Badanie związku polimorfizmu rs2910164 w genie mir-146a z podatnością na nieżyt nosa pochodzenia alergicznego

Podsumowanie

Celem niniejszego badania jest wyjaśnienie związku między polimorfizmem rs2910164 w miR-146a a podatnością na nieżyt nosa (AR). Niższe poziomy miR-146a w osoczu oraz genotyp GG rs2910164 wiążą się z podwyższonym ryzykiem wystąpienia AR, nasilonymi odpowiedziami zapalnymi oraz cięższymi objawami klinicznymi u pacjentów z AR.

Streszczenie

Nieżyt nosa o podłożu alergicznym (AR) nie stanowi zagrożenia dla życia pacjentów, lecz poważnie upośledza ich jakość życia. MikroRNA-146a (miR-146a) ma kluczowe znaczenie dla regulacji odporności i odpowiedzi zapalnej; jednak związek między polimorfizmem rs2910164 w miR-146a a podatnością na AR pozostaje nie do końca poznany. Niniejsze badanie kliniczne z grupą kontrolną zostało zaprojektowane w celu zbadania wpływu polimorfizmu miR-146a rs2910164 na podatność na AR. W badaniu wzięło udział łącznie 180 ochotników bez AR oraz 21 pacjentów z AR. Ekspresję miR-146a w osoczu zmierzono za pomocą RT-qPCR; genotyp rs2910164 wykryto metodą TaqMan-qPCR. Do oznaczania poziomów IgE, IL-4, IL-6 i IL-10 w surowicy wykorzystano test ELISA. Analiza korelacji Pearsona posłużyła do oceny korelacji liniowych między ekspresją miR-146a a wynikiem TNSS, wynikiem RQLQ oraz stężeniem czynników w surowicy. Czynniki ryzyka AR zidentyfikowano za pomocą regresji logistycznej. Genotyp GG oraz allel G polimorfizmu miR-146a rs2910164 występowały istotnie częściej u pacjentów z AR niż w zdrowej grupie kontrolnej. Poziom miR-146a w osoczu był obniżony u pacjentów z AR. Poziom miR-146a w osoczu był niższy u pacjentów z AR posiadających genotyp GG, co wiązało się z bardziej aktywnymi odpowiedziami alergicznymi i zapalnymi. Ekspresja miR-146a była ściśle powiązana z objawami alergicznymi i nasileniem manifestacji klinicznych. Regresja logistyczna wskazuje, że poziomy IgE i IL-4 w surowicy były niezależnymi czynnikami ryzyka AR, natomiast IL-10 i ekspresja miR-146a były niezależnymi czynnikami ochronnymi. U pacjentów z AR obserwuje się niskie poziomy miR-146a w osoczu, a genotyp GG polimorfizmu miR-146a rs2910164 zwiększa podatność na AR.

Wprowadzenie

Katar sienny (AR) jest zapalnym schorzeniem błony śluzowej nosa o charakterze nieinfekcyjnym, wywoływanym przez alergeny. Typowe objawy kliniczne AR obejmują świąd nosa, zatkanie nosa, wodnisty wyciek z nosa oraz częste kichanie¹. W cięższych przypadkach pacjenci mogą również odczuwać upośledzenie zmysłu węchu, a choroba może wpływać nawet na jakość snu. Dane epidemiologiczne wskazują, że globalna zapadalność na AR rośnie z roku na rok, osiągając poziom od 10% do 25%². Chociaż AR nie zagraża życiu pacjentów, poważnie zaburza sen, naukę i pracę, znacząco obniża jakość życia oraz stanowi duże obciążenie ekonomiczne dla osób chorych i społeczeństwa³. Badania potwierdziły, że AR stanowi czynnik ryzyka rozwoju astmy, a w miarę postępu choroby u pacjentów częściej pojawia się zapalenie zatok lub polipy nosa, co dodatkowo zwiększa obciążenie chorobą^4,5. Dlatego profilaktyka i kontrola AR stają się kluczowym zadaniem w dziedzinie chorób układu oddechowego. Jednak patogeneza AR nie została jeszcze w pełni wyjaśniona. Pogłębiona analiza mechanizmów patofizjologicznych AR oraz opracowanie ukierunkowanych strategii terapeutycznych mają kluczowe znaczenie. Są to aktualne problemy naukowe, które wymagają pilnego rozwiązania.

Wystąpienie AR jest związane z czynnikami środowiskowymi i genetycznymi⁶. Obecne badania wskazują zazwyczaj, że synergistyczny efekt indywidualnej podatności genetycznej oraz środowiska ekspozycji na alergeny jest głównym czynnikiem sprawczym rozwoju AR. Zespół Brozek potwierdził ponadto, że oddziaływanie między genetyczną podatnością organizmu a ekspozycją środowiskową jest fundamentalną przyczyną AR². W badaniach nad mechanizmami genetycznymi AR polimorfizm genetyczny stopniowo staje się przedmiotem szczególnej uwagi naukowców. Polimorfizmy pojedynczego nukleotydu (SNPs), jako powszechna forma polimorfizmu genetycznego, są główną przyczyną zmienności informacji genetycznej w organizmach⁷. Narastające dowody wskazują, że genotyp TT w locus rs704343 genu IL-3 może służyć jako potencjalny cel profilaktyki i leczenia AR⁸. Dodatkowo genotyp TT w obrębie miejsca C-159T promotora CD14 działa jako marker prognostyczny ryzyka AR⁹. Wskazuje to, że kluczowe SNPs w genach mogą służyć jako istotne cele molekularne do oceny ryzyka AR, wczesnego ostrzegania oraz realizacji precyzyjnej profilaktyki i leczenia. Dostarcza to kluczowych wskazówek do głębszego zrozumienia mechanizmu podatności genetycznej na AR.

Liczne badania wykazały, że nieprawidłowa ekspresja mikroRNA (miRNA) jest jednym z kluczowych czynników napędzających występowanie i rozwój szerokiego spektrum chorób¹⁰. miRNA charakteryzują się stabilnością w płynach ustrojowych, co czyni je wysoce czułymi markerami molekularnymi w diagnostyce chorób. miR-146a jest rodzajem niekodującej cząsteczki RNA o rozległych funkcjach biologicznych¹. Polimorfizm rs2910164 znajduje się w obrębie regionu pętli (stem-loop) sekwencji prekursora miR-146a. Zmienność w tym miejscu może wpływać na wydajność przetwarzania i dojrzewania pre-miR-146a, zmieniając tym samym poziom ekspresji dojrzałego miR-146a i wpływając na kaskadowe odpowiedzi immunologiczne i zapalne. Wcześniejsze badania potwierdziły, że nadekspresja miR-146a może znacząco zmniejszyć nadreaktywność dróg oddechowych w mysich modelach astmy oraz hamować aktywację uczulonych limfocytów¹². Poprzez celowanie i hamowanie aktywności receptora epidermalnego czynnika wzrostu (EGFR), miR-146a może skutecznie łagodzić uszkodzenia zapalne w zapaleniu zatok¹³. Co więcej, nadekspresja miR-146a może również łagodzić objawy patologiczne w mysim modelu AR poprzez blokowanie szlaku sygnalizacyjnego receptora Toll-podobnego 4 (TLR4)¹⁴. Obserwacje te podkreślają kluczową rolę miR-146a w modulowaniu chorób układu oddechowego.

Istniejące dowody z badań nad polimorfizmem genetycznym wskazują, że częstość występowania allelu G w locus miR-146a rs2910164 jest ściśle powiązana z nadreaktywnością dróg oddechowych¹⁵. Ten SNP jest również uważany za potencjalny biomarker ryzyka astmy w populacji koreańskiej¹⁵. Ponadto zespół Jimenez-Morales wykazał, że genotyp CC w locus miR-146a rs2910164 zapewnia ochronę przed astmą¹⁶. Jednakże nie przeprowadzono żadnych istotnych badań raportujących związek między polimorfizmem miR-146a rs2910164 a podatnością na AR. Dlatego celem niniejszego badania jest zweryfikowanie wpływu polimorfizmu miR-146a rs2910164 na AR, co dostarczy nowej podstawy teoretycznej dla patogenezy, diagnostyki klinicznej i leczenia AR.

Protokół

Oświadczenie etyczne:
Wszyscy uczestnicy zostali w pełni poinformowani o celu naszego eksperymentu i podpisali formularz świadomej zgody. Badanie to zostało zatwierdzone przez komisję etyki Pierwszego Szpitala Afiliowanego w Longyan Uniwersytetu Medycznego w Fujian (numer zatwierdzenia LYREC2023-k07-01). Wszystkie procedury zostały przeprowadzone zgodnie z odpowiednimi wytycznymi, przepisami oraz Deklaracją Helsińską.

Rekrutacja uczestników, kryteria kwalifikacji i pobieranie próbek
W okresie od stycznia 2023 do maja 2025 roku z poradni otolaryngologicznej Pierwszego Szpitala Filiacyjnego w Longyan Uniwersytetu Medycznego w Fujian zrekrutowano łącznie 211 osób z rozpoznaniem AR oraz 180 zdrowych uczestników (bez AR). Kryteria diagnostyczne AR przyjęto z wytycznych Chińskiego Towarzystwa Alergologicznego dotyczących diagnozowania i leczenia alergicznego nieżytu nosa¹⁷. Od pacjentów wymagano występowania co najmniej dwóch objawów klinicznych AR, takich jak świąd nosa, kichanie, zatkanie nosa lub wyciek z nosa. Dodatkowo badanie błony śluzowej nosa musiało wykazać bladość i obrzęk, a wynik testu punktowego (SPT) lub wynik badania poziomu IgE w surowicy musiał być dodatni. Test SPT był wykonywany przez wykwalifikowany personel w gabinecie testowania alergenów w trybie ambulatoryjnym, aby zapewnić dokładność i spójność wyników. Wszyscy pacjenci z AR zostali poddani ocenie za pomocą kwestionariusza jakości życia w alergicznym nieżycie nosa i zapaleniu spojówek (RQLQ) oraz całkowitej oceny objawów nosa (TNSS) z pomocą personelu medycznego, a uzyskane wyniki zapisano do dalszej analizy.

Zdrowych ochotników poddawanych rutynowym badaniom fizykalnym w szpitalu zrekrutowano do grupy kontrolnej (bez AR). Kryteria kwalifikacji obejmowały brak osobistej lub rodzinnej historii AR, brak astmy lub innych chorób alergicznych, brak przewlekłego zapalenia zatok lub innych chorób zapalnych jamy nosowej oraz brak infekcji dróg oddechowych w ciągu ostatniego miesiąca. Dodatkowo z badania wykluczono osoby z historią poważnych chorób serca, wątroby, płuc lub nerek, a także z obecnością jakichkolwiek nowotworów złośliwych.

Pobrano próbki krwi żylnej obwodowej od dwóch grup ochotników. Część krwi żylnej z antykoagulantem wykorzystano do ekstrakcji DNA oraz izolacji RNA z osocza. Inna część krwi żylnej została odwirowana w celu uzyskania surowicy, która posłużyła do oznaczania czynników związanych z surowicą (immunoglobuliny E (IgE), interleukiny-4 (IL-4), IL-6 oraz IL-10).

Ekstrakcja DNA:
DNA z 20 µL próbek krwi żylnej obwodowej wyekstrahowano przy użyciu zestawu do ekstrakcji genomowego DNA z krwi pełnej (patrz Tabela materiałów). Próbki krwi pobrano do probówek z heparyną litową, a następnie podzielono na aliquoty i zamrożono w temperaturze -20 °C do przechowywania. Szczegółowe procedury operacyjne powinny być ściśle zgodne z instrukcją dołączoną do zestawu. Na koniec do elucji DNA wykorzystano 10 µL buforu elucyjnego. Czystość wyekstrahowanego DNA określono za pomocą analizatora kwasów nukleinowych/białek (spektrofotometru) (stosunek OD₂₆₀/OD₂₈₀ wynosił od 1,8 do 2,0). Próbki DNA po analizie przechowywano w temperaturze -20 °C do późniejszego wykorzystania w kolejnych badaniach genotypowania.

Wykrywanie genotypu
Do wykrywania rozkładu genotypów miR-146a rs2910164 wykorzystano zestaw do genotypowania SNP TaqMan. Informacje o zestawie zostały wprowadzone do listy materiałów zużywalnych. Całkowita objętość reakcji PCR wynosiła 10 µL i zawierała 5 µL Master Mix, 0,5 µL mieszaniny starterów i sondy typującej, 10 ng matrycowego DNA oraz wodę wolną od RNaz. Amplifikację DNA przeprowadzono za pomocą instrumentu do ilościowej fluorescencyjnej PCR w czasie rzeczywistym Roche LightCycler 480 II. Warunki reakcji: przeddenaturacja w 95 °C przez 10 min; 40 cykli (95 °C przez 15 sekund, 60 °C przez 1 min), a odczyt fluorescencji FAM/VIC odbywał się w 60 °C. Po zakończeniu amplifikacji zebrane sygnały podwójnej fluorescencji FAM/VIC przeanalizowano za pomocą oprogramowania LightCycler 480, a dane genotypowe poddano obróbce statystycznej. Pojedynczy sygnał FAM oznacza genotyp homozygotyczny, pojedynczy sygnał VIC oznacza drugi genotyp homozygotyczny, a obecność obu sygnałów wskazuje na genotyp heterozygotyczny. Próbki z nieprawidłowymi sygnałami lub niespójnymi wynikami po powtórzeniu zostaną przebadane ponownie. Każdy eksperyment przeprowadzono z kontrolą bez matrycy oraz kontrolą dodatnią w celu kontroli jakości. Wszystkie próbki poddano trzem powtórzeniom technicznym.

RT-qPCR
Przeprowadzono całkowitą ekstrakcję miRNA z osocza z 100 µL osocza przy użyciu dedykowanego zestawu do ekstrakcji miRNA. Informacje o zestawie zostały wprowadzone do listy materiałów zużywalnych. Stężenie RNA określono za pomocą spektrofotometru. OD₂₆₀/OD₂₈₀ stosunek próbek wyizolowanego, wysokiej jakości miRNA mieścił się w zakresie od 1,8 do 2,0. Do odwrotnej transkrypcji w celu syntezy cDNA wykorzystano 20 ng RNA, a procedurę reakcji przeprowadzono zgodnie ze standardową instrukcją dołączoną do zestawu. Odwrotną transkrypcję przeprowadzono w całkowitej objętości 20 µL, w tym inkubację w temperaturze 42 °C przez 60 min, a następnie inaktywację w temperaturze 85 °C przez 5 min. Reakcję qPCR przygotowano zgodnie z ustalonym protokołem, przy całkowitej objętości wynoszącej 20 µLMieszaninę reakcyjną przygotowano w następujący sposób: 10 µL mieszaniny reakcyjnej do qPCR, 0.4 µL startera forwardowego, 0.4 µL starteru odwrotnego, 1 µL matrycy cDNA oraz 8.2 µL wody wolnej od RNaz. Wykorzystano specyficzne startery dla miR-146a oraz wewnętrznego genu referencyjnego U6. Amplifikację przeprowadzono przy użyciu systemu do ilościowej fluorescencyjnej PCR w czasie rzeczywistym Roche LightCycler 480 II. Warunki cyklicznej obróbki termicznej qPCR były następujące: 95 °C do wstępnej denaturacji przez 30 s, a następnie 40 cykli denaturacji w 95 °C przez 5 s, a następnie przyłączanie i elongację w temperaturze 60 °C przez 30 s. Wszystkie próbki analizowano w trzech powtórzeniach technicznych. Dane eksperymentalne analizowano przy użyciu oprogramowania LightCycler 480. Wykorzystując U6 jako referencję wewnętrzną w celu skorygowania zmienności międzypróbkowej, najpierw obliczono ΔCt (wartość Ct dla miR-146a - wartość Ct dla U6), a następnie obliczyć ΔΔCt (próg ΔWartość Ct grupy doświadczalnej – the ΔCt grupy kontrolnej), a ostateczny względny poziom ekspresji miR-146a uzyskano za pomocą 2^⁻ΔΔCt.

ELISA
Poziomy IgE, IL-4, IL-6 i IL-10 w surowicy oznaczono za pomocą zestawów ELISA. Procedury eksperymentalne przeprowadzono zgodnie z instrukcją obsługi. Poszczególne kroki przebiegały następująco: najpierw rozcieńczono stężony roztwór płuczący, a standardy rozcieńczono gradientowo w celu przygotowania roztworów roboczych do krzywej wzorcowej. Następnie dołków dodano 50 µL rozcieńczalnika, roztworu standardu oraz badanej próbki, po czym inkubowano w temperaturze 37 °C przez 60 min. Po inkubacji dołki trzykrotnie przemyto buforem płuczącym. Następnie dodano 50 µL roboczego roztworu przeciwciała sprzężonego z enzymem i inkubowano płytki w temperaturze 37 °C przez 30 min. Po zakończeniu inkubacji odlano ciecz i ponownie przemyto dołki, a następnie dodano roztwór chromogenny i inkubowano przez 15 min w temperaturze 37 °C w ciemności. Po dodaniu roztworu stopującego zmierzono absorbancję przy 450 nm za pomocą czytnika mikropłytek. Stężenia w próbkach obliczono na podstawie krzywej wzorcowej. Każdą próbkę badano trzykrotnie. Za ważne uznano dane z współczynnikiem zmienności mniejszym niż 10%. W celu kontroli jakości podczas eksperymentu wyznaczono dołki ślepe i kontrolne. Zakres detekcji oraz czułość zestawu były zgodne z wytycznymi określonymi w instrukcji producenta.

Statystyka danych
Dane eksperymentalne analizowano przy użyciu oprogramowania SPSS oraz GraphPad Prism 9. Dane przedstawiono jako średnią ± odchylenie standardowe (mean ± SD). Do oceny normalności rozkładu zmiennych ciągłych zastosowano test Shapiro-Wilka, a do oceny jednorodności wariancji – test Levene’a. Porównanie zmiennych ciągłych między dwiema grupami przeprowadzono za pomocą testu t dla prób niezależnych. W przypadku porównań wielu grup zastosowano jednoczynnikową analizę wariancji (One-way ANOVA) z następującym po niej testem post-hoc Tukeya, natomiast dwuczynnikową analizę wariancji (Two-way ANOVA) wykorzystano do oceny głównych efektów dwóch niezależnych czynników oraz ich efektu interakcji. Wartości odstające zidentyfikowano i wykluczono w oparciu o regułę 3 odchyleń standardowych. W badaniu nie stwierdzono brakujących danych. Do analizy skuteczności diagnostycznej miR-146a w przypadku AR wykorzystano krzywą charakterystyki operacyjnej odbiornika (ROC). Odpowiednie parametry ROC oraz 95% przedziały ufności obliczono przy użyciu wbudowanych algorytmów statystycznych. Do pomiaru korelacji liniowej między ekspresją miR-146a a poziomami czynników związanych z surowicą zastosowano analizę korelacji Pearsona. W celu wyłonienia czynników ryzyka AR przeprowadzono jednowymiarową i wielowymiarową analizę regresji logistycznej. Zmienne z p < 0,05 w analizie jednowymiarowej włączono do wielowymiarowego modelu regresji logistycznej. Wartość p < 0,05 uznano za statystycznie istotną.

Wyniki

Charakterystyka uczestników i rozkład genotypów
Przeprowadzono analizę statystyczną danych klinicznych wyjściowych dla dwóch grup badanych. Wyniki wskazały na istotne różnice w surowiczych poziomach IgE, IL-4, IL-6 oraz IL-10. W porównaniu z grupą ochotników bez AR, w grupie pacjentów z AR stężenia surowiczego IgE, IL-4 i IL-6 były podwyższone, natomiast poziom IL-10 był obniżony (Tabela 1). Rozkład genotypów miR-146a rs2910164 oznaczono metodą TaqMan-qPCR. Wyniki analizy wykazały, ż...

Dyskusja

AR to przewlekła alergiczna choroba zapalna dróg oddechowych. Głównym mechanizmem AR jest fakt, że po ekspozycji organizmu na alergeny zmiany zapalne w błonie śluzowej nosa są pośredniczone przez IgE^17,18. Objawy kliniczne obejmują głównie świąd nosa, zatkanie nosa, kichanie oraz wodnisty wyciek z nosa, co poważnie obniża jakość życia pacjentów. Badania epidemiologiczne i genetyczne potwierdziły, że podatność genetyczna wywiera istotny i niezbędny wpływ na wystąp...

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
probówka wirówkowa 15 ml	Corning	430791	Do separacji plazmy, subpakowania próbek oraz ekstrakcji kwasów nukleinowych
Applied Biosystems TaqMan Genotyping Master Mix	Thermo Fisher Scientific	4371355	2× skoncentrowany master mix zoptymalizowany do genotypowania SNP, zawierający polimerazę Taq typu hot-start, dNTP, jony magnezu, bufor reakcyjny i barwnik referencyjny ROX. Nie wymaga manualnego przygotowania układu. Jest kompatybilny z powyższym zestawem TaqMan SNP Genotyping Assay i zapewnia stabilny enzymatyczny układ reakcyjny do amplifikacji SNP oraz fluorescencyjnego genotypowania, charakteryzujący się dobrą powtarzalnością i wyraźnymi wynikami grupowania (clustering).
Zestaw do genotypowania SNP Applied Biosystems TaqMan (rs2910164, miR-146a)	Thermo Fisher Scientific	C__15946974_10	Gotowa mieszanina starterów i sond do genotypowania SNP w locus ludzkiego miR-146a rs2910164. Zawiera specyficzne startery PCR oraz dwie fluorescencyjne sondy MGB. Marker VIC oznacza allel C, a marker FAM oznacza allel G. Produkt umożliwia dokładne rozróżnienie trzech genotypów (CC, CG, GG) w jednej probówce, co pozwala na końcową dyskryminację alleliczną przy użyciu aparatury do qPCR.
Probówki BD do pobierania krwi z przeciwkrzepliwym heparynianem litu	BD Vacutainer	367884	Biochemia kliniczna, badania ratunkowe i badania hematologiczne
GraphPad	USA	/	Profesjonalne tworzenie wykresów naukowych & oprogramowanie statystyczne, standard w biologii i medycynie, nie wymaga programowania. Główne atuty: testy t, ANOVA, analiza przeżywalności, regresja nieliniowa (np. krzywe zależności dawka-odpowiedź); generowanie wykresów gotowych do publikacji (słupkowe, punktowe, krzywe przeżywalności) dla qPCR, Western Blot oraz testów komórkowych.
Zestaw ELISA do oznaczania immunoglobuliny E (IgE)	Jiancheng	H108-1-2	Zastosowanie: Badania nad odpowiedzią immunologiczną i chorobami alergicznymi
Zestaw ELISA do oznaczania interleukiny 10 (IL-10)	Jiancheng	H010-1-2	Zastosowanie: stan zapalny, regulacja odporności, badania nad biomarkerami klinicznymi
Zestaw ELISA do oznaczania interleukiny 4 (IL-4)	Jiancheng	H05-1-2	Dziedzina badań: Zapalenie, odpowiedź immunologiczna Th2, reakcja alergiczna
Zestaw ELISA do oznaczania interleukiny-6 (IL-6)	Jiancheng	H07-1-2	Zastosowanie: stan zapalny, regulacja odporności, badania nad biomarkerami klinicznymi
Oprogramowanie LightCycler 480 (v1.5 /v1.6)	Roche Diagnostics	/	Oficjalne oprogramowanie firmy Roche, które umożliwia jednoklikową akwizycję danych qPCR, analizę ilościową, analizę krzywych topnienia oraz genotypowanie SNP (metoda końcopunktowa TaqMan + HRM).
Zestaw do syntezy pierwszej nici cDNA miRNA miRcute Enhanced miRNA cDNA First-Strand Synthesis Kit	TIANGEN	KR21-02	Odpowiednie dla odwrotnej transkrypcji wszystkich dojrzałych miRNA
Zestaw do ekstrakcji i izolacji miRNA z surowicy/osocza miRcute	TIANGEN	DP503	Próbki nadające się do badania: surowica ludzka, osocze, nadsącz komórkowy
Urządzenie Roche LightCycler 480 Instrument II (system PCR w czasie rzeczywistym)	Roche Diagnostics	05015278001	Ilościowe oznaczenie qPCR + genotypowanie SNP (w tym metodą TaqMan) + analiza krzywych topnienia wysokiej rozdzielczości HRM
SPSS 27.0	USA	/	Wszechstronne oprogramowanie do statystyki w naukach społecznych i medycznych, sterowane menu (brak konieczności programowania), idealne dla dużych prób & złożone schematy badawcze. Główne funkcje: statystyki opisowe, ANOVA, regresja, test chi-kwadrat, analiza przeżycia, rzetelność, obliczanie wielkości próby; obsługa oczyszczania danych & import wieloformatowy (Excel/CSV) dla danych klinicznych, ankietowych i epidemiologicznych.
SuperReal PreMix Plus (SYBR Green)	TIANGEN	FP205-02	Wysokospecyficzna ulepszona mieszanina master mix; zoptymalizowany bufor z czynnikiem wiązań wodorowych minimalizuje powstawanie dimerów starterów & nieswoistości; hot-start Taq + ROX do LightCycler 480 II; wysoka czułość & odtwarzalność; idealne dla genów o niskiej ekspresji, złożonych próbek, wysokoprzepustowego genotypowania.
Fotometr do mikropłytek Thermo Scientific Multiskan FC	Thermo	51119180	Zaawansowany wielofunkcyjny czytnik płytek; absorbancja (w tym 450 nm) + fluorescencja + luminescencja; liniowość 0–4 Abs (±2%) przy 450 nm, precyzja SD&<0,01 Abs; kompatybilność z płytkami 96/384-dołkowymi, automatyczny zakres dynamiczny; idealne do testów ELISA, oceny żywotności komórek, testów immunoologicznych, oddziaływań molekularnych.
Spektrofotometr UV-Vis Thermo Scientific NanoDrop One	Thermo	/	Złoty standard spektrofotometru UV-Vis do mikroobjętości; 1–2 μL próbka, kuweta nie jest wymagana; bezpośredni pomiar kwasów nukleinowych (260 nm), białek (280 nm), OD600 wraz z wyznaczeniem stężenia & wskaźniki czystości (A260/A280, A260/A230); skan pełnego widma 190–850 nm, autokalibracja, ekran dotykowy; idealny do qPCR, NGS, kontroli jakości oczyszczania białek.
Zestaw do izolacji genomowego DNA z krwi pełnej	TIANGEN	DP304-03	Próbki do analizy: pełna krew obwodowa, komórki krwi, próbki tkanek