Zskoordynowana aktywność skurczową mięśni gładkich przewodu pokarmowego stanowi fizjologiczną podstawę utrzymania normalnych funkcji trawienia, wchłaniania i transportu, a jej dysfunkcja jest ściśle związana z zaburzeniami motoryki. Technika perfuzji izolowanych narządów eliminuje złożone czynniki in vivo—takie jak czynniki nerwowe, hormonalne i krążeniowe—służąc jako klasyczny model do badań farmakologicznych. W tym celu niniejsze badanie szczegółowo opisuje stopniowy protokół standaryzowanej przygotowania izolowanych mięśni gładkich dwunastnicy królika. Przepływ proceduralny podkreśla krytyczne kroki przygotowywania roztworów, uśmiercania królika, wykonywania precyzyjnej środkowej laparotomii śródbrzusznej w warunkach aseptycznych dla szybkiego wycięcia tkanki, zawieszania pasm mięśni gładkich oraz kalibracji przetworników do rejestracji naprężeń w czasie rzeczywistym. Na podstawie tej platformy technicznej zweryfikowaliśmy dalszą metodę oceniając wpływ Huoxiang Zhengqi Oral Liquid (HXZQ-OL) na mimowolne skurcze oraz skurcze tętniczne wywołane acetylocholiną/chlorkiem baru. Podsumowując, niniejszy protokół zapewnia solidną i wysoce reproduktywalną ramę metodologiczną, dostarczając szeroko stosowanej in vitro platformy do przesiewowego oceniania farmakologicznego środków terapeutycznych ukierunkowanych na motorykę przewodu pokarmowego.