Niniejszy protokół opisuje zestandaryzowaną metodę mechanicznej akupunktury z wykorzystaniem urządzenia do stymulacji wibracyjnej, które zapewnia powtarzalną stymulację igłą w punkcie akupunktury HT7 u szczurów. Metoda ta, zwalidowana w modelu aktywności lokomotorycznej indukowanej kokainą, stanowi ilościową i powtarzalną platformę do badania obwodowych i centralnych mechanizmów neurofizjologicznych leżących u podstaw efektów wywoływanych przez akupunkturę.
Artykuł metodologiczny
Mechaniczne urządzenie do akupunktury do powtarzalnej stymulacji wibracyjnej punktów akupunkturowych u szczurów
* These authors contributed equally
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Choć akupunktura manualna jest szeroko stosowana w badaniach eksperymentalnych i klinicznych, jej zastosowanie jest ograniczone przez niską powtarzalność wynikającą ze zmienności manipulacji igłą zależnej od osoby wykonującej zabieg. Aby pokonać to ograniczenie, opracowano mechaniczny instrument do akupunktury (MAI), który dostarcza kontrolowaną stymulację wibracyjną poprzez wprowadzoną igłę akupunkturową bez użycia prądu elektrycznego. Niniejszy artykuł przedstawia ustandaryzowany protokół stosowania stymulacji MAI w punkcie akupunkturowym HT7 u szczurów, obejmujący przygotowanie zwierząt, lokalizację punktu akupunkturowego, wprowadzenie igły, konfigurację parametrów stymulacji oraz ocenę behawioralną. Reprezentatywne badania walidacyjne wykazały, że stymulacja MAI w punkcie HT7 redukowała wywołaną kokainą aktywność lokomotoryczną i preferencyjnie aktywowała szlaki włókien A związanych z mechanoreceptorami. Dalsze badania potwierdziły udział obwodowych aferentów nerwu łokciowego, szlaku kolumny tylnej oraz mezolimbicznego układu nagrody w pośredniczeniu tych efektów. Reprezentatywne wyniki przedstawione w tym artykule opierają się na wcześniej opublikowanych badaniach walidacyjnych z wykorzystaniem platformy MAI. Protokół ten zapewnia powtarzalną i ilościową metodę badania neurofizjologicznych mechanizmów stymulacji akupunkturowej w eksperymentalnych modelach zwierzęcych.
Wprowadzenie
Manualna akupunktura jest tradycyjną metodą stymulacji z użyciem igieł, która dostarcza dynamiczny bodziec mechaniczny do tkanek obwodowych poprzez bezpośrednią manipulację igłą i jest szeroko stosowana zarówno w warunkach klinicznych, jak i eksperymentalnych1,2. W przeciwieństwie do elektroakupunktury (EA), akupunktura manualna generuje złożoną stymulację mechaniczną, w tym deformację tkanek i aktywację obwodowych mechanoreceptorów, poprzez fizyczną manipulację wprowadzoną igłą2. Komponenty mechaniczne te są uważane za istotny czynnik przyczyniający się do charakterystycznych efektów fizjologicznych akupunktury i uważa się, że angażują one somatosensoryczne drogi doprowadzające w inny sposób niż stymulacja elektryczna3,4.
Pomimo znaczenia fizjologicznego i szerokiego zastosowania, eksperymentalne wykorzystanie akupunktury manualnej pozostaje ograniczone ze względu na słabą powtarzalność2. Efekty terapeutyczne akupunktury manualnej zależą w dużej mierze od czynników zależnych od operatora, w tym od technik manipulacji igłą, intensywności stymulacji, częstotliwości i czasu trwania, które mogą się znacząco różnić w zależności od praktyka i warunków eksperymentalnych1. Ta zmienność stanowi główną przeszkodę w badaniach mechanistycznych próbujących ustanowić związki przyczynowo-skutkowe między stymulacją akupunkturową a wynikami neurofizjologicznymi.
Aby przezwyciężyć te ograniczenia, często stosuje się elektroakupunkturę (EA) jako metodę alternatywną, ponieważ umożliwia ona precyzyjną kontrolę parametrów stymulacji, takich jak częstotliwość, amplituda i czas trwania. Jednak EA wprowadza impulsy elektryczne, które mogą aktywować szlaki neuronalne odmienne od tych pobudzanych podczas manualnego nakłuwania5. W konsekwencji trudno jest wyizolować i ocenić specyficzny wkład stymulacji mechanicznej, która stanowi fundamentalny element tradycyjnej akupunktury manualnej. Dlatego w badaniach nad mechanizmami działania akupunktury niezbędna jest powtarzalna metoda zdolna do dostarczania kontrolowanej stymulacji mechanicznej bez zakłóceń elektrycznych.
Aby wyeliminować to ograniczenie, w 2013 roku opracowano mechaniczny instrument do akupunktury (MAI), który pozwala na odtworzenie mechanicznej stymulacji opartej na wibracjach przy jednoczesnej ilościowej kontroli parametrów stymulacji3,5. Urządzenie to dostarcza kontrolowaną stymulację wibracyjną bezpośrednio do wprowadzonej igły do akupunktury, standaryzując tym samym bodziec mechaniczny przykładany do tkanki. Stosując to podejście, wcześniejsze badania wykazały, że mechaniczna akupunktura moduluje somatosensoryczne, związane z nagrodą oraz autonomiczne obwody neuronalne w wielu modelach eksperymentalnych4,6,7,8. Na przykład stymulacja mechaniczna w punktach akupunkturowych HT7 osłabiła reakcje behawioralne wywołane kokainą oraz uzależnienie od alkoholu poprzez modulację mezolimbicznego układu dopaminergicznego, endogennych szlaków opioidowych i somatosensorycznych obwodów przekaźnikowych6,7. Ponadto połączona stymulacja mechaniczna i elektryczna stosowana w punktach neurogennych hamowała nadciśnienie poprzez mechanizmy zależne od opioidów w centralnych obszarach autonomicznych5. Łącznie około 30 badań z wykorzystaniem tej platformy przyczyniło się do zrozumienia mechanizmów działania akupunktury w uzależnieniach, regulacji autonomicznej oraz w innych warunkach eksperymentalnych.
W przeciwieństwie do ogólnych systemów stymulacji opartych wyłącznie na wibracjach, niniejszy protokół zapewnia zintegrowany przebieg pracy dla nieelektrycznej, mechanicznej akupunktury wibracyjnej z wykorzystaniem sprzężenia igły u czuwających szczurów. Łączy on montaż urządzenia, sprzęganie igły z silnikiem, standaryzację głębokości wkłucia, kalibrację opartą na akcelerometrze, lokalizację punktów akupunkturowych oraz reprezentatywną walidację behawioralną z wykorzystaniem stymulacji HT7 w modelu aktywności lokomocyjnej indukowanej kokainą u szczurów. Tym samym artykuł ten dostarcza odtwarzalnego protokołu eksperymentalnego dla kontrolowanej mechanicznej stymulacji akupunkturowej, a nie prezentuje nowego urządzenia terapeutycznego.
Ustandaryzowany i ilościowo kontrolowany sygnał wyjściowy MAI może również stanowić użyteczną platformę dla przyszłej integracji z analitycznymi podejściami opartymi na danych. Ponieważ parametry stymulacji, takie jak częstotliwość wibracji, przyspieszenie, głębokość wprowadzenia i czas trwania stymulacji, mogą być precyzyjnie zdefiniowane i odtworzone, zmienne te mogą służyć jako ustrukturyzowane dane wejściowe dla modelowania obliczeniowego. Niedawne badania wykazały, że podejścia oparte na uczeniu maszynowym, głębokim uczeniu oraz uczeniu transferowym mogą poprawić ekstrakcję cech, klasyfikację sygnałów, rozpoznawanie wzorców i optymalizację w złożonych obrazach biomedycznych oraz zbiorach danych sygnałów wibracyjnych9,10,11,12. Podobne podejścia mogłyby potencjalnie zostać zastosowane w badaniach nad akupunkturą opartą na MAI poprzez integrację parametrów stymulacji z danymi behawioralnymi, neurofizjologicznymi i sygnałami wyjściowymi wibracji w celu wsparcia analizy sygnałów, klasyfikacji behawioralnej, optymalizacji parametrów stymulacji oraz przewidywania odpowiedzi związanych z akupunkturą. Zatem przyszłe badania łączące stymulację opartą na MAI z metodologiami uczenia maszynowego mogą dodatkowo zwiększyć precyzję, powtarzalność i interpretację mechanistyczną badań nad akupunkturą.
Ważnym aspektem jest fakt, że reprezentatywne dane walidacyjne przedstawione w niniejszym artykule zostały powielone, zaadaptowane lub podsumowane na podstawie wcześniej opublikowanych badań z wykorzystaniem platformy MAI. Głównym celem tego artykułu nie jest raportowanie nowych wyników eksperymentalnych, lecz dostarczenie szczegółowego, krok po kroku protokołu w celu odtwarzalnego zastosowania ustandaryzowanej mechanicznej stymulacji akupunkturowej w eksperymentalnych modelach zwierzęcych.
Protokół
Wszystkie protokoły dotyczące zwierząt opisane w niniejszym artykule zostały zatwierdzone przez Institutional Animal Care and Use Committees (IACUCs) Uniwersytetu Daegu Haany (DHU2012-008, DHU2022-12) oraz College of Medicine Uniwersytetu Yonsei (# 2023-0006) i zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals.
1. Przygotowanie instrumentu do akupunktury mechanicznej
- Zmontuj instrument do akupunktury mechanicznej (MAI) (Rysunek 1).
- Przygotuj instrument do akupunktury mechanicznej (MAI), składający się z wykonanej na zamówienie jednostki sterującej oraz wibratora mechanicznego połączonego z igłą do akupunktury (Rysunek 1D). Użyj jednostki sterującej do regulacji natężenia stymulacji, częstotliwości wibracji oraz czasu trwania stymulacji3,4,13.
- Użyj sterylnej igły do akupunktury o średnicy 0.10 mm, długości trzonu 10 mm i długości uchwytu 10 mm. Zamocuj gumowy ogranicznik na trzonie igły w odległości 3 mm od jej czubka, aby ustandaryzować głębokość wprowadzenia.
- Przymocuj silnik wibracyjny do igły do akupunktury za pomocą stabilnego złącza zaciskowego. Upewnij się, że igła nie przesuwa się podczas wibracji, a ogranicznik pozostaje nieruchomy podczas stymulacji.
- Skonfiguruj parametry stymulacji.
- Ustaw warunki stymulacji na wibracje ciągłe o częstotliwości 85 Hz i przyspieszeniu 1.3 m/s2 przez 20 s, co generuje stabilne przebiegi przyspieszenia podczas stymulacji (Rysunek 1E).
UWAGA: Wcześniejsze eksperymenty walidacyjne13 wykazały, że akupunktura manualna generuje częstotliwości wibracji wynoszące około 70–90 Hz oraz wartości przyspieszenia średnio około 1.3 m/s2 (Rysunek 1A,B). Na podstawie tych pomiarów MAI skonfigurowano tak, aby dostarczał stymulację wibracyjną o częstotliwości 85 Hz i przyspieszeniu 1.3 m/s2, co ściśle odpowiada charakterystyce mechanicznej akupunktury manualnej, zapewniając jednocześnie stabilny i powtarzalny sygnał wyjściowy. Czas trwania stymulacji wynoszący 20 s przyjęto z wcześniej opublikowanych badań nad optymalizacją parametrów13 w szczurzym modelu aktywności lokomotorycznej indukowanej kokainą, w których porównywano różne czasy trwania stymulacji i natężenia przyspieszenia w celu zidentyfikowania skutecznych i dobrze tolerowanych warunków stymulacji. W niniejszym protokole „częstotliwość” odnosi się do dominującej składowej częstotliwości wibracji czubka igły mierzonej z sygnału akcelerometru. Wartość ta odzwierciedla wibracje przekazywane na czubek igły podczas manualnego manipulowania uchwytem (tzw. flicking), a nie wolniejszy rytm powtarzających się ruchów ręką operatora. - Zastosuj warunki 85 Hz i 1.3 m/s2, aby wygenerować stabilny i powtarzalny wzorzec wibracji porównywalny z manualną manipulacją igłą (Rysunek 1E).
- Ustaw warunki stymulacji na wibracje ciągłe o częstotliwości 85 Hz i przyspieszeniu 1.3 m/s2 przez 20 s, co generuje stabilne przebiegi przyspieszenia podczas stymulacji (Rysunek 1E).
- Zwaliduj sygnał wibracyjny.
- Aby zwalidować stabilność sygnału wibracyjnego, mocno przymocuj czubek igły do akcelerometru, tak aby wibracje mechaniczne z silnika były bezpośrednio przekazywane z igły na czujnik.
- Zarejestruj sygnał przyspieszenia podczas okresu stymulacji za pomocą systemu akwizycji danych i przeanalizuj sygnał w programie LabVIEW lub równoważnym oprogramowaniu.
- Zdefiniuj wartość przyspieszenia jako stabilne przyspieszenie czubka igły mierzone w fazie plateau stymulacji po początkowej odpowiedzi przejściowej i oblicz dominującą częstotliwość wibracji z sygnału przyspieszenia.
- Przeprowadzaj kalibrację przed każdą sesją eksperymentalną oraz za każdym razem, gdy silnik, złącze, igła lub sprzężenie igła-silnik zostaną wymienione lub wyregulowane.
- Przejdź do eksperymentów na zwierzętach tylko wtedy, gdy zmierzona częstotliwość dominująca i przyspieszenie pozostają stabilne w fazie plateau i mieszczą się w dopuszczalnym zakresie docelowych parametrów stymulacji, np. w granicach około ±10% dla 85 Hz i 1.3 m/s2.
UWAGA: Reprezentatywne przebiegi przyspieszenia wygenerowane podczas akupunktury manualnej oraz stymulacji MAI przedstawiono na Rysunku 1B,E.
2. Przygotowanie zwierząt i model aktywności lokomotorycznej indukowanej kokainą
- Przygotowanie zwierząt doświadczalnych.
- Do eksperymentów dotyczących aktywności lokomotorycznej indukowanej kokainą należy wykorzystać samce szczurów Sprague-Dawley o masie 270–320 g3,4,5. Zwierzęta należy utrzymywać w 12-godzinnym cyklu światło/ciemność z wolnym dostępem do pokarmu i wody.
- Do każdej grupy doświadczalnej należy przydzielić od 6 do 8 zwierząt, chyba że określono inaczej.
- Habituacja zwierząt.
- Każdego szczura należy poddać habituacji do procedur eksperymentalnych na 1 dzień przed testami. Należy przeprowadzić delikatną manipulację oraz sham akupunkturę bez wprowadzania igieł przez 2–3 min.
- Zwierzęta należy umieścić w komorze do pomiaru aktywności lokomotorycznej na 90 min, aby zredukować behawioralne odpowiedzi związane ze stresem podczas procedur stymulacji w stanie czuwania.
- Przed eksperymentem z akupunkturą należy codziennie habituować szczury do chwytania i lekkiego unieruchomienia manualnego przez czas odpowiadający planowanej procedurze akupunktury.
- Podczas stymulacji zwierzę należy delikatnie trzymać w dłoni, aby ustabilizować ciało i przednią kończynę, nie wywierając nadmiernego nacisku. Zwierzęta z grupy kontrolnej (bez akupunktury) należy unieruchamiać w ten sam sposób i przez ten sam czas, ale bez wprowadzania igieł, aby kontrolować ogólne efekty stresu związanego z immobilizacją.
UWAGA: Operatorzy powinni zostać przeszkoleni w celu zapewnienia spójności w przeprowadzaniu unieruchomienia, wprowadzania igieł oraz stymulacji. - W przypadku zaobserwowania uporczywego szamotania się, wokalizacji, prób ucieczki lub innych nadmiernych reakcji stresowych, należy przerwać procedurę i zapewnić dodatkową habituację przed testami.
UWAGA: Wszystkie procedury stymulacji akupunkturowej należy przeprowadzać u zwierząt w stanie czuwania przy lekkim unieruchomieniu manualnym.
3. Lokalizacja punktów akupunkturowych
- Zlokalizuj punkty akupunkturowe HT7 oraz LI5.
- Zlokalizuj punkty akupunkturowe, stosując metodę transpozycyjną, w której lokalizacja punktu akupunkturowego u człowieka jest przeniesiona na odpowiadający mu obszar anatomiczny u zwierzęcia.
- Zidentyfikuj punkt HT7 (Shenmen) w poprzecznej zmarszczce nadgarstka przedniej łapy, po stronie promieniowej względem ścięgna mięśnia zginacza nadgarstka łokciowego3,4,5,8.
UWAGA: Lokalizacja ta odpowiada anatomicznie obszarowi kanału łokciowego/kanału Guyona w pobliżu nerwu łokciowego. W przeciwieństwie do niego, punkt LI5 znajduje się na promieniowym końcu grzbietowej strony nadgarstka, pomiędzy ścięgnami mięśnia prostownika kciuka długiego i mięśnia prostownika kciuka krótkiego. LI5 jest położony po przeciwnej stronie niż HT7, w odległości około 5 mm (Rycyna 1F). Punkty orientacyjne te zostały wykorzystane w celu zapewnienia powtarzalnej lokalizacji punktów akupunkturowych14.
- Zlokalizuj kontrolne punkty akupunkturowe.
- Jako pobliski kontrolny punkt nadgarstka wykorzystaj punkt LI5. Zlokalizuj LI5 w odległości około 5 mm od HT7, w pobliżu dystalnego końca kości promieniowej, pomiędzy ścięgnami mięśnia dłoniowego długiego a mięśnia zginacza nadgarstka promieniowego.
4. Procedura stymulacji mechanicznej
- Przeprowadzenie eksperymentów dotyczących aktywności lokomotorycznej.
- Umieścić szczura w komorze otwartego pola i zapewnić 60 min habituacji. Rejestrować bazową aktywność lokomotoryczną przez 30 min.
- Wstrzyknąć kokainę dootrzewnowo w dawce 15 mg/kg, aby wywołać aktywację lokomotoryczną3,4,5. Lekko unieruchomić zwierzę 1 min po wstrzyknięciu kokainy.
- Aby ustandaryzować głębokość wprowadzenia, zamontować gumowy korek na trzonie igły w punkcie 3 mm od czubka igły (Rysunek 1D). Upewnić się, że korek jest stabilnie zamocowany, tak aby pozostał nieruchomy podczas wprowadzania i wibracji.
- Podczas wprowadzania igły przesuwać ją do momentu, aż korek delikatnie zetknie się z powierzchnią skóry, unikając nadmiernego ucisku skóry, który mógłby zmienić efektywną głębokość wprowadzenia.
- Zastosowanie stymulacji mechanicznej.
- Zastosować ciągłą stymulację wibracyjną o częstotliwości 85 Hz i przyspieszeniu 1,3 m/s2 przez 20 s, co stanowi zoptymalizowany warunek stymulacji zidentyfikowany w eksperymentach walidacji parametrów (Rysunek 2A–C). Pozostawić igłę w miejscu przez 1 min po wprowadzeniu, a następnie ją wycofać.
- Kontynuować rejestrację aktywności lokomotorycznej do 60 min po wstrzyknięciu kokainy. Analizować aktywność lokomotoryczną w odstępach 10-minutowych lub jako całkowity dystans przebyty w ciągu 60 min (Rysunek 1C).
- Stosować 20-sekundową stymulację jako warunek standardowy, ponieważ czas ten wywołał silne hamowanie indukowanej kokainą aktywności lokomotorycznej w poprzednich eksperymentach walidacyjnych (Rysunek 2A–C).
UWAGA: Ciągła 40-sekundowa stymulacja wywoływała zachowania stresowe, w tym wokalizację i reakcje unikania, dlatego została wykluczona ze standardowych warunków stymulacji.
- Przeprowadzenie eksperymentów walidacji parametrów bodźca.
- Porównać czasy stymulacji wynoszące 0 s, 10 s, 20 s i 40 s lub porównać różne ustawienia przyspieszenia, np. 0,7 i 1,3 m/s2, w celu walidacji parametrów stymulacji (Rysunek 2).
- Stosować stymulację 50 Hz jako warunek ukierunkowany na ciałka Meissnera oraz stymulację 200 Hz jako warunek ukierunkowany na ciałka Paciniego w eksperymentach związanych z mechanoreceptorami, zgodnie z wcześniejszymi opisami4,8.
5. Pozyskiwanie danych i analiza statystyczna
- Zmierz aktywność lokomotoryczną przy użyciu systemu wideotracingu z kamerą zamontowaną nad obszarem testowym. Umieść zwierzęta w kwadratowej komorze otwartego pola (40 cm × 40 cm × 45 cm) i określ całkowity przebyty dystans za pomocą oprogramowania do śledzenia wideo.
- Zarejestruj przebiegi przyspieszenia w czasie z wyjścia akcelerometru podczas eksperymentów kalibracyjnych wibracji. Podaj częstotliwość dominującą, amplitudę przyspieszenia oraz czas trwania stabilnych wibracji (Rysunek 1D,E).
- Oceń rozkład danych pod kątem normalności przed przeprowadzeniem parametrycznej analizy statystycznej. W przypadku spełnienia założeń normalności rozkładu, przeanalizuj różnice między grupami za pomocą jednoczynnikowej lub dwuczynnikowej analizy wariancji, a następnie przeprowadź odpowiednie porównania post hoc.
- Śledzenie i analiza behawioralna powinny być wykonywane przez badaczy, którzy w miarę możliwości nie znają przydziału zwierząt do grup eksperymentalnych.
- Dane behawioralne i fizjologiczne przedstaw jako średnią ± SEM. Aktywność lokomotoryczną przeanalizuj za pomocą jednoczynnikowej lub dwuczynnikowej analizy wariancji z powtarzanymi pomiarami (ANOVA), a następnie przeprowadź test post hoc Tukeya.
UWAGA: Wielkość prób dobrano na podstawie wcześniejszych badań z wykorzystaniem tego samego modelu aktywności lokomotorycznej indukowanej kokainą u szczurów oraz protokołu mechanicznej stymulacji akupunkturowej. Aby zapewnić wystarczającą moc statystyczną, w każdej grupie wykorzystano 6–8 szczurów. Zwierzęta wykluczano z analizy wyłącznie w przypadku wystąpienia zdefiniowanych problemów technicznych lub proceduralnych, takich jak błędna lokalizacja punktów akupunkturowych, awaria urządzenia, niestabilne wyjście wibracji podczas kalibracji lub błąd śledzenia wideo.
Wyniki
Walidacja powtarzalnej stymulacji mechanicznej
Reprezentatywna konfiguracja urządzenia oraz walidacja wyjściowych drgań przedstawione na Rysunku 1 zostały przygotowane na potrzeby niniejszego artykułu, natomiast ilościowe zakresy referencyjne dla parametrów drgań pochodzących z akupunktury manualnej zostały podsumowane na podstawie wcześniejszych badań walidacyjnych.
Urządzenie MAI zostało zwalidowane poprzez porównanie efektu mechanicznego generowanego podczas ręcznej manipulacji igłą akupunktury z efektem generowanym przez stymulację sterowaną urządzeniem (Rysunek 1). Ręczna manipulacja igłą akupunktury wywoła gwałtowne i nieregularne piki przyspieszenia na końcówce igły, wykazując znaczną zmienność w zależności od operatora13. W pierwotnym badaniu walidacyjnym wartości przyspieszenia mieściły się w zakresie od 0,1 m/s2 do 2,9 m/s2, przy średniej wartości wynoszącej około 1,3 m/s2, a podczas ręcznej manipulacji igłą wykryto dominujące częstotliwości drgań w zakresie około 70–90 Hz (Rysunek 1A,B)3,13.
Na podstawie tych pomiarów skonfigurowano MAI tak, aby dostarczał powtarzalną stymulację wibracyjną o częstotliwości 85 Hz i przyspieszeniu 1,3 m/s2. W tych warunkach urządzenie generowało stabilne i ciągłe przebiegi przyspieszenia podczas stymulacji, co wykazało, że wibracje igły przypominające ruchy manualne mogą zostać przekształcone w mierzalny i powtarzalny bodziec mechaniczny (Rycina 1D,E).
Obserwacja ta stanowi bezpośrednią mechaniczną walidację wyjścia urządzenia, a nie interpretację behawioralną lub mechanistyczną. Wyniki te potwierdzają zdolność platformy MAI do standaryzacji mechanicznej stymulacji akupunkturowej przy jednoczesnym zachowaniu charakterystyk wibracji porównywalnych z tymi uzyskiwanymi podczas manualnej manipulacji akupunkturowej.
Walidacja behawioralna w modelu aktywności lokomocyjnej indukowanej kokainą
Dane behawioralne przedstawione na Rysunku 2 są reprezentatywnymi danymi walidacyjnymi z wcześniejszych badań MAI z wykorzystaniem szczurego modelu aktywności lokomotorycznej indukowanej kokainą, chyba że w legendzie do rysunku wskazano inaczej.
Skuteczność biologiczną protokołu oceniono z wykorzystaniem modelu aktywności lokomocyjnej indukowanej kokainą (Rysunek 2). Podanie kokainy znacząco zwiększyło aktywność lokomocyjną, podczas gdy stymulacja MAI w HT7 istotnie osłabiła hiperlokomocję wywołaną kokainą4,5,7,8,13. Eksperymenty te przeprowadzano zazwyczaj na 6–8 szczurach w grupie, a istotność statystyczną określano za pomocą porównań opartych na analizie ANOVA, zgodnie z raportami w oryginalnych badaniach. Efekt hamujący był zależny od czasu trwania stymulacji i był najsilniejszy po 20 s stymulacji przy 85 Hz i 1,3 m/s2 (Rysunek 2A–C).
Eksperymenty optymalizacji parametrów stymulacji dodatkowo wykazały, że efekt hamujący zależał od intensywności stymulacji oraz lokalizacji punktu akupunkturowego. Stymulacja mechaniczna zastosowana w punkcie HT7 znacząco zredukowała odpowiedzi lokomotoryczne indukowane kokainą, podczas gdy stymulacja pobliskiego punktu kontrolnego LI5 w identycznych warunkach nie zahamowała aktywności lokomotorycznej4,13. Zatem bezpośrednia obserwacja behawioralna wykazała, że stymulacja HT7 zredukowała aktywność lokomotoryczną indukowaną kokainą, podczas gdy stymulacja LI5 nie wywoła takiego samego efektu hamującego przy tych samych warunkach stymulacji (Rysunek 2D,E). Wyniki te wskazują, że efekt behawioralny był specyficzny dla punktu akupunkturowego, a nie stanowił niespecyficznej konsekwencji unieruchomienia lub stymulacji nadgarstka.
Wcześniejsze dowody walidacyjne dla dróg obwodowych i ośrodkowych zaangażowanych w stymulację MAI
Wyniki w tej sekcji zostały podsumowane na podstawie wcześniejszych badań nad walidacją mechanistyczną. Eksperymenty walidacyjne w obrębie układu obwodowego i centralnego dodatkowo potwierdziły swoistość protokołu MAI (Rysunek 3). Hamujący efekt stymulacji punktu HT7 został znacząco zredukowany przez podanie miejscowego środka znieczulającego oraz zniesiony przezcięcie nerwu łokciowego, co wskazuje, że dla wystąpienia efektów behawioralnych stymulacji mechanicznej akupunktury niezbędna jest nienaruszona obwodowa sygnalizacja aferentna nerwu łokciowego3,13. W przeciwieństwie do tego, przezcięcie nerwu promieniowego lub pośrodkowego nie zniosło hamującego efektu stymulacji HT7, co potwierdza anatomiczną swoistość drogi aferentnej nerwu łokciowego. Eksperymenty te przeprowadzono z wykorzystaniem liczebności grup opisanych w oryginalnych badaniach, zazwyczaj od 6 do 8 szczurów na grupę, chyba że zaznaczono inaczej.
Reprezentatywne zapisy wykazały, że stymulacja MAI preferencyjnie aktywowała duże mielinizowane drogi włókien A związane z mechanoreceptorami, w tym ciałka Paciniego i Meissnera, podczas gdy stosunkowo słabsze odpowiedzi zaobserwowano w nocyceptywnych drogach włókien C/Aδ5,13. Stwierdzenie to odnosi się do bezpośrednich obserwacji elektrofizjologicznych odpowiedzi aferentnych. Interpretacja, że odpowiedzi te odzwierciedlają sygnalizację związaną z mechanoreceptorami, jest przedstawiona jako wnioskowanie na poziomie drogi na podstawie wcześniejszych badań walidacyjnych. Ponadto mechaniczna stymulacja nerwu łokciowego aktywowała drogę słupów tylnych i jądra klinowego, a przerwanie tej drogi zapobiegło efektowi hamującemu w odpowiedziach lokomocyjnych indukowanych kokainą3. Kolejne badania wykazały dalszy udział bocznego podwzgórza, drogi kory przedczołowej przyśrodkowej – bocznej obrębu habenuli, jądra przymiędziowego grzbietowego oraz mezolimbicznego układu dopaminergicznego w zapośredniczonym przez MAI tłumieniu behawioralnych odpowiedzi związanych z kokainą (Rysunek 4)3,4,7,8,13,15. Badania nad tymi centralnymi drogami obejmowały podejścia polegające na przerwaniu lub hamowaniu dróg, takie jak ablacja elektrolityczna, chemiczna ablacja indukowana kwasem ibotenowym oraz optogenne hamowanie za pomocą halorodopsyny, aby sprawdzić, czy obwody te są wymagane dla efektów behawioralnych stymulacji HT7. Ponieważ eksperymenty te obejmują wyspecjalizowane manipulacje na poziomie obwodów, zostały one tutaj podsumowane jako wcześniejsze dowody walidacyjne, a nie przedstawione jako krok po kroku opisane procedury eksperymentalne.
Łącznie te reprezentatywne wyniki wykazują, że stymulacja oparta na MAI zapewnia powtarzalny i mierzalny protokół akupunktury mechanicznej, który jest w stanie aktywować określone obwodowe drogi mechanoreceptorowe oraz modulować powiązane z nagrodą obwody neuronalne i reakcje behawioralne.
Rycina 1Opracowanie i walidacja mechanicznego instrumentu do akupunktury (MAI). (A) Schematyczna ilustracja przedstawiająca zmienność manualnej manipulacji akupunkturowej w zależności od operatora. (B) Reprezentatywne przebiegi przyspieszenia zarejestrowane podczas manualnej manipulacji akupunkturowej. (C) Wpływ manualnej akupunktury punktu HT7 wykonanej przez czterech różnych operatorów na indukowaną kokainą aktywność lokomotoryczną, ilustrujący zmienność międzyoperatorową w behawioralnych efektach manualnej stymulacji. (D) Adnotowany obraz zmontowanego MAI przedstawiający igłę, zacisk typu krokodylk, silnik wibracyjny oraz gumowy korek służący do standaryzacji 3-mm głębokości wprowadzenia. (E) Reprezentatywny przebieg przyspieszenia generowany przez MAI przy 85 Hz i 1,3 m/s2, wykazując stabilną i powtarzalną stymulację mechaniczną. (F) Reprezentatywne zdjęcia przedstawiające anatomiczne położenie punktów HT7 i LI5 w przedniej łapie szczura. Czerwone kropki wskazują lokalizacje punktów akupunkturowych wykorzystanych do wprowadzenia igieł. Punkt HT7 zidentyfikowano w poprzecznej zmarszczce nadgarstka w pobliżu ścięgna mięśnia zginacza nadgarstka łokciowego, natomiast punkt LI5 zidentyfikowano po stronie promieniowej grzbietowej części nadgarstka, pomiędzy ścięgnami mięśnia prostownika kciuka długiego i krótkiego, co zapewniło powtarzalne punkty orientacyjne dla lokalizacji punktów akupunkturowych. Rysunek został zaadaptowany za zgodą Kim et al.13. Aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku, kliknij tutaj.
Rysunek 2Optymalizacja parametrów stymulacji mechanicznej w modelu aktywności lokomocyjnej wywołanej kokainą. (A–C) Wpływ czasu trwania stymulacji, natężenia stymulacji oraz głębokości wprowadzenia igły na aktywność lokomotoryczną indukowaną kokainą. (AStymulację HT7-MAI zastosowano przez 0, 10, 20 lub 40 s przy częstotliwości 85 Hz i prędkości 1,3 m/s2. (BStymulację HT7-MAI stosowano przez 20 s przy różnych intensywnościach przyspieszenia.CStymulację HT7-MAI stosowano na różnych głębokościach wprowadzenia igły.D) Reprezentatywne ścieżki ruchu podczas testowania aktywności lokomocyjnej po podaniu soli fizjologicznej, kokainy, kokainy wraz ze stymulacją HT7 lub kokainy wraz ze stymulacją LI5. (E) Mechaniczna stymulacja akupunkturowa w punkcie HT7, ale nie LI5, z częstotliwością 85 Hz i prędkością 1,3 m/s2 przez 20 s, co znacząco osłabiło indukowany kokainą wzrost aktywności lokomotorycznej. Dane przedstawiono jako średnia ± SEM. *p < 0,05 w porównaniu z grupą kontrolną traktowaną kokainą. Rycina została opracowana na podstawie danych Kim i wsp. za zgodą autorów.13. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.
Rycina 3Walidacja obwodowych włókien aferentnych i mechanoreceptorów w kontekście efektów akupunktury indukowanych przez MAI. (A) Schematyczny rysunek sygnalizacji obwodowo-centralnej indukowanej mechaniczną akupunkturą. Stymulacja wibracyjna w punkcie HT7 aktywuje mechanoreceptory, w tym ciałka Meissnera i Paciniego, w tkankach skórnych i podskórnych. Sygnały te są przesyłane za pośrednictwem grubych, zmielinizowanych włókien doprowadzających typu A nerwu łokciowego do segmentów rdzeniowych C8–T1, a następnie wpływają na mezolimbiczny system dopaminergiczny. (B) Wpływ wstrzyknięcia środka znieczulającego miejscowo na hamujący efekt stymulacji HT7-MAI. Wstrzyknięcie bupiwakainy wokół HT7 zmniejszyło hamujący wpływ stymulacji HT7 na aktywność lokomotoryczną wywołaną kokainą, co wskazuje na udział obwodowych sygnałów aferentnych. (C–H) Somatyczne odpowiedzi aferentne włókien związanych z ciałkami Paciniego oraz włókien związanych z ciałkami Meissnera podczas stymulacji MAI w punkcie HT7. (I–N) Odpowiedzi włókien A i włókien C podczas stymulacji MAI w punkcie HT7. Stymulacja MAI silnie aktywowała aferentne włókna A i wywoła słabsze odpowiedzi włókien C. Dane przedstawiono jako średnia ± SEM. *p < 0,05 względem wartości bazowej lub grupy kontrolnej traktowanej kokainą, w zależności od przypadku. Rycina została opracowana na podstawie danych z pracy Kim i wsp. za zgodą autorów.13. Prosimy kliknąć tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.
Rycina 4Proponowana obwodowo-centralna ścieżka neuronalna leżąca u podstaw modulacji odpowiedzi indukowanych kokainą oraz mezolimbicznego systemu dopaminergicznego za pośrednictwem MAIStymulacja MAI skóry aktywuje obwodowe nerwy sensoryczne i przekazuje sygnały somatosensoryczne poprzez wznoszące drogi rdzeniowe. Impulsy te są przekazywane do obwodów mózgowych obejmujących mPFC, LHb, RMTg, VTA oraz NAc. Aktywacja szlaku mPFC–LHb–RMTg może nasilać hamowanie GABA-ergiczne neuronów dopaminergicznych VTA, co prowadzi do zmniejszenia uwalniania dopaminy w NAc i tłumienia wywołanej kokainą aktywacji psychomotorycznej. Prosimy kliknąć tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.
Dyskusja
Niniejsze badanie przedstawia zestandaryzowany protokół stosowania akupunktury mechanicznej z wykorzystaniem urządzenia do stymulacji wibracyjnej, które umożliwia powtarzalne dostarczanie mechanicznej stymulacji opartej na wibracjach. Poprzez zapewnienie ilościowej kontroli częstotliwości stymulacji, intensywności przyspieszenia oraz czasu trwania, podejście to eliminuje głównym ograniczenie tradycyjnej akupunktury manualnej, która jest immanentnie zależna od techniki terapeuty i trudna do standaryzacji.
Jedną z głównych zalet tego protokołu jest możliwość izolacji i standaryzacji mechanicznego komponentu stymulacji akupunkturowej. W przeciwieństwie do akupunktury manualnej, która znacząco różni się w zależności od praktyka, urządzenie MAI generuje stabilną i powtarzalną stymulację wibracyjną bezpośrednio przez wprowadzoną igłę do akupunktury. Powtarzalność ta jest szczególnie istotna w badaniach mechanistycznych analizujących neurologiczne i fizjologiczne podstawy efektów akupunktury.
W porównaniu z elektroakupunkturą (EA), niniejszy protokół pozwala na badanie stymulacji mechanicznej bez wprowadzania zewnętrznego prądu elektrycznego. Rozróżnienie to jest istotne, ponieważ stymulacja elektryczna może bezpośrednio depolaryzować obwodowe włókna nerwowe w zależności od pobudliwości elektrycznej, konfiguracji elektrod, natężenia prądu i impedancji tkanek16,17. Z kolei MAI generuje przede wszystkim odkształcenia mechaniczne miejscowych tkanek skórnych i podskórnych otaczających wprowadzoną igłę. W związku z tym protokół ten dokładniej odwzorowuje fizyczny komponent manualnej akupunktury, umożliwiając jednocześnie ilościową kontrolę parametrów stymulacji.
Poprzednie badania walidacyjne wykazały, że stymulacja MAI w punkcie HT7 hamuje indukowaną kokainą aktywność lokomotoryczną poprzez obwodowe mechanizmy aferentne13. Efekt hamujący został zablokowany przez znieczulenie miejscowe w punkcie HT7 i zniesiony przez przecięcie nerwu łokciowego, co wskazuje, że nienaruszone przewodnictwo aferentne nerwu łokciowego jest niezbędne do wystąpienia efektów behawioralnych mechanicznej stymulacji akupunkturowej. Co ważne, efekt hamujący nie został zapobiegiony przez blokadę dróg włókien C/Aδ i nie został odtworzony przez selektywną stymulację nocyceptywną, co sugeruje, że stymulacja MAI aktywuje głównie duże zmielinizowane drogi włókien A, a nie aferenty nocyceptywne.
Charakter tego protokołu, oparty na mechanoreceptorach, dodatkowo odróżnia stymulację MAI od EA. Opisana tutaj częstotliwość stymulacji reprezentuje dominującą częstotliwość wibracji oscylacyjnych przenoszonych na końcówkę igły, a nie rytm powtarzających się ruchów ręcznych. Wcześniejsze badania wykazały, że częstotliwości wibracji związane z aktywacją ciałek Meissnera i Paciniego skutecznie hamowały reakcje lokomotoryczne wywołane kokainą5,18. Wyniki te wspierają interpretację, że mechaniczna akupunktura oparta na wibracjach angażuje aferenty związane z niskoprogowymi mechanoreceptorami w tkankach powierzchownych i głębokich oraz przekazuje sygnały poprzez drogi włókien A nerwu łokciowego3,13. Zatem MAI stanowi pośredni model eksperymentalny między akupunkturą manualną a EA, zachowując mechaniczny komponent akupunktury manualnej oparty na igle, przy jednoczesnym umożliwieniu standaryzacji i kwantyfikacji stymulacji.
Biologiczną zasadność niniejszego protokołu potwierdzają dowody na poziomie szlaków sygnałowych. Mechaniczna stymulacja nerwu łokciowego aktywowała szlak kolumny tylnej – jądra klinowego, a przerwanie tego szlaku zniosło efekt hamujący aktywność lokomotoryczną wywołaną kokainą3. Z kolei uszkodzenia drogi rdzeniowo-wzgórzowej nie zapobiegły efektowi behawioralnemu, co sugeruje, że w procesie tym zaangażowane są nieszkodliwe somatosensoryczne szlaki dotykowe i wibracyjne, a nie sygnalizacja nocyceptywna. Pod względem mechanistycznym wcześniejsze badania wskazują, że stymulacja HT7 oparta na MAI angażuje szlak obwodowo-centralny łączący duże zmielinizowane włókna aferentne typu A w nerwie łokciowym z regulacją dopaminergiczną w układzie mezolimbicznym. Sygnały somatosensoryczne te są przekazywane poprzez szlak kolumny tylnej – jądra klinowego, a następnie rekrutują downstreamowe obwody modulacyjne mezolimbiczne, w tym szlak mPFC–LHb–RMTg–VTA–NAc. Szlak ten może przyczyniać się do supresji aktywności lokomotorycznej wywołanej kokainą oraz reakcji behawioralnych związanych z dopaminą4,6,7,8. Zbiorczo wyniki te wskazują, że protokół MAI stanowi powtarzalną platformę eksperymentalną do badania sposobu, w jaki określona obwodowa stymulacja mechaniczna moduluje centralne obwody neuronalne i zachowania związane z nagrodą.
W celu pomyślnego zastosowania niniejszego protokołu należy wziąć pod uwagę kilka krytycznych kroków. Po pierwsze, lokalizacja punktu akupunkturowego musi być precyzyjna anatomicznie. W przypadku stymulacji HT7 u gryzoni, kluczowymi punktami orientacyjnymi są poprzeczna zmarszczka nadgarstka oraz ścięgno mięśnia zginacza nadgarstka łokciowego13,19. Po drugie, głębokość wprowadzenia igły powinna być zestandaryzowana przy użyciu ogranicznika, ponieważ niekontrolowane różnice w głębokości wkłucia mogą zwiększyć zmienność eksperymentalną20. Po trzecie, wymagane jest stabilne połączenie igły z silnikiem, aby zapewnić dokładną transmisję wibracji na końcówkę igły. Wreszcie, należy unikać nadmiernej stymulacji. Wcześniejsze badania walidacyjne wykazały, że przedłużona stymulacja ciągła, np. wibracje trwające 40 s, wywoływała behawioralne reakcje stresowe, podczas gdy stymulacja trwająca 20 s przynosiła wyraźne efekty behawioralne przy lepszej tolerancji13.
Pomimo tych zalet, należy uznać kilka ograniczeń. Stymulacja generowana przez MAI reprezentuje jedynie podzbiór technik akupunktury manualnej i nie odtwarza w pełni wielokierunkowych manipulacji wykonywanych przez doświadczonych praktyków. Ponadto większość walidacji tego protokołu przeprowadzono na modelach zwierzęcych, a jego bezpośrednia przydatność w klinicznych warunkach u ludzi wymaga dalszych badań.
MAI nie odtwarza pełnej wielowymiarowej złożoności tradycyjnej akupunktury manualnej, w tym ruchów unoszenia i wciskania, rotacji, dwukierunkowej deformacji tkanek oraz zależnego od terapeuty sprzężenia zwrotnego dotykowego. W związku z tym stymulacja wibracyjna dostarczana przez MAI nie powinna być interpretowana jako pełna reprezentacja akupunktury manualnej. Zamiast tego, niniejszy protokół standaryzuje oparty na wibracjach komponent mechaniczny przekazywany do czubka igły podczas manualnej manipulacji polegającej na szybkim potrząsaniu uchwytem.
Chociaż protokół ten został zwalidowany głównie przy użyciu stymulacji HT7 u samców szczurów Sprague-Dawley w modelu aktywności lokomotorycznej indukowanej kokainą, MAI można dostosować do innych punktów akupunkturowych i modeli eksperymentalnych. Może być jednak wymagana ponowna optymalizacja parametrów, ponieważ głębokość tkanki, lokalna anatomia, rozkład mechanoreceptorów oraz skład nerwów aferentnych mogą się różnić w zależności od punktów akupunkturowych, gatunków, szczepów, płci i stanów chorobowych.
Przyszłe zastosowania tego podejścia mogą obejmować jego integrację ze zestandaryzowanymi platformami badawczymi w zakresie neuromodulacji oraz adaptację do translacyjnych i klinicznych badań nad akupunkturą. Dalsze udoskonalenie urządzenia może umożliwić bardziej precyzyjną kontrolę wzorców stymulacji i ułatwić szersze zastosowanie w wielu modelach chorób. W ostateczności protokół ten może pomóc w połączeniu tradycyjnej praktyki akupunktury z nowoczesną neuronauką, umożliwiając powtarzalne i mierzalne badanie fizjologicznych mechanizmów pośredniczących w działaniu akupunktury.
Oświadczenia
Autorzy oświadczają, że nie mają żadnych konkurencyjnych interesów finansowych ani konfliktów interesów związanych z niniejszym badaniem.
Podziękowania
Niniejsza praca została sfinansowana przez Koreański Instytut Medycyny Wschodniej (KIOM) w ramach grantu nr KSN2512011, Koreańską Agencję Technologii Zdrowotnych (Korea Health Technology R...&Projekt #38;D realizowany za pośrednictwem Koreańskiego Instytutu Rozwoju Przemysłu Zdrowia (KHIDI), finansowany przez Ministerstwo Zdrowia & Ministerstwo Zdrowia i Opieki Społecznej Republiki Korei (RS-2024-00443893) oraz Narodowa Fundacja Badań Korei (NRF) w ramach grantu finansowanego przez rząd Korei (RS-2024-00349070). Pragniemy wyrazić naszą szczerą wdzięczność Zespołowi Badawczemu Punktów Akupunkturowych w Koreańskim Instytucie Medycyny Wschodniej, Katedrze Studiów nad Meridianami i Punktami Akupunkturowymi na Uniwersytecie Daegu Haany oraz Katedrze Fizjologii w College of Medicine Uniwersytetu Yonsei za nieocenione wsparcie i wnikliwe dyskusje związane z opracowaniem i walidacją mechanicznego instrumentu do akupunktury.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Akcelerometr | PCB Piezotronics | PO-AXA-12-01 | Stosowany do pomiaru wibracji |
| Igła do akupunktury (0,10 mm × 10 mm) | Dongbang Acupuncture Inc. | DB102 | Sterylna jednorazowa igła do akupunktury |
| Złącze z klipsem typu krokodylko | N/A | N/A | Służy do połączenia wibratora z igłą do akupunktury |
| Bupiwakainy chlorowodorek (0,5%) | Huons Pharm, Korea | HIRA Code (199502333) | Stosowany w eksperymentach z znieczuleniem miejscowym |
| Kokainy chlorowodorek | Macfarlan Smith Ltd | 53-21-4 | Stosowany w eksperymentach dotyczących aktywności lokomotorycznej indukowanej kokainą |
| Jednostka sterująca | Własny wyrób | N/A | Służy do regulacji częstotliwości stymulacji, intensywności przyspieszenia i czasu trwania |
| Oprogramowanie do akwizycji danych | LabVIEW | LabVIEW 7 Express (7.0) | Stosowane do analizy sygnałów wibracyjnych |
| System akwizycji danych | National Instruments | DAQ-NI USB-6200 | Służy do cyfryzacji sygnału |
| Mechaniczne urządzenie do akupunktury (MAI) | Własny wyrób | N/A | Urządzenie wykonane na zamówienie, składające się z jednostki sterującej, silnika wibracyjnego, złącza typu klips, igły do akupunktury i gumowego stopera |
| Komora do testów lokomotorycznych open-field | Własny wyrób | kwadratowe pudełko open field (40 cm × 40 cm× 45cm) wykonane z czarnego akrylu. | Stosowane do analizy aktywności lokomotorycznej |
| Gumowy stoper | N/A | N/A | Zamontowany 3 mm od czubka igły w celu standaryzacji głębokości wprowadzenia |
| Szczury Sprague-Dawley | Orient Bio | Crl:CD(SD)IGS | Samce, 270–320 g |
| Silnik wibracyjny | Motor Bank | MB-0412V | Stosowany do mechanicznej stymulacji wibracyjnej |
| Oprogramowanie do śledzenia wideo | EthoVision XT | Ethovision 3.1 | Stosowane do śledzenia aktywności lokomotorycznej |
Bibliografia
- Langevin HM, et al. Biomechanical response to acupuncture needling in humans. J Appl Physiol (1985). 2001;91(6):2471-2478.
- Langevin HM, et al. Manual and electrical needle stimulation in acupuncture research: Pitfalls and challenges of heterogeneity. J Altern Complement Med. 2015;21(3):113-128.
- Chang S, et al. Involvement of the cuneate nucleus in the acupuncture inhibition of drug-seeking behaviors. Front Neurosci. 2019;13:928.
- Chang S, et al. Acupuncture reduces cocaine psychomotor responses by activating the rostromedial tegmental nucleus. Addict Biol. 2021;26(6):e13052.
- Shin JH, et al. Paired mechanical and electrical acupuncture of neurogenic spots induces opioid-mediated suppression of hypertension in rats. J Physiol Sci. 2020;70(1):14.
- Chang S, et al. Acupuncture attenuates alcohol dependence through activation of endorphinergic input to the nucleus accumbens from the arcuate nucleus. Sci Adv. 2019;5(9):eaax1342.
- Chang S, et al. Mediation of mPFC-LHb pathway in acupuncture inhibition of cocaine psychomotor activity. Addict Biol. 2023;28(10):e13321.
- Ahn D, et al. Role of lateral hypothalamus in acupuncture inhibition of cocaine psychomotor activity. Int J Mol Sci. 2021;22(11):5994.
- He J, et al. Cancer detection for small-size and ambiguous tumors based on semantic FPN and transformer. PLoS One. 2023;18(2):e0275194.
- Zhang J, Yu H, Ning X. Variational mode decomposition based on refined composite multiscale dispersion entropy and its application in sEMG denoising. J Electromyogr Kinesiol. 2026;89:103176.
- Zhu H, Rong C, Liu H. Deep deterministic policy gradient algorithm based on dung beetle optimization and priority experience replay mechanism. Sci Rep. 2025;15(1):13978.
- Su H, et al. A novel transfer learning framework based on deep contrastive convolution for wind turbine bearing fault localization. IEEE Trans Reliab. 2025;74(4):5579-5591.
- Kim SA, et al. Peripheral afferent mechanisms underlying acupuncture inhibition of cocaine behavioral effects in rats. PLoS One. 2013;8(11):e81018.
- Jin W, et al. Acupuncture reduces relapse to cocaine-seeking behavior via activation of GABA neurons in the ventral tegmental area. Addiction Biology. 2018;23(1):165-181.
- Kim, DH, et al. Acupuncture points can be identified as cutaneous neurogenic inflammatory spots. Sci Rep. 2017;7:15214.
- Merrill DR, Bikson M, Jefferys JG. Electrical stimulation of excitable tissue: Design of efficacious and safe protocols. J Neurosci Methods. 2005;141(2):171-198.
- Rattay F. The basic mechanism for the electrical stimulation of the nervous system. Neuroscience. 1999;89(2):335-346.
- Abraira VE, Ginty DD. The sensory neurons of touch. Neuron. 2013;79(4):618-639.
- Yin CS, et al. A proposed transpositional acupoint system in a mouse and rat model. Res Vet Sci. 2008;84(2):159-165.
- Macpherson H, et al. Standards for reporting interventions in controlled trials of acupuncture: The STRICTA recommendations. Acupunct Med. 2002;20(1):22-25.
Przedruki i uprawnienia
