Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Znormalizowana Preparacja Izolowanego Gładkiego Mięśnia Dwunastnicy Królika Do In Vitro Oceny Farmakologicznej Aktywności Skurtczowej

130 wyświetleń

DOI:

10.3791/71167

12 czerwca 2026

W tym artykule

Podsumowanie

Przedstawiamy tutaj protokół standaryzujący przygotowanie izolowanego mięśnia gładkiego dwunastnicy królika do in vitro oceny farmakologicznej, z wykorzystaniem Horyzontalnego Systemu Eksperymentów na Mięśniach Gładkich o Stałej Temperaturze do rejestracji danych w czasie rzeczywistym dotyczących aktywności skurczu.

Streszczenie

Zskoordynowana aktywność skurczową mięśni gładkich przewodu pokarmowego stanowi fizjologiczną podstawę utrzymania normalnych funkcji trawienia, wchłaniania i transportu, a jej dysfunkcja jest ściśle związana z zaburzeniami motoryki. Technika perfuzji izolowanych narządów eliminuje złożone czynniki in vivo—takie jak czynniki nerwowe, hormonalne i krążeniowe—służąc jako klasyczny model do badań farmakologicznych. W tym celu niniejsze badanie szczegółowo opisuje stopniowy protokół standaryzowanej przygotowania izolowanych mięśni gładkich dwunastnicy królika. Przepływ proceduralny podkreśla krytyczne kroki przygotowywania roztworów, uśmiercania królika, wykonywania precyzyjnej środkowej laparotomii śródbrzusznej w warunkach aseptycznych dla szybkiego wycięcia tkanki, zawieszania pasm mięśni gładkich oraz kalibracji przetworników do rejestracji naprężeń w czasie rzeczywistym. Na podstawie tej platformy technicznej zweryfikowaliśmy dalszą metodę oceniając wpływ Huoxiang Zhengqi Oral Liquid (HXZQ-OL) na mimowolne skurcze oraz skurcze tętniczne wywołane acetylocholiną/chlorkiem baru. Podsumowując, niniejszy protokół zapewnia solidną i wysoce reproduktywalną ramę metodologiczną, dostarczając szeroko stosowanej in vitro platformy do przesiewowego oceniania farmakologicznego środków terapeutycznych ukierunkowanych na motorykę przewodu pokarmowego.

Wprowadzenie

Zskoordynowana czynność skurczową mięśni gładkich przewodu pokarmowego służy jako fizjologiczne podstawa utrzymania normalnych funkcji trawienia, wchłaniania i transportu1. Jego dysfunkcja jest ściśle związana z różnymi powszechnymi zaburzeniami klinicznymi, w tym zespołem jelita drażliwego2, dyspepsją funkcjonalną3 oraz zaburzeniami ruchliwości przewodu pokarmowego po operacji4. Wyjaśnienie mechanizmów molekularnych i farmakologicznych regulujących czynność mięśni gładkich jest kluczowe dla opracowania nowych terapii prokinetycznych lub przeciwskurczowych. W tej dziedzinie....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

W niniejszym badaniu wykorzystano zdrowe dorosłe króliki Nowej Zelandii, rasy White, o dowolnej płci (waga 2,0–2,5 kg). Wszystkie procedury eksperymentów na zwierzętach przeprowadzano zgodnie z wytycznymi dotyczącymi opieki i użytkowania zwierząt laboratoryjnych oraz zostały zatwierdzone przez Komitet Etyczny ds. Zwierząt Laboratoryjnych Uniwersytetu Medycyny Tradycyjnej w Chengdu (Numer zgody: [2026070]). Podjęto wszelkie możliwe kroki, aby zminimalizować cierpienie zwierząt i zmniejszyć liczbę użytych zwierząt. Schemat przepływu pracy przedstawiono na Rysunku 1.

1. Przygotowanie roztworów

<....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Niniejszy protokół eksperymentalny opisuje standaryzowaną metodę przygotowania izolowanych pasków mięśnia dwunastnicy królika oraz proces rejestracji ich dynamicznych zmian napięcia i częstotliwości w czasie rzeczywistym za pomocą układu perfuzji izolowanego narządu. Zgodnie z tym protokołem, HXZQ-OL był sekwencyjnie dodawany poprzez kumulatywne dawkowanie do 20 mL kąpieli roztworu Tyrode'a, osiągając końcowe stężenia objętościowe 10, 20, 30, 40 i 50 µL/mL w kąpieli. Odwołując się do standardów Chińskiej Farmakopei (wyda.......

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Izolowana perfuzja narządów i techniki rejestracji naprężeń reprezentują klasyczne metody badania fizjologii i farmakologii mięśni gładkich. Ich wyniki mają znaczące znaczenie dla wyjaśnienia mechanizmów patofizjologicznych leżących u podstaw zaburzeń motoryki przewodu pokarmowego, chorób naczyń i dysfunkcji macicy12,13,14,15. Wykorzystując standaryzowany ex vivo model dwunastnicy król.......

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy nie mają konfliktów interesów do ujawnienia.

Podziękowania

To dzieło było wspierane przez Projekt Promowania Badań Stypendialnych Xinglin Uniwersytetu Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Chengdu (QJRC2022031), Projekt Szczególnych Talentów Stypendialnych Xinglin Uniwersytetu Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Chengdu (MPRC2023027) oraz Wspólny Fundusz Innowacji Uniwersytetu Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Chengdu – Szpitala Podlegającego (LH202402016).

....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
0.5-10 µL PipetteDalong Laboratory Instruments Co., Ltd.7010101004
10 µL Pipette tipsLABSELECTT-001-10
10 mL Volumetric flaskSichuan Shuniu Glass Instrument Co., Ltd.B-043804
100 mL Volumetric flaskSichuan Shuniu Glass Instrument Co., Ltd.B-043807
100-1000 µL PipetteDalong Laboratory Instruments Co., Ltd.7010101014
1250 µL Pipette tipsLABSELECTT-001-1250
20 mL Volumetric flaskSichuan Shuniu Glass Instrument Co., Ltd.B-010105
200 µL Pipette tipsLABSELECTT-001-200
50 mL Conical centrifuge tubeLABSELECTCT-002-50A
5-50 µL PipetteDalong Laboratory Instruments Co., Ltd.7010101006
Acetylcholine chlorideSupelcoPHR1546
All-in-One Lab ComputerLenovoR5-3500U
Atropine sulfateMacklinA822893
Barium chlorideSigma-Aldrich342920
Calcium chlorideSigma-Aldrich499609
D-GlucoseSigma-AldrichG5767
Freezing point osmometerShanghai Precision Instruments Co., Ltd.BS100
Horizontal Constant-Temperature Smooth Muscle Experiment SystemChengdu Instrument FactoryDSQG-1
Huoxiang Zhengqi Oral LiquidTaiji Group Co., Ltd. Z50020409
Magnesium chlorideSigma-AldrichM8266
Multi-Channel Physiological Recording and Processing SystemChengdu Instrument FactoryRM6240XC
New Zealand White rabbitsPizhou Dongfang Breeding Co., Ltd. (License No.: SCXK[Su]2022-0004) either sex (weighing 2.0–2.5 kg)
pH meterShanghai Leici PHS-25
Potassium chlorideSigma-AldrichP5405
Povidone-iodineH&H Medical Co., Ltd.3180132
Precision balance (0.1 mg)SartoriusBCE64i
Saline solutionH&H Medical Co., Ltd.100014438029
Sodium bicarbonateSigma-AldrichS6014
Sodium chlorideSigma-AldrichS9888
Sodium dihydrogen phosphateSupelco1063700250
Sodium PentobarbitalSigma-AldrichP3761
Verapamil HydrochlorideMacklinV820460
Vortex mixerKylin-BellXW-80A

Przedruki i uprawnienia

Tagi

g adka mi sie kr likafarmakologia in vitroperfuzja narz duprzygotowanie paska mi niarejestracja napi ciamotoryka przewodu pokarmowegozaburzenia motoryki