Celem niniejszego badania jest wyjaśnienie związku między polimorfizmem rs2910164 w miR-146a a podatnością na nieżyt nosa (AR). Niższe poziomy miR-146a w osoczu oraz genotyp GG rs2910164 wiążą się z podwyższonym ryzykiem wystąpienia AR, nasilonymi odpowiedziami zapalnymi oraz cięższymi objawami klinicznymi u pacjentów z AR.
Artykuł badawczy
Badanie związku polimorfizmu rs2910164 w genie mir-146a z podatnością na nieżyt nosa pochodzenia alergicznego
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Nieżyt nosa o podłożu alergicznym (AR) nie stanowi zagrożenia dla życia pacjentów, lecz poważnie upośledza ich jakość życia. MikroRNA-146a (miR-146a) ma kluczowe znaczenie dla regulacji odporności i odpowiedzi zapalnej; jednak związek między polimorfizmem rs2910164 w miR-146a a podatnością na AR pozostaje nie do końca poznany. Niniejsze badanie kliniczne z grupą kontrolną zostało zaprojektowane w celu zbadania wpływu polimorfizmu miR-146a rs2910164 na podatność na AR. W badaniu wzięło udział łącznie 180 ochotników bez AR oraz 21 pacjentów z AR. Ekspresję miR-146a w osoczu zmierzono za pomocą RT-qPCR; genotyp rs2910164 wykryto metodą TaqMan-qPCR. Do oznaczania poziomów IgE, IL-4, IL-6 i IL-10 w surowicy wykorzystano test ELISA. Analiza korelacji Pearsona posłużyła do oceny korelacji liniowych między ekspresją miR-146a a wynikiem TNSS, wynikiem RQLQ oraz stężeniem czynników w surowicy. Czynniki ryzyka AR zidentyfikowano za pomocą regresji logistycznej. Genotyp GG oraz allel G polimorfizmu miR-146a rs2910164 występowały istotnie częściej u pacjentów z AR niż w zdrowej grupie kontrolnej. Poziom miR-146a w osoczu był obniżony u pacjentów z AR. Poziom miR-146a w osoczu był niższy u pacjentów z AR posiadających genotyp GG, co wiązało się z bardziej aktywnymi odpowiedziami alergicznymi i zapalnymi. Ekspresja miR-146a była ściśle powiązana z objawami alergicznymi i nasileniem manifestacji klinicznych. Regresja logistyczna wskazuje, że poziomy IgE i IL-4 w surowicy były niezależnymi czynnikami ryzyka AR, natomiast IL-10 i ekspresja miR-146a były niezależnymi czynnikami ochronnymi. U pacjentów z AR obserwuje się niskie poziomy miR-146a w osoczu, a genotyp GG polimorfizmu miR-146a rs2910164 zwiększa podatność na AR.
Wprowadzenie
Katar sienny (AR) jest zapalnym schorzeniem błony śluzowej nosa o charakterze nieinfekcyjnym, wywoływanym przez alergeny. Typowe objawy kliniczne AR obejmują świąd nosa, zatkanie nosa, wodnisty wyciek z nosa oraz częste kichanie1. W cięższych przypadkach pacjenci mogą również odczuwać upośledzenie zmysłu węchu, a choroba może wpływać nawet na jakość snu. Dane epidemiologiczne wskazują, że globalna zapadalność na AR rośnie z roku na rok, osiągając poziom od 10% do 25%2. Chociaż AR nie zagraża życiu pacjentów, poważnie zaburza sen, naukę i pracę, znacząco obniża jakość życia oraz stanowi duże obciążenie ekonomiczne dla osób chorych i społeczeństwa3. Badania potwierdziły, że AR stanowi czynnik ryzyka rozwoju astmy, a w miarę postępu choroby u pacjentów częściej pojawia się zapalenie zatok lub polipy nosa, co dodatkowo zwiększa obciążenie chorobą4,5. Dlatego profilaktyka i kontrola AR stają się kluczowym zadaniem w dziedzinie chorób układu oddechowego. Jednak patogeneza AR nie została jeszcze w pełni wyjaśniona. Pogłębiona analiza mechanizmów patofizjologicznych AR oraz opracowanie ukierunkowanych strategii terapeutycznych mają kluczowe znaczenie. Są to aktualne problemy naukowe, które wymagają pilnego rozwiązania.
Wystąpienie AR jest związane z czynnikami środowiskowymi i genetycznymi6. Obecne badania wskazują zazwyczaj, że synergistyczny efekt indywidualnej podatności genetycznej oraz środowiska ekspozycji na alergeny jest głównym czynnikiem sprawczym rozwoju AR. Zespół Brozek potwierdził ponadto, że oddziaływanie między genetyczną podatnością organizmu a ekspozycją środowiskową jest fundamentalną przyczyną AR2. W badaniach nad mechanizmami genetycznymi AR polimorfizm genetyczny stopniowo staje się przedmiotem szczególnej uwagi naukowców. Polimorfizmy pojedynczego nukleotydu (SNPs), jako powszechna forma polimorfizmu genetycznego, są główną przyczyną zmienności informacji genetycznej w organizmach7. Narastające dowody wskazują, że genotyp TT w locus rs704343 genu IL-3 może służyć jako potencjalny cel profilaktyki i leczenia AR8. Dodatkowo genotyp TT w obrębie miejsca C-159T promotora CD14 działa jako marker prognostyczny ryzyka AR9. Wskazuje to, że kluczowe SNPs w genach mogą służyć jako istotne cele molekularne do oceny ryzyka AR, wczesnego ostrzegania oraz realizacji precyzyjnej profilaktyki i leczenia. Dostarcza to kluczowych wskazówek do głębszego zrozumienia mechanizmu podatności genetycznej na AR.
Liczne badania wykazały, że nieprawidłowa ekspresja mikroRNA (miRNA) jest jednym z kluczowych czynników napędzających występowanie i rozwój szerokiego spektrum chorób10. miRNA charakteryzują się stabilnością w płynach ustrojowych, co czyni je wysoce czułymi markerami molekularnymi w diagnostyce chorób. miR-146a jest rodzajem niekodującej cząsteczki RNA o rozległych funkcjach biologicznych1. Polimorfizm rs2910164 znajduje się w obrębie regionu pętli (stem-loop) sekwencji prekursora miR-146a. Zmienność w tym miejscu może wpływać na wydajność przetwarzania i dojrzewania pre-miR-146a, zmieniając tym samym poziom ekspresji dojrzałego miR-146a i wpływając na kaskadowe odpowiedzi immunologiczne i zapalne. Wcześniejsze badania potwierdziły, że nadekspresja miR-146a może znacząco zmniejszyć nadreaktywność dróg oddechowych w mysich modelach astmy oraz hamować aktywację uczulonych limfocytów12. Poprzez celowanie i hamowanie aktywności receptora epidermalnego czynnika wzrostu (EGFR), miR-146a może skutecznie łagodzić uszkodzenia zapalne w zapaleniu zatok13. Co więcej, nadekspresja miR-146a może również łagodzić objawy patologiczne w mysim modelu AR poprzez blokowanie szlaku sygnalizacyjnego receptora Toll-podobnego 4 (TLR4)14. Obserwacje te podkreślają kluczową rolę miR-146a w modulowaniu chorób układu oddechowego.
Istniejące dowody z badań nad polimorfizmem genetycznym wskazują, że częstość występowania allelu G w locus miR-146a rs2910164 jest ściśle powiązana z nadreaktywnością dróg oddechowych15. Ten SNP jest również uważany za potencjalny biomarker ryzyka astmy w populacji koreańskiej15. Ponadto zespół Jimenez-Morales wykazał, że genotyp CC w locus miR-146a rs2910164 zapewnia ochronę przed astmą16. Jednakże nie przeprowadzono żadnych istotnych badań raportujących związek między polimorfizmem miR-146a rs2910164 a podatnością na AR. Dlatego celem niniejszego badania jest zweryfikowanie wpływu polimorfizmu miR-146a rs2910164 na AR, co dostarczy nowej podstawy teoretycznej dla patogenezy, diagnostyki klinicznej i leczenia AR.
Protokół
Oświadczenie etyczne:
Wszyscy uczestnicy zostali w pełni poinformowani o celu naszego eksperymentu i podpisali formularz świadomej zgody. Badanie to zostało zatwierdzone przez komisję etyki Pierwszego Szpitala Afiliowanego w Longyan Uniwersytetu Medycznego w Fujian (numer zatwierdzenia LYREC2023-k07-01). Wszystkie procedury zostały przeprowadzone zgodnie z odpowiednimi wytycznymi, przepisami oraz Deklaracją Helsińską.
Rekrutacja uczestników, kryteria kwalifikacji i pobieranie próbek
W okresie od stycznia 2023 do maja 2025 roku z poradni otolaryngologicznej Pierwszego Szpitala Filiacyjnego w Longyan Uniwersytetu Medycznego w Fujian zrekrutowano łącznie 211 osób z rozpoznaniem AR oraz 180 zdrowych uczestników (bez AR). Kryteria diagnostyczne AR przyjęto z wytycznych Chińskiego Towarzystwa Alergologicznego dotyczących diagnozowania i leczenia alergicznego nieżytu nosa17. Od pacjentów wymagano występowania co najmniej dwóch objawów klinicznych AR, takich jak świąd nosa, kichanie, zatkanie nosa lub wyciek z nosa. Dodatkowo badanie błony śluzowej nosa musiało wykazać bladość i obrzęk, a wynik testu punktowego (SPT) lub wynik badania poziomu IgE w surowicy musiał być dodatni. Test SPT był wykonywany przez wykwalifikowany personel w gabinecie testowania alergenów w trybie ambulatoryjnym, aby zapewnić dokładność i spójność wyników. Wszyscy pacjenci z AR zostali poddani ocenie za pomocą kwestionariusza jakości życia w alergicznym nieżycie nosa i zapaleniu spojówek (RQLQ) oraz całkowitej oceny objawów nosa (TNSS) z pomocą personelu medycznego, a uzyskane wyniki zapisano do dalszej analizy.
Zdrowych ochotników poddawanych rutynowym badaniom fizykalnym w szpitalu zrekrutowano do grupy kontrolnej (bez AR). Kryteria kwalifikacji obejmowały brak osobistej lub rodzinnej historii AR, brak astmy lub innych chorób alergicznych, brak przewlekłego zapalenia zatok lub innych chorób zapalnych jamy nosowej oraz brak infekcji dróg oddechowych w ciągu ostatniego miesiąca. Dodatkowo z badania wykluczono osoby z historią poważnych chorób serca, wątroby, płuc lub nerek, a także z obecnością jakichkolwiek nowotworów złośliwych.
Pobrano próbki krwi żylnej obwodowej od dwóch grup ochotników. Część krwi żylnej z antykoagulantem wykorzystano do ekstrakcji DNA oraz izolacji RNA z osocza. Inna część krwi żylnej została odwirowana w celu uzyskania surowicy, która posłużyła do oznaczania czynników związanych z surowicą (immunoglobuliny E (IgE), interleukiny-4 (IL-4), IL-6 oraz IL-10).
Ekstrakcja DNA:
DNA z 20 µL próbek krwi żylnej obwodowej wyekstrahowano przy użyciu zestawu do ekstrakcji genomowego DNA z krwi pełnej (patrz Tabela materiałów). Próbki krwi pobrano do probówek z heparyną litową, a następnie podzielono na aliquoty i zamrożono w temperaturze -20 °C do przechowywania. Szczegółowe procedury operacyjne powinny być ściśle zgodne z instrukcją dołączoną do zestawu. Na koniec do elucji DNA wykorzystano 10 µL buforu elucyjnego. Czystość wyekstrahowanego DNA określono za pomocą analizatora kwasów nukleinowych/białek (spektrofotometru) (stosunek OD₂₆₀/OD₂₈₀ wynosił od 1,8 do 2,0). Próbki DNA po analizie przechowywano w temperaturze -20 °C do późniejszego wykorzystania w kolejnych badaniach genotypowania.
Wykrywanie genotypu
Do wykrywania rozkładu genotypów miR-146a rs2910164 wykorzystano zestaw do genotypowania SNP TaqMan. Informacje o zestawie zostały wprowadzone do listy materiałów zużywalnych. Całkowita objętość reakcji PCR wynosiła 10 µL i zawierała 5 µL Master Mix, 0,5 µL mieszaniny starterów i sondy typującej, 10 ng matrycowego DNA oraz wodę wolną od RNaz. Amplifikację DNA przeprowadzono za pomocą instrumentu do ilościowej fluorescencyjnej PCR w czasie rzeczywistym Roche LightCycler 480 II. Warunki reakcji: przeddenaturacja w 95 °C przez 10 min; 40 cykli (95 °C przez 15 sekund, 60 °C przez 1 min), a odczyt fluorescencji FAM/VIC odbywał się w 60 °C. Po zakończeniu amplifikacji zebrane sygnały podwójnej fluorescencji FAM/VIC przeanalizowano za pomocą oprogramowania LightCycler 480, a dane genotypowe poddano obróbce statystycznej. Pojedynczy sygnał FAM oznacza genotyp homozygotyczny, pojedynczy sygnał VIC oznacza drugi genotyp homozygotyczny, a obecność obu sygnałów wskazuje na genotyp heterozygotyczny. Próbki z nieprawidłowymi sygnałami lub niespójnymi wynikami po powtórzeniu zostaną przebadane ponownie. Każdy eksperyment przeprowadzono z kontrolą bez matrycy oraz kontrolą dodatnią w celu kontroli jakości. Wszystkie próbki poddano trzem powtórzeniom technicznym.
RT-qPCR
Przeprowadzono całkowitą ekstrakcję miRNA z osocza z 100 µL osocza przy użyciu dedykowanego zestawu do ekstrakcji miRNA. Informacje o zestawie zostały wprowadzone do listy materiałów zużywalnych. Stężenie RNA określono za pomocą spektrofotometru. OD₂₆₀/OD₂₈₀ stosunek próbek wyizolowanego, wysokiej jakości miRNA mieścił się w zakresie od 1,8 do 2,0. Do odwrotnej transkrypcji w celu syntezy cDNA wykorzystano 20 ng RNA, a procedurę reakcji przeprowadzono zgodnie ze standardową instrukcją dołączoną do zestawu. Odwrotną transkrypcję przeprowadzono w całkowitej objętości 20 µL, w tym inkubację w temperaturze 42 °C przez 60 min, a następnie inaktywację w temperaturze 85 °C przez 5 min. Reakcję qPCR przygotowano zgodnie z ustalonym protokołem, przy całkowitej objętości wynoszącej 20 µLMieszaninę reakcyjną przygotowano w następujący sposób: 10 µL mieszaniny reakcyjnej do qPCR, 0.4 µL startera forwardowego, 0.4 µL starteru odwrotnego, 1 µL matrycy cDNA oraz 8.2 µL wody wolnej od RNaz. Wykorzystano specyficzne startery dla miR-146a oraz wewnętrznego genu referencyjnego U6. Amplifikację przeprowadzono przy użyciu systemu do ilościowej fluorescencyjnej PCR w czasie rzeczywistym Roche LightCycler 480 II. Warunki cyklicznej obróbki termicznej qPCR były następujące: 95 °C do wstępnej denaturacji przez 30 s, a następnie 40 cykli denaturacji w 95 °C przez 5 s, a następnie przyłączanie i elongację w temperaturze 60 °C przez 30 s. Wszystkie próbki analizowano w trzech powtórzeniach technicznych. Dane eksperymentalne analizowano przy użyciu oprogramowania LightCycler 480. Wykorzystując U6 jako referencję wewnętrzną w celu skorygowania zmienności międzypróbkowej, najpierw obliczono ΔCt (wartość Ct dla miR-146a - wartość Ct dla U6), a następnie obliczyć ΔΔCt (próg ΔWartość Ct grupy doświadczalnej – the ΔCt grupy kontrolnej), a ostateczny względny poziom ekspresji miR-146a uzyskano za pomocą 2⁻ΔΔCt.
ELISA
Poziomy IgE, IL-4, IL-6 i IL-10 w surowicy oznaczono za pomocą zestawów ELISA. Procedury eksperymentalne przeprowadzono zgodnie z instrukcją obsługi. Poszczególne kroki przebiegały następująco: najpierw rozcieńczono stężony roztwór płuczący, a standardy rozcieńczono gradientowo w celu przygotowania roztworów roboczych do krzywej wzorcowej. Następnie dołków dodano 50 µL rozcieńczalnika, roztworu standardu oraz badanej próbki, po czym inkubowano w temperaturze 37 °C przez 60 min. Po inkubacji dołki trzykrotnie przemyto buforem płuczącym. Następnie dodano 50 µL roboczego roztworu przeciwciała sprzężonego z enzymem i inkubowano płytki w temperaturze 37 °C przez 30 min. Po zakończeniu inkubacji odlano ciecz i ponownie przemyto dołki, a następnie dodano roztwór chromogenny i inkubowano przez 15 min w temperaturze 37 °C w ciemności. Po dodaniu roztworu stopującego zmierzono absorbancję przy 450 nm za pomocą czytnika mikropłytek. Stężenia w próbkach obliczono na podstawie krzywej wzorcowej. Każdą próbkę badano trzykrotnie. Za ważne uznano dane z współczynnikiem zmienności mniejszym niż 10%. W celu kontroli jakości podczas eksperymentu wyznaczono dołki ślepe i kontrolne. Zakres detekcji oraz czułość zestawu były zgodne z wytycznymi określonymi w instrukcji producenta.
Statystyka danych
Dane eksperymentalne analizowano przy użyciu oprogramowania SPSS oraz GraphPad Prism 9. Dane przedstawiono jako średnią ± odchylenie standardowe (mean ± SD). Do oceny normalności rozkładu zmiennych ciągłych zastosowano test Shapiro-Wilka, a do oceny jednorodności wariancji – test Levene’a. Porównanie zmiennych ciągłych między dwiema grupami przeprowadzono za pomocą testu t dla prób niezależnych. W przypadku porównań wielu grup zastosowano jednoczynnikową analizę wariancji (One-way ANOVA) z następującym po niej testem post-hoc Tukeya, natomiast dwuczynnikową analizę wariancji (Two-way ANOVA) wykorzystano do oceny głównych efektów dwóch niezależnych czynników oraz ich efektu interakcji. Wartości odstające zidentyfikowano i wykluczono w oparciu o regułę 3 odchyleń standardowych. W badaniu nie stwierdzono brakujących danych. Do analizy skuteczności diagnostycznej miR-146a w przypadku AR wykorzystano krzywą charakterystyki operacyjnej odbiornika (ROC). Odpowiednie parametry ROC oraz 95% przedziały ufności obliczono przy użyciu wbudowanych algorytmów statystycznych. Do pomiaru korelacji liniowej między ekspresją miR-146a a poziomami czynników związanych z surowicą zastosowano analizę korelacji Pearsona. W celu wyłonienia czynników ryzyka AR przeprowadzono jednowymiarową i wielowymiarową analizę regresji logistycznej. Zmienne z p < 0,05 w analizie jednowymiarowej włączono do wielowymiarowego modelu regresji logistycznej. Wartość p < 0,05 uznano za statystycznie istotną.
Wyniki
Charakterystyka uczestników i rozkład genotypów
Przeprowadzono analizę statystyczną klinicznych danych wyjściowych w dwóch grupach badawczych. Wyniki wykazały istotne różnice w surowiczych poziomach IgE, IL-4, IL-6 oraz IL-10. W porównaniu z grupą ochotników bez AR, w grupie pacjentów z AR stwierdzono zwiększone stężenie surowiczego IgE, IL-4 i IL-6, natomiast poziom IL-10 był obniżony (Tabela 1). Rozkład genotypów miR-146a rs2910164 określono metodą TaqMan-qPCR. Wyniki analizy wykazały, że genotyp GG (χ2=7,018, OR (95% CI) = 0,471 (0,269-0,825), p=0,08) oraz allel G (χ2=7,474, OR (95% CI) = 0,637 (0,506-0,894), p=0,06) w obrębie rs2910164 występowały częściej w grupie pacjentów z AR niż w grupie bez AR. Rozkład genotypów w locus rs2910164 był zgodny z równowagą Hardy’ego-Weinberga (pHWE = 0,191) (Tabela 2).
Analiza ekspresji miR-146a w osoczu
Zmierzono poziom ekspresji miR-146a w osoczu w dwóch kohortach badawczych. U pacjentów z AR zaobserwowano wyraźny spadek poziomu miR-146a (Ryc. 1A). Analiza krzywej ROC wykazała, że miR-146a posiada dobrą skuteczność diagnostyczną w przypadku AR (Ryc. 1B). AUC wyniosło 0,891. Przy optymalnej wartości odcięcia 0,785 czułość wyniosła 83,89%, swoistość 79,4%, a indeks Youdena 0,63. Na podstawie genotypu rs2910164 miR-146a, obie grupy badanych podzielono odpowiednio na trzy podgrupy: GG, GC i CC. Porównano różnice w ekspresji miR-146a w każdej z podgrup. Wyniki statystyczne wykazały, że w grupie bez AR ekspresja miR-146a nie wykazywała istotnych statystycznie różnic pomiędzy poszczególnymi podgrupami genotypowymi (Ryc. 1C); natomiast w grupie AR poziom ekspresji miR-146a w osoczu w podgrupie o genotypie GG był znacząco niższy niż w podgrupach o genotypie GC i CC (Ryc. 1D). Powyższe dane wskazują, że ekspresja miR-146a w osoczu u pacjentów z AR będących nosicielami genotypu GG rs2910164 jest obniżona.
Analiza cytokin w surowicy i korelacja z ekspresją miR-146a
Następnie przeprowadzono analizę statystyczną poziomów IgE, IL-4, IL-6 i IL-10 w surowicy w różnych podgrupach genotypowych badanych osób. Wyniki statystyczne nie wykazały istotnych różnic w poziomach surowiczych IgE, IL-4, IL-6 i IL-10 pomiędzy różnymi podgrupami genotypowymi (Rycina 2A-D); w grupie AR poziomy IgE, IL-4 i IL-6 w surowicy u pacjentów z genotypem GG były istotnie wyższe niż u pacjentów z genotypami GC i CC, natomiast poziom IL-10 w surowicy był niższy (Rycina 2A-D). W celu zbadania korelacji liniowych pomiędzy ekspresją miR-146a w osoczu a wynikiem TNSS, wynikiem RQLQ oraz poziomami IgE, IL-4, IL-6 i IL-10 w surowicy zastosowano analizę korelacji Pearsona. Wyniki wskazały, że ekspresja miR-146a była istotnie skorelowana ujemnie z wynikiem TNSS, wynikiem RQLQ oraz poziomami IgE, IL-4 i IL-6 w surowicy, natomiast była skorelowana dodatnio z poziomem IL-10 w surowicy (Tabela 3). Wyniki te sugerują, że poziom ekspresji miR-146a jest ściśle powiązany z ciężkością AR, a także z nasileniem reakcji alergicznych i stanu zapalnego.
Analiza czynników ryzyka dla alergicznego nieżytu nosa
Do analizy czynników ryzyka AR zastosowano jednowymiarową regresję logistyczną; wyniki wykazały, że IgE (OR = 1,719, 95% CI = 1,151-2,568, p = 0,08), IL-4 (OR = 1,602, 95% CI = 1,073-2,392, p = 0,021), IL-6 (OR = 1,56, 95% CI = 1,048-2,341, p = 0,029), IL-10 (OR = 0,649, 95% CI = 0,435-0,968, p = 0,034), a ekspresja miR-146a (OR = 0,149, 95% CI = 0,096–0,23, p < 0,01) miało wpływ na występowanie AR. Po skontrolowaniu czynników zakłócających za pomocą wieloczynnikowej analizy regresji logistycznej wykazano statystycznie, że IgE (OR=1,724, 95% CI = 1,092-2,72, p = 0,019), IL-4 (OR = 1,943, 95% CI = 1,206-3,131, p = 0,06), IL-10 (OR = 0,479, 95% CI = 0,296-0,773, p = 0,03) oraz ekspresję miR-146a (OR = 0,148, 95% CI = 0,093-0,235, p < 0,01) stanowiły niezależne czynniki ryzyka AR (Tabela 4).
Rysunek 1: Schematyczny diagram przebiegu prac. Kliknij tutaj, aby wyświetlić większą wersję tego rysunku.
Rysunek 2. Ekspresja miR-146a w osoczu i wydajność diagnostyczna w AR.
(A) Względna ekspresja miR-146a w osoczu ochotników bez AR oraz pacjentów z AR. (B) Krzywa ROC oceniająca wydajność diagnostyczną miR-146a w osoczu w przypadku AR. (C) Ekspresja miR-146a w osoczu w podgrupach genotypów GG, GC i CC w grupie bez AR. (D) Ekspresja miR-146a w osoczu w podgrupach genotypów GG, GC i CC w grupie AR. Dane przedstawiono jako średnia ± SD. ***p < 0.01. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.
Rysunek 3. Stężenie cytokin w surowicy u osób z różnymi genotypami miR-146a rs2910164 w grupach bez AR oraz z AR.
Poziomy w surowicy (A) IgE, (B) IL-4, (C) IL-6 oraz (D) IL-10 w podgrupach genotypów GG, GC i CC w grupach bez AR oraz z AR. Dane przedstawiono jako średnia ± SD. *p < 0.05, **p < 0.01, ***p < 0.001; ns, brak istotności statystycznej. Kliknij tutaj, aby wyświetlić większą wersję tego rysunku.
| Informacje | nie-AR | rozszerzona rzeczywistość | pwartość p |
| Wiek (lata) | 42.37±12.43 | 41.81±11.86 | 0.316 |
| BMI (kg/m²2) | 23.72±2.36 | 23.58±2.71 | 0.302 |
| Płeć (samiec, n) | 87 | 97 | 0.641 |
| Palacz | 81 | 94 | 0.929 |
| IgE (IU/ml) | 36.17±10.44 | 116.52±24.38 | <0.001 |
| IL-4 (ng/L) | 1.76±0.61 | 18.74±4.62 | <0.001 |
| IL-6 (ng/L) | 1.29±0.57 | 9.63±3.79 | <0.001 |
| IL-10 (ng/L) | 3.26±0.68 | 1.74±0.73 | <0.001 |
| TNSS | / | 5.92±1.82 | |
| RQLQ | / | 2.43±1.16 | |
| Skróty: AR, alergiczny nieżyt nosa; BMI, wskaźnik masy ciała; IgE, immunoglobulina E; IL, interleukina; TNSS, całkowita skala objawów nosa; RQLQ, kwestionariusz jakości życia w zapaleniu nosa i spojówek; p<Wartość 0,05 wskazuje na istotność statystyczną. | |||
Tabela 1: Charakterystyka kliniczna uczestników badania.
Porównanie cech demograficznych, poziomów cytokin w surowicy oraz wyników oceny klinicznej pomiędzy grupą bez AR a grupą z AR. Skróty zdefiniowano w przypisie do tabeli.
| rs2910164 | non-AR (n=180) (%) | AR (n=21) (%) | Χ2 | pwartość p | OR (95% CI) |
| Model kodominacji | |||||
| GG | 31 (17.22%) | 57 (27.01%) | 1 | ||
| GC | 82 (45.56%) | 96 (45.50%) | 2.832 | 0.092 | 0.637 (0.376-1.079) |
| CC | 67 (37.22%) | 58 (27.49%) | 7.018 | 0.008 | 0.471 (0.269-0.825) |
| Model dominujący | |||||
| GG+ GC | 113 (62.78%) | 153 (72.51%) | 1 | ||
| CC | 67 (38.22%) | 58 (27.49%) | 4.232 | 0.04 | 0.639 (0.417-0.980) |
| Model recesywny | |||||
| GG | 31 (17.22%) | 57 (27.01%) | 1 | ||
| GC + CC | 149 (82.78%) | 154 (72.99%) | 5.34 | 0.021 | 0.562 (0.344-0.919) |
| Allele | |||||
| G | 144 (40.00%) | 210 (49.76%) | 1 | ||
| C | 216 (60.00%) | 212 (50.24%) | 7.474 | 0.006 | 0.637 (0.506-0.894) |
| pRównowaga Hardy’ego-Weinberga | 0.494 | 0.191 | |||
| Skróty: AR, alergiczny nieżyt nosa; OR, iloraz szans; pHWE>Wartość 0,05 sugeruje, że grupa jest zgodna z równowagą Hardy’ego-Weinberga. p < Wartość 0,05 wskazuje na istotność statystyczną. Uwaga: Genotyp GG został przyjęty jako grupa referencyjna (OR = 1,00) dla wszystkich modeli genetycznych. | |||||
Tabela 2: Związek między polimorfizmem rs2910164 miR-146a a alergicznym nieżytem nosa.
Rozkład genotypów i alleli rs2910164 w grupach bez AR i z AR analizowany przy użyciu kodominantnego, dominującego, recesywnego oraz allelicznego modelu genetycznego.
| Elementy | miR-146a | TNSS | RQLQ | IgE | IL-4 | IL-6 | IL-10 |
| Korelacja Pearsona | 1 | -0.742 | -0.736 | -0.806 | -0.756 | -0.727 | 0.757 |
| pwartość p | / | <0.001 | <0.001 | <0.001 | <0.001 | <0.001 | <0.001 |
| Skróty: TNSS, całkowita skala objawów nosa; RQLQ, kwestionariusz jakości życia w rhinokonjunctivitis; IgE, immunoglobulin E; IL, interleukina; p<Wartość 0,05 wskazuje na istotność statystyczną. | |||||||
Tabela 3: Korelacja ekspresji miR-146a w osoczu z parametrami klinicznymi i zapalnymi.
Analiza korelacji Pearsona ekspresji miR-146a w osoczu z wynikiem TNSS, wynikiem RQLQ, poziomem IgE w surowicy oraz poziomami cytokin u uczestników badania.
| Elementy | Jednowymiarowa analiza regresji | Wielowymiarowa analiza regresji | ||||
| OR | 95% CI | p-value | OR | 95% CI | p-value | |
| Wiek | 0.984 | 0.61-1.465 | 0.937 | |||
| BMI | 1.301 | 0.79-2.19 | 0.29 | |||
| Płeć | 1.09 | 0.738-1.638 | 0.641 | |||
| Palacz | 1.018 | 0.683-1.519 | 0.929 | |||
| IgE | 1.719 | 1.151-2.568 | 0.08 | 1.724 | 1.092-2.72 | 0.019 |
| IL-4 | 1.602 | 1.073-2.392 | 0.021 | 1.943 | 1.206-3.131 | 0.06 |
| IL-6 | 1.56 | 1.048-2.341 | 0.029 | 1.489 | 0.924-2.353 | 0.08 |
| IL-10 | 0.649 | 0.435-0.968 | 0.034 | 0.479 | 0.296-0.73 | 0.03 |
| Ekspresja miR-146a | 0.149 | 0.096-0.23 | <0.01 | 0.148 | 0.093-0.235 | <0.01 |
| Skróty: AR, nieżyt nosa alergiczny; BMI, wskaźnik masy ciała; IgE, immunoglobulin E; IL, interleukina. | ||||||
Tabela 4: Analiza regresji logistycznej czynników związanych z alergicznym nieżytem nosa.
Jedno- i wieloczynnikowe analizy regresji logistycznej oceniające zmienne demograficzne, cytokiny surowicze oraz ekspresję miR-146a w osoczu jako czynniki związane z AR.
Plik uzupełniający 1: Surowe dane Kliknij tutaj, aby pobrać ten plik.
Dyskusja
AR to przewlekła alergiczna choroba zapalna dróg oddechowych. Głównym mechanizmem AR jest fakt, że po ekspozycji organizmu na alergeny zmiany zapalne w błonie śluzowej nosa są pośredniczone przez IgE17,18. Objawy kliniczne obejmują głównie świąd nosa, zatkanie nosa, kichanie oraz wodnisty wyciek z nosa, co poważnie obniża jakość życia pacjentów. Badania epidemiologiczne i genetyczne potwierdziły, że podatność genetyczna wywiera istotny i niezbędny wpływ na wystąpienie i rozwój AR19. Niniejsze badanie ujawniło ponadto, że polimorfizm miR-146a rs2910164 jest ściśle powiązany z podatnością na AR, a genotyp GG w obrębie rs2910164 może być genotypem patogennym. Podwyższone stężenie IgE, IL-4 i IL-6 w surowicy, wraz z obniżonym poziomem IL-10 obserwowanym u pacjentów z AR, wskazują na nasilone reakcje alergiczne i zapalne, które są zgodne z charakterystyką immunopatologiczną tej choroby.
Wcześniejsze badania wykazały, że polimorfizm pojedynczego nukleotydu (SNP) miR-146a przyczynia się do patogenezy różnych chorób alergicznych, takich jak reumatoidalne zapalenie stawów20, toczeń rumieniowaty układowy21 oraz nieswoiste zapalenia jelit2. Rasha i wsp. donieśli ponadto, że rozkład częstości genotypu GG oraz allelu G w locus rs2910164 był istotnie skorelowany z podatnością na nieswoiste zapalenia jelit2. Zespół Hai-Bo odkrył, że genotyp CC w locus rs2910164 był genotypem ochronnym przeciwko łuszczycy. Osoby posiadające genotyp GG wykazują istotnie niższe ryzyko wystąpienia łuszczycy23. W wielu badaniach zgłoszono, że polimorfizm rs2910164 jest ściśle związany z podatnością na astmę i potwierdzono, że genotyp GG istotnie zwiększa ryzyko rozwoju astmy15,16,24. Niniejsze badanie dodatkowo ujawniło, że częstość występowania genotypu GG miR-146a rs2910164 u pacjentów z AR była wyższa niż w grupie kontrolnej osób zdrowych, co sugeruje, że genotyp GG może zwiększać podatność na AR. Obserwowany wzrost częstości genotypu GG i allelu G w grupie AR dodatkowo potwierdza potencjalny wpływ zmienności genetycznej miR-146a rs2910164 na podatność na chorobę. U pacjentów z AR posiadających genotyp rs2910164 GG stwierdzono zwiększone stężenia surowiczego IgE, IL-4, IL-6 oraz IL-10. Zmieniony profil cytokin zaobserwowany u osób z genotypem GG sugeruje silniejszą odpowiedź zapalną i alergiczną, co może przyczyniać się do zwiększonej podatności na chorobę. Wynik ten sugeruje, że genotyp GG może być zaangażowany w patogenezę AR poprzez nasilenie reakcji alergicznej i zapalnej.
Jako kluczowy regulator odpowiedzi zapalnej, miR-146a wykazuje silne działanie przeciwzapalne. Nadekspresja miR-146a reguluje geny downstream i znacząco łagodzi wiele uszkodzeń związanych ze stanem zapalnym25,26,27. Poprzednie badania potwierdziły, że nadekspresja miR-146a może skutecznie tłumić odpowiedź zapalną w alergicznym zapaleniu spojówek poprzez upregulację ekspresji czynnika transkrypcyjnego białka forkhead box 3 (FOXP3)28. Dalsze eksperymenty na zwierzętach wykazały, że wyciszenie miR-146a u myszy mutantów wiąże się z wyższym ryzykiem rozwoju rozedmy w porównaniu z myszami typu dzikiego, co dodatkowo potwierdza ochronną rolę miR-146a w chorobach dróg oddechowych29. W modelu zapalenia zatok miR-146a hamuje aktywację Mucin5AC (MUC5AC), redukując zapalenie błony śluzowej i nadmierną sekrecję śluzu13. Wynik niniejszego badania wykazał, że poziom miR-146a u pacjentów z AR był obniżony, a ekspresja miR-146a w osoczu u pacjentów z genotypem rs2910164 GG była jeszcze niższa. Odkrycia te wskazują, że genotyp rs2910164 GG może wpływać na podatność na AR poprzez jego związek ze zmniejszoną ekspresją miR-146a i zmienioną regulacją odpornościową. Genotyp GG może obniżać ekspresję miR-146a, osłabiając jego przeciwzapalną funkcję regulacyjną i zwiększając podatność na AR. Analiza korelacji Pearsona dodatkowo wskazała na związek między poziomem ekspresji miR-146a a ciężkością AR, a także stanem zapalnym. Ekspresja miR-146a była liniowo ujemnie skorelowana z TNSS, RQLQ oraz poziomami IgE, IL-4 i IL-6 w surowicy, a liniowo dodatnio skorelowana z poziomem IL-10. Wskazuje to, że u pacjentów z AR z niższą ekspresją miR-146a objawy kliniczne są cięższe, jakość życia jest bardziej upośledzona, a reakcje alergiczne i odpowiedzi zapalne są silniejsze.
Niniejsze badanie było badaniem klinicznym typu przypadek-kontrola. Analiza potwierdziła istotną zależność między polimorfizmem rs2910164 w miR-146a a podatnością na AR. Badanie to posiada jednak pewne ograniczenia. Z jednej strony, stosunkowo niewielka liczebność próby może ograniczać możliwość generalizacji naszych wniosków i nie pozwala na dokładną charakterystykę cech rozkładu genotypu rs2910164 w populacji. Z drugiej strony, badanie to wykazuje jedynie powiązanie między polimorfizmem rs2910164 w miR-146a a podatnością na AR, lecz nie pozwala na jednoznaczne wykazanie związku przyczynowo-skutkowego między polimorfizmem rs2910164 w miR-146a a AR. W związku z tym, w przyszłości zostanie przeprowadzone prospektywne badanie kohortowe z udziałem większej liczby pacjentów, aby wyjaśnić relację między polimorfizmem rs2910164 w miR-146a a występowaniem, progresją i rokowaniem w AR, co dostarczy bardziej wystarczających podstaw teoretycznych dla profilaktyki i leczenia AR.
Ogólnie rzecz biorąc, ekspresja miR-146a w osoczu była obniżona u pacjentów z AR, a genotyp GG polimorfizmu rs2910164 wiązał się ze zwiększoną podatnością na tę chorobę. Niniejsze badanie dostarcza potencjalnego markera molekularnego do identyfikacji osób z grupy zwiększonego ryzyka AR i stanowi podstawę dla przyszłych badań nad mechanizmami genetycznymi leżącymi u podstaw rozwoju i progresji choroby.
Oświadczenia
W niniejszej pracy nie zgłoszono żadnych konfliktów interesów.
Dostępność danych:
Wszystkie dane wygenerowane lub przeanalizowane w ramach niniejszego badania zostały zawarte w artykule jako plik uzupełniający. Dalsze zapytania można kierować do autora korespondencyjnego.
Wkład autorów:
YMY wniósł istotny wkład w koncepcję i projekt, pozyskiwanie danych lub analizę i interpretację danych oraz uczestniczył w przygotowaniu manuskryptu. YYH pomógł w pozyskiwaniu danych, analizie danych i analizie statystycznej. GML i JCW przyczynili się do interpretacji wyników i krytycznie zrewidowali manuskrypt. Wszyscy autorzy przeczytali i zatwierdzili ostateczną wersję manuskryptu.
Podziękowania
Nie dotyczy.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| probówka wirówkowa 15 ml | Corning | 430791 | Do separacji plazmy, subpakowania próbek oraz ekstrakcji kwasów nukleinowych |
| Applied Biosystems TaqMan Genotyping Master Mix | Thermo Fisher Scientific | 4371355 | 2× skoncentrowany master mix zoptymalizowany do genotypowania SNP, zawierający polimerazę Taq typu hot-start, dNTP, jony magnezu, bufor reakcyjny i barwnik referencyjny ROX. Nie wymaga manualnego przygotowania układu. Jest kompatybilny z powyższym zestawem TaqMan SNP Genotyping Assay i zapewnia stabilny enzymatyczny układ reakcyjny do amplifikacji SNP oraz fluorescencyjnego genotypowania, charakteryzujący się dobrą powtarzalnością i wyraźnymi wynikami grupowania (clustering). |
| Zestaw do genotypowania SNP Applied Biosystems TaqMan (rs2910164, miR-146a) | Thermo Fisher Scientific | C__15946974_10 | Gotowa mieszanina starterów i sond do genotypowania SNP w locus ludzkiego miR-146a rs2910164. Zawiera specyficzne startery PCR oraz dwie fluorescencyjne sondy MGB. Marker VIC oznacza allel C, a marker FAM oznacza allel G. Produkt umożliwia dokładne rozróżnienie trzech genotypów (CC, CG, GG) w jednej probówce, co pozwala na końcową dyskryminację alleliczną przy użyciu aparatury do qPCR. |
| Probówki BD do pobierania krwi z przeciwkrzepliwym heparynianem litu | BD Vacutainer | 367884 | Biochemia kliniczna, badania ratunkowe i badania hematologiczne |
| GraphPad | USA | / | Profesjonalne tworzenie wykresów naukowych & oprogramowanie statystyczne, standard w biologii i medycynie, nie wymaga programowania. Główne atuty: testy t, ANOVA, analiza przeżywalności, regresja nieliniowa (np. krzywe zależności dawka-odpowiedź); generowanie wykresów gotowych do publikacji (słupkowe, punktowe, krzywe przeżywalności) dla qPCR, Western Blot oraz testów komórkowych. |
| Zestaw ELISA do oznaczania immunoglobuliny E (IgE) | Jiancheng | H108-1-2 | Zastosowanie: Badania nad odpowiedzią immunologiczną i chorobami alergicznymi |
| Zestaw ELISA do oznaczania interleukiny 10 (IL-10) | Jiancheng | H010-1-2 | Zastosowanie: stan zapalny, regulacja odporności, badania nad biomarkerami klinicznymi |
| Zestaw ELISA do oznaczania interleukiny 4 (IL-4) | Jiancheng | H05-1-2 | Dziedzina badań: Zapalenie, odpowiedź immunologiczna Th2, reakcja alergiczna |
| Zestaw ELISA do oznaczania interleukiny-6 (IL-6) | Jiancheng | H07-1-2 | Zastosowanie: stan zapalny, regulacja odporności, badania nad biomarkerami klinicznymi |
| Oprogramowanie LightCycler 480 (v1.5 /v1.6) | Roche Diagnostics | / | Oficjalne oprogramowanie firmy Roche, które umożliwia jednoklikową akwizycję danych qPCR, analizę ilościową, analizę krzywych topnienia oraz genotypowanie SNP (metoda końcopunktowa TaqMan + HRM). |
| Zestaw do syntezy pierwszej nici cDNA miRNA miRcute Enhanced miRNA cDNA First-Strand Synthesis Kit | TIANGEN | KR21-02 | Odpowiednie dla odwrotnej transkrypcji wszystkich dojrzałych miRNA |
| Zestaw do ekstrakcji i izolacji miRNA z surowicy/osocza miRcute | TIANGEN | DP503 | Próbki nadające się do badania: surowica ludzka, osocze, nadsącz komórkowy |
| Urządzenie Roche LightCycler 480 Instrument II (system PCR w czasie rzeczywistym) | Roche Diagnostics | 05015278001 | Ilościowe oznaczenie qPCR + genotypowanie SNP (w tym metodą TaqMan) + analiza krzywych topnienia wysokiej rozdzielczości HRM |
| SPSS 27.0 | USA | / | Wszechstronne oprogramowanie do statystyki w naukach społecznych i medycznych, sterowane menu (brak konieczności programowania), idealne dla dużych prób & złożone schematy badawcze. Główne funkcje: statystyki opisowe, ANOVA, regresja, test chi-kwadrat, analiza przeżycia, rzetelność, obliczanie wielkości próby; obsługa oczyszczania danych & import wieloformatowy (Excel/CSV) dla danych klinicznych, ankietowych i epidemiologicznych. |
| SuperReal PreMix Plus (SYBR Green) | TIANGEN | FP205-02 | Wysokospecyficzna ulepszona mieszanina master mix; zoptymalizowany bufor z czynnikiem wiązań wodorowych minimalizuje powstawanie dimerów starterów & nieswoistości; hot-start Taq + ROX do LightCycler 480 II; wysoka czułość & odtwarzalność; idealne dla genów o niskiej ekspresji, złożonych próbek, wysokoprzepustowego genotypowania. |
| Fotometr do mikropłytek Thermo Scientific Multiskan FC | Thermo | 51119180 | Zaawansowany wielofunkcyjny czytnik płytek; absorbancja (w tym 450 nm) + fluorescencja + luminescencja; liniowość 0–4 Abs (±2%) przy 450 nm, precyzja SD&<0,01 Abs; kompatybilność z płytkami 96/384-dołkowymi, automatyczny zakres dynamiczny; idealne do testów ELISA, oceny żywotności komórek, testów immunoologicznych, oddziaływań molekularnych. |
| Spektrofotometr UV-Vis Thermo Scientific NanoDrop One | Thermo | / | Złoty standard spektrofotometru UV-Vis do mikroobjętości; 1–2 μL próbka, kuweta nie jest wymagana; bezpośredni pomiar kwasów nukleinowych (260 nm), białek (280 nm), OD600 wraz z wyznaczeniem stężenia & wskaźniki czystości (A260/A280, A260/A230); skan pełnego widma 190–850 nm, autokalibracja, ekran dotykowy; idealny do qPCR, NGS, kontroli jakości oczyszczania białek. |
| Zestaw do izolacji genomowego DNA z krwi pełnej | TIANGEN | DP304-03 | Próbki do analizy: pełna krew obwodowa, komórki krwi, próbki tkanek |
Bibliografia
- Bernstein, J. A., Bernstein, J. S., Makol, R. & Ward, S. Allergic Rhinitis: A Review. JAMA. 331 (10), 866-877, (2024).
- Brozek, J. L. et al. Allergic Rhinitis and its Impact on Asthma (ARIA) guidelines-2016 revision. J Allergy Clin Immunol. 140 (4), 950-958, (2017).
- Pagel, J. M. L. & Mattos, J. L. Allergic Rhinitis and Its Effect on Sleep. Otolaryngol Clin North Am. 57 (2), 319-328, (2024).
- Nappi, E. et al. Comorbid allergic rhinitis and asthma: important clinical considerations. Expert Rev Clin Immunol. 18 (7), 747-758, (2022).
- Grimm, D., Hwang, P. H. & Lin, Y. T. The link between allergic rhinitis and chronic rhinosinusitis. Curr Opin Otolaryngol Head Neck Surg. 31 (1), 3-10, (2023).
- Wise, S. K. et al. International consensus statement on allergy and rhinology: Allergic rhinitis - 2023. Int Forum Allergy Rhinol. 13 (4), 293-859, (2023).
- Vignal, A., Milan, D., SanCristobal, M. & Eggen, A. A review on SNP and other types of molecular markers and their use in animal genetics. Genet Sel Evol. 34 (3), 275-305, (2002).
- Falahi, S. et al. Association between IL-33 Gene Polymorphism (Rs7044343) and Risk of Allergic Rhinitis. Immunol Invest. 51 (1), 29-39, (2022).
- Kamel, M. A. et al. Association of serum CD14 level and functional polymorphism C-159T in the promoter region of CD14 gene with allergic rhinitis. Clin Exp Med. 23 (8), 4861-4869, (2023).
- Vishnoi, A. & Rani, S. miRNA Biogenesis and Regulation of Diseases: An Updated Overview. Methods Mol Biol. 2595 1-12, (2023).
- Vijayakumar, S., Yesudhason, B. V., Anandharaj, J. L., Kalaivanan, L. & Selvan Christyraj, J. R. S. Exosomes and Their miRNA as a Potential Biomarker in the Diagnosis of Parkinson's Disease. ACS Chem Neurosci. 16 (15), 2756-2766, (2025).
- Han, S., Ma, C., Bao, L., Lv, L. & Huang, M. miR-146a Mimics Attenuate Allergic Airway Inflammation by Impacted Group 2 Innate Lymphoid Cells in an Ovalbumin-Induced Asthma Mouse Model. Int Arch Allergy Immunol. 177 (4), 302-310, (2018).
- Yan, D. et al. Human Neutrophil Elastase Induces MUC5AC Overexpression in Chronic Rhinosinusitis Through miR-146a. Am J Rhinol Allergy. 34 (1), 59-69, (2020).
- Wang, J. et al. MiR-146a mimic attenuates murine allergic rhinitis by downregulating TLR4/TRAF6/NF-kappaB pathway. Immunotherapy. 11 (13), 1095-1105, (2019).
- Trinh, H. K. T. et al. Association of the miR-196a2, miR-146a, and miR-499 Polymorphisms with Asthma Phenotypes in a Korean Population. Mol Diagn Ther. 21 (5), 547-554, (2017).
- Jimenez-Morales, S. et al. MiR-146a polymorphism is associated with asthma but not with systemic lupus erythematosus and juvenile rheumatoid arthritis in Mexican patients. Tissue Antigens. 80 (4), 317-321, (2012).
- Bayar Muluk, N., Bafaqeeh, S. A. & Cingi, C. Anti-IgE treatment in allergic rhinitis. Int J Pediatr Otorhinolaryngol. 127 109674, (2019).
- Lv, R. et al. Research progress of anti-IGE treatment for allergic rhinitis. Am J Otolaryngol. 46 (3), 104646, (2025).
- Davila, I. et al. Genetic aspects of allergic rhinitis. J Investig Allergol Clin Immunol. 19 Suppl 1 25-31, (2009).
- Bogunia-Kubik, K. et al. Significance of Polymorphism and Expression of miR-146a and NFkB1 Genetic Variants in Patients with Rheumatoid Arthritis. Arch Immunol Ther Exp (Warsz). 64 (Suppl 1), 131-136, (2016).
- El-Akhras, B. A. et al. mir-146a genetic polymorphisms in systemic lupus erythematosus patients: Correlation with disease manifestations. Noncoding RNA Res. 7 (3), 142-149, (2022).
- Ghorab, R. A. et al. MiR-146a (rs2910164) Gene Polymorphism and Its Impact on Circulating MiR-146a Levels in Patients with Inflammatory Bowel Diseases. Inflammation. 48 (3), 1193-1205, (2025).
- Gong, H. B., Zhang, S. L., Wu, X. J., Pu, X. M. & Kang, X. J. Association of rs2910164 polymorphism in MiR-146a gene with psoriasis susceptibility: A meta-analysis. Medicine (Baltimore). 98 (6), e14401, (2019).
- Dong, J., Sun, D. & Lu, F. Association of two polymorphisms of miRNA-146a rs2910164 (G > C) and miRNA-499 rs3746444 (T > C) with asthma: a meta-analysis. J Asthma. 58 (8), 995-1002, (2021).
- Zhou, Z., Zhu, Y., Gao, G. & Zhang, Y. Long noncoding RNA SNHG16 targets miR-146a-5p/CCL5 to regulate LPS-induced WI-38 cell apoptosis and inflammation in acute pneumonia. Life Sci. 228 189-197, (2019).
- Olivieri, F. et al. miR-21 and miR-146a: The microRNAs of inflammaging and age-related diseases. Ageing Res Rev. 70 101374, (2021).
- Xiong, J. R. et al. miR-146a Regulates Neuroinflammation and Immune Cell Function in Neurodegenerative Diseases. Curr Med Sci. 45 (4), 725-744, (2025).
- Guo, H. et al. MiR-146a upregulates FOXP3 and suppresses inflammation by targeting HIPK3/STAT3 in allergic conjunctivitis. Ann Transl Med. 10 (6), 344, (2022).
- Yoshikawa, H. et al. miR-146a regulates emphysema formation and abnormal inflammation in the lungs of two mouse models. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 326 (1), L98-L110, (2024).