Protokół ten umożliwia przygotowanie i charakteryzację CD47- i integrinowych α4/β1–komodyfikowanych makrofagów pokrytych membraną (kwas ko-glikolowy) nanocząstek do zastosowań ukierunkowanych na dostarczanie leków.
Method Article
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
|---|---|---|---|
| 7-Aminoaktinomycyna D (7-AAD) | Thermo Fisher Scientific (USA) | A1310 | Barwnik żywotności do cytometrii przepływowej – rozróżnianie żywych/martwych |
| Alexa Fluor 488-sprzężony antykróliczy antykróliczy IgG | Thermo Fisher Scientific (USA) | A-11008 | Przeciwciało wtórne do barwienia immunofluorescencji CD68 |
| Przeciwciało przeciwmysze CD47 | Abcam (USA) | ab214453 | Wykorzystywany do analizy Western blot w celu weryfikacji ekspresji CD47 |
| Integryna antymysza i alfa; Przeciwciała 4 (B-2) | Santa Cruz Biotechnology (USA) | SC-376334 | Wykorzystywany do analizy Western blot w celu weryfikacji integriny i alfa; Ekspresja 4 |
| Integryna antymysza i beta; 1 przeciwciało (A-4) | Santa Cruz Biotechnology (USA) | SC-374429 | Wykorzystywany do analizy Western blot w celu weryfikacji integriny i beta; Wyrażenie 1 |
| ApoE-/- myszy | Laboratorium Jacksona (USA) | Nie ma | Stosowane w modelu miażdżycy in vivo |
| Zestaw do testowania BCA | Thermo Fisher Scientific (USA) | 23225 | Wykorzystywane do określania stężenia białka |
| płyta silikonowa | Nie ma | Nie ma | Używany do montażu aorty podczas obrazowania ex vivo |
| Plazmid CD47 (pcDNA3.1(+)) | Generay Biotech (Chiny) | G0177361-1 | Zawiera myszy gen Cd47 do nadmiernej ekspresji |
| Kolchicyna | Sigma-Aldrich (USA) | C9754 | Ładunek terapeutyczny w nanocząstkach |
| Konfokalny mikroskop laserowy skanujący | Leica Microsystems | TCS SP8 | Wykorzystywane do obrazowania fluorescencyjnego i analizy współlokalizacji |
| Bufor cytrynowy (pH 6,0) | Thermo Fisher Scientific (USA) | Nie ma | Wykorzystywany do pobierania antygenów w barwieniu immunofluorescencyjnym |
| Rurki dializacyjne (MWCO 3 500 Da) | Sigma-Aldrich (USA) | PURD35030 | Wykorzystywane do oczyszczania nanocząsteczek |
| Dimetylsulfotlenek (DMSO) | Sigma-Aldrich (USA) | D2447 | Rozpuszczalnik do przygotowania nanocząstek |
| DiI (1,1′-dioctadecyl-3,3,3′,3′-nadchloran tetrametyloindokarbocyaniny) | Beyotime (Chiny) | C1036 | Znakowanie fluorescencyjne rdzenia nanocząsteczkowego |
| DiO (3,3′-dioctadecyloxakarbocyanin nadchloran) | Beyotime (Chiny) | C1038 | Znakowanie fluorescencyjne błony makrofagów |
| DiR | Beyotime (Chiny) | Y239280 | Wykorzystywane do obrazowania fluorescencyjnego in vivo |
| DAPI | Thermo Fisher Scientific (USA) | D3571 | Jądrowe barwienie przeciwbarwne do obrazowania fluorescencyjnego |
| Dulbecco' Zmodyfikowany Eagle Medium (DMEM) | Thermo Fisher Scientific (USA) | 11965092 | Pożywka hodowla komórkowa |
| Dynamiczny analizator rozpraszania światła (Zetasizer Nano ZS) | Malvern Panalytical (Wielka Brytania) | Nie ma | Wykorzystywany do pomiarów dynamicznego rozpraszania światła (DLS) wielkości nanocząstek, PDI i potencjału zeta |
| Zestaw ELISA | R& D Systems (USA) | To zależy od cytokiny docelowej | Wykorzystywane do ilościowego określania cytokin zapalnych |
| Endothelin-1 (ET-1) | Sigma-Aldrich (USA) | E7764 | Używa się do stymulacji integriny i alfa; 4/β Wyrażenie 1 |
| Serum bydła płodu (FBS) | Gibco (Thermo Fisher Scientific, USA) | 10091148 | Suplement do pożywki do hodowli komórkowej |
| Cytometr przepływowy | BD Biosciences (USA) | FACSCalibur | Wykorzystywane do pozyskiwania sygnału fluorescencyjnego |
| Oprogramowanie do analizy cytometrii przepływowej (FlowJo v10.8.1) | BD Biosciences (USA) | Nie ma | Wykorzystywane do analizy danych cytometrii przepływowej |
| Ludzkie komórki śródbłonka żyły pępowinowej (HUVEC) | FuHeng Biotechnologies (Chiny) | FH1122 | Stosowane do testów celowania in vitro |
| Oprogramowanie do analizy obrazów (ImageJ) | Narodowe Instytuty Zdrowia (USA) | Nie ma | Wykorzystywane do ilościowej analizy obrazów |
| System obrazowania in vivo | PerkinElmer (USA) | IVIS Lumina III | Stosowane do obrazowania fluorescencji całego ciała |
| Izopropanol (60%) | Sigma-Aldrich (USA) | 34863 | Stosowane do różnicowania podczas barwienia Oil Red O |
| Lipofektamina 3000 | Thermo Fisher Scientific (USA) | L3000001 | Odczynnik transfekcyjny |
| Mieszadło magnetyczne i pręt mieszający | Nie ma | Nie ma | Wykorzystywane do przygotowania nanocząstek |
| Masson' Zestaw do bejcowania Trichrome | Abcam (USA) | ab150686 | Stosowane do barwienia kolagenu |
| Mini ekstruder | Avanti Polar Lipids (USA) | 610000 | Stosowane do wyciągania membranowego |
| Linia komórkowa Murine RAW 264.7 | FuHeng Biotechnologies (Chiny) | FH0328 | Źródło makrofagów |
| Linia komórkowa mięśni gładkich myszy | FuHeng Biotechnologies (Chiny) | FH-Y063 | Wykorzystywane do oceny bezpieczeństwa |
| Olej czerwony O | Sigma-Aldrich (USA) | O0625 | Stosowany do barwienia lipidów |
| Opti-MEM | Thermo Fisher Scientific (USA) | 31985062 | Medium o obniżonej surowicy do transfekcji |
| Utleniona lipoproteina o niskiej gęstości (Ox-LDL) | Yiyuan Biotechnologies (Chiny) | YB-002 | Wykorzystywane do indukowania powstawania komórek piankowych |
| Penicylina– Streptomycyna | Thermo Fisher Scientific (USA) | 15140122 | Suplement antybiotykowy do hodowli komórek |
| Fenylosulfonylofluorek (PMSF) | Sigma-Aldrich (USA) | 78830 | Inhibitor proteazy |
| Sól fizjologiczna z buforem fosforanowym (PBS) | Thermo Fisher Scientific (USA) | 10010023 | Bufor płukania i rozcieńczania |
| Poli(kwas ko-glikolowy) (PLGA, 50:50; MW 90 000) | Dalian Meilun Biotechnology (Chiny) | MB5649-1 | Polimer do produkcji nanocząstek |
| Filtry membranowe poliwęglanowe (200 nm, 400 nm) | Whatman (Wielka Brytania) | 800282 | Wykorzystywane do wyciągania |
| Chlorek potasu (KCl) | Sigma-Aldrich (USA) | P9333 | Składnik buforu lizy |
| Odczynnik P3000 | Thermo Fisher Scientific (USA) | L3000001 | Wzmacniacz transfekcji |
| Mikrotom obrotowy | Leica Biosystems (Niemcy) | RM2235 | Używany do sekcjonowania parafiny |
| Pompa strzykawkowa | Aparat Harvarda (USA) | 70-3007 | Wykorzystywane do kontrolowanego tworzenia nanocząstek |
| Transmisyjny mikroskop elektronowy (TEM) | Thermo Fisher Scientific (USA) | Talos F200S | Wykorzystywane do obrazowania nanocząstek |
| Tris-HCl | Sigma-Aldrich (USA) | T2663 | Komponent bufora |
| Czynnik martwicy nowotworów alfa (TNF-&alfa;) | R& D Systems (USA) | 410-MT | Wykorzystywane do aktywacji komórek śródbłonka |
| Woda ultraczysta | Milli-Q (Merck, USA) | ZMQSV0T01 | Wykorzystywane do przygotowania nanocząstek i dializ |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request Permission