Artykuł metodologiczny

Pojedyncza dożylna dawka tlenkowej brucelli produkującej indol u myszy NOD: ocena początku cukrzycy typu 1 i remodelacji odporności wysp

122 wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/71193

⸱

26 maja 2026

 ,  ,  , 
1Department of Microbial Pathogenesis and Immunology, Texas A'M University Health Science Center, 2Department of Veterinary Pathobiology, College of Veterinary Medicine ' Biomedical Sciences, Texas A'M University, 3Bond Life Sciences Center, The University of Missouri

* These authors contributed equally

W tym artykule

Podsumowanie

Protokół ten opisuje dożylne podanie indolowego osłabionego szczepu Brucella melitensis u myszy NOD/ShiLtJ, a następnie podłużne monitorowanie cukrzycy, histologię trzustki oraz opcjonalną proteomikę przestrzenną wysoko-plexową i sekwencjonowanie RNA pojedynczych komórek w celu oceny przeprogramowania odporności wysp.

Streszczenie

Cukrzyca typu 1 (T1D) wynika z autoimmunologicznego niszczenia komórek β trzustki, a obecne terapie nie przywracają trwałej odporności. Metabolicznie modyfikowane bakterie produkujące immunomodulacyjne metabolity stanowią obiecującą strategię terapeutyczną w pojedynczej dawce. W niniejszym artykule przedstawiono kompleksowy protokół, w którym pojedyncze dożylne podanie indolizującego osłabionego szczepu Brucella melitensis BmΔvjbR::tnaA służy do oceny wpływu na wystąpienie cukrzycy autoimmunologicznej u myszy NOD/ShiLtJ z przedcukrzycową chorobą cukrzycową.

Protokół rozpoczyna się od przygotowania BmΔvjbR::tnaA z zamrożonych zapasów glicerolu, uprawy w podłożu selektywnym do fazy średniej logariatusu oraz obliczania jednostek tworzących kolonie na podstawie gęstości optycznej. Samice myszy NOD, <5-tygodniowe, są unieruchomione bez znieczulenia i wstrzykiwane dożylnie przez boczną żyłę ogonową z określoną dawką bakteryjną soli fizjologicznej z buforem fosforanowym podczas utrzymywania na poduszkach grzewczych. Poziom glukozy we krwi jest monitorowany 2 razy w tygodniu po 2-godzinnym poście przez 70–105 dni, a cukrzyca definiuje się jako glukozę ≥250 mg/dL w dwóch kolejnych pomiarach. W końcowych fazach eksperymentalnych pobrana trzustka jest utrwalana w neutralno-buforowanej formalinie przez 72 godziny, osadzona w parafinie i sekcjonowana w celu barwienia hematoksyliny i eozyny, immunohistochemii insuliny oraz określenia całkowitej powierzchni wysepek. Fragmenty parafiny utrwalonej formaliną są przesyłane do proteomiki przestrzennej z panelem przeciwciał 25-markerowych do wizualizacji populacji regulatorowych i efektorowych odporności. Na koniec świeża tkanka trzustkowa przechodzi izolację pojedynczych komórek, przygotowanie biblioteki 3′, sekwencjonowanie oraz analizę bioinformatyczną opartą na Seurat, aby profilować zmiany transkrypcyjne w populacjach immunologicznych i stromalnych.

Ten zintegrowany protokół umożliwia powtarzalne podawanie terapii bakteryjnej w pojedynczej dawce oraz wielomodalną charakterystykę remodelacji odporności wysepek, dostarczając ramy do testowania mikroorganizmów inżynieryjnych metabolitów w modelach autoimmunologicznych oraz rozkładania tkankowo-specyficznych mechanizmów immunologicznych w rozdzielczości pojedynczej komórki.

Wprowadzenie

Cukrzyca typu 1 (T1D) to przewlekła choroba autoimmunologiczna charakteryzująca się niszczeniem komórek β trzustki produkujących insulinę, prowadzącym do dożywotniego uzależnienia od insuliny oraz zwiększonego ryzyka powikłań naczyniowych1. Mysz NOD/ShiLtJ odtwarza kluczowe cechy ludzkiej autoimmunologicznej cukrzycy, w tym spontaniczne zapalenie niesulitis i postęp do jawnej cukrzycy, i jest szeroko stosowany jako model przedkliniczny w badaniach mechanistycznych i terapeutycznych 1,2,3. Obecne terapie T1D — w tym leki immunosupresyjne, przeciwciała monoklonalne oraz terapie z adopcyjnymi regulacjami limfocytów T (Treg) — mogą tymczasowo spowalniać postęp choroby, ale często nie zapewniają trwałego przywrócenia odporności odpornościowej ani trwałego zachowania masy β komórek 1,2,4,5,6,7,8,9,10,11.

Ukierunkowanie na Tregów i inne populacje regulacyjne jest głównym obszarem rozwoju nowych terapii T1D, w tym autologicznych poliklonalnych infuzji Tregów, inżynieryjnie specyficznych antygenowych Tregów orazschematów opartych na IL-2 1,2,4,5,6,7,8,9,10,11 . Jednak prozapalne mikrośrodowisko w wysepkach trzustkowych może podważyć skuteczność tych metod, podkreślając potrzebę lokalnego przeprogramowaniasieci odpornościowych tkanek 2,7. Metabolity tryptofanu pochodzące z mikroorganizmów, szczególnie indol i powiązane związki, mogą modulować zarówno odporność wrodzoną, jak i adaptacyjną, wspierając różnicowanie komórek T regulacyjnych, indukując polaryzację makrofagów przeciwzapalnych oraz tłumiąc odpowiedzi Th1712,13. Żywe terapie mikrobiologiczne oraz bakterie metabolicznie inżynieryjne stanowią zatem obiecującą strategię dostarczania immunomodulujących metabolitów in situ oraz przekształcania odporności tkanek 12,13,14,15,16,17,18.

Wcześniej opracowaliśmy metabolicznie modyfikowany szczep Brucella melitensis, BmΔvjbR::tnaA, który konstytutywnie produkuje indol i kontroluje autoimmunologiczne zapalenie stawów poprzez rozszerzanie Tregs i przebudowywanie zapalnych mikrośrodowisk 14,15,16. Osłabione szczepy Brucella, takie jak BmΔvjbR, zostały szeroko scharakteryzowane jako platformy szczepionkowe i mogą być genetycznie modyfikowane, aby przenosić ładunki immunoregulacyjne 14,15,16.

Przedstawiamy szczegółowy protokół oceny pojedynczej dożylnej dawki BmΔvjbR::tnaA w modelu NOD/ShiLtJ, obejmujący przygotowanie bakteryjne, standaryzowane podanie dożylne, monitorowanie cukrzycy oraz wielomodalną analizę tkanki trzustki za pomocą histologii, proteomiki przestrzennej high-plex oraz pojedynczokomórkowego RNA-seq. Ten workflow stanowi praktyczne ramy do testowania mikroorganizmów inżynieryjnych metabolitów jako pojedynczych dawk immunoterapii w autoimmunologii specyficznej dla narządów. Wcześniejsza analiza dawka-odpowiedź wykazała bezpieczeństwo i tolerancję do 1 × 10CFU osłabionego szczepu.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Wszystkie eksperymenty na zwierzętach były przeprowadzane ściśle zgodnie z wytycznymi etycznymi i zatwierdzone przez Komitet ds. Opieki i Wykorzystania Zwierząt (IACUC) Texas A&M University (Numer Protokołu: 2021-0123).

1. Przygotowanie i charakterystyka BmΔvjbR::tnaA

  1. Tło i magazynowanie szczepu bakteryjnego
    UWAGA: BmΔvjbR::tnaA pochodzi z Brucella melitensis 16M poprzez usunięcie regulatora zjadliwości vjbR oraz wprowadzenie genu tnaA Escherichia coli do produkcji indolu, jak opisano wcześniejw 14,15,16.
    1. Utrzymuj zapasy glicerolu na poziomie −80 °C w 20% glicerolu.
  2. Hodowla bakteryjna na agarze selektywnym
    1. Odzyskaj zamrożony bulion glicerolu z magazynu w temperaturze −80 °C. Rozmazuj 10–20 μL na tryptyczne płyty agaru sojowego (TSA) uzupełnione chloramfenikolem (25–30 μg/mL).
    2. Inkubować płytki w temperaturze 37 °C w warunkach CO₂ przez 48–72 godziny, aż pojawią się pojedyncze kolonie (średnica 2–3 mm).
      UWAGA: Praca z szczepami Brucella wymaga odpowiednich warunków na poziomie bezpieczeństwa biologicznego (minimum BSL2). Przestrzegaj protokołów biobezpieczeństwa instytucjonalnego oraz wymaganych zatwierdzeń.
  3. Przygotowanie hodowli ciecznej
    1. Wybierz świeżą tablicę TSA (≤1 tydzień). Wybierz 2–3 izolowane kolonie za pomocą sterylnej pętli.
    2. Zaszczepić do 10 mL tryptycznego bulionu sojowego (TSB) uzupełnionego chloramfenikolem (25–30 μg/mL) w sterylnej probówce o pojemności 15 mL. Inkubować w temperaturze 37 °C z drżeniami przy 250 obr./min w warunkach CO₂ otoczenia.
      UWAGA: Do powiększenia używaj kolby Erlenmeyera z przegrodą 250 mL z przegrodą.
  4. Monitorowanie wzrostu i zbiory
    1. Spektrofotometr wyczyszczony jest sterylnym TSB uzupełnionym chloramfenikolem.
    2. Mierz OD₆₀₀ co 2–3 godziny.
    3. Kondicjuj inkubację, aż OD₆₀₀ osiągnie 2,0 ± 0,2 (około 18–24 godziny).
      KRYTYCZNY KROK: Pobieranie przy OD₆₀₀ = 2,0 ± 0,2 dla stałego stężenia bakterii i żywotności.
      UWAGA: W tych warunkach OD₆₀₀ ≈ 2.0 odpowiada fazie logarytmu średniego do późnego.
  5. Szacunki CFU
    1. Oszacuj stężenie bakterii, stosując zależność:
      OD₆₀₀ = 1 odpowiada 5 × 109 CFU/mL.
      UWAGA: Hodowla 10 mL przy OD₆₀₀₀ = 2,0 zawiera około 1 × 1011 CFU.
    2. OPCJONALNIE: Przygotuj 10-krotne seryjne rozcieńczenia (10⁻6 do 10⁻9) w sterylnym PBS. Płytka 100 μL na TSA z dodatkiem chloramfenikolu. Inkubować w 37 °C przez 48–72 godziny. Policz kolonie, aby potwierdzić CFU.
  6. Zbieranie i koncentracja bakterii
    1. Przelej hodowlę 10 mL do sterylnej stożkowej probówki o pojemności 15 mL.
    2. Wirówka w temperaturze 3 000–4 000 × g przez 10 minut w temperaturze pokojowej.
    3. Ostrożnie zasysaj i odrzucaj supernatant, nie naruszając granulatu.
  7. Ponowna zawiesina do wstrzyknięcia
    1. Dodaj 1 ml sterylnej, wolnej od endotoksyn soli fizjologicznej 1× fosforanowej (PBS, pH 7,4) do granulki bakteryjnej. Delikatnie zawiesz przez pipetowanie 10–15 razy, aż uzyskamy jednorodną zawieszinę bez widocznych grudek.
      UWAGA: Końcowe stężenie wynosi około 1 × 1011 CFU/mL.
  8. Przechowywanie i zastosowanie
    1. Trzymaj zawiesinę bakteryjną na lodzie w zamkniętej tubie. Stosuj zawiesinę do zastrzyków dożylnych w ciągu 4 godzin od przygotowania.
      UWAGA: Nie mroź ani nie przechowuj przez noc, ponieważ żywotność bakterii maleje.
      PUNKT ZATRZYMANIA: Bakterie mogą być przechowywane w lodzie do 4 godzin; Zaleca się stosowanie tego samego dnia.

2. Zakup, mieszkanie i przygotowanie myszy NOD/ShiLtJ

  1. Zdobądź samice myszy NOD/ShiLtJ. Przyzwyczaj myszy przez co najmniej 7 dni przed eksperymentami.
    UWAGA: Stosuj samice myszy ze względu na częstszą i bardziej stałą częstość występowania cukrzycy.
  2. Myszy domowe w indywidualnie wentylowanych klatkach w określonych warunkach wolnych od patogenów. Utrzymuj do pięciu myszy w klatce.
  3. Zapewnij ściółkę, wzbogacanie środowiska, jedzenie i wodę ad libitum. Utrzymuj temperaturę na poziomie 20–24 °C, wilgotność na poziomie 40–60% oraz 12-godzinny cykl światła/ciemności.
  4. Używaj myszy poniżej 5 tygodni życia. Rejestruj bazową masę ciała.
  5. Losowo przydziel myszy na poziomie klatki do grup leczących i kontrolnych. Przypisz każdej myszy unikalne identyfikatory (nieznanka na uchu lub tatuaż na ogonie).
    UWAGA: Prowadź główny rejestr wszystkich zadań z myszami i grupami.
  6. Przenieś klatki do sali zabiegowej co najmniej 30 minut przed wstrzyknięciem. Umieść klatki na poduszkach grzewczych ustawionych na 37–40 °C, aby wspierać rozszerzanie żył ogonowych.

3. Podanie dożylnie przez boczną żyłę ogonową

  1. Stosując technikę sterylną, pobierz 100 μL zawiesina bakteryjną do sterylnych strzykawek insulinowych (29G–30G). Oznacz każdą strzykawkę odpowiednim identyfikatorem myszy.
  2. Przygotuj strzykawki kontrolne zawierające 100 μL sterylnego PBS.
    UWAGA: Przygotuj strzykawki bezpośrednio przed wstrzyknięciem.
  3. Każdą mysz załóż w pas, umożliwiając dostęp do ogona.
    UWAGA: Nie stosuj znieczulenia do zastrzyków do żyły ogonowej.
  4. Przetrzyj ogon 70% etanolem i pozwól wyschnąć na powietrzu.
  5. Wizualizuj boczne żyły ogonowe przy odpowiednim oświetleniu.
    WSKAZÓWKA: Ogrzej ogon, jeśli żyły nie są widoczne.
  6. Trzymaj dalszą trzecią część ogona delikatnie napiętą. Wprowadź fazę igły pod niewielkim kątem (10–15°) do żyły bocznej.
  7. Wstrzyknij 100 μL powoli przez 5–10 sekund. Wyjmij igłę i delikatnie naciskaj sterylną gazą.
    KLUCZOWY KROK: Potwierdzenie skutecznego wstrzyknięcia dożylnego bez oporu, obrzęku lub blanszowania.
  8. Wróć mysz do klatki na poduszce grzewczej. Obserwuj przez 5–10 minut pod kątem oznak niepokoju. Zapisz wszelkie niepożądane zdarzenia.
  9. Wykonuj zastrzyki wszystkim myszom w losowej kolejności w ciągu 2 godzin.

4. Monitorowanie poziomu glukozy we krwi i definicja cukrzycy

  1. Rozpocznij monitorowanie glukozy 7 dni po wstrzyknięciu. Mierz poziom glukozy we krwi 2 razy w tygodniu aż do zakończenia badania.
  2. Usuń jedzenie na 2 godziny przed pomiarem, zachowując dostęp do wody.
  3. Unieruchom mysz. Oczyść końcówkę ogona 70% etanolem.
  4. Naciąć ogon sterylnym lancetem lub igłą. Usuń pierwszą kroplę krwi. Zbierz drugą kroplę na pasek testowy glukometru. Zapisuj wartości glukozy we krwi wraz z identyfikatorem myszy i datą.
    UWAGA: Użyj nowej strony, jeśli końcówka ogona zostanie zabliznowana.
  5. Zdefiniuj cukrzycę jako poziom glukozy we krwi ≥ 250 mg/dL na dwóch kolejnych pomiarach oddzielonych co najmniej 24 godzinami.
  6. Uśpienie myszy wykazujących poważne objawy choroby zgodnie z wytycznymi instytucjonalnymi.

5. Pobieranie, utrwalanie i przetwarzanie trzustki

  1. Uśpiaj myszy zgodnie z zatwierdzonymi protokołami. Ostrożnie rozciń i zbierz trzustkę, w tym wszystkie płaty.
  2. Włóż trzustkę do 10% neutralnej buforowanej formaliny w stosunku utrwalacza do objętości tkanki co najmniej 10:1. Ustaw na 72 godziny w temperaturze pokojowej.
    UWAGA: Obchodz się formaliną w chemicznym okapie z odpowiednią ochroną środków ochrony osobistej.
  3. Po utrwaleniu przenieś tkanki do 70% etanolu.
  4. Złożyć stałe tkanki do zakładu histologicznego w celu osadzenia parafiny, przekrojowania o grubości 5 μm na dodatnio naładowanych preparatach, barwienia hematoksyliny i eozyny oraz immunohistochemii insuliny.
    UWAGA: Prosimy o odcinki bez barwienia, jeśli planowane są dalsze analizy w dalszej fazie rzeki.

6. Histologiczna ocena i kwantyfikacja powierzchni wysepek

  1. Uzyskuj obrazy całych preparatów za pomocą skanera lub mikroskopu.
  2. Otwieraj obrazy w wskazanym oprogramowaniu. Ręcznie adnotuj wyspy za pomocą odpowiednich narzędzi.
  3. Mierz powierzchnię wysew za pomocą narzędzi do adnotacji.
  4. Eksportuj pomiary do analizy.
    UWAGA: Całkowita powierzchnia wysepek obejmuje komórki endokrynne i przeciekające.

7. Różne analizy dalsze

  1. Oblicz średnią powierzchnię wysepki na mysz. Porównaj grupy za pomocą odpowiednich testów statystycznych.
  2. Opcjonalnie: Analiza proteomiki przestrzennej (patrz Tabela Uzupełniająca S1)
    1. Przygotuj sekcje FFPE na slajdach o dodatnim ładunku. Prześlij próbki do dostawcy usług proteomiki przestrzennej. Dostarcz specyfikację panelu przeciwciał.
  3. Opcjonalnie: Sekwencjonowanie RNA pojedynczych komórek (patrz Tabela Uzupełniająca S2)
    1. Zbieraj trzustkę i umieść ją w zimnym podłożu.
    2. Złóż próbki do zakładu genomiki w celu izolacji pojedynczych komórek i przygotowania bibliotecznego.
    3. Przetwarzaj dane sekwencjonowania przy użyciu odpowiednich potoków (np. Cell Ranger, Seurat).
    4. Dane dotyczące sekwencjonowania depozytów w publicznym repozytorium przed publikacją.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Chociaż szerszy protokół opisany w niniejszym manuskrypcie został od tego czasu zoptymalizowany do postaci schematu zapobiegawczego z jedną dawką, wyniki pilotażowe są tutaj przedstawione wyłącznie w celu zilustrowania oczekiwanych odczytów histologicznych i glikemicznych, które można osiągnąć przy zastosowaniu tego przepływu pracy.

Ogólny kontekst choroby oraz różnice między trzustką zdrową a trzustką w cukrzycy typu 1 przedstawiono schematycznie na Rysunku 1A. A...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Kluczowym ograniczeniem reprezentatywnych wyników przedstawionych tutaj jest fakt, że dane przedstawione jako ilustrujące punkty końcowe analityczne (Rysunek 3) pochodziły z wczesnej kohorty pilotażowej stosującej schemat dwóch dawek. Ponieważ protokół ten został udoskonalony do profilaktyki pojedynczej dawki, przyszłe, większe badania wykorzystujące opisany tutaj zoptymalizowany protokół jednodawkowy będą potrzebne do ustalenia formalnej skuteczności statystycznej.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy nie mają konkurujących ze sobą interesów finansowych.

Podziękowania

Prace te były wspierane przez granty National Institutes of Health R01CA273002 i R21AI167793 dla J.S. i P.d.F. oraz przez NIH Institutional National Research Service Award (T32) wspierającą K.D. Dziękujemy Texas A&M University Health Science Center za wsparcie instytucjonalne. Dziękujemy dr Yava Jones-Hall za oceny z zaślepionej histopatologii, laboratorium Song za wsparcie pilotażowe i techniczne dla zwierząt, Texas A&M Institute for Genome Sciences & Society (TIGSS) Molecular Genomics Workspace za przygotowanie i sekwencjonowanie biblioteki RNA-seq pojedynczych komórek, TIGSS Bioinformatics Core do analizy i interpretacji danych oraz Akoya Biosciences za usługi proteomiki przestrzennej. Dziękujemy za wsparcie Texas A&M Institute for Genome Sciences & Society (TIGSS) Bioinformatics Core (TBC) za ich pomoc.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
10% neutralna formalina buforowana (NBF)VWR10790-714
10x Genomics Chromium ControllerMiejsce pracy TIGSS Molecular Genomics, Texas A& Uniwersytet M
70% etanoluVWR89125-164
Szkiełka mikroskopowe do kleju dla FFPELeica Biosystems3800084E
Panel przeciwciał FFPE myszy Akoya (~25 markerów)Akoya Biosciences[ID panelu/panel niestandardowy]
Bioanalizator lub TapeStation z zestawami DNA HSMiejsce pracy TIGSS Molecular Genomics, Texas A& M/ Agilent
BMΔ vjbR::szczep bakteryjny tnaAMateriał laboratoryjny (Song/de Figueiredo labs)
Potok Cell Ranger10x Genomicsv7.1
ChloramfenikolResearch Products International56-75-7
Chromium Next GEM Single Cell 3' kit10x Genomics przez rdzeń TIGSS
Kolagenaza z Clostridium histolyticumMillipore SigmaC7657-100MG
Barwienie jądrowe DAPIAkoya Biosciences[Usługa świadczona]
Osadzanie FFPE, H& Barwienie E, insulina IHC i skanowanie szkiełkoweLaboratorium Histologiczne VMBS, Texas A& Uniwersytet Mhttps://vetmed.tamu.edu/vmbs-histology-lab/
Paski testowe glukozyEKF Diagnostyka / Fisher Scientific22-022-649
Paski testowe glukozy (alternatywne)Opieka nad Cukrzycą w AscensiaPaski testowe CONTOUR NEXT
Glicerol (masowo, 500 mL)Millipore SigmaG7893-500ML
Glicerol (sterylny, 100 mL)Sigma Aldrich (G Biosciences)G5516-100ml
GraphPad Prism (lub pakiet R survival)Oprogramowanie GraphPad / Rv10.2
Ręczny glukometrOpieka nad Cukrzycą w AscensiaKONTUR NASTĘPNY EZ
Sekwencer Illumina NextSeq 2000Miejsce pracy TIGSS Molecular Genomics, Texas A& Uniwersytet M
Strzykawki insulinowe, 29– 30 G (U-100)VWR10002-702
Lancety do testów na cukrzycęBecton, Dickinson and Company (BD)366594
Liberase TL Stopień BadawczyMillipore Sigma5401020001
Niskotemperaturowe podkładki grzewczeProwadzenie naukiRWD-69025
Zestaw do izolacji jąder Miltenyiego/komórekMiejsce pracy TIGSS Molecular Genomics, Texas A& M/ Miltenyi Biotec
Podkładka grzewcza do myszy (alternatywna)Kent ScientificRightTemp
Zabezpieczenia dla myszyBraintree ScientificTV-RED 150-STD
Myszy NOD/ShiLtJ (samica, 5 tygodni)Laboratorium JacksonaSzczep #001976
Zestaw komórek przepływowych P2 XLEAP 100-cyklowyIllumina przez rdzeń TIGSS
Pozyskiwanie danych i obsługa kontroli jakości PhenoCyclerAkoya Biosciences
Odczynniki i workflow obrazowania PhenoCyclerAkoya Biosciences[Usługa świadczona]
System PhenoCycler-FusionAkoya Biosciences
Sól fizjologiczna z buforem fosforanowym (PBS), 1xThermo Fisher10010023
Inhibitor RNazy ProtectorMillipore Sigma3335402001
Fluorometr Qubit i zestaw dsDNA HS Test KitMiejsce pracy TIGSS Molecular Genomics, Texas A& M/ Thermo Fisher
QuPathOpen sourcev0.4.3
Oprogramowanie RProjekt Rv4.0+
Seurat (pakiet R)Laboratorium Satija / CRANv4.3
StarDistOpen sourcev0.8.3
Trypton Soy Agar (TSA)VWRCA90002-706

Bibliografia

  1. Bender, C., et al. A phase 2 randomized trial with autologous polyclonal expanded regulatory T cells in children with new-onset type 1 diabetes. Sci Transl Med. 16, eadn2404 (2024).
  2. Yang, S. J., et al. Pancreatic islet-specific engineered Tregs exhibit robust antigen-specific and bystander immune suppression in type 1 diabetes models. Sci Transl Med. 14, eabn1716 (2022).
  3. . NOD/ShiLtJ (001976) datasheet Available from: https://www.jax.org/strain/001976 (2026)
  4. Raeber, M. E., et al. Interleukin-2 immunotherapy reveals human regulatory T cell subsets with distinct functional and tissue-homing characteristics. Immunity. 57 (9), 2232-2250.e10 (2024).
  5. Efe, O., et al. A humanized IL-2 mutein expands Tregs and prolongs transplant survival in preclinical models. J Clin Invest. 134 (5), e173107 (2024).
  6. Haque, M., et al. Stem cell-derived tissue-associated regulatory T cells suppress the activity of pathogenic cells in autoimmune diabetes. JCI Insight. 4 (7), e126471 (2019).
  7. Su, W., et al. Protein prenylation drives discrete signaling programs for the differentiation and maintenance of effector Treg cells. Cell Metab. 32 (6), 996-1011.e17 (2020).
  8. Hassan, M., Elzallat, M., Mohammed, D. M., Balata, M., El-Maadawy, W. H. Exploiting regulatory T cells (Tregs): cutting-edge therapy for autoimmune diseases. Int Immunopharmacol. 155, 114624 (2025).
  9. Chen, X., et al. Differential roles of human CD4+ and CD8+ regulatory T cells in controlling self-reactive immune responses. Nat Immunol. 26 (2), 230-239 (2025).
  10. Huang, Q., Zhu, J. Regulatory T cell-based therapy in type 1 diabetes: latest breakthroughs and evidence. Int Immunopharmacol. 140, 112724 (2024).
  11. Passerini, L., Forlani, A., Gregori, S. Advances in regulatory cell therapy for type 1 diabetes: emerging strategies and future directions. Eur J Immunol. 55 (5), e202451722 (2025).
  12. Singh, N. P., et al. Dietary indoles suppress delayed-type hypersensitivity by inducing a switch from proinflammatory Th17 cells to anti-inflammatory regulatory T cells through regulation of microRNA. J Immunol. 196 (3), 1108-1122 (2016).
  13. Krishnan, S., et al. Gut microbiota-derived tryptophan metabolites modulate inflammatory response in hepatocytes and macrophages. Cell Rep. 23 (4), 1099-1111 (2018).
  14. Das, J. K., et al. A metabolically engineered bacterium controls autoimmunity and inflammation by remodeling the pro-inflammatory microenvironment. Gut Microbes. 14 (1), 2143222 (2022).
  15. Plocica, J., et al. Engineering live attenuated vaccines: old dogs learning new tricks. J Transl Autoimmun. 6, 100198 (2023).
  16. Bender, E. Could a bacteria-stuffed pill cure autoimmune diseases?. Nature. 577, S12-S13 (2020).
  17. Chen, G., Wang, C., Wan, Q., Dong, F., Radstake, T. Editorial: next generation therapeutic modality to cure autoimmune diseases. Front Immunol. 16, 1631995 (2025).
  18. Adedokun, A. I., et al. Exploring immunotherapeutic strategies for bacterial and viral diseases. Explor Immunol. 5, 100320 (2025).
  19. Bankhead, P., et al. QuPath: open source software for digital pathology image analysis. Sci Rep. 7 (1), 16878 (2017).
  20. Satija, R., Farrell, J. A., Gennert, D., Schier, A. F., Regev, A. Spatial reconstruction of single-cell gene expression data. Nat Biotechnol. 33 (5), 495-502 (2015).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Brucella produkuj ca indolwstrzykni cie do ylnesekwencjonowanie pojedynczych kom rekproteomika przestrzennaimmunohistochemia insulinyterapia bakteryjnaautoimmunologiczna cukrzyca
Film wkrótce dostępny

Powiązane artykuły