Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł badawczy

Ruskogenina hamuje progresję raka nosogardzieli poprzez obniżanie ekspresji KDM1A w celu współindukcji ferroptozy i apoptozy

57 wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/72523

⸱

3 września 2026

1School of Stomatology and Optometry, Hubei University of Science and Technology

W tym artykule

Podsumowanie

Niniejszy protokół ma na celu ocenę skuteczności przeciwnowotworowej ruscogeniny w komórkach rakaa nosogardzieli. Przedstawia on szczegółowe metodologie — w tym testy żywotności, migracji, apoptozy i ferroptozy — aby systematycznie wyjaśnić, w jaki sposób związek ten indukuje podwójną śmierć komórek poprzez celowanie i obniżanie ekspresji KDM1A.

Streszczenie

Rak nosogardzielny (NPC) jest wysoce agresywnym nowotworem złośliwym. Naturalny związek ruscogenina (Rus) wykazuje potencjał przeciwnowotworowy. Niniejsze badanie wyjaśnia specyficzny mechanizm działania w raku nosogardzielnym (NPC) poprzez zbadanie jego wpływu na komórki NPC oraz analizę leżącego u podstaw ścieżki molekularnej. Ludzka linia komórkowa raka nosogardzielnego (NPC), C666-1, była traktowana różnymi stężeniami Rus. Wykonano serię testów in vitro w celu oceny żywotności, proliferacji, migracji, inwazji, apoptozy i ferroptozy komórek. Rola demetylazy 1A specyficznej dla lizyny (KDM1A) została zbadana za pomocą analizy Western blot i dokowania molekularnego, a jej rola pośrednicząca została potwierdzona w eksperymentach z nadróbieniem poprzez nadekspresję. Ruscogenina w sposób zależny od dawki zmniejszyła zdolności do proliferacji, tworzenia kolonii, migracji oraz inwazji komórek C666-1. Mechanistycznie traktowanie Rus indukowało zarówno apoptozę, co potwierdzono aktywacją efektorowej kaspazy-3 i przesunięciem w stronę sygnalizacji proapoptotycznej poprzez równowagę Bax/Bcl-2, jak i ferroptozę, charakteryzującą się zwiększonym peroksydowaniem lipidów oraz wzrostem poziomu żelaza wewnątrzkomórkowego. Efekty przeciwnowotworowe były silnie skorelowane z obniżeniem poziomu KDM1A. Co kluczowe, wymuszona nadekspresja KDM1A znacząco osłabiła indukowaną przez Rus apoptozę i ferroptozę oraz odwróciła supresję fenotypów złośliwych, co potwierdziło krytyczną rolę pośredniczącą KDM1A. Ruscogenina hamuje progresję złośliwą raka nosogardzielnego poprzez obniżanie poziomu KDM1A, promując tym samym apoptozę i ferroptozę. Wyniki te wskazują, że oś Rus-KDM1A jest obiecującym celem terapeutycznym w leczeniu NPC.

Wprowadzenie

Rak nosogardzielny (NPC) jest rodzajem nowotworu wywołanego współoddziaływaniem czynników genetycznych i środowiskowych1. Chociaż radioterapia przyniosła znaczące postępy w leczeniu, całkowita przeżywalność pacjentów z NPC pozostaje niezadowalająca. Wynika to prawdopodobnie z faktu, że komórki NPC mogą szybko proliferować i wykazują wysoką skłonność do przerzutów do regionalnych węzłów chłonnych oraz odległych narządów2. Dlatego kluczowe jest zbadanie mechanizmów molekularnych sprzyjających progresji NPC. Niedawno odkryto, że ferroptoza – nowy rodzaj śmierci komórkowej regulowany przez Fe2⁺ i nadtlenki lipidów w sposób zależny od żelaza – odgrywa istotną rolę w NPC3. Obecne dowody wykazały, że ferroptoza pełni ważną rolę w NPC, a jej indukcja może zwiększyć skuteczność radioterapii nowotworu4,5.

Ze względu na minimalną toksyczność i mniejszą liczbę skutków ubocznych, chińskie receptury ziołowe są stosowane w leczeniu nowotworów od tysięcy lat6,7. Jako leki wieloskładnikowe, wielocelowe i wykazujące efekt synergistyczny, receptury tradycyjnej medycyny chińskiej (TCM) są stosowane jako skuteczna terapia wspomagająca w zapobieganiu i leczeniu nowotworów, w tym NPC8,9,10. Doniesiono, że Radix ophiopogonis (RO), korzeń wieloletniej rośliny zielnej Ophiopogon japonicus, skutecznie łagodzi NPC w ramach terapii adjuwantowej11,12. Ruscogenina (Rus), główny składnik RO, wykazuje silne działanie przeciwnowotworowe13. W modelach mysich raka jelita grubego Rus może poprawiać uszkodzenia połączeń ścisłych i hamować migrację guza14. Co istotne, Rus może również zmniejszać żywotność komórek raka trzustki poprzez indukcję ferroptozy. Jednakże wpływ Rus na NPC pozostaje niejasny.

Epigenetyka jest głównym obszarem badań nad patogenezą nowotworów i dostarcza wielu skutecznych metod leczenia15. Metylacja histonów, jako jedna z dobrze przebadanych modyfikacji epigenetycznych, bierze udział w rozwoju nowotworów i stanowi istotny cel projektowania leków16. Dynamiczna modulacja metylacji histonów jest pośredniczona przez metylotransferazy i demetylazy17. KDM1A to demetylaza lizyny histonowej, która ze względu na udział w modulacji epigenetycznej uznana została za kluczową w procesie kancerogenezy18. Ponadto wykazano, że KDM1A jest onkoproteiną o wysokiej ekspresji w wielu nowotworach, takich jak rak płuca i rak trzustki19. Guo i wsp. doniesli, że podwyższony poziom KDM1A może tłumić ekspresję homologu fosfatazy i tensyny (PTEN) oraz nasilać proliferację i migrację komórek NPC, jednocześnie hamując apoptozę20. Jednocześnie stwierdzono, że nadekspresja KDM1A może hamować ferroptozę w raku płuca21. Analiza bazy danych Super-PRED wykazała, że KDM1A jest potencjalnym celem działania Rus.

Pomimo uznanego potencjału przeciwnowotworowego Rus w innych nowotworach, jego specyficzna rola i mechanizmy molekularne w raku przerębowo-gardzielowym pozostają całkowicie nieustalone, co stanowi istotną lukę badawczą. Co więcej, choć wcześniejsze doniesienia oddzielnie łączyły KDM1A z proliferacją guza i opornością na ferroptozę, żadne badanie nie sprawdziło dotąd, czy celowanie w KDM1A może jednocześnie uruchamiać wiele ścieżek śmierci komórkowej w NPC. Dlatego niniejsze badanie stanowi silną podstawę do postawienia hipotezy, że Rus może hamować złośliwą progresję komórek NPC poprzez bezpośrednią regulację w dół KDM1A.

Niniejsze badanie miało na celu wypełnienie tej luki poprzez systematyczną ocenę wpływu Rus na proliferację, migrację i inwazję komórek NPC. Główna nowość tych badań polega na odkryciu strategii opartej na podwójnym mechanizmie. Skupiono się na zdolności Rus do jednoczesnego indukcji zarówno klasycznej apoptozy, jak i zależnej od żelaza ferroptozy. Poprzez walidację nowej osi sygnalizacyjnej Rus-KDM1A, badanie to znacząco poszerza obecną wiedzę, wykazując, w jaki sposób pojedynczy związek naturalny może przełamać odporność guza poprzez jednoczesną blokadę wielu szlaków, co stanowi obiecującą przedkliniczną podstawę dla celowanej terapii NPC.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Hodowla komórek, traktowanie i transfekcja

Ludzka linia komórkowa raka nosogardzi (NPC), C666-1 (RRID: CVCL_M597), oraz niemaligniczna ludzka linia komórkowa nabłonka nosogardzieli, NP69 (RRID: CVCL_F755), zostały zakupione od dostawcy komercyjnego. Obie linie komórkowe zostały uwierzytelnione za pomocą profilowania krótkich powtórzeń tandemowych (STR) i przed użyciem potwierdzono brak kontaminacji mycoplasma. Do rutynowej hodowli komórki C666-1 namnażano w pożywce RPMI 1640 uzupełnionej o 10% płodowej surowicy bydlęcej (FBS) i 1% penicyliny-streptomycyny. Komórki NP69 hodowano w bezsurowiczej pożywce dla keratynocytów uzupełnionej o 10% FBS, 10 ng/mL rekombinowanego epidermalnego czynnika wzrostu oraz 1% penicyliny-streptomycyny. Ruscogeninę (Rus; czystość ≥ 98%) zakupiono od dostawcy komercyjnego. Obie linie komórkowe utrzymywano w inkubatorze z nawilżaniem w temperaturze 37 °C przy 5% CO₂. Do zabiegów komórki eksponowano na Ruscogeninę (Rus) w różnych stężeniach (10, 20, 50 µM) przez 24 h22. Do transfekcji wykorzystano plazmidy kodujące demetylazę 1A swoistą dla lizyny do nadekspresji (oe-KDM1A) oraz odpowiadający im negatywny kontrolny pusty wektor (oe-NC), pozyskane od dostawcy komercyjnego; transfekcję przeprowadzono w komórkach C666-1, gdy stopień konfluencji osiągnął 70–80%. Konkretnie, 2,5 µg DNA plazmidowego oraz 5 µL lipidowego odczynnika do transfekcji rozcieńczono odpowiednio w 150 µL pożywki z obniżoną zawartością surowicy, delikatnie wymieszano, inkubowano przez 20 min w temperaturze pokojowej, a następnie dodano do każdej studni płytki 6-dołkowej zgodnie z protokołem producenta. Komórki inkubowano przez 48 h w temperaturze 37 °C, a następnie potwierdzono wydajność transfekcji.

Test CCK-8 (Cell counting kit-8)

Żywotność komórek po zastosowaniu Rus określono za pomocą testu CCK-8. W tej procedurze komórki wysiano najpierw do płytek 96-dołkowych i inkubowano przez noc. Test rozpoczęto poprzez dodanie 10 µL roztworu CCK-8, a po 2 h inkubacji zmierzono powstałą zmianę kolorymetryczną jako gęstość optyczną (OD) przy 450 nm przy użyciu czytnika płytek.

Test tworzenia kolonii

W celu oceny przeżywalności klonogenicznej komórki C666-1 wysiano na płytki 6-dołkowe i hodowano przez 14 dni. Po okresie inkubacji powstałe kolonie utrwalono 100% metanolem przez 10 min, a następnie wizualizowano za pomocą 0,5% fioletu krystalicznego przez 30 min. Liczbę barwionych kolonii określono następnie za pomocą obrazowania mikroskopowego i przeliczania.

Western blot

Do analizy Western blot w pierwszej kolejności wyekstrahowano białka całkowite z komórek przy użyciu buforu RIPA, a otrzymane lizaty odwirowano (12 000 × g) w celu zebrania supernatantu. Do oznaczenia stężenia białek wykorzystano test BCA. Na żel naniesiono równe ilości białka całkowitego (30 µg na ścieżkę), które następnie rozdzielono za pomocą 10% elektroforezy żelowej z SDS i poliakryloamidem (SDS-PAGE). Po rozdzieleniu białka przeniesiono na membrany z polifluorku winylidenu (PVDF) przy stałym napięciu 100 V przez 90 min na lodzie. Następnie membrany blokowano w 5% albuminie surowicy bydlęcej (BSA) przygotowanej w buforze TBST (tris-buffered saline z 0,1% Tween 20) przez 2 h w temperaturze pokojowej. Membrany inkubowano następnie przez noc w 4°C z następującymi przeciwciałami pierwszorzędowymi rozcieńczonymi w buforze blokującym (wszystkie w stosunku 1:1000): Ki67, PCNA, MMP2, MMP9, Bcl-2, Bax, KDM1A, SLC7A11, GPX4, ACSL4, TFR1 oraz β-actin. Na koniec, po 2-godzinnej inkubacji z przeciwciałami wtórnymi sprzężonymi z HRP, prążki immunoreaktywne wizualizowano przy użyciu reagentu do detekcji wzmocnionej chemiluminescencji (ECL), a analizę densytometryczną przeprowadzono za pomocą oprogramowania do analizy obrazu.

Test zgojenia rany (scratch assay)

W celu przeprowadzenia testu gojenia ran hodowano komórki C666-1 w płytkach 6-dołkowych do osiągnięcia 80% konfluencji. Jednorodna rana została wykonana w monowarstwie poprzez zeskrobanie komórek końcówką pipety 200 µL. Oddzielone komórki usunięto poprzez przemycie PBS, po czym zastąpiono pożywkę hodowlaną pożywką bezsurowiczą na 24-godzinną inkubację. Obrazy obszaru rany wykonano w 0 h i 24 h przy użyciu mikroskopu świetlnego w celu oceny migracji komórek.

Test Transwell

Inwazję komórek oceniono przy użyciu komór transwell (rozmiar porów 8-µm), uprzednio pokrytych 50 µL macierzy błony podstawnej. Zdolność inwazyjną komórek C666-1 oceniono za pomocą komór Transwell. W górnych insertach zasiano komórki zawieszone w medium z ograniczoną zawartością surowicy, natomiast w dolnych studzienkach umieszczono DMEM z 10% FBS. Po 24-godzinnej inkubacji komórki pozostające na stronie apikalnej błony zostały ostrożnie usunięte. W celu ilościowego oznaczenia komórki na powierzchni basolateralnej utrwalono w metanolu, zabarwiono 0,1% fioletem krystalicznym i policzono na podstawie obrazów uzyskanych za pomocą mikroskopii świetlnej.

Cytometria przepływowa

Apoptozę ilościowo określono za pomocą cytometrii przepływowej. W celu przygotowania próbek komórki C666-1 zebrano, przepłukano lodowatym PBS, a następnie resuspendowano w 100 µL buforu wiążącego. Komórki poddano następnie podwójnemu barwieniu przy użyciu Annexin-V-FITC (20 µg/mL) i jodku propidyny (PI). Barwienie przeprowadzono przez 15 min w temperaturze 0°C, chroniąc próbki przed światłem. Dane natychmiast zarejestrowano za pomocą cytometru przepływowego, aby wyznaczyć procent komórek apoptotycznych.

Wykrywanie aktywności kaspazy-3

Aktywność kaspazy-3 zmierzono przy użyciu komercyjnego zestawu testowego zgodnie z instrukcją producenta. W skrócie, komórki C666-1 poddano lizie, a następnie zebrano nadsączniki po wirowaniu przy 14 000 × g. Po 2-godzinnej inkubacji z dostarczonym odczynnikiem zmierzono absorbancję każdego nadsącznika przy 405 nm.

RT-qPCR

Całkowity RNA oczyszczono z komórek C666-1 przy użyciu komercyjnego odczynnika do ekstrakcji RNA. Uzyskany RNA poddano odwrotnej transkrypcji do cDNA pierwszej nici za pomocą komercyjnego zestawu, zgodnie z protokołem producenta. Analizę ekspresji genów przeprowadzono następnie metodą ilościowego PCR (qPCR) w systemie PCR w czasie rzeczywistym z zastosowaniem master mixu opartego na SYBR Green. Do wyznaczenia względnych poziomów transkrypcyjnych zastosowano metodę porównawczą Ct (2⁻△△Ct). Sekwencje starterów użytych do amplifikacji były następujące: β-actin (Forward: 5'-CATGTACGTTGCTATCCAGGC-3'; Reverse: 5'-CTCCTTAATGTCACGCACGAT-3') oraz KDM1A (Forward: 5'-TGACCGGATGACTTCTCAAGA-3'; Reverse: 5'-GTTGGAGAGTAGCCTC AAATGTC-3').

Oznaczenie substancji reaktywnych z kwasem tiobarbiturowym (TBARS)

W celu pomiaru peroksydacji lipidów najpierw przygotowano nadnadlewy z komórek C666-1 poprzez wytrącanie (15% TCA, 500 mM BHA) i wirowanie przez 10 min przy 10 000 × g. Następnie nadnadlewy te poddano reakcji z 0,375% kwasem tiobarbiturowym i ogrzewano w temperaturze 100 °C przez 10 min w celu utworzenia adduktu MDA-TBA. Poziom tego adduktu, będący wskaźnikiem peroksydacji lipidów, określono poprzez pomiar absorbancji przy 532 nm przy użyciu czytnika mikropłytek23.

Wykrywanie lipidowych reaktywnych form tlenu (ROS)

Peroksydację lipidów wykryto przy użyciu fluorescencyjnej sondy do peroksydacji lipidów. Komórki C666-1 wysiano do płytek 6-dołkowych, inkubowano przez noc, a następnie poddano działaniu sondy fluorescencyjnej (2 µM). Sonda ta wykazuje przesunięcie fluorescencji z czerwonej na zieloną po utlenieniu. Stosunek fluorescencji zielonej do czerwonej przeanalizowano przy użyciu konfokalnego mikroskopu skaningowego z laserem oraz oprogramowania do analizy obrazu. Wykreślony stosunek fluorescencji zielonej do czerwonej był wyraźnie zdefiniowany i wykorzystany jako ilościowy wskaźnik poziomu peroksydacji lipidów24.

Wykrywanie Fe2+

Poziom wewnątrzkomórkowego żelaza dwuwartościowego (Fe2⁺) zmierzono przy użyciu wewnątrzkomórkowej fluorescencyjnej sondy żelaza. Komórki C666-1 inkubowano z 10 µM sondy fluorescencyjnej przez 10 min. Po przemyciu komórek roztworem PBS w celu usunięcia nadmiaru sondy, przeprowadzono analizę za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej.

Analiza dokowania molekularnego

Dokowanie molekularne jest kluczową metodą obliczeniową, która ułatwia projektowanie nowych leków poprzez przewidywanie powinowactwa wiązania i oddziaływań między ligandem a jego białkiem docelowym na podstawie oceny trybów ich wiązania25. Ze strony internetowej RCSB PDB (https://www.rcsb.org/) pobrano strukturę 3D białka KDM1A (PDB ID: 6NQU). W ramach przygotowania struktury białka KDM1A usunięto cząsteczki wody oraz nieistotne małe ligandy. Symulację dokowania molekularnego przeprowadzono za pomocą oprogramowania do dokowania molekularnego z wykorzystaniem lamarckowskiego algorytmu genetycznego, a wizualizację wykonano przy użyciu oprogramowania do wizualizacji molekularnej26.

Analiza statystyczna

Wszystkie eksperymenty przeprowadzono z wykorzystaniem co najmniej trzech niezależnych powtórzeń biologicznych, a wyniki przedstawiono jako średnią ± odchylenie standardowe (SD). Analizę statystyczną wykonano przy użyciu oprogramowania do analizy statystycznej. Różnice między wieloma grupami oceniano za pomocą jednoczynnikowej analizy wariancji (ANOVA), a następnie testu post-hoc Tukeya dla porównań wielokrotnych. Wartość P mniejszą niż 0,05 uznano za wskazującą na istotność statystyczną różnic.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Ruscogenina selektywnie hamuje żywotność i proliferację komórek raka nosogardzieli

W badaniu najpierw zbadano wpływ ruskogeniny (Rus) na żywotność zarówno prawidłowych komórek nabłonka nosogardzieli (NP69), jak i komórek raka nosogardzieli (NPC) (C666-1). Jak ustalono w teście CCK-8, traktowanie Rus w stężeniach 10, 20 i 50 µM nie wykazało istotnej toksyczności wobec prawidłowych komórek NP69. Przeciwnie, ruskogenina (Rus) znacząco upośledziła przeżywalność komórek nowotworowy...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Rak macicznosci nosogardzielny (NPC) jest ciężkim nowotworem złośliwym charakteryzującym się wysoką częstotliwością przerzutów, co wyjaśnia pilną potrzebę opracowania lepszych metod interwencji27. W niniejszej pracy wykazano, że ruskogenina (Rus), produkt naturalny otrzymywany jako pochodna Radix ophiopogonis, wykazuje silne działanie przeciwnowotworowe w komórkach NPC. Stwierdzono również, że Rus hamuje progresję NPC poprzez supresję demetylazy histonów KDM1A, co w konsekwencji promuje d...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy deklarują brak konkurencyjnych interesów finansowych. Autorzy oświadczają, że w fazie opracowania koncepcji badania, gromadzenia danych, analizy danych ani tworzenia rycin nie wykorzystano generatywnych narzędzi AI. Technologie wspomagane przez AI zostały użyte wyłącznie do drobnej edycji językowej i korekty gramatycznej podczas przygotowywania rękopisu. Autorzy biorą pełną odpowiedzialność za treść i rzetelność opublikowanej pracy.

Podziękowania

Nie dotyczy.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
System 7500 Fast Real-Time PCRApplied Biosystems4351106Analiza RT-qPCR
Zestaw do badania apoptozy Annexin-V-FITC/PIBD Biosciences556547Detekcja apoptozy metodą cytometrii przepływowej
Przeciwciało anty-ACSL4Abcamab155282Przeciwciało pierwszorzędowe do Western blotu
Przeciwciało anty-BaxCell Signaling Technology (CST)5023Przeciwciało pierwszorzędowe do Western blotu
przeciwciało anty-Bcl-2Cell Signaling Technology (CST)15071Przeciwciało pierwszorzędowe do Western blotu
Przeciwciała
Przeciwciało anty-GPX4Abcamab125066Przeciwciało pierwszorzędowe do Western blotu
Przeciwciało anty-KDM1A (LSD1)Cell Signaling Technology (CST)2139Przeciwciało pierwszorzędowe do analizy Western blot
Przeciwciało anty-Ki67Abcamab16667Przeciwciało pierwszorzędowe do Western blotu
Przeciwciało anty-MMP2Abcamab92536Przeciwciało pierwszorzędowe do analizy Western blot
Przeciwciało anty-MMP9Abcamab76003Przeciwciało pierwszorzędowe do Western blotu
Przeciwciało anty-PCNACell Signaling Technology (CST)13110Przeciwciało pierwszorzędowe do Western blotu
Przeciwciało anty-królicze IgG, sprzężone z HRPCell Signaling Technology (CST)7074Przeciwciało wtórne
Przeciwciało anty-SLC7A11 (xCT)Abcamab175186Przeciwciało pierwszorzędowe do Western blotu
Przeciwciało anty-TfR1Abcamab84036Przeciwciało pierwotne do analizy Western blot
Przeciw-βprzeciwciało przeciwko aktynieCell Signaling Technology (CST)4970Przeciwciało pierwszorzędowe do kontroliy obciążenia
Zestawy do analiz
Autodock 4.2Scripps Research InstitutePonieważ nie dostarczono tekstu źródłowego do przetłumaczenia, proszę o przesłanie treści, którą należy przełożyć na język polski.Symulacja dokowania molekularnego
zestaw do oznaczenia białek metodą BCABeyotime BiotechnologyP0012Oznaczanie ilości białka
sonda BODIPY 581/591 C11Invitrogen (Thermo Fisher Scientific)D3861Wykrywanie reaktywnych form tlenu (ROS) w lipidach (2 μM)
linia komórkowa C666-1iCell Bioscience Inc.iCell-h378Linia komórkowa raka nosogardzieli człowieka
Zestaw do oznaczania aktywności kaspazy-3Beyotime BiotechnologyC1115Ocena apoptozy
zestaw do testu CCK-8Dojindo Molecular TechnologiesCK04Pomiar żywotności komórek
Odczynniki chemiczne & Odczynniki
cytometr przepływowy CytoFLEXBeckman CoulterCytoFLEXAnaliza apoptozy
odczynnik do detekcji ECLMilliporeSigmaWBKLS0500Wizualizacja Western blot (Immobilon)
Sprzęt
płodowa surowica bydlęca (FBS)Gibco (Thermo Fisher Scientific)10099141Suplement do hodowli komórkowej
GraphPad Prism 8.0Oprogramowanie GraphPadProszę podać tekst źródłowy do tłumaczenia.Analiza statystyczna i przedstawianie danych na wykresach
oprogramowanie ImageJNIHProszę podać tekst źródłowy do tłumaczenia.Analiza densytometryczna obrazów
Bezsierykowe medium dla keratynocytówiCell Bioscience Inc.iCell-019Do hodowli komórek NP69
Konfokalny mikroskop skaningowy z laserowym wzbudzeniemCarl ZeissLSM 880Obrazowanie fluorescencyjne BODIPY C11
Mikroskop świetlny / fluorescencyjnyOlympusIX73Test gojenia ran (wound scratch), Transwell & Obrazowanie jonów Fe2+
LightCycler 480 SYBR Green I MasterRoche Diagnostics4887352001Ilościowa PCR w czasie rzeczywistym
odczynnik Lipofectamine 2000Invitrogen (Thermo Fisher Scientific)11668019Odczynnik do transfekcji komórek
MatrigelCorning356234Macierz błony podstawnej do testu inwazyjności
Czytnik płytek mikrotytułowychMolecular DevicesSpectraMax M5Pomiar absorbancji (405, 450, 532 nm)
linia komórkowa NP69iCell Bioscience Inc.iCell-h431Linia prawidłowych ludzkich komórek nabłonka nosogardzieli
oe-KDM1A & plazmidy oe-NCShanghai GenePharma Co., Ltd.Synteza na zamówieniePlasmidy do nadekspresji KDM1A
Sonda Phen Green SK (PGSK)Invitrogen (Thermo Fisher Scientific)P14312Wykrywanie wewnątrzkomórkowego Fe2+ (10 μM)
PyMOL 3.0Błąd: nieprzesłano tekstu źródłowego do tłumaczenia. Proszę o dostarczenie treści w języku angielskim.ödingerPonieważ nie podano tekstu źródłowego do tłumaczenia, proszę o dostarczenie materiałów, które wymagają przekładu na język polski. Jestem gotowy do przetłumaczenia treści naukowych i edukacyjnych JoVE zgodnie z Twoimi wytycznymi.Wizualizacja dokowania molekularnego
Zestaw do odwrotnej transkrypcjiRoche Diagnostics4379012001Zestaw do syntezy pierwszej nici cDNA Transcriptor
bufor lizujący RIPASolarbio (Beijing, Chiny)R0010Ekstrakcja całkowitego białka
pożywka RPMI 1640iCell Bioscience Inc.iCell-0002Do hodowli komórek C666-1
Ruscogenina (Rus)MedChemExpress (MCE)HY-N0193Leczenie farmakologiczne, czystość ≥ 98%
Oprogramowanie
zestaw do analizy TBARSCayman Chemical10009055Pomiar peroksydacji lipidów
odczynnik TRIzolInvitrogen (Thermo Fisher Scientific)*15596026Ekstrakcja całkowitego RNA

Bibliografia

  1. Zhou R, Qiu L, Zhou L, Geng R, Yang S, Wu J. P4HA1 activates HMGCS1 to promote nasopharyngeal carcinoma ferroptosis resistance and progression. Cell Signal. 2023;105:110609.
  2. Cao JY, Liu L, Chen SP, Zhang X, Mi YJ, Liu ZG, et al. Prognostic significance and therapeutic implications of centromere protein F expression in human nasopharyngeal carcinoma. Mol Cancer. 2010;9:237.
  3. Dixon SJ, Lemberg KM, Lamprecht MR, Skouta R, Zaitsev EM, Gleason CE, et al. Ferroptosis: an iron-dependent form of nonapoptotic cell death. Cell. 2012;149(5):1060-72.
  4. Liu S, Zhang HL, Li J, Ye ZP, Du T, Li LC, et al. Tubastatin A potently inhibits GPX4 activity to potentiate cancer radiotherapy through boosting ferroptosis. Redox Biol. 2023;62:102677.
  5. Amos A, Jiang N, Zong D, Gu J, Zhou J, Yin L, et al. Depletion of SOD2 enhances nasopharyngeal carcinoma cell radiosensitivity via ferroptosis induction modulated by DHODH inhibition. BMC Cancer. 2023;23(1):117.
  6. Jiang H, Li M, Du K, Ma C, Cheng Y, Wang S, et al. Traditional Chinese medicine for adjuvant treatment of breast cancer: Taohong Siwu decoction. Chin Med. 2021;16(1):129.
  7. Shang L, Wang Y, Li J, Zhou F, Xiao K, Liu Y, et al. Mechanism of Sijunzi decoction in the treatment of colorectal cancer based on network pharmacology and experimental validation. J Ethnopharmacol. 2023;302(Pt A):115876.
  8. Yang CH, Tung KL, Wu YT, Liu C, Lin SC, Yang CC, et al. Qing Yan Li Ge Tang, a Chinese herbal formula, induces autophagic cell death through the PI3K/Akt/mTOR pathway in nasopharyngeal carcinoma cells in vitro. Evid Based Complement Alternat Med. 2021;2021:9925684.
  9. Ren T, Bai XY, Yang MZ, Xu N, Guo XZ, Qin LJ, et al. Gambogic acid suppresses nasopharyngeal carcinoma via rewiring the molecular network of cancer malignancy and immunosurveillance. Biomed Pharmacother. 2022;150:113012.
  10. Zhou T, Zhao S, Tang S, Wang Y, Wu R, Zeng X, et al. Guggulsterone promotes nasopharyngeal carcinoma cells' exosomal Circfip1L1 to mediate miR-125a-5p/VEGFA, affecting tumor angiogenesis. Curr Mol Pharmacol. 2023;16(8):870-80.
  11. Feng X, Shi H, Chao X, Zhao F, Song L, Wei M, et al. Deciphering the pharmacological mechanism of the herb Radix Ophiopogonis in the treatment of nasopharyngeal carcinoma by integrating iTRAQ-coupled 2-D LC-MS/MS analysis and network investigation. Front Pharmacol. 2019;10:253.
  12. Kim W, Lee WB, Lee J, Min BI, Lee H, Cho SH. Traditional herbal medicine as adjunctive therapy for nasopharyngeal cancer: a systematic review and meta-analysis. Integr Cancer Ther. 2015;14(3):212-20.
  13. Zhao J, He B, Seshadri VD, Xu S. Anticancer effect of ruscogenin in B(a)P-induced lung cancer in mice via modulation of proinflammatory cytokines and mitochondrial enzymes. Appl Biochem Biotechnol. 2022;194(12):5862-77.
  14. Rabitha R, Shivani S, Showket Y, Sudhandiran G. Ferroptosis regulates key signaling pathways in gastrointestinal tumors: underlying mechanisms and therapeutic strategies. World J Gastroenterol. 2023;29(16):2433-51.
  15. Feinberg AP, Koldobskiy MA, Göndör A. Epigenetic modulators, modifiers and mediators in cancer etiology and progression. Nat Rev Genet. 2016;17(5):284-99.
  16. Song Y, Wu F, Wu J. Targeting histone methylation for cancer therapy: enzymes, inhibitors, biological activity and perspectives. J Hematol Oncol. 2016;9(1):49.
  17. Zhang W, Ruan X, Li Y, Zhi J, Hu L, Hou X, et al. KDM1A promotes thyroid cancer progression and maintains stemness through the Wnt/β-catenin signaling pathway. Theranostics. 2022;12(4):1500-17.
  18. Ismail T, Lee HK, Kim C, Kwon T, Park TJ, Lee HS. KDM1A microenvironment, its oncogenic potential, and therapeutic significance. Epigenetics Chromatin. 2018;11(1):33.
  19. Hou X, Li Q, Yang L, Yang Z, He J, Li Q, et al. KDM1A and KDM3A promote tumor growth by upregulating cell cycle-associated genes in pancreatic cancer. Exp Biol Med (Maywood). 2021;246(17):1869-83.
  20. Guo D, Liu F, Zhang L, Bian N, Liu L, Kong L, et al. Long non-coding RNA AWPPH enhances malignant phenotypes in nasopharyngeal carcinoma via silencing PTEN through interacting with LSD1 and EZH2. Biochem Cell Biol. 2021;99(2):195-202.
  21. Lu C, Cai Y, Liu W, Peng B, Liang Q, Yan Y, et al. Aberrant expression of KDM1A inhibits ferroptosis of lung cancer cells through up-regulating c-Myc. Sci Rep. 2022;12(1):19168.
  22. Hua H, Zhu Y, Song YH. Ruscogenin suppressed the hepatocellular carcinoma metastasis via PI3K/Akt/mTOR signaling pathway. Biomed Pharmacother. 2018;101:115-22.
  23. Sun Q, Zhen P, Li D, Liu X, Ding X, Liu H. Amentoflavone promotes ferroptosis by regulating reactive oxygen species (ROS) /5'AMP-activated protein kinase (AMPK)/mammalian target of rapamycin (mTOR) to inhibit the malignant progression of endometrial carcinoma cells. Bioengineered. 2022;13(5):13269-79.
  24. Carlsen CU, Kurtmann L, Brüggemann DA, Hoff S, Risbo J, Skibsted LH. Investigation of oxidation in freeze-dried membranes using the fluorescent probe C11-BODIPY(581/591). Cryobiology. 2009;58(3):262-7.
  25. Liu J, Yuan S, Yao Y, Wang J, Scalabrino G, Jiang S, et al. Network pharmacology and molecular docking elucidate the underlying pharmacological mechanisms of Houttuynia cordata in treating SARS-CoV-2 pneumonia. Viruses. 2022;14(7).
  26. Zhu W, Li Y, Zhao J, Wang Y, Li Y, Wang Y. The mechanism of triptolide in the treatment of connective tissue disease-related interstitial lung disease based on network pharmacology and molecular docking. Ann Med. 2022;54(1):541-52.
  27. Lee AWM, Ng WT, Chan JYW, Corry J, Mäkitie A, Mendenhall WM, et al. Management of locally recurrent nasopharyngeal carcinoma. Cancer Treat Rev. 2019;79:101890.
  28. Li BH, Ma H, Zhu J, Chen J, Dai YQ, Zhang XJ, et al. Semisynthesis and anti-cancer properties of novel honokiol derivatives in human nasopharyngeal carcinoma CNE-2Z cells. J Enzyme Inhib Med Chem. 2023;38(1):2244694.
  29. Qiao H, Zhang W, Liu P, Zhu R, Zhang J, Gao J, et al. Ropivacaine inhibits proliferation and invasion and promotes apoptosis and autophagy in bladder cancer cells via inhibiting the PI3K/AKT pathway. J Biochem Mol Toxicol. 2023;37(1):e23233.
  30. Zhao L, Han S, Hou J, Shi W, Zhao Y, Chen Y. The local anesthetic ropivacaine suppresses the progression of breast cancer by regulating miR-27b-3p/YAP axis. Aging (Albany, NY). 2021;13(12):16341-52.
  31. Ghasemi A, Khanzadeh T, Zadi Heydarabad M, Khorrami A, Jahanban Esfahlan A, Ghavipanjeh S, et al. Evaluation of BAX and BCL-2 gene expression and apoptosis induction in acute lymphoblastic leukemia cell line CCRFCEM after high-dose prednisolone treatment. Asian Pac J Cancer Prev. 2018;19(8):2319-23.
  32. Wadey KS, Johnson JL, George SJ. Monitoring cellular proliferation and apoptosis in atherosclerotic plaques and intimal thickenings. Methods Mol Biol. 2022;2419:507-19.
  33. Chen P, Wang D, Xiao T, Gu W, Yang H, Yang M, et al. ACSL4 promotes ferroptosis and M1 macrophage polarization to regulate nasopharyngeal carcinoma tumorigenesis. Int Immunopharmacol. 2023;122:110629.
  34. Forcina GC, Dixon SJ. GPX4 at the crossroads of lipid homeostasis and ferroptosis. Proteomics. 2019;19(18):e1800311.
  35. Zhao Y, Li Y, Zhang R, Wang F, Wang T, Jiao Y. The role of erastin in ferroptosis and its prospects in cancer therapy. Onco Targets Ther. 2020;13:5429-41.
  36. Sareddy GR, Nair BC, Krishnan SK, Gonugunta VK, Zhang QG, Suzuki T, et al. KDM1 is a novel therapeutic target for glioma treatment. Oncotarget. 2013;4(1):18-28.
  37. Ferrari-Amorotti G, Fragliasso V, Esteki R, Prudente Z, Soliera AR, Cattelani S, et al. Inhibiting the interactions between the lysine demethylase LSD1 and snail/slug blocks cancer cell invasion. Cancer Res. 2013;73(1):235-45.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Leczenie ruscogeninąobniżenie poziomu KDM1Aindukcja ferroptozyindukcja apoptozykomórki C666-1proliferacja komórekWestern blotperoksydacja lipidówaktywacja kaspazy-3
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki korzystania z usługi

Zasady

Prawa autorskie © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.