od Th2, natomiast czynnik martwicy nowotworu-α (TNF-α) przyczynia się do AHR i przebudowy dróg oddechowych; oba te czynniki odgrywają kluczową rolę w patogenezie astmy u dzieci29. Aby dalej ocenić stan zapalny dróg oddechowych, poziomy ekspresji IL-4 i TNF-α w tkankach płuc określono za pomocą ilościowej reakcji polimerazy w łańcuchu z odwrotną transkrypcją (qRT-PCR). W porównaniu z grupą CN, w grupie AS odnotowano znacznie zwiększoną ekspresję IL-4 i TNF-α (P = 0,000 i P = 0,000 odpowiednio; Rysunek 3C,D). Ekspresja obu cytokin była znacznie obniżona po leczeniu SP lub MP, a połączenie SP i MP doprowadziło do największej redukcji (P = 0,001 i P = 0,000 odpowiednio; Rysunek 3C,D).

figure-results-1
Rysunek 1: Szczegółowa procedura manipulacji polegającej na uciskaniu kręgosłupa (SP) u szczurów. (A) Utrzymaj szczura w pozycji brzusznej na dłoni operatora. (B) Uszczypnij skórę u nasady ogona. (C) Podnieś uszczypniętą skórę. (D) Obróć palce i przesuń je w kierunku kranialnym wzdłuż kręgosłupa w stronę punktu Dazhui (GV14). Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.

figure-results-2
Rycina 2: Schematyczny rysunek naczynia zarządzającego (GV), południka pęcherza moczowego (BL) oraz punktu Dazhui (GV14) u szczurów. Diagram przedstawia lokalizację anatomiczną GV, południka BL oraz punktu Dazhui (GV14), które stanowią miejsca docelowe dla manipulacji polegającej na uciskaniu kręgosłupa. Proszę kliknąć tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.

figure-results-3
Rysunek 3: Wpływ manipulacji polegającej na uciskaniu kolca na masę ciała, nadreaktywność dróg oddechowych oraz czynniki zapalne w płucach u młodych szczurów. (A) Porównanie masy ciała w grupach eksperymentalnych. (B) Porównanie wartości wzmocnionej pauzy (Penh). (C) Względna ekspresja genu interleukiny-4 (IL-4) w tkance płucnej. (D) Względna ekspresja genu czynnika martwicy nowotworu-α (TNF-α) w tkance płucnej. Dane przedstawiono jako średnia ± SD. *P < 0.05 oraz **P < 0.01 w stosunku do grupy CN; #P < 0.05 oraz ##P < 0.01 w stosunku do grupy AS. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.

figure-results-4
Rycina 4: Reprezentatywne zmiany histopatologiczne w tkance płuc. (A) Barwienie hematoksyliną i eozyną (HE) wykazujące zapalenie okołubronchialne. (B) Barwienie trichromem Massona wykazujące odkładanie kolagenu i przebudowę dróg oddechowych. Obrazy uzyskano przy powiększeniu 200×. Paski skali = 100 µm. Proszę kliknąć tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.

figure-results-5
Rysunek 5: Reprezentatywne krzywe siły zarejestrowane podczas manipulacji polegającej na uszczypnięciu kręgosłupa z wykorzystaniem systemu Finger TPS. (A) Krzywa siły zarejestrowana podczas manipulacji polegającej na głaskaniu pleców. (B) Krzywa siły zarejestrowana podczas manipulacji polegającej na uszczypnięciu kręgosłupa (SP). Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.

figure-results-6
Rycina 6: Harmonogram eksperymentu. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.

GrupaOcena stanu zapalnego w barwieniu HEPowierzchnia kolagenu/obwód błony podstawnej (μm²/μm)
CN1.10 ± 0.252.50 ± 0.43
AS2.32 ± 0.50**4.23 ± 0.53**
AS+SP1.66 ± 0.27##3.12 ± 0.56*##
AS+MP1.67 ± 0.31##3.12 ± 0.50*##
AS+SP+MP1.34 ± 0.27##3.01 ± 0.33##

Tabela 1: Wyniki oceny histopatologicznej płuc. Stan zapalny okołubronchialny oceniano przy użyciu barwienia HE, a przebudowę dróg oddechowych określono jako obszar pozytywny pod kątem kolagenu znormalizowany względem obwodu błony podstawnej (µm2/µm). Dane przedstawiono jako średnią ± SD (n = 5 na grupę). *P < 0,05 i **P < 0,01 w stosunku do grupy CN; #P < 0,05 i ##P < 0,01 w stosunku do grupy AS.

Dyskusja

Sensybilizacja i wywołanie reakcji owalbuminą (OVA) to jeden z najszerzej stosowanych modeli eksperymentalnych do badania astmy u dzieci30,31. Niniejsze badanie wykazało, że ustandaryzowany protokół manipulacji polegającej na uciskaniu kręgosłupa (SP) łagodził przewlekły stan zapalny dróg oddechowych, nadreaktywność dróg oddechowych (AHR) oraz przebudowę dróg oddechowych. Poprzednie badania kliniczne wykazały, że tradycyjny masaż pediatryczny, w tym SP, poprawia przebieg astmy i innych chorób alergicznych u dzieci11,13,32. Ponadto wcześniejsze badania na zwierzętach wykazały, że SP osłabiło stan zapalny dróg oddechowych w młodzieńczych modelach astmy u szczurów poprzez modulację mikrobioty jelitowej12,15. Niniejsze badanie dodatkowo wykazało, że zastosowanie ustandaryzowanego protokołu SP poprawiło przewlekły stan zapalny dróg oddechowych, AHR oraz przebudowę dróg oddechowych w młodzieńczym modelu astmy u szczurów. Co więcej, SP wzmocniło efekty terapeutyczne metyloprednizolonu (MP), jednocześnie redukując jego skutki uboczne w postaci zahamowania wzrostu.

SP jest praktykowane w Chinach od ponad 1000 lat i pozostaje jedną z najszerzej stosowanych technik masażu pediatrycznego w zapobieganiu i leczeniu astmy oraz innych chorób wieku dziecięcego12,15,33,34,35. Mimo długiej historii zastosowań klinicznych, SP pozostaje stosunkowo nieznane poza Chinami. Zgodnie z teorią tradycyjnej medycyny chińskiej, południki GV i BL przebiegają wzdłuż lub obok kręgosłupa i komunikują się z narządami wewnętrznymi. W związku z tym uważa się, że stymulacja południków GV i BL reguluje funkcje trzewne, moduluje aktywność immunologiczną i zwiększa odporność organizmu. SP polega na uszczypkiwaniu, unoszeniu, skręcaniu i przesuwaniu skóry wzdłuż kręgosłupa, co stymuluje zarówno południk GV, jak i BL. Manipulacja ta jednocześnie wywiera siły ściskające i rozciągające na skórę oraz leżącą pod nią powięź, wywołując umiarkowaną stymulację mechaniczną. W praktyce klinicznej przed i po SP rutynowo wykonuje się delikatne głaskanie pleców w celu zmniejszenia stymulacji i poprawy komfortu pacjenta. Głaskanie pleców polega na delikatnych ruchach w dół wzdłuż pleców i jest szeroko stosowane w masażu pediatrycznym. Dlatego, w oparciu o zasady istotności klinicznej, wykonalności, prostoty i powtarzalności, zstandaryzowany protokół obejmuje zarówno SP, jak i manipulację polegającą na głaskaniu pleców.

Wcześniejsze badania wykazały, że SP zmniejsza stan zapalny zarówno w płucach, jak i w hipokampie poprzez mechanizmy immunomodulacyjne12,36. Astma dziecięca charakteryzuje się stanem zapalnym z przewagą odpowiedzi Th2, ściśle związanym z dysregulacją odporności37. Wcześniejsze badania eksperymentalne wykazały, że gładzenie ręką lub pędzlem regulowało odpowiedzi immunologiczne u myszy, gdy było wykonywane z naciskiem 100–150 mmH₂O (7–11 mmHg) i prędkością około 3 cm/s38. Ponadto badanie kliniczne wykazało, że gładzenie wykonywane z prędkością około 1–10 cm/s było odbierane jako przyjemniejsze39. Na podstawie tych wyników w zestandaryzowanym protokole przyjęto siłę gładzenia pleców wynoszącą 5 ± 0,6 N oraz prędkość 5 cm/s, aby uzyskać odpowiedni efekt kojący. Ciśnienie, częstotliwość i liczba powtórzeń SP zostały określone na podstawie wcześniejszych badań12,15 oraz powiązanych analiz przeprowadzonych przez inne grupy badawcze40,41. Chociaż w poprzednich badaniach standaryzowano albo manualne gładzenie pleców (20 cm/s; około 100 mmH₂O), albo mechaniczną stymulację GV (30–50 g; około 15,3 cm/s) w celu wywołania inhibicji sercowo-naczyniowej lub promowania przebudowy synaptycznej u gryzoni, manualne SP stanowi odrębną interwencję biomechaniczną opartą na sprzężeniu zwrotnym dotykowym i proprioceptywnym, a zatem nie może być w pełni odwzorowane przez istniejące urządzenia mechaniczne. To rozróżnienie podkreśla znaczenie protokołów standaryzowanych przez praktyków dla przyszłych badań translacyjnych nad interwencjami dotykowymi w leczeniu astmy alergicznej.

Liczne badania opublikowane w języku chińskim wykazały, że SP moduluje funkcje odpornościowe i hamuje stan zapalny42,43,44. Zgodnie z aktualnym stanem wiedzy żadne wcześniejsze badanie poza grupą badawczą autorów nie ustandaryzowało nacisku i prędkości SP w celu zbadania konkretnej choroby w modelach zwierzęcych astmy dziecięcej. Wcześniejsze badania analizowały mechanizmy leżące u podstaw SP w młodych modelach astmy u szczurów, w tym modulację mikrobioty jelitowej, zwiększoną produkcję krótkołańcuchowych kwasów tłuszczowych, poprawę funkcji mięśni oddechowych (np. siły przepony) oraz łagodzenie stanu zapalnego dróg oddechowych i dysfunkcji płuc11. Niniejsze badanie koncentrowało się przede wszystkim na opracowaniu ustandaryzowanego protokołu, a nie na kompleksowym wyjaśnieniu leżących u podstaw mechanizmów działania. Do standaryzacji siły przykładanej zarówno podczas głaskania pleców, jak i SP wykorzystano wysokoprecyzyjny system pomiaru i rejestracji nacisku dotykowego, natomiast prędkość i częstotliwość manipulacji ustandaryzowano zgodnie z wcześniejszymi badaniami. Wybrano szczury, ponieważ wielkość ich ciała ułatwia stabilne prowadzenie zwierzęcia i manualne stosowanie SP, ściśle odwzorowując procedurę kliniczną. Głaskanie pleców wykonywano palcami jednej ręki, analogicznie do praktyki klinicznej w pediatrii. Ze względu na mniejszą wielkość ciała szczurów, SP wykonywano trzema palcami jednej ręki, a nie obiema, zachowując jednocześnie kluczowe cechy biomechaniczne techniki klinicznej. Modyfikacja ta wiernie reprodukuje stymulację meridianów GV i BL w modelu szczura. Ponieważ parametry pomiarowe mogą różnić się w zależności od systemów pomiaru nacisku dotykowego, standaryzacja manualnej manipulacji w oparciu o reakcje behawioralne szczurów podczas głaskania pleców i SP może zapewnić większą powtarzalność niż poleganie wyłącznie na pomiarach siły specyficznych dla urządzenia. Wcześniejsze badania wykazały również, że głaskanie pleców wykazuje działanie przeciwdepresyjne u młodych szczurów z indukowanym CUMS9, choć SP wywołało znacznie silniejsze efekty terapeutyczne. W konsekwencji korzystne efekty zaobserwowane w niniejszym badaniu mogą częściowo odzwierciedlać wkład manipulacji polegającej na głaskaniu pleców, oprócz głównych efektów SP.

Należy zwrócić uwagę na kilka ograniczeń. Po pierwsze, wielkość próby była stosunkowo mała, co może ograniczać wiarygodność i możliwość generalizacji wyników. Po drugie, niniejsze badanie koncentrowało się głównie na opracowaniu i walidacji standaryzowanego protokołu SP; w związku z tym zbadano jedynie ograniczony zestaw wyników mechanistycznych, zamiast kompleksowo opisać leżące u podstaw mechanizmy biologiczne. W związku z tym nie przeprowadzono walidacji mechanistycznej, obejmującej liczbę komórek zapalnych w BALF, poziomy IgE specyficznych dla OVA, profilowanie cytokin Th2 (np. IL-5, IL-13) oraz analizę wewnątrzkomórkowych szlaków sygnalizacyjnych. Wynik ten wskazał, że SP poprawiło funkcję oddechową u szczurów z astmą, co wciąż wymaga dalszej walidacji w połączeniu z pomiarami bezpośredniego oporu dróg oddechowych (Raw). Po trzecie, wszystkie manipulacje były wykonywane przez jednego przeszkolonego operatora, a powtarzalność między różnymi przeszkolonymi operatorami nie została oceniona. Wreszcie, nie uwzględniono grupy interwencyjnej stosującej wyłącznie głaskanie grzbietu, aby odróżnić niezależne efekty głaskania grzbietu od efektów SP. Przyszłe badania powinny obejmować większe próby, oceniać powtarzalność międzyoperatorową, wprowadzić dodatkowe grupy kontrolne oraz dalej badać mechanizmy molekularne leżące u podstaw terapeutycznych efektów SP.

Oświadczenia

Autorzy oświadczają, że nie mają nic do ujawnienia. W procesie przygotowywania rękopisu nie wykorzystano żadnych narzędzi sztucznej inteligencji. Autorzy biorą pełną odpowiedzialność za kompletność i dokładność ostatecznej wersji rękopisu.

Podziękowania

Niniejsza praca była finansowana przez Narodową Fundację Nauk Naturalnych Chin (kierownik projektu Xiong Ying, nr 81973970, przy wsparciu Nankinowskiego Uniwersytetu Medycyny Chińskiej). Autorzy dziękują Instytutowi Pediatrii, Jiangsu Key Laboratory of Children's Health and Chinese Medicine oraz Key Laboratory of Acupuncture and Medicine Research Ministerstwa Edukacji za udostępnienie pomieszczeń, instrumentów i sprzętu.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
żel 4%Al(OH)3Shanxi ZHHC Biomedical Technology Co., LTD, ChinaBS010N/A
Ach (acetylocholina)Sigma, USAA2251N/A
Adhezyjne szkiełka mikroskopoweCitotest, Jiangsu, ChinaREF.188105
P/N.80312-3161		N/A
Worki na odpady biologiczneNanjing Xinyuan plastic Co., Ltd.HJ421-2008N/A
Urządzenie do suszenia tkanek biologicznychKedee, Zhejiang, ChinaKD-HIIN/A
Urządzenie do zatapiania tkanek biologicznychKedee, Zhejiang, ChinaKD-BMN/A
Mikrotom do cięcia tkanek biologicznychKedee, Zhejiang, ChinaKD-PIN/A
Buxco Research SystemsDSI Buxco,Wilmington, NC,USAPFTN/A
Mieszalnik z regulacją obrotów (MX-S)DLAB, Beijing, China8031102000N/A
Wirówka do mikropłytekScilogex, USASCI-CF2800M E050S11B000798N/A
Ława z laminarnym przepływem powietrza Sanfa, Shanghai, ChinaSF-CJ-1AN/A
Standardowa wirówkaDLAB, Beijing, ChinaD100BE: 9031001011N/A
Jednorazowe sterylne rękawiczkiShanghai Kebang Medical Latex Equipment Co., Ltd.22010739https://www.sh-kebang.com/products_detail/6.html
Waga elektronicznaJinghai, ShanghaiYP3001NN/A
Waga elektronicznaJinghai,  Shanghai, ChinaYP3001NN/A
System Finger TPSPressure Profile System, Inc, USAWersja oprogramowania: Chameleon 2018https://pressureprofile.com/body-pressure-mapping/finger-tps
 Fluorescencyjny mikroskop optycznyOlympus, Tokyo, JapanDP70N/A
Autoklaw parowy wysokociśnieniowyTomy, JapanSX-500N/A
Wirówka chłodząca wysokich obrotówEppendorf5418RN/A
Zestaw do barwienia trichromatycznego MassonaSolarbio, Shanghai, ChinaG1340N/A
Mikropipety i sterylne końcówkieppendorfJ48931Lhttps://www.eppendorf.com/hk-en/Products/Liquid-Handling/All-Pipettes-Dispensers-Automated-Liquid-Handlers/Eppendorf-Reference2-p-PF-222171
MikrotomyLeica, GermanRM2145N/A
MP (bursztynian sodu metylprednizolonu)Shyndec, Shanghai, ChinaH20070007N/A
Spektrofotometr NanoDrop LiteThermo Fisher Scientific, USAnd-ndl-pr-2yrw-cccN/A
 Sterownik nebulizacjiEmka, FranceVENT4:14554N/A
Nieprzezroczyste koperty plombowaneNanjing Kongdu printing Co., Ltd201701N/A
OVA (klasa II)Sigma, USAA5253N/A
OVA (klasa V)Sigma, USAA5503N/A
Zestaw do PCRYeasen, Shanghai, China11201ES08N/A
Odporny na przebicia pojemnik na odpady ostro zakończoneNanjing Xinyuan plastic Co., Ltd.KMT-15YN/A
Zestaw do odwrotnej transkrypcjiBio.vazyme, Nanjing, ChinaR323N/A
Małe wirówkiHettich, GermanMIKRO 220R D-78532N/A
Sterylne suche kulki watyZHENDE, Zhejiang, China202203121Bhttps://www.zhende.com/index.php?g=product&m=index&a=info&id=13
TrizolBio.vazyme, Nanjing, ChinaR771N/A
Zamrażarka do ultra niskich temperaturThermo Fisher Scientific, USA950GP-ULTSN/A
Nebulizator ultradźwiękowyJiangsu Yuwell Medical Instruments Co., Ltd., China402AIN/A
System Real-Time PCR ViiATM7Life TechnologiesTM , Singapore278882021N/A
Pletyzmograf całego ciałaScrieq, Canada1185162,1184031,1185898Wkład wydechowy FV-FXM1-01,FX1 :FV-FXM1 ET, wkład wdechowy FX1 :FV-FXM1-IA

Bibliografia

  1. Bateman ED, et al. Global strategy for asthma management and prevention: GINA executive summary. Eur Respir J. 2008;31(1):143-178.
  2. Lizano-Barrantes C, et al. Impact of treatment adherence and inhalation technique on asthma outcomes of pediatric patients: A longitudinal study. Front Pharmacol. 2024;15:1340255.
  3. Vähätalo I, et al. Long-term adherence to inhaled corticosteroids and asthma control in adult-onset asthma. ERJ Open Res. 2021;7(1).
  4. Yılmaz İ, et al. Biological therapy management from the initial selection of biologics to switching between biologics in severe asthma. Tuberk Toraks. 2023;71(1):75-93.
  5. García-Marcos L, et al. Asthma management and control in children, adolescents, and adults in 25 countries: A Global Asthma Network phase I cross-sectional study. Lancet Glob Health. 2023;11(2):e218-e228.
  6. Kelly HW, et al. Effect of inhaled glucocorticoids in childhood on adult height. N Engl J Med. 2012;367(10):904-912.
  7. Wu J, Yang XW, Zhang M. Massage therapy in children with asthma: A systematic review and meta-analysis. Evid Based Complement Alternat Med. 2017:5620568.
  8. Yue QJ, et al. Effect of pediatric massage in the treatment of chronic persistent asthma in children: A systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials. J Hainan Med Univ. 2019;25:1260-1266.
  9. Wu R, et al. Traditional pediatric massage enhanced hippocampal GR, BDNF, and IGF-1 expressions and exerted an antidepressant effect in an adolescent rat model of CUMS-induced depression. Neuroscience. 2024;542:47-58.
  10. Lin L, Yu L, Zhang S, Liu J. The positive effect of mother-performed infant massage on infantile eczema and maternal mental state: A randomized controlled trial. Front Public Health. 2022;10:1068043.
  11. Lin L, et al. Traditional pediatric massage enhanced skeletal muscle mass in OVA-exposed adolescent rats via regulating the SCFAs-FFAR2-IGF-1/AKT pathway. Front Microbiol. 2024;15:1492783.
  12. Xiong Y, Noraas AU, Yang X. The effect of chiropractic manipulation on atopic symptoms and gut microbiota in children with atopy. J Li Shizhen Tradit Chin Med. 2017;28:2440-2442.
  13. Liu Y, Gu Y, Xiong Y. Wrist-ankle acupuncture combined with spine-pinching manipulation for allergic rhinitis in children: A randomized controlled trial. World J Acupunct Moxibustion. 2019;29:259-263.
  14. Zhu Y, et al. Chiropractic therapy modulated gut microbiota and attenuated allergic airway inflammation in an immature rat model. Med Sci Monit. 2020;26:e926039.
  15. Lu W, Fang M, Yang X. Observation on the influence of parent-child massage on children's psychological and behavioral problems. Chin Med Mod Distance Educ China. 2025;23(4):75-78.
  16. Lund I, Lundeberg T, Kurosawa M, Uvnäs-Moberg K. Sensory stimulation (massage) reduces blood pressure in unanesthetized rats. J Auton Nerv Syst. 1999;78(1):30-37.
  17. Chen YN, et al. Repetitive unidirectional spinal tactile stimulation engages microglial BMAL1 pathways to promote synaptic remodeling in the medial prefrontal cortex of adolescent VPA-exposed mice. J Neuroinflammation. 2025;23(1):23.
  18. Gorrell LM, et al. Spinal manipulation characteristics: A scoping literature review of force-time characteristics. Chiropr Man Therap. 2023;31(1):36.
  19. Papadopoulos NG, Miligkos M, Xepapadaki P. A current perspective of allergic asthma: From mechanisms to management. Handb Exp Pharmacol. 2022;268:69-93.
  20. Nials AT, Uddin S. Mouse models of allergic asthma: Acute and chronic allergen challenge. Dis Model Mech. 2008;1(4-5):213-220.
  21. Martin JG, Tamaoka M. Rat models of asthma and chronic obstructive lung disease. Pulm Pharmacol Ther. 2006;19(6):377-385.
  22. QDV, et al. Construction of an acupoint atlas for experimental rats. Acupunct Res. 2025;50(11):1339-1351.
  23. Dong L, et al. Hypoxic hUCMSC-derived extracellular vesicles attenuate allergic airway inflammation and airway remodeling in chronic asthma mice. Stem Cell Res Ther. 2021;12(1):4.
  24. Muhamad SA, et al. Intranasal administration of Lignosus rhinocerotis (Cooke) Ryvarden (Tiger Milk Mushroom) extract attenuates airway inflammation in a murine model of allergic asthma. Exp Ther Med. 2019;17(5):3867-3876.
  25. Vaickus LJ, Bouchard J, Kim J, Natarajan S. Assessing pulmonary pathology by detailed examination of respiratory function. Am J Pathol. 2010;177(4):1861-1869.
  26. Glaab T, Taube C, Braun A, Mitzner W. Invasive and noninvasive methods for studying pulmonary function in mice. Respir Res. 2007;8(1):63.
  27. Lomask M. Further exploration of the Penh parameter. Exp Toxicol Pathol. 2006;57(Suppl 2):13-20.
  28. Leung SY, et al. Effect of transforming growth factor-beta receptor I kinase inhibitor 2,4-disubstituted pteridine (SD-208) in chronic allergic airway inflammation and remodeling. J Pharmacol Exp Ther. 2006;319(2):586-594.
  29. Ogulur I, et al. Type 2 immunity in allergic diseases. Cell Mol Immunol. 2025;22(3):211-242.
  30. Lee JH, Son SH, Kim NJ, Im DS. NJK14047 suppression of the p38 MAPK pathway ameliorates OVA-induced allergic asthma during sensitization and challenge periods. Biomol Ther (Seoul). 2023;31(2):183-192.
  31. Li J, et al. Establishment of a juvenile mouse asthma model induced by postnatal hyperoxia exposure combined with early OVA sensitization. Heliyon. 2024;10(1):e23291.
  32. Wei J, Yang X. Efficacy of pediatric tuina on spleen deficiency syndrome and allergic constitution in children with bronchial asthma during the remission period: A study of 29 cases. J Pediatr Tradit Chin Med. 2023;19(3):86-89.
  33. Gao J, He J. Fifty-eight cases of allergic rhinitis treated with spine-pinching manipulation and acupuncture in Switzerland. World J Acupunct Moxibustion. 2010;20(3).
  34. Hu Y, et al. Clinical study of Yupingfeng Powder combined with spine-pinching manipulation for cough variant asthma in children. Heilongjiang J Tradit Chin Med. 2024;53(2):369-371.
  35. Yao D, Zhang Y, Deng L. Effect of spine-pinching manipulation on asthma control in children. Heilongjiang J Tradit Chin Med. 2020;49(2):157-158.
  36. Zhang X, et al. Traditional pediatric massage exerted an antidepressant effect and activated the IGF-1/NRF2 pathway in CUMS-exposed adolescent rats. J Neuroimmunol. 2025;400:578554.
  37. Lan J, McCray A, Brown E, Eddens T. Early-life viral infections and asthma: New cells and ideas. Curr Opin Pediatr. 2025;37(6):597-605.
  38. Major B, et al. Massage-like stroking boosts the immune system in mice. Sci Rep. 2015;5:10913.
  39. Ackerley R, Carlsson I, Wester H, Olausson H, Backlund Wasling H. Touch perceptions across skin sites: Differences between sensitivity, direction discrimination, and pleasantness. Front Behav Neurosci. 2014;8:54.
  40. Li Q, et al. Experimental study on the effects of different durations of spine-pinching manipulation on immune function in rats with Wei Qi deficiency. Jiangsu J Tradit Chin Med. 2017;49(9):75-77.
  41. Tang Q, Shen L, Lin L. Effects of spine-pinching manipulation with different stimulation intensities on hippocampal inflammation-related factors and behavioral disorders in autistic rats. J Hunan Univ Chin Med. 2025;45(7):1264-1270.
  42. Li Z, et al. Effects of spine-pinching therapy on thoracic duct lymph flow and mesenteric lymphatic microcirculation in rats with spleen deficiency. China J Tradit Chin Med Pharm. 2025;40(8):4246-4250.
  43. Ma W, et al. Effects of spine-pinching intervention on anorexia in young rats based on the 2-AG/CB1/AMPK1 pathway. Shaanxi J Tradit Chin Med. 2025;46(2):159-164.
  44. Tang Q, et al. Effects of spine-pinching manipulation on BDNF and CREB protein expression in different brain regions of rats with autism spectrum disorder. J Hunan Univ Chin Med. 2025;45(2):259-266.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Szczurzy model astmyzapalenie dróg oddechowychnadreaktywność dróg oddechowychprzebudowa dróg oddechowychmasaż pediatrycznytradycyjna medycyna chińskastandaryzacja protokołuastma eksperymentalna

Ten artykuł został opublikowany

Film wkrótce dostępny

Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki korzystania z usługi

Zasady

Prawa autorskie © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.