Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł badawczy

Wpływ regulacji ekspresji SPRY2 i miR-590-5p na autofagię w ludzkich chondrocjach z modelu osteoartrozy

108 wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/70883

⸱

31 lipca 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1The First Affiliated Hospital of Guangxi University of Chinese Medicine, 2Guangxi University of Chinese Medicine

* These authors contributed equally

W tym artykule

Podsumowanie

Stres zapalny w modelu chondrocytów C28/I2 wywołanym IL-1β zwiększył ekspresję miR-590-5p i zmniejszył ekspresję SPRY2. Modulacja tej osi zmieniła ekspresję Beclin-1, LC3-II i Bcl-2, co sugeruje hipotetyczną ścieżkę regulacyjną miR-590-5p/SPRY2, która może wpływać na odpowiedzi związane z autofagią i przeżywalność chondrocytów w osteoartrozie.

Streszczenie

Choroba zwyrodnieniowa stawów (OA) jest rozpowszechnioną chorobą zwyrodnieniową stawów charakteryzującą się progresywnym niszczeniem chrząstki i utratą homeostazy chondrocytów. Chociaż dysregulacja autofagii przyczynia się do patogenezy OA, mechanizmy molekularne rządzące reakcjami związanymi z autofagia w chondrocytach pozostają niedostatecznie poznane. Niniejsze badanie zbadał rolę osi regulacyjnej miR-590-5p/SPRY2 w zapalnym mikrośrodowisku OA za pomocą ludzkich chondrocytów C28/I2 indukowanych IL-1β. Model OA in vitro został ustanowiony poprzez leczenie komórek C28/I2 IL-1β. Ekspresję miR-590-5p i SPRY2 oceniono za pomocą ilościowej PCR i Western blottingu. Zastosowano podejście zysku i utraty funkcji, aby ocenić wpływ SPRY2 i miR-590-5p na markery związane z autofagia Beclin-1 i LC3-II, a także białko związane z przeżyciem Bcl-2. Analizę bioinformatyczną i eksperymenty ratunkowe wykorzystano do zbadania relacji regulacyjnej między miR-590-5p a SPRY2. Leczenie IL-1β znacząco zwiększyło ekspresję miR-590-5p, jednocześnie zmniejszając poziomy mRNA i białka SPRY2 (P < 0,05). Przewlekła nadekspresja SPRY2 znacząco zmniejszyła ekspresję Beclin-1 i LC3-II, ze zmniejszeniem odpowiednio o około 65% i 77% (P < 0,05). W przeciwieństwie do tego, przewlekła nadekspresja miR-590-5p zwiększyła ekspresję Beclin-1, LC3-II i Bcl-2, podczas gdy inhibicja miR-590-5p odwróciła te efekty i przywróciła ekspresję SPRY2. Analizy funkcjonalne potwierdziły SPRY2 jako domniemany dolny strumieniowy cel regulatorowy miR-590-5p. Te odkrycia identyfikują oś miR-590-5p/SPRY2 jako ważny regulator ekspresji markerów związanych z autofagia i przeżycia chondrocytów w warunkach zapalnych oraz sugerują jej potencjalne znaczenie jako cel terapeutyczny w OA.

Wprowadzenie

Jakoż najczęstsza forma artretyzmu na całym świecie, choroba zwyrodnieniowa stawów (OA) jest główną przyczyną bólu, upośledzenia ruchomości i niepełnosprawności fizycznej, obciążając znacznie systemy opieki zdrowotnej i społeczeństwo1. Patologicznie OA charakteryzuje się postępującą degeneracją chrząstki stawowej, zapaleniem błony maziowej i patologiczną przebudową kości podstawnej chrząstki1. Szacunki epidemiologiczne wskazują, że około 303 milionów osób na całym świecie jest dotkniętych OA, a liczba ta ma wzrosnąć wraz z starzeniem się populacji i wzrostem otyłości2. W Chinach szacunkowa częstość występowania objawowego OA kolan wynosi 8,1%, przy czym znacznie wyższa częstość występowania obserwuje się u kobiet i ludności wiejskiej3. Mimo wysokiej częstości występowania, obecne opcje leczenia są w dużej mierze ograniczone do zarządzania objawami poprzez leki niesteroidowe przeciwzapalne (NLPZ) oraz interwencji chirurgicznej w zaawansowanej chorobie4. Brak leków modyfikujących przebieg osteoartretyzmu (DMOAD) odzwierciedla niepełne zrozumienie mechanizmów molekularnych regulujących homeostazę i przetrwanie chondrocytów5.

Struktura i funkcjonalność chrząstki stawowej zależy od rezydentnych chondrocytów, które utrzymują obrót macierzy pozakomórkowej (ECM) poprzez równowagę między procesami anabolicznymi i katabolicznymi6. Podczas progresji OA, chondrocyty są narażone na nienormalne obciążenia mechaniczne i prozapalne mediatory, szczególnie interleukina-1β (IL-1β) i czynnik nekrozy nowotworu-α (TNF-α), które sprzyjają przejściu z syntezy macierzy do degradacji macierzy6. IL-1β przyczynia się do zniszczenia chrząstki poprzez stymulację produkcji metaloproteinaz macierzy (MMP) i agregakan, a jednocześnie hamuje syntezę kolagenu typu II i proteoglikanów7. Dodatkowo, IL-1β indukuje stres oksydacyjny i dysfunkcję mitochondriów, prowadząc do apoptozy i starzenia się chondrocytów8. W konsekwencji, identyfikowanie wewnątrzkomórkowych szlaków sygnałowych regulujących przetrwanie chondrocytów w warunkach zapalnych pozostaje priorytetem w badaniach nad OA.

Autofagia jest ewolucjonującą ścieżką degradacji lizosomalnej, która utrzymuje homeostazę komórkową poprzez usuwanie i recykling uszkodzonych organelli i agregatów białkowych9. Bazalna autofagia jest niezbędna dla przetrwania komórkowego i równowagi energetycznej; jednak dysregulowany proces autofagii może przyczyniać się do progresji choroby9. W OA autofagia jest ogólnie uważana za ochronną reakcję, która pomaga chondrocytom adaptować się do stresu komórkowego i opierać się apoptozie10. Poprzednie badania sugerują, że aktywność autofagiczna maleje w trakcie progresji OA, szczególnie w zaawansowanych stadiach choroby, prowadząc do upośledzonej kontroli jakości komórkowej i zwiększonej utraty chondrocytów11. Kilka białek jest powszechnie stosowanych jako wskaźniki aktywności związanej z autofagią. Beclin-1 uczestniczy w inicjacji autofagosomu, podczas gdy konwersja białka związanego z mikrotubulami 1 łańcucha lekkiego 3 (LC3-I do LC3-II) jest szeroko stosowana jako marker formowania autofagosomu12. Natomiast białko limfoma komórek B2 (Bcl-2) hamuje autofagię zależną od Beclin-1, jednocześnie wywierając efekty anty-apoptotyczne13. Mimo to, interpretacja wskaźników związanych z autofagią wymaga ostrożności, ponieważ statyczne pomiary LC3-II i Beclin-1 nie mogą niezależnie odróżnić zwiększonego formowania autofagosomu od upośledzonej degradacji lizosomalnej. Mimo tych ograniczeń, modulacja szlaków związanych z autofagią pozostaje obiecującą strategią terapeutyczną w OA.

MikroRNA (miRNA) to krótkie niekodujące RNA, które regulują ekspresję genów po transkrypcyjnie poprzez wiązanie się z komplementarnymi sekwencjami w obrębie regionów 3'-niekodujących (3'-UTR) docelowych RNA ribonukleotydowych, prowadząc do degradacji mRNA lub represji translacji14. Aberracyjna ekspresja miRNA została związana z patogenezą OA poprzez wpływ na stan zapalny, apoptozę i remodelowanie ECM15. Wśród tych molekuł, miR-590-5p przyciągnęło uwagę ze względu na jego regulacyjne role w metabolizmie kostnym i inne procesy patologiczne. Poprzednie badania wykazały, że miR-590-5p promuje różnicowanie osteogenne i hamuje adipogenezę w komórkach macierzystych mezenchymalnych16. W modelach nowotworowych, miR-590-5p wykazuje funkcje uzależnione od kontekstu jako regulator onkogenny lub supresor nowotworowy17. Ponadto, zmienione profile ekspresji mikroRNA, w tym członkowie rodziny miR-590, zostały związane z patologiczną przebudową tkanek stawowych podczas OA18. Jednak dowody uzyskane z modeli komórek macierzystych lub nowotworowych nie mogą

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

To badanie przeprowadzono wyłącznie przy użyciu komercyjnie dostępnej linii komórek chondrocytów ludzkich C28/I2. W badaniu nie było zaangażowanych ludzkich uczestników, próbek tkanki ludzkiej, materiałów pochodzących od pacjentów ani żywych zwierząt. Dlatego zatwierdzenie Komisji Etycznej (IRB) oraz Komisji Opieki nad Zwierzętami (IACUC) nie było wymagane zgodnie z wytycznymi instytucjonalnymi i krajowymi. Narzędzia, chemikalia, zestawy i odczynniki użyte w protokołach są wymienione w Tabeli materiałów.

1. Hodowla komórek i konstrukcja modelu OA 

Ludzka linia komórek chondrocytów C28/I2 (szczegóły podane w Tabeli materiałów) została uzyskana od komercyjnego dostawcy. Aby zapewnić reproduktywalność eksperymentu, komórki zostały uwierzytelnione za pomocą profilowania krótkich tandemowych powtórzeń (STR) i rutynowo testowane w celu potwierdzenia braku skażenia mykoplazmą. Do wszystkich eksperymentów wykorzystywano komórki między przeszczepami 3 a 8. Komórki były utrzymywane w DMEM uzupełnionym o 10% fetalne surowce krwi wołowej (FBS) i 1% penicylinę-streptomycynę (wszystkie odczynniki hodowlane są szczegółowo opisane w Tabeli materiałów) w 37 °C w wilgotnej atmosferze zawierającej 5% CO2.

Aby stworzyć in vitro model osteoartrozy (OA), komórki C28/I2 zostały stymulowane rekombinowanym ludzkim IL-1β. Na podstawie ustanowionej literatury6,7, wstępnych eksperymentów optymalizacji dawki-odpowiedzi zaprojektowanych w celu wywołania wyraźnego stanu katabolizmu bez nadmiernej natychmiastowej cytotoksyczności, komórki były traktowane 20 ng/mL IL-1β przez 24 godziny.

2. Grupowanie eksperymentalne i transfekcja 

Aby wyjaśnić mechanizmy, badanie zostało podzielone na trzy główne moduły eksperymentalne, z których każdy posiadał co najmniej trzy niezależne biologiczne repliki:

  1. SPRY2 Zysk/utrata funkcji:
    Komórki zostały przypisane do grupy Kontrolnej, modelu OA, OA + pusty wektor (NC), OA + nadekspresja plazmidu SPRY2 (OE-SPRY2) oraz odpowiadających grup małej interferencyjnej RNA (si-NC i trzech specyficznych konstrukcji si-SPRY2: si-695, si-800, si-896) w celu przesiewu skuteczności interferencji.
  2. Modulacja miR-590-5p:
    Komórki zostały podzielone na grupy Kontrolne, model OA, OA + imitator NC, OA + imitator miR-590-5p, OA + inhibitor NC oraz OA + inhibitor miR-590-5p.
  3. Walidacja funkcjonalna relacji regulacyjnej miR-590-5p/SPRY2:
    Aby dalece oceniać proponowaną relację regulacyjną między miR-590-5p i SPRY2, komórki były poddawane warunkom imitatora miR-590-5p i inhibitora, aby ustalić, czy modulacja miR-590-5p zmieniła ekspresję SPRY2 w modelu OA.
    Do transfekcji, komórki C28/I2 zostały zasiano w 6-dołkowych płytkach w liczbie 2 × 105 komórek/dołek. Po osiągnięciu 70-80% konfluencji, transfekcje przeprowadzono przy użyciu komercyjnego lipidowego środka transfekcyjnego zgodnie z protokołem producenta i ustalonymi procedurami dostarczania małej RNA w chondrocitach24. Krótko mówiąc, plazmidy (OE-SPRY2 i NC; 2 μg/dołek) oraz oligonukleotydy (imitacja/inhibitor miR-590-5p i siRNA; 50 nM) były rozcieńczane w środowisku z obniżoną zawartością surowca. Kompleksy lipid-DNA/RNA inkubowano w temperaturze pokojowej przez 15 minut przed dodaniem kroplowo do komórek w środowisku DMEM bez surowca. 6 godzin po transfekcji, środowisko zostało zastąpione pełnym DMEM zawierającym 10% FBS, a komórki były hodowane przez kolejne 48 godzin przed ekstrakcją RNA i białka.

3. Wykrywanie qPCR

Całkowite RNA i miRNA zostały izolowane za pomocą dedykowanego zestawu ekstrakcyjnego miRNA zgodnie z protokołem producenta. Czystość i stężenie RNA oceniono za pomocą spektrofotometru UV-Vis, a próbki o stosunku A260/A280 wynoszącym 1,8–2,0 zostały wykorzystane do dalszych analiz. Do syntezy cDNA zastosowano komercyjne odczynniki do odwrotnej transkrypcji. Procedura cyklu qPCR przebiegała następująco: 95 °C przez 10 min; 40 cykli po 95 °C przez 10 s, 58 °C przez 30 s i 72 °C przez 30 s; a następnie analizę krzywej topienia w celu zweryfikowania specyficzności primerów i braku dimeryzacji primerów. β-Aktyna i U6 służyły jako kontrole wewnętrzne dla mRNA i miRNA, odpowiednio. Względna ekspresja genów została obliczona metodą 2-ΔΔCt25. Wszystkie sekwencje primerów, w tym te dla Col-II, SPRY2, Beclin-1, LC3, Bcl-2, miR-590-5p oraz genów referencyjnych, są wymienione w Tabeli 1.</

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Ustanowienie in vitro modelu zapalnego chondrocytów

W celu zbadania mechanizmów molekularnych leżących u podstaw patologii choroby zwyrodnieniowej stawów, ustanowiono zapalny model in vitro z wykorzystaniem ludzkich chondrocytów C28/I2 stymulowanych IL-1β. Poprawność tego modelu potwierdzono poprzez ocenę ekspresji łańcucha alfa 1 kolagenu typu II (Col-II), który jest głównym składnikiem macierzy zewnątrzkomórkowej chrząstki szklistej i markerem zdrowych chondrocytów....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Poprzednie badania wykazały, że miRNA regulują autofagię na wielu etapach, w tym inicjację, wydłużanie wezykuł i dojrzewanie27. Udział miRNA w patogenezie OA jest coraz częściej dokumentowany, szczególnie poprzez wpływ na stan zapalny, apoptozę, remodelację macierzy zewnątrzkomórkowej i szlaki związane z autofagią. miR-590-5p zostało powiązane z homeostazą komórkową i procesami związanymi z rakiem28,29,30...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy deklarują brak konfliktu interesów.

Podziękowania

Autorzy dziękują Działowi Geriatrii w Szpitalu Ruikang, Uniwersytecie Medycyny Chińskiej w Guangxi, za zapewnienie obiektywów eksperymentalnych i wsparcia technicznego dla tego badania. Autorzy dziękują również pracownikom laboratorium i kolegom za pomoc w zbieraniu i analizie danych. Praca ta była wspierana przez Natural Science Research Project Uniwersytetu Medycyny Chińskiej w Guangxi (Grant No. 2022MS039; LncRNA-GAS5 pośredniczy w ekspresji SPRY2 w celu hamowania autofagii w chrząstkach kolanowych OA myszy: Badanie mechanizmu i wczesne efekty interwencji receptury Huayu Qushi) oraz Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych Chin (Fundacja Regionalna) (Grant No. 82160912; Dyskusja na temat mechanizmu degradacji przez ubiquitinację Skp2 FoxO1 w hamowaniu autofagii chrząstek kolanowych OA i wczesne efekty interwencji receptury Huayu Qushi).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Anti-β-actin antibodyProteintech66009-1-Ig ; RRID: AB_2687938Wewnętrzna kontrola ładowania dla analizy Western blot
Anti-SPRY2 antibodyProteintech11383-1-AP ; RRID: AB_2196324Wykrywanie ekspresji białka SPRY2
BCA protein assay kitThermo Fisher Scientific23225Oznaczanie stężenia białek całkowitych
C28/I2 human chondrocyte cell linePunocelCP-H107In vitro model chondrocytów do badań nad osteoartrozą
Complete DMEMKeyGen BiotecKGM12800SPodstawowe medium do rutynowej hodowli komórek
CWBIO Ultrapure miRNA extraction kitCWBIOCW0627SIzolacja całkowitego RNA i miRNA
ECL detection systemThermo Fisher Scientific32106Chemiluminescencyjne wizualizowanie pasm białkowych
Fetal Bovine Serum (FBS)Gibco1891605Suplement hodowli komórek
GraphPad Prism version 9.0GraphPad SoftwareN/AAnaliza statystyczna i generowanie wykresów
HiScript II Q RT SuperMixVazymeR223-01Odwrotna transkrypcja mRNA na cDNA
ImageJ softwareNational Institutes of HealthN/AIlościowa ocena intensywności pasm Western blot
Lipofectamine 3000InvitrogenL3000015Transfekcja plazmidów i oligonukleotydów
miR-590-5p mimic, inhibitor, and NCsRiboBioSyntetyzowane na zamówienieModulacja ekspresji miR-590-5p
miRNA 1st Strand cDNA Synthesis KitVazymeMR101-02Odwrotna transkrypcja miRNA na cDNA
Opti-MEM mediumGibco31985-062Przygotowanie kompleksów transfekcyjnych
Penicillin-streptomycinGibco15140122Profilaktyka zakażeń bakteryjnych w hodowli komórek
Protease and phosphatase inhibitor cocktailsMedChemExpressHY-K0010Ochrona białek podczas ekstrakcji
PVDF membranesMillipore SigmaISEQ00010Membran do transferu białek do immunoblottingu
Recombinant human IL-1βMedChemExpressHY-P78459Indukcja stanów zapalnych przypominających OA
RIPA bufferBeyotimeP0013BLizys komórek i ekstrakcja białek
si-SPRY2 constructs and si-NCGenePharmaSyntetyzowane na zamówienieKnockdown ekspresji SPRY2
SPRY2 overexpression plasmid (OE) and empty vector (NC)GeneChemSyntetyzowane na zamówienieOcena efektów nadekspresji SPRY2
UV-VIS spectrophotometer (NanoDrop 2000)Thermo Fisher ScientificND-2000Pomiar stężenia i czystości RNA

Bibliografia

  1. Hunter DJ, Bierma-Zeinstra S. Osteoarthritis. Lancet. 2019;393:1745-59.
  2. GBD 2019 Diseases and Injuries Collaborators. Global burden of 369 diseases and injuries in 204 countries and territories, 1990-2019: A systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2019. Lancet. 2020;396:1204-22.
  3. Tang X, et al. The prevalence of symptomatic knee osteoarthritis in China: Results from the China Health and Retirement Longitudinal Study. Arthritis Rheumatol. 2016;68:648-53.
  4. Latourte A, Kloppenburg M, Richette P. Emerging pharmaceutical therapies for osteoarthritis. Nat Rev Rheumatol. 2020;16:673-88.
  5. Glyn-Jones S, et al. Osteoarthritis. Lancet. 2015;386:376-87.
  6. Kapoor M, et al. Role of proinflammatory cytokines in the pathophysiology of osteoarthritis. Nat Rev Rheumatol. 2011;7:33-42.
  7. Goldring MB, Otero M. Inflammation in osteoarthritis. Curr Opin Rheumatol. 2011;23:471-8.
  8. Lepetsos P, Papavassiliou AG. ROS/oxidative stress signaling in osteoarthritis. Biochim Biophys Acta. 2016;1862:576-91.
  9. Mizushima N, Komatsu M. Autophagy: Renovation of cells and tissues. Cell. 2011;147:728-41.
  10. Caramés B, Olmer M, Kiosses WB, Lotz MK. The relationship of autophagy defects to cartilage damage during joint aging in a mouse model. Arthritis Rheumatol. 2015;67:1568-76.
  11. Lotz MK, Caramés B. Autophagy and cartilage homeostasis mechanisms in joint health, aging and OA. Nat Rev Rheumatol. 2011;7:579-87.
  12. Kabeya Y, et al. LC3, a mammalian homologue of yeast Apg8p, is localized in autophagosome membranes after processing. EMBO J. 2000;19:5720-8.
  13. Pattingre S, et al. Bcl-2 antiapoptotic proteins inhibit Beclin 1-dependent autophagy. Cell. 2005;122:927-39.
  14. Bartel DP. MicroRNAs: Genomics, biogenesis, mechanism, and function. Cell. 2004;116:281-97.
  15. Miyaki S, Asahara H. Macro view of microRNA function in osteoarthritis. Nat Rev Rheumatol. 2012;8:543-52.
  16. Wu Z, Lin Y, Zhang Z, Pan Y. Melatonin-mediated miR-526b-3p and miR-590-5p upregulation promotes chondrogenic differentiation of human mesenchymal stem cells. J Pineal Res. 2018;65:e12483.
  17. Chen M, Wang S, Chen Y. miR-590-5p suppresses hepatocellular carcinoma chemoresistance by targeting YAP1 expression. EBioMedicine. 2018;35:142-54.
  18. Endisha H, Rockel J, Jurisica I, Kapoor M. The complex landscape of microRNAs in articular cartilage: biology, pathology, and therapeutic targets. JCI Insight. 2018;3:e98630.
  19. Guy GR, Jackson RA, Yusoff P, Chow SY. Sprouty proteins: Modified modulators, matchmakers or missing links? J Endocrinol. 2009;203:191-202.
  20. Loeser RF. Integrins and chondrocyte-matrix interactions in articular cartilage. Matrix Biol. 2014;39:11-6.
  21. Zhang W, Chen L, Xiong Y. Intraarticular gene transfer of SPRY2 suppresses adjuvant-induced arthritis in rats. Appl Microbiol Biotechnol. 2015;99:6727-35.
  22. Liu Y, et al. MicroRNA-124 facilitates lens epithelial cell apoptosis by inhibiting SPRY2 and MMP-2. Mol Med Rep. 2021;23:381.
  23. Wu Y, Gao Z, Zhang J. Transcription factor E2F1 aggravates neurological injury in ischemic stroke via microRNA-122-targeted Sprouty2. Neuropsychiatr Dis Treat. 2020;16:2633-47.
  24. Jiang P, Zheng Z, Tang Y. miR-590-5p affects chondrocyte proliferation, apoptosis, and inflammation by targeting FGF18 in osteoarthritis. Am J Transl Res. 2021;13:8728-41.
  25. Livak KJ, Schmittgen TD. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) method. Methods. 2001;25:402-8.
  26. Towbin H, Staehelin T, Gordon J. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: Procedure and some applications. Proc Natl Acad Sci U S A. 1979;76:4350-4.
  27. Panagopoulos PK, Lambrou GI. The involvement of microRNAs in osteoarthritis and recent developments: A narrative review. Mediterr J Rheumatol. 2018;29:67-79.
  28. Barwal TS, Sharma P. miR-590-5p: A double-edged sword in the oncogenesis process. Cancer Treat Res Commun. 2022;32:100593.
  29. Mou K, Chen M. miR-590-5p inhibits tumor growth in malignant melanoma by suppressing YAP1 expression. Oncol Rep. 2018;40:2056-66.
  30. D'Adamo S, et al. Autophagy in osteoarthritis: a target for new therapies. Curr Rheumatol Rep. 2020;22:37.
  31. Agarwal V, Bell GW, Nam JW, Bartel DP. Predicting effective microRNA target sites in mammalian mRNAs. eLife. 2015;4:e05005.
  32. Friedman RC, Farh KK, Burge CB, Bartel DP. Most mammalian mRNAs are conserved targets of microRNAs. Genome Res. 2009;19:92-105.
  33. Lee CC, et al. Overexpression of sprouty 2 inhibits HGF/SF-mediated cell growth, invasion, migration, and cytokinesis. Oncogene. 2004;23:5193-202.
  34. Frank MJ, et al. Expression of sprouty2 inhibits B-cell proliferation and is epigenetically silenced in mouse and human B-cell lymphomas. Blood. 2009;113:2478-87.
  35. Cui S, et al. Hsa-miR-22-3p inhibits liver cancer cell EMT and cell migration/invasion by indirectly regulating SPRY2. PLoS One. 2023;18:e0281536.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

MedycynaWydanie 233Wydanie 233Wartość pustaWydaniekomórki C28/I2ludzki model choroby zwyrodnieniowej stawów (OA)miRNA-590-5pBeclin-1LC3IIBcl-2
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki korzystania z usługi

Zasady

Prawa autorskie © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.