Artykuł metodologiczny

Ustanowienie modelu komórki Het-1A indukowanego kwasem oraz analiza funkcjonalna osi miR-107/FGFRL1

DOI:

10.3791/70874

⸱

29 maja 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Gastroenterology, Longyan First Hospital, 2Department of Gastroenterology, The Affiliated TCM Hospital of Guangzhou Medical University, 3Department of Gastroenterology, The Affiliated TCM Hospital of Guangzhou University of Chinese Medicine, 4Department of Gastroenterology, Jiaozhou Central Hospital of Qingdao, 5Clinical Nutrition Department, Jiaozhou Central Hospital of Qingdao, 6Department of Gastroenterology, People's Hospital of Wenshang County

* These authors contributed equally

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Przedstawiamy tutaj protokół mający na celu ustanowienie modelu komórek refluksowego przełyku indukowanego przez HCl, wykorzystujący komórki Het-1A oraz badanie osi miR-107/FGFRL1 za pomocą testów molekularnych i komórkowych.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Liczne dowody sugerują, że mikroRNA (miRNA) odgrywają kluczową rolę w procesach patofizjologicznych w procesach gastro-jelitowych. Jednak ich specyficzne mechanizmy w refluksowym zapaleniu przełyku (RE) pozostają słabo poznane. Przedstawiamy tutaj protokół mający na celu ustalenie modelu RE indukowanego kwasem oraz badanie osi miR-107/FGFRL1 za pomocą testów molekularnych i komórkowych. Przeprowadziliśmy analizy prób klinicznych, w tym pobieranie surowicy od pacjentów z R-E (n=94) i zdrowymi kontrolami (n=94), a następnie śledziliśmy ilościowe wykrywanie za pomocą RT-qPCR. In vitro opracowano model uszkodzenia wywołanego kwasem, wykorzystujący komórki Het-1A wystawione na kwas solny. Dodatkowo przeprowadzono walidację funkcjonalną komórek za pomocą testów żywotności komórek MTT oraz testów raportowych z podwójną lucyferazą. Reprezentatywne wyniki wskazują, że miR-107 był obniżony w surowicy pacjentów z RE oraz w komórkach Het-1A leczonej kwasem. miR-107 wywołał zmiany żywotności komórek Het-1A i poziomu zapalnego wywołane kwasem solnym, celując bezpośrednio w FGFRL1, co wiąże się ze zmianami żywotności komórek i stanów zapalnych poprzez celowanie FGFRL1. Protokół ten umożliwia badanie mechanizmów pośredniczonych przez miR-107/FGFRL1 w RE. To podejście stanowi powtarzalną platformę do badania mechanizmów molekularnych w RE.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Refluksowe zapalenie przełyku (RE) to choroba trawienna, w której kwas żołądkowy i zawartość żołądka wielokrotnie przelewają się do przełyku, prowadząc do stanu zapalnego, erozji, a nawet wrzodów błony śluzowej przełyku, której nasilenie zależy od charakteru refluksu, częstotliwości refluksu oraz oporu błony śluzowej przełyku 1,2. Jako bardzo powszechny typ choroby refluksu przełyku (GERD), RE wykazuje stale rosnącą częstość występowania i stopniowo rozszerzający się globalny wpływ3. Niespecyficzny obraz kliniczny RE często prowadzi do błędnej diagnozy lub niedodiagnozowania. Ponadto nawracający przebieg choroby często przechodzi w poważniejsze powikłania żołądkowo-jelitowe, nakładając znaczne obciążenia fizjologiczne i społeczno-ekonomiczne na osoby chore4. Standardowe leczenie kliniczne RE zazwyczaj obejmuje farmakoterapię (np. inhibitory pompy protonowej), minimalnie inwazyjne zabiegi endastroskopowe lub chirurgiczne 5,6. Jednak skuteczność terapeutyczna jest często ograniczona przez działania niepożądane związane z lekami oraz zachorowalność proceduralną. Biorąc pod uwagę niepełne zrozumienie molekularnej patogenezy RE, wyjaśnienie jej podstawowych mechanizmów może ujawnić nowe cele terapeutyczne i pomóc w opracowaniu skuteczniejszych, dostosowanych do pacjenta strategii leczenia. Protokół ten ma na celu ustanowienie modelu in vitro RE oraz zbadanie roli regulacyjnej osi miR-107/FGFRL1 za pomocą testów molekularnych i komórkowych.

MikroRNA (miRNA) zostały szeroko udokumentowane jako uczestniczące w patogenezie wielu chorób ludzkich dzięki zdolności do regulacji translacji mRNA poprzez powiązanie specyficzne dla sekwencji7. Na przykład miR-3682-3p wpływa na szlak Wnt/β-katenin poprzez regulację ekspresji FHL1, co prowadzi do postępu raka przełyku8. miR-21-5p i miR-223-3p wpływają na przebieg eozynofilowego zapalenia przełyku (EOE) poprzez pośredniczenie w ekspresji genów docelowych9. miR-107 to miRNA kodowane na chromosomie 10 u ludzi, które przyciągnęło znaczące zainteresowanie badawcze ze względu na swoje znaczenie w różnych procesach nowotworowych 10,11,12. Obecne dowody wskazują, że miR-107 jest gorącym mediatorem w raku żołądka i przełyku13,14, jednak jego funkcje patofizjologiczne i mechanizmy regulacyjne w nienowotworowych chorobach układu pokarmowego wymagają dokładnego zbadania. Jednak odpowiednie modele in vitro oraz zintegrowane podejścia analityczne do badania funkcji miR-107 w RE pozostają ograniczone.

Refluks żołądkowy jest powszechnie uznawany za główny czynnik patogenny odpowiedzialny za uszkodzenia błony śluzowej przełyku wRE-15. Najnowsze badania sugerują, że patogenny mechanizm RE nie polega na bezpośrednim uszkodzeniu błony śluzowej przez soki żołądkowe, lecz na ich stymulacji uwalniania chemokiny z komórek nabłonka przełyku, co inicjuje kaskadę uszkodzeń tkanek wywołanych zapalnymi16. Aby zbadać molekularne mechanizmy leżące u podstaw tego procesu, poddaliśmy się komórkom Het-1A kwasem solnym, aby utworzyć model urazu kwasu in vitro, który odtwarza kluczowe cechy patologiczne uszkodzenia nabłonka spowodowanego refluksem kwasowym. To podejście zapewnia kontrolowany i powtarzalny system naśladujący uszkodzenie nabłonka wywołane kwasem in vitro. Systematycznie badaliśmy rolę regulacyjną miR-107 w zapaleniu i apoptozie związanej z RE, a także jego potencjał diagnostyczny. Protokół ten umożliwia badanie regulacji szlaków zapalnych i apoptotycznych w komórkach nabłonka przełyku za pośrednictwem miRNA. W porównaniu z tradycyjnymi modelami zwierzęcymi in vivo oraz hodowlami komórek pierwotnych, model Het-1A indukowany HCl w połączeniu z funkcjonalnymi testami miR-107 oferuje wyjątkową stabilność, kontrolowalność i powtarzalność, co czyni go szczególnie dobrym do badania uszkodzeń nabłonka wywołanych kwasem, regulacji posttranskrypcyjnej podleganej miRNA oraz reakcji zapalnych w komórkach przełyku17. Metoda ta jest szczególnie odpowiednia do badań nad molekularnymi mechanizmami uszkodzenia nabłonka wywołanego kwasem oraz regulacji pośredniczonej przez miRNA. W połączeniu z analizami klinicznymi pacjentów, podejście to może być połączone z danymi klinicznymi, wspierając badania mechanistyczne w RE.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Rekrutacja pacjentów

  1. Przeprowadz badanie zgodnie z Deklaracją Helsińską.
  2. Uzyskaj zgodę na protokół badawczy od Komisji Etyki Centralnego Szpitala Jiaozhou w Qingdao (Numer zatwierdzenia: 2023033-01).
  3. Upewnij się, że wszyscy uczestnicy przed rozpoczęciem badania udzielili podpisanej świadomej zgody.
  4. Zidentyfikuj i zapisz 94 pacjentów z refluksowym zapaleniem przełyku (RE) z Centralnego Szpitala Jiaozhou w Qingdao.
  5. Uwzględnić 94 zdrowych ochotników jako grupę kontrolną.
  6. Diagnozować wszystkich pacjentów z RE za pomocą gastroskopii, aby potwierdzić zmiany śluzowe przełyku i erozje. Grupuj pacjentów według kryteriów klasyfikacji Los Angeles18.
  7. Uwzględniono pacjentów RE, którzy mają dyskomfort układu trawiennego trwający ponad 3 miesiące, nie przechodzili historii operacji górnej części przewodu pokarmowego oraz udzielili podpisanej świadomej zgody na to badanie.
  8. Wykluczyć pacjentów z przełykiem Barretta, żylakami przełyku, zwężeniem przełyku, głębokimi wrzodami lub złośliwymi zmianami guzowymi za pomocą gastroskopii.

2. Pobieranie próbek serum

  1. Pobierz 5 ml krwi żylnej na czczo od każdego uczestnika między 8:00 a 10:00 po nocnym poście trwającym co najmniej 8 godzin.
  2. Wirówka pobranej krwi w temperaturze 4 °C 3000 × g przez 15 minut.
  3. Po wirowaniu ostrożnie zbierz supernatant.
  4. Przechowuj rozdzielone serum w zamrażarce w temperaturze -80 °C do czasu kolejnego pomiaru.
    UWAGA: Próbki można przechowywać w temperaturze −80 °C w celu długoterminowego przechowywania i przetwarzać później

3. Hodowla komórkowa

  1. Kup ludzkie linie płaskosno-komórkowe Het-1A przełyku w komercyjnym banku komórkowym. Szybko rozmroz komórki w kąpieli wodnej o temperaturze 37 °C w ciągu 1–2 minut.
  2. Reanimować komórki Het-1A i hodować je w podłożu RPMI-1640, uzupełnionym o 10% surowicy wołowej płodu i 1% penicyliny/streptomycyny.
  3. Ustaw parametry inkubatora na 37°C i 5% CO₂ do utrzymania hodowli komórkowej.
  4. Uzupełniaj podłoże co 2 dni i przepuszczaj komórki przy 80–90% zbiegu, używając 0,25% trypsyny-EDTA.

4. Indukcja komórkowa

  1. Zaszczep komórki Het-1A w płytki 6-dołkowe i dostosuj gęstość komórek do 2×105 komórek na 1 w 2 mL kompletnym nośnikiem.
  2. Rozcieńcz skoncentrowany kwas solny (HCl) z fosforanową solą fizjologiczną (PBS) i dostosuj pH do 4,0.
    UWAGA: Kwas solny jest żrący i drażniący. Obchodzić się z kwasem solnym przy użyciu odpowiedniego sprzętu ochronnego (w tym gogli ochronnych, rękawiczek i fartucha laboratoryjnego) oraz pracować w okapu chemicznym
  3. Dodaj 2 mL przygotowanego roztworu HCl do każdego dołku, aby indukować komórki.
  4. Usuń roztwór HCl i przemyj komórki dwukrotnie podgrzanym PBS przed testami w każdym punkcie czasu.
  5. Mierz żywotność komórek za pomocą testu MTT na 0, 10, 20 i 30 min.

5. Ilościowa reakcja łańcuchowa polimerazy w czasie rzeczywistym (RT-qPCR)

  1. Ekstrakt całkowitego RNA z komórek Het-1A za pomocą odczynnika fenol-chloroformowego.
  2. Ocenić czystość i stężenie RNA za pomocą spektrofotometru NanoDrop, potwierdzając stosunek A260/A280 w zakresie 1,8 do 2,0.
  3. Konfiguruj system wzmacniania transkrypcji wstecznej za pomocą zestawu do transkrypcji odwrotnej.
  4. Wykonaj transkrypcję odwrotną w maszynie PCR w temperaturze 37°C przez 15 minut, 85°C przez 5 sekund, a następnie utrzymuj ją w 4°C.
  5. Generuj okrągłe DNA (cDNA) poprzez transkrypcję odwrotną.
  6. Przeprowadz reakcje RT-qPCR w objętości 20 μL za pomocą mieszanki SYBR Green PCR.
  7. Ustaw warunki cykli PCR następująco: początkowa denaturacja w 95 °C przez 10 minut, następnie 40 cykli 95 °C przez 15 s i 60 °C przez 1 minutę.
  8. Stosuj gliceraldehydową dehydrogenazę 3-fosforanową (GAPDH) oraz małe jądrowe RNA (U6) jako wewnętrzne mechanizmy kontroli dla miR-107 i FGFRL1.
  9. Obliczaj dane metodą 2-ΔΔCt.
  10. Ilościowo określić zawartość mRNA czynników zapalnych (IL-6, IL-8) oraz cząsteczek regulacyjnych związanych z apoptozą (Fas, s. 53) za pomocą RT-qPCR.

6. Transfekcja komórek

  1. Hodować komórki Het-1A statycznie na płytkach 6-dołkowych o gęstości 2×105 komórek – dobrze-1 aż do osiągnięcia fazy wzrostu logarytmicznego.
  2. Pozyskaj syntetyczne oligonukleotydy (miR-107 mimika/ov-FGFRL1; 50 nM), plazmidy obniżone (inhibitor miR-107; 100 nM) oraz odpowiadające im fragmenty kontroli ujemnej od komercyjnego dostawcy.
  3. Transfekcja wyżej wymienionych fragmentów w komórki za pomocą odczynnika lipofektaminy przez 48 godzin.

7. Żywotność komórek

  1. Rozsiewaj komórki Het-1A na płytkach 96-dołkowych o gęstości 5×103 komórki-1 na 100 μL na medium i hoduj przez noc.
  2. Dodaj do komórek Het-1A roztwór metyl tiazolylu (MTT) (20 μL, 5 mg·mL-1, stężenie końcowe 0,5 mg·mL-1) i inkubuj przez 4 godziny w temperaturze 37 °C.
  3. Dodaj dimetylosulfoksyd (DMSO, 150 μL) i zatwórz mieszaninę przez 10 minut.
  4. Zmierz wartość absorpcji (490 nm) każdej dołki za pomocą czytnika mikropłyt.
  5. Ustaw 3 studnie replikacyjne na grupę i powtórz 3 niezależne razy.

8. Badanie ELISA

  1. Wykrywanie IL-6 i IL-8 w komórkach za pomocą zestawu ELISA, zgodnie ze standardową procedurą producenta.
  2. Powtórz procedurę trzy niezależne razy.

9. Prognozowanie celów i badanie aktywności lucyferazy

  1. Przewidywanie potencjalnych celów miR-107 za pomocą baz miRDB i ENCORI. Zidentyfikuj nakładające się cele i zweryfikowaj miejsca wiązania komplementarnego.
  2. Zidentyfikuj komplementarne miejsca wiązania między miR-107 a FGFRL1.
  3. Sklonuj i uzyskaj dzikie FGFRL1 3'UTR zawierające miejsca wiązania miR-107 (wt-FGFRL1). Generuj mutantów specyficznych miejsc wiązania (mut-FGFRL1).
  4. Ko-transfekcyjne komórki Het-1A z naśladowcą/inhibitorem wt/mut-FGFRL1 i miR-107 (lub kontrolą NC).
  5. Mierz aktywność lucyferazy za pomocą systemu testów reporterowych z podwójną lucyferazą.

10. Analiza statystyczna

  1. Wykonaj analizę ROC za pomocą GraphPad Prism, wprowadzając dane wyrażeń, wybierając funkcję krzywej ROC i eksportując wyniki.
  2. Oceń różnice między grupami za pomocą testu Student t-test (dla dwóch grup) lub jednokierunkowej analizy wariancji (ANOVA; dla wielu grup), a następnie test post hoc Tukeya.
  3. Rozważmy p < 0,05 jako statystycznie istotne.
  4. Szczegółowe informacje z oryginalnych danych zostały podsumowane w dodatkowej Tabeli 1.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Rekrutacja pacjentów i charakterystyka wyjściowa Wyniki te opisują ekspresję i skuteczność diagnostyczną miR-107 u pacjentów RE. Tabela 1 przedstawia ogólne cechy zdrowych kontrolnych i pacjentów RE. Wyniki nie wykazują statystycznie istotnych różnic między obiema grupami pod względem płci, wieku i historii medycznej (s. > 0,05), co wskazuje na porównywalność.

Ekspresja i wydajność diagnostyczna miR-107 w surowicy

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

RE to zapalna choroba błony śluzowej przełyku wywołana refluksem przełyku o szerokim spektrum objawów, które mogą wpływać na jakość życia i niosą ryzyko poważnych powikłań19. W normalnych warunkach fizjologicznych żołądek pozostaje chroniony przed kwasem żołądkowym i żółcią dzięki swoim wrodzonym mechanizmom obronnym. Natomiast przełyk, pozbawiony solidnej bariery śluzowej, jest bardziej podatny na uszkodzenia spowodowane przez te czynniki20. Dlatego jesteśmy chętni do ocen...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy deklarują, że nie mają ze sobą rywalizujących interesów.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Projekt technologii Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Kantonie oraz zintegrowanej technologii medycyny chińskiej i zachodniej (numer grantu: 20242A011007). Projekt Badawczy Prowincji Guangdong ds. Tradycyjnej Medycyny Chińskiej (Numer Grantu: 20262041).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Kolekcja Kultury Amerykańskiego Typu Manassas, USAKomercyjny bank komórkowy
Dimetylsulfotlenek Sigma, NiemcyD4540
Zestaw do analizy reportera z podwójną lucyferaząPromega, USAE1910System analiz reportera z podwójną lucyferazą
FastStart Uniwersalny SYBR Green Master KitRoche, Niemcy4913850SYBR Green PCR master mix
Surowica bydła płodowaGibco, NY, USA10100147C
GenePharma CompanySzanghaj, Chiny
Chlorek wodoruSigma-Aldrich, MO, USA1099730001
Zestaw IL-6 ELISAR& D Systems, USAD6050Zestaw ELISA
Zestaw IL-8 ELISAR& D Systems, USAD8000CZestaw ELISA
InkubatorForma Scientific, MA, USA311 S/N29035
Lipofektamina 3000Invitrogen, USAL3000015Reagent lipofektaminy
Metyl tiazolyl tetrazoliumSigma, NiemcyM5655
Czytnik mikropłytBioTek, VT, USAELx808
Spektrofotometr NanoDropThermo, MA, USAND-1000
Penicylina/streptomycynaGibco, NY, USA15070063
Zestaw RT PrimeScriptTakara, JaponiaDRR047AZestaw do transkrypcji odwrotnej
TRIzol Thermo, MA, USA10296010Odczynnik fenol-chloroform
Zamrażarka ultra-niskiej temperatury Haier, Qingdao, ChinyDW-86W100

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Guo, Z., et al. Integrated transcriptomic and metabolomic analyses reveal the mechanism by which quercetin inhibits reflux esophagitis in rats. PLoS One. 20 (5), e0321959(2025).
  2. Maev, I. V., Livzan, M. A., Mozgovoi, S. I., Gaus, O. V., Bordin, D. S. Esophageal Mucosal Resistance in Reflux Esophagitis: What We Have Learned So Far and What Remains to Be Learned. Diagnostics (Basel). 13 (16), 2664(2023).
  3. Quach, D. T., et al. Clinical characteristics and risk factors of gastroesophageal reflux disease in Vietnamese patients with upper gastrointestinal symptoms undergoing esophagogastroduodenoscopy. JGH Open. 5 (5), 580-584 (2021).
  4. Han, Y. M., et al. Inverse correlation between gastroesophageal reflux disease and atrophic gastritis assessed by endoscopy and serology. World J Gastroenterol. 28 (8), 853-867 (2022).
  5. Tanvir, F., et al. Gastroesophageal Reflux Disease: New Insights and Treatment Approaches. Cureus. 16 (8), e67654(2024).
  6. Bortolotti, M. Is patient satisfaction sufficient to validate endoscopic anti-reflux treatments? World J Gastroenterol. 28 (28), 3743-3746 (2022).
  7. Fabian, M. R., Sonenberg, N., Filipowicz, W. Regulation of mRNA translation and stability by microRNAs. Annu Rev Biochem. 79, 351-379 (2010).
  8. Cai, Y., et al. MiR-3682-3p promotes esophageal cancer progression by targeting FHL1 and activating the Wnt/β-catenin signaling pathway. Cell Signal. 119, 111155(2024).
  9. Tarallo, A., et al. MiR-21-5p and miR-223-3p as Treatment Response Biomarkers in Pediatric Eosinophilic Esophagitis. Int J Mol Sci. 26 (7), 3111(2025).
  10. Liu, X., et al. Decreased PANK1 expression in kidney renal clear cell carcinoma: impact on cell apoptosis, invasion, migration, and epithelial-mesenchymal transition. Discov Oncol. 15 (1), 380(2024).
  11. Huang, F., Tang, W., Lei, Y. MicroRNA-107 promotes apoptosis of acute myelocytic leukemia cells by targeting RAD51. Arch Med Sci. 17 (4), 1044-1055 (2021).
  12. Zheng, J., et al. Applications of Exosomal miRNAs from Mesenchymal Stem Cells as Skin Boosters. Biomolecules. 14 (4), 459(2024).
  13. Wang, P., et al. miR-107 reverses the multidrug resistance of gastric cancer by targeting the CGA/EGFR/GATA2 positive feedback circuit. J Biol Chem. 300 (8), 107522(2024).
  14. Zhang, P., et al. MiR-107 inhibits the malignant biological behavior of esophageal squamous cell carcinoma by targeting TPM3. J Gastrointest Oncol. 13 (4), 1541-1555 (2022).
  15. Lee, H. W., et al. A Pharmacokinetic/Pharmacodynamic Study of Esomeprazole Comparing a Dual Delayed-Release Formulation (YYD601) to a Conventional Formulation Following Multiple Administrations in Healthy Adult Subjects. Drug Des Devel Ther. 19, 97-110 (2025).
  16. Wasielica-Berger, J., et al. Expression of VEGF, EGF, and Their Receptors in Squamous Esophageal Mucosa, with Correlations to Histological Findings and Endoscopic Minimal Changes, in Patients with Different GERD Phenotypes. Int J Environ Res Public Health. 19 (9), 5298(2022).
  17. Zou, Z., Fu, L., Liu, J., Huang, B. Establishment and Evaluation of Cell Models for Bronchopulmonary Dysplasia: Challenges and Prospects. Clin Respir J. 19 (8), e70118(2025).
  18. Lundell, L. R., et al. Endoscopic assessment of oesophagitis: clinical and functional correlates and further validation of the Los Angeles classification. Gut. 45 (2), 172-180 (1999).
  19. Wu, Y., Hussain, S. A., Luo, M. Columbianadin ameliorates experimental acute reflux esophagitis in rats via suppression of NF-κB pathway. Acta Cir Bras. 39, e391824(2024).
  20. Yao, P., Liao, X., Huang, J., Dang, Y., Jiang, H. Identifying causal relationships between gastroesophageal reflux and extraesophageal diseases: A Mendelian randomization study. Medicine (Baltimore). 103 (7), e37054(2024).
  21. Webb, J., et al. The microRNA Pathway of Macroalgae: Its Similarities and Differences to the Plant and Animal microRNA Pathways. Genes (Basel). 16 (4), 442(2025).
  22. Wu, Z., Yan, Y., Li, W., Li, Y., Yang, H. Expression Profile of miR-199a and Its Role in the Regulation of Intestinal Inflammation. Animals (Basel). 13 (12), 1979(2023).
  23. Wang, J., Liu, L. MiR-149-3p promotes the cisplatin resistance and EMT in ovarian cancer through downregulating TIMP2 and CDKN1A. J Ovarian Res. 14 (1), 165(2021).
  24. Wu, L., et al. Increased miR-214 expression suppresses cell migration and proliferation in Hirschsprung disease by interacting with PLAGL2. Pediatr Res. 86 (4), 460-470 (2019).
  25. Kim, S. Y., et al. Fexuprazan safeguards the esophagus from hydrochloric acid-induced damage by suppressing NLRP1/Caspase-1/GSDMD pyroptotic pathway. Front Immunol. 15, 1410904(2024).
  26. Liu, C., Gui, Y., Zeng, M., Zhou, Z. Effects of dexmedetomidine combined with intravenous general anesthesia on hemodynamics and inflammatory factors in patients undergoing laparoscopic colorectal cancer surgery. Wideochir Inne Tech Maloinwazyjne. 19 (3), 391-398 (2024).
  27. Rjiba, K., et al. Disorders of sex development in Wolf-Hirschhorn syndrome: a genotype-phenotype correlation and MSX1 as candidate gene. Mol Cytogenet. 14 (1), 12(2021).
  28. Zhao, X., et al. Exploration of Potential Integrated Models of N6-Methyladenosine Immunity in Systemic Lupus Erythematosus by Bioinformatic Analyses. Front Immunol. 12, 752736(2021).
  29. Sharma, P., Kaushik, V., Saraya, A., Sharma, R. Aberrant Expression of FGFRL1 in Esophageal Cancer and Its Regulation by miR-107. Asian Pac J Cancer Prev. 24 (4), 1331-1341 (2023).
  30. Guo, Y., et al. Pancreatic cancer stem cell-derived exosomal miR-210 mediates macrophage M2 polarization and promotes gemcitabine resistance by targeting FGFRL1. Int Immunopharmacol. 127, 111407(2024).
  31. Jia, X., Zhao, Y., Li, H., Fan, S., Hu, H. Downregulation of MUC6 improves esophageal epithelial barrier dysfunction and inhibits epithelial-mesenchymal transition in reflux esophagitis. BMC Gastroenterol. 26 (1), 53(2026).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Model kom rkowy indukowany kwasemkom rki Het 1Ao miR 107refluksowe zapalenie prze ykutest ywotno ci kom rekRT qPCRtest dualnej lucyferazymarkery stanu zapalnegomechanizmy molekularne

Powiązane artykuły