Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł badawczy
Poziom miR‑486‑3p jest obniżony u pacjentów z ostrym zawałem mózgu i zespołem obturacyjnego bezdechu sennego, koreluje ujemnie z ciężkością choroby oraz markerami stanu zapalnego i pozwala przewidzieć złe rokowania w perspektywie 1 roku, co potwierdza jego potencjał jako biomarkera diagnostycznego i prognostycznego.
Ostre zawały mózgu (ACI) powikłane zespołem obturacyjnego bezdechu sennego (OSAS) wiążą się z wysokim ryzykiem nawrotu udaru oraz zgonu, jednak liczba skutecznych biomarkerów dla tej współistniejącej choroby pozostaje ograniczona. W to retrospektywne badanie kohortowe włączono 270 pacjentów z ACI w okresie od listopada 2020 do grudnia 2023 roku, których podzielono na grupę ACI (n = 100, wskaźnik bezdechu-hipopnoe [AHI] < 5) oraz grupę ACI z OSAS (n = 170, AHI ≥ 5), przy czym tę ostatnią dodatkowo podzielono na podgrupy z lekkim (5 ≤ AHI < 15, n = 60), umiarkowanym (15 ≤ AHI < 30, n = 75) i ciężkim przebiegiem (AHI ≥ 30, n = 35). Ekspresję serum miR‑486‑3p zmierzono za pomocą RT‑qPCR, a markery zapalne, w tym czynnik martwicy nowotworu-α (TNF‑α), białko C-reaktywne (CRP) oraz czynnik indukowany hipoksją-1α (HIF‑1α), oznaczono metodą ELISA. Wartość diagnostyczną miR‑486‑3p oceniono za pomocą analizy krzywej charakterystyki operacyjnej odbiornika (ROC), a jego znaczenie prognostyczne oceniono poprzez analizę przeżycia Kaplana-Meiera oraz modele regresji Coxa. Poziom miR-486-3p był wyraźnie niższy w grupie z chorobami współistniejącymi i wykazał wysoką zdolność diagnostyczną (AUC = 0,927). Co istotne, zaobserwowano wyraźną zależność od dawki w podgrupach ciężkości OSAS, gdzie poziom miR‑486‑3p stopniowo spadał, a poziomy TNF‑α i CRP sukcesywnie rosły od łagodnego do ciężkiego stadium OSAS. Analizy korelacji Spearmana wykazały, że miR‑486‑3p był ujemnie skorelowany z AHI, wynikiem w skali NIHSS, TNF‑α oraz CRP. W obserwacji po 1 roku pacjenci z niską ekspresją miR‑486‑3p mieli znacznie gorsze wyniki funkcjonalne w porównaniu z osobami o wysokiej ekspresji. Wieloczynnikowa regresja Coxa potwierdziła, że miR‑486‑3p jest niezależnym czynnikiem ochronnym dla rokowań w okresie 1 roku. Wyniki te sugerują, że miR‑486‑3p może służyć jako nowy biomarker diagnostyczny i prognostyczny dla pacjentów z ACI i OSAS, potencjalnie poprzez jego rolę regulacyjną w zapaleniu ogólnoustrojowym, co uzasadnia dalszą walidację w większych kohortach prospektywnych.
Obstrukcyjny bezdech senny (OBS) jest powszechnym schorzeniem charakteryzującym się powtarzającymi się przerwami w oddychaniu podczas snu1. OBS często współistnieje z chorobami towarzyszącymi, takimi jak zaburzenia metaboliczne, sercowo-naczyniowe, nerkowe, płucne oraz neuropsychiatryczne2. Poza ogólnymi powiązaniami z chorobami układu krążenia i zaburzeniami metabolicznymi, OBS stanowi specyficzne i poważne zagrożenie w przypadku ostrego udaru niedokrwiennego, komplikując do 70% przypadków i zwiększając ryzyko pogorszenia stanu neurologicznego, zgonu oraz nawrotu udaru3,4,5. Ostry zawał mózgu (ACI) stanowi najczęstszą postać udaru. Mimo znaczących postępów w leczeniu ACI w ostatnich latach, większość pacjentów nadal cierpi z powodu ciężkiej niepełnosprawności lub umiera6. Synergistyczne oddziaływanie między ACI a współistniejącym OBS potęguje uszkodzenia niedokrwienne i zapalenie układowe, znacząco podnosząc ryzyko nawrotu udaru, niepełnosprawności i śmiertelności. W związku z tym identyfikacja wiarygodnych biomarkerów do wczesnej diagnostyki i leczenia tego wysokoryzykownego stanu współistniejącego ma kluczowe znaczenie.
MikroRNA (miRNA) wykazują w ostatnich latach ogromny potencjał jako biomarkery. Wśród nich miR-486-3p ma duże znaczenie w chorobach naczyniowo-mózgowych. Wcześniejsze badania wykazały, że ekspresja miR-486-3p jest zahamowana w obturacyjnym bezdechu sennym (OSA)7. Ponadto terapia z użyciem egzosomów zawierających glikoproteinę wirusa wścieklizny oraz miR-486-3p może łagodzić zaburzenia neurobehawioralne, obrzęk mózgu, uszkodzenia bariery krew-mózg oraz neurodegenerację8, co wskazuje na rolę miR-486-3p w urazach mózgu. Po ACI dochodzi do aktywacji mikrogleju w uszkodzonej tkance mózgowej, co sprzyja sekrecji cytokin zapalnych5. OSAS wywołuje objawy przerywanej hipoksji, prowadząc do aktywacji współczulnego układu nerwowego i stresu oksydacyjnego, co w konsekwencji wyzwalają systemową kaskadę reakcji zapalnych9. miR-486-3p jest ściśle powiązany ze stanem zapalnym10. Powyższe dowody sugerują, że miR-486-3p może służyć jako łącznik molekularny pomiędzy hipoksją związaną z OSAS, zapaleniem systemowym a rekonwalescencją po udarze.
Jednak profil jego ekspresji, dokładność diagnostyczna oraz znaczenie prognostyczne u pacjentów z ACI z towarzyszącym OSAS nie zostały systematycznie zbadane, a to, czy koreluje on z ciężkością OSAS lub mediatorami zapalnymi w sposób zależny od dawki, pozostaje nieznane. Aby wypełnić te luki, w niniejszym badaniu oceniono wartość diagnostyczną miR-486-3p dla OSAS u pacjentów z ACI, zbadano jego zależność od dawki w odniesieniu do ciężkości OSAS i markerów zapalnych (TNF-α, CRP oraz HIF-1α) oraz oceniono jego użyteczność prognostyczną dla rocznych wyników funkcjonalnych. Z naszej wiedzy jest to pierwsze kompleksowe badanie wykazujące, że miR-486-3p może służyć jako nowy biomarker diagnostyczny i prognostyczny dla współistnienia ACI i OSAS, potencjalnie poprzez regulację systemowego stanu zapalnego.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Badanie to zostało zatwierdzone przez Komisję Etyczną Szpitala Powiązanego z Uniwersytetem Medycznym w Xuzhou (numer zatwierdzenia: XYFY2024-KL238-01) i zostało zwolnione z wymogu uzyskania dodatkowej świadomej zgody od pacjentów. Wykorzystane odczynniki i sprzęt wymieniono w Tabeli materiałów.
Pacjenci i próbki
Niniejsze badanie było retrospektywnym badaniem kohortowym. W okresie od listopada 2020 r. do grudnia 2023 r. zakwalifikowano kolejno 270 pacjentów z ACI leczonych w szpitalu stowarzyszonym z Xuzhou Medical University. Proces doboru pacjentów przedstawiono na Rysunku uzupełniającym 1. Kwalifikowalne osoby identyfikowano poprzez codzienny przegląd wszystkich nowych przyjęć na oddział udarów. Wystąpienie objawów w ciągu 72 h przed przyjęciem zweryfikowano na podstawie dokumentacji medycznej z oddziału ratunkowego oraz potwierdzono przez certyfikowanego neurologa w wywiadzie z pacjentem i rodziną. Wielkość próby obliczono w oparciu o zdolność do wykrycia istotnej różnicy w poziomach miR-486-3p między grupami. Przy założeniu wielkości efektu 0,5, dwustronnym poziomie istotności α = 0,05 i mocy (1-β) wynoszącej 0,80, wymagano minimum 64 pacjentów w każdej grupie. Końcowe liczebności grup odzwierciedlają rzeczywisty nabór oraz wyższą częstość występowania OSAS w populacji pacjentów z udarem, a nie z góry określony przydział. Rokowania pacjentów z ACI i współistniejącym OSAS monitorowano przez okres 1 roku.
Kryteria włączenia obejmowały: (1) Ostrego udaru niedokrwiennego z wystąpieniem objawów w ciągu 72 h przed przyjęciem, potwierdzonego w badaniu rezonansem magnetycznym. (2) Zdolność do zrozumienia i wypełnienia kwestionariuszy badania oraz poddania się ocenom neurologicznym. (3) Ciężkość ACI została oceniona w momencie przyjęcia za pomocą skali udarów National Institutes of Health Stroke Scale (NIHSS). Wynik NIHSS <5 klasyfikowano jako łagodny ACI; wynik NIHSS między 5 a 20 uznawano za umiarkowany ACI. Główne kryteria wykluczenia obejmowały: historię nowotworów złośliwych, istniejącą ciężką niepełnosprawność fizyczną lub zaburzenia psychiatryczne, ciężką niewydolność serca, płuc lub nerek, rozległą operację lub uraz w ciągu ostatnich 3 miesięcy, aktywne infekcje lub choroby autoimmunologiczne; udar w ciągu ostatnich 6 miesięcy; terapię immunosupresyjną oraz wcześniejszą diagnozę lub leczenie OSAS (w tym terapię dodatnim ciśnieniem w drogach oddechowych).
W celu potwierdzenia w badaniu MRI, wszyscy pacjenci zostali poddani standardowemu rezonansowi magnetycznemu mózgu w systemie 3.0-T, obejmującemu następujące sekwencje: T1-zależną, T2-zależną, FLAIR (fluid-attenuated inversion recovery), DWI (diffusion-weighted imaging) oraz mapowanie ADC (apparent diffusion coefficient). Ostry zawał zdefiniowano jako obecność sygnału hiperintensywnego w DWI z odpowiadającym mu sygnałem hipointensywnym w ADC. Wszystkie skany MRI zostały zinterpretowane przez dwóch doświadczonych neuroradiologów, którzy nie mieli dostępu do danych klinicznych, a rozbieżności rozstrzygano drogą konsensusu. Ocena w skali NIHSS została przeprowadzona przy przyjęciu przez certyfikowanych neurologów przed jakimkolwiek leczeniem trombolitycznym lub endowaskularnym.
Krew żylną na czczo pobrano od 24 h do 48 h po wystąpieniu udaru, po nocnym poście trwającym co najmniej 8 h. Pobrania krwi przeprowadzono między godziną 6:00 a 8:00, aby zminimalizować zmienność okołodobową. Łącznie 5 mL krwi żylnej obwodowej pobrano do probówek próżniowych z EDTA. W ciągu 2 h od pobrania próbki krwi odwirowano przy 1 500 × g przez 15 min w temperaturze 4 °C przy użyciu wirówki chłodzącej. Nadosiarcz serum ostrożnie rozdzielono do 1,5 mL probówek do mikrocentryfugi wolnych od RNaz i natychmiast przechowywano w temperaturze −80 °C do czasu ekstrakcji RNA. Ściśle unikano powtarzających się cykli zamrażania i rozmrażania; wszystkie alikwoty poddano maksymalnie jednemu cyklowi zamrażania i rozmrażania przed analizą.
Podział pacjentów na grupy
Uczestników podzielono na grupy na podstawie wyników wskaźnika AHI uzyskanych w badaniu polisomnograficznym. Wszystkie zapisy wykonano w szpitalnym laboratorium snu między godziną 22:00 a 6:00 rano przez co najmniej 7 h. Monitorowane kanały fizjologiczne obejmowały: elektroencefalografię (EEG; sześć kanałów), elektrookulografię (EOG; dwa kanały), elektromiografię (EMG; podbródek i obustronnie mięśnie piszczelowe przednie), elektrokardiografię (EKG; pojedyncze odprowadzenie), przepływ powietrza przez nos (termistor i przetwornik ciśnienia), wysiłek oddechowy klatki piersiowej i brzucha (pletyzmografia indukcyjna oddechowa) oraz pulsoksymetrię (SpO2). Wskaźnik AHI został obliczony przez technika badania snu. Ocena faz snu i zdarzeń oddechowych była wykonywana ręcznie przez certyfikowanego technika snu zgodnie z podręcznikiem punktacji American Academy of Sleep Medicine (AASM) z 2012 roku, przy użyciu oprogramowania Somnolyzer 24×7. Zgodnie z powszechnie przyjętymi kryteriami diagnostycznymi American Academy of Sleep Medicine, wartość AHI wynosząca 5 lub więcej zdarzeń na godzinę jest standardowym progiem diagnostycznym dla OSAS. W związku z tym uczestników z AHI < 5 zaklasyfikowano do grupy ACI (n = 100), natomiast osoby z AHI ≥ 5 zaklasyfikowano do grupy ACI z OSAS (n = 170). Wśród osób z AHI ≥ 5 (grupa ACI z OSAS, n = 170) pacjentów dodatkowo podzielono na trzy podgrupy stopnia nasilenia na podstawie ustalonych kryteriów: łagodny OSAS (5 ≤ AHI < 15, n = 60), umiarkowany OSAS (15 ≤ AHI < 30, n = 75) oraz ciężki OSAS (AHI ≥ 30, n = 35). Taka stratyfikacja umożliwiła ocenę zależności zależnej od dawki pomiędzy obciążeniem hipoksycznym, ekspresją miR‑486‑3p a markerami zapalnymi. Pacjenci, którzy wcześniej byli leczeni na OSAS (np. CPAP), nie zostali włączeni do badania, aby uniknąć zakłócenia pomiaru wyjściowego AHI.
Ocena rokowań
Punkt czasowy wynoszący 1 rok pozwala na ustąpienie efektów ostrych i przejawy skumulowanego obciążenia hipoksycznego związanego z OSAS, co zapewnia wiarygodne okno do oceny jego wpływu prognostycznego. Rokowania kliniczne pacjentów z ACI w połączeniu z OSAS oceniano za pomocą zmodyfikowanej skali Rankin (mRS) po wystąpieniu choroby. Wszystkie oceny mRS zostały przeprowadzone przez certyfikowanych neurologów, którzy przed rozpoczęciem badania przeszli ustandaryzowany trening, z wykorzystaniem ustrukturyzowanego formularza wywiadu mRS. Wiarygodność międzyoceniaczy oceniono za pomocą współczynnika kappa >0,85. Ocena kontrolna została przeprowadzona podczas zaplanowanej wizyty w poradni specjalistycznej. W przypadku pacjentów niezdolnych do osobistego stawiennictwa, przeszkolona pielęgniarka badawcza przeprowadziła ustrukturyzowany wywiad telefoniczny przy użyciu ustandaryzowanego scenariusza. Wszyscy oceniający byli zaślepieni względem poziomów miR-486-3p oraz statusu OSAS u pacjentów. Aby zachować spójność między ocenami w poradni a ocenami telefonicznymi, w obu formatach stosowano ten sam ustrukturyzowany kwestionariusz, a wszyscy oceniający wykonali ćwiczenie kalibracyjne przed rozpoczęciem badania. Pacjentów z wynikiem 0–2 zakwalifikowano do grupy z dobrymi rokowaniami, a pacjentów z wynikiem 3–6 do grupy ze złymi rokowaniami. Żaden pacjent nie wypadł z obserwacji. SAQLI, ESS, TNF-α oraz HIF-1α oceniano jako zmienne prognostyczne, zamiast wykorzystywać je do definiowania grup rokowniczych. Skale NIHSS, SAQLI oraz ESS zostały przeprowadzone przez przeszkolony personel badawczy. Kwestionariusze SAQLI i ESS były przeprowadzane w formie wywiadu w cichym pomieszczeniu.
Indeks punktacji
NIHSS jest ilościową skalą oceny udaru11, w której wyższe wyniki wskazują na większy stopień nasilenia ACI. SAQLI to kwestionariusz jakości życia w OSA w skali od 1 do 7, gdzie wyższe wyniki oznaczają gorszą jakość życia, obejmujący czynności dnia codziennego, interakcje społeczne, stany emocjonalne, objawy oraz dolegliwości związane z leczeniem12. ESS jest stosowany do badania zgłaszzanej przez pacjentów senności w ciągu dnia, z zakresem wyników od 0 do 24, gdzie wynik > 10 wskazuje na występowanie senności w ciągu dnia13.
Izolacja RNA i odwrotna transkrypcja
Całkowite RNA wyizolowano z 200 µL surowicy przy użyciu odczynnika TRIzol. W skrócie, próbki surowicy zmieszano z 800 µL TRIzol, inkubowano w temperaturze pokojowej przez 5 min, a następnie wirowano przy 12,000 × g przez 15 min w temperaturze 4 °C. Dodano chloroform (200 µL), a mieszaninę energicznie wstrząsano przez 15 s, inkubowano przez 3 min i wirowano przy 12,000 × g przez 15 min w temperaturze 4 °C. Fazę wodną przeniesiono do nowej probówki, a RNA wytrącono za pomocą 500 µL izopropanolu, inkubowano w temperaturze −20 °C przez 1 h i wirowano przy 12,000 × g przez 10 min w temperaturze 4 °C. Osad RNA przemyto 75% etanolem, wysuszono na powietrzu i rozpuściono w 20 µL wody wolnej od RNaz. Stężenie i czystość RNA oceniono za pomocą mikroobjętościowego spektrofotometru, przyjmując stosunek A260/A280 w zakresie od 1,8 do 2,0 jako odpowiedni do dalszych analiz. Integralność RNA zweryfikowano za pomocą elektroforezy w żelu agarozowym.
Odwrotą transkrypcję przeprowadzono przy użyciu 500 ng całkowitego RNA z zastosowaniem Reverse Transcription Kit w całkowitej objętości reakcji 20 µL, wykorzystując randomowe primery heksamerowe zgodnie z protokołem producenta. Reakcję odwrotnej transkrypcji przeprowadzono w temperaturach 25 °C przez 10 min, 42 °C przez 60 min oraz 70 °C przez 5 min. Uzyskane cDNA przechowywano w temperaturze −20 °C do czasu użycia.
RT-qPCR
Ekspresję miR-486-3p wykryto przy użyciu zestawu do PCR w czasie rzeczywistym opartego na SYBR Green do ilościowego oznaczania microRNA w systemie do ilościowej PCR w czasie rzeczywistym (qPCR). Mieszanina reakcyjna zawierała 10 µL 2× SYBR Green Master Mix, 2 µL matrycy cDNA (rozcieńczonej 1:5), 1 µL każdego z primerów (10 µM) oraz wodę wolną od nukleaz do końcowej objętości 20 µL. Sekwencje primerów są następujące (od 5'-3'): miR-486-3p-forward: TCGGCAGCGGGGCAGCUCAGU, reverse: CTCAACTGGTGTCGTGGA; oraz U6-forward: CTCGCTTCGGCAGCACA, reverse: AACGCTTCACGAATTTGCGT. Warunki cykliczne qPCR były następujące: 95 °C przez 2 min, a następnie 40 cykli obejmujących 95 °C przez 30 s, 60 °C przez 30 s i 72 °C przez 60 s. Każdą próbkę analizowano w trzech powtórzeniach, a w każdym przebiegu uwzględniono kontrolę bez matrycy (NTC). Specyficzność amplifikacji potwierdzono analizą krzywej topnienia w zakresie od 60 °C do 95 °C. Próg cyklu (Ct) był automatycznie wyznaczany przez oprogramowanie QuantStudio 6 Pro (v1.5) przy użyciu domyślnych ustawień progu. Poziom miR-486-3p obliczono metodą 2-ΔΔCT i znormalizowano do U6. U6 został zwalidowany jako stabilny gen referencyjny w naszych próbkach surowicy przy użyciu algorytmu NormFinder w celu zapewnienia spójności między grupami. Współczynniki zmienności między- i wewnątrzseryjnej wynosiły <5%.
ELISA
Stężenia białka C-reaktywnego (CRP), TNF-α oraz HIF-1α w surowicy oznaczono przy użyciu zestawu ELISA. Procedury eksperymentalne przeprowadzono zgodnie z instrukcjami producenta. W skrócie, próbki surowicy rozmrożono na lodzie i rozcieńczono w stosunku 1:2 w dostarczonym buforze do rozcieńczania. Próbki oraz wzorce naniesiono na wcześniej powleczone płytki 96-dołkowe (100 µL/dołek) i inkubowano przez 2 h w temperaturze 37°C. Po czterokrotnym przemyciu 300 µL buforu piorącego, dodano 100 µL biotynylowanego przeciwciała detekcyjnego i inkubowano przez 1 h w 37°C. Po kolejnym etapie przemywania dodano 100 µL streptawidyny sprzężonej z peroksydazą chrzanową i inkubowano przez 30 min w 37°C w ciemności. Następnie dodano substrat chromogenny (tetrametylobenzydyna, 100 µL) i inkubowano przez 15 min w 37°C, chroniąc przed światłem. Reakcję przerwano za pomocą 50 µL roztworu stopującego, a absorbancję zmierzono przy 450 nm przy użyciu czytnika mikropłytek. Stężenia obliczono na podstawie krzywych wzorcowych wyznaczonych dla znanych stężeń białek rekombinowanych. Każdą próbkę oznaczono w duplikacie, a do analizy przyjęto wartość średnią. Na każdej płytce umieszczono próbki kontroli jakości dostarczone przez producenta; wyniki akceptowano tylko wtedy, gdy wartości QC mieściły się w zakresie określonym przez producenta.
Kontrola jakości i powtarzalność
Wszystkie analizy laboratoryjne zostały przeprowadzone zgodnie z wytycznymi MIQE (Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments) dla RT-qPCR oraz odpowiednimi standardami raportowania dla testów ELISA. Główne urządzenia były kalibrowane zgodnie z harmonogramami producentów. W każdej serii analiz RT-qPCR i ELISA uwzględniono próbki kontrolne ujemne i dodatnie w celu monitorowania zmienności między płytkami. Wszystkie dane były rejestrowane i zarządzane przy użyciu programu Microsoft Excel, a autor korespondencyjny udostępni szczegółowe protokoły eksperymentalne i surowe dane na uzasadnioną prośbę.
Analiza statystyczna
Dane analizowano przy użyciu programu SPSS 23.0 oraz oprogramowania do statystyki i tworzenia wykresów. Rozkład normalny oceniano testem Shapiro-Wilka. Zmienne ciągłe przedstawiono jako średnia ± SD lub mediana (IQR) i porównywano za pomocą testu t lub testu U Manna-Whitneya, w zależności od rozkładu. Zmienne kategoryczne porównywano testem χ2. Korelacje badano za pomocą analiz Pearsona lub Spearmana, w zależności od rozkładu danych. Wartość prognostyczną określono za pomocą krzywej ROC i zweryfikowano metodą 5-krotnej walidacji krzyżowej. Optymalną wartość odcięcia dla miR-486-3p wyznaczono poprzez maksymalizację indeksu Youdena. Do oceny korelacji wykorzystano analizy korelacji Pearsona i Spearmana. W analizie prognostycznej pacjentów podzielono na grupy na podstawie mediany ekspresji miR‑486‑3p; do porównania wyników przeżycia między grupami wykorzystano krzywe Kaplana-Meiera z testem log-rank. Zmienne z wartością P < 0,1 w jednowymiarowym modelu regresji Coxa wprowadzono do wielowymiarowego modelu Coxa. Wartość P < 0,05 uznano za istotną statystycznie.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Charakterystyka wyjściowa w grupie ACI i w grupie ACI z współistniejącym OSAS
Jak pokazano w Tabeli 1, grupa ACI składała się z 68 mężczyzn i 32 kobiet, o średnim wieku 62,84 ± 12,65 lat, natomiast grupa ACI z współistniejącym OSAS obejmowała 116 mężczyzn i 54 kobiety, o średnim wieku 61,31 ± 11,25 lat. W grupie ACI z współistniejącym OSAS odnotowano istotnie wyższe wartości AHI, wyniki w skali NIHSS oraz poziomy CRP. Jednakże w obu grupach stwierdzono porównywalny rozkład wieku, płc...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Pacjenci z OSAS doświadczają nawracających zapadań i niedrożności dróg oddechowych, co prowadzi do przerywanej hipoksji (IH) i nadmiernej senności w ciągu dnia (EDS), które mogą powodować uszkodzenia neuronalne14OSA występuje z wysoką częstotliwością po ACI, dotykając około 72% pacjentów, i znacząco zwiększa ryzyko sercowo-naczyniowe15ACI stanowi spektrum deficytów neurologicznych wynikających z ogniskowego niedokrwienia i niedotlenienia mózgu wtórnych do niewystarczającej ...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Niniejsze badanie zostało sfinansowane w ramach projektu „Research on Stroke Prevention and Treatment Technologies” (nr WKZX2023CZ0143).
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Skaner MRI 3,0 T | Siemens Healthineers, Niemcy | MAGNETOM Skyra | Obrazowanie mózgu w celu potwierdzenia ostrego zawału mózgu |
| Mikropłytki ELISA 96-dołkowe | Shenzhen Xinbosheng Biological Co., Ltd., Chiny | płytka XBS | Reakcja antygen-przeciwciało w detekcji metodą ELISA |
| Wytyczne praktyki klinicznej AASM dotyczące zaburzeń oddychania podczas snu | American Academy of Sleep Medicine | pełny wytyczne z 2020 r. | Zstandaryzowane kryteria diagnostyczne AHI oraz kryteria stratyfikacji ciężkości OSAS |
| Chińska zwalidowana wersja Indeksu Jakości Życia w Bezdechu Sennym w Calgary (SAQLI) | University of Calgary | wydanie tłumaczone z 2021 r. | Ocena jakości życia u pacjentów z ACI powikłanym przez OSAS |
| Próżniowe probówki do pobierania krwi z EDTA-K2 5 ml | BD Biosciences, USA | 367863 | Pobieranie krwi żylnej obwodowej w celu wyizolowania surowicy |
| Chińska zwalidowana wersja Skali Senności Epworth (ESS) | Johns Hopkins University | wydanie zaktualizowane 2018 | Ocena senności w ciągu dnia u pacjentów po udarze mózgu |
| GraphPad Prism 9 | GraphPad Software, USA | Wersja 9.4.1 | Wykresy rozrzutu, wykresy pudełkowe, wizualizacja krzywej ROC |
| Zestaw ELISA do oznaczania ludzkiego białka CRP | Shenzhen Xinbosheng Biological Co., Ltd., Shenzhen, Chiny | XBS-H001 | Ilościowe oznaczanie białka C-reaktywnego w surowicy |
| Ludzki HIF-1α Zestaw ELISA | Shenzhen Xinbosheng Biological Co., Ltd., Shenzhen, Chiny | XBS-H007 | Ilościowe oznaczanie czynnika indukowanego hipoksją 1 w surowicyα |
| Ludzki TNF-α Zestaw ELISA | Shenzhen Xinbosheng Biological Co., Ltd., Shenzhen, Chiny | XBS-H003 | Ilościowe oznaczanie TNF-α w surowicyα czynnik zapalny |
| IBM SPSS Statistics 23.0 | IBM, Armonk, NY, USA | Wersja 23.0 | Wszystkie analizy statystyczne (test t, korelacja, ROC, Kaplan–(model Kaplana-Meiera, regresja Coxa) |
| Spektrofotometr do mikropłytek | Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, USA) | Multiskan FC | Pomiar absorbancji dla płytek ELISA przy 450 nm |
| miR-486-3p & Startery qPCR dla U6 | Sangon Biotech, Szanghaj, Chiny | Synteza na zamówienie | Amplifikacja genu docelowego i genu referencyjnego do qPCR |
| Zestaw miScript SYBR Green PCR Kit | Qiagen GmbH, Hilden, Niemcy | 218073 | Ilościowa amplifikacja miR-486-3p i U6 metodą real-time PCR |
| Chińska zwalidowana wersja skali udaru NIH (NIHSS) | National Institute of Neurological Disorders and Stroke (NINDS), USA | Standardowe wydanie kliniczne | Wstępna ocena stopnia nasilenia deficytów neurologicznych u pacjentów z ACI |
| Oprogramowanie do scoringu snu w PSG | BMC Medical Co., Ltd., Chiny | v3.2 | Zautomatyzowana wstępna ocena zdarzeń oddechowych podczas snu |
| System do analizy PCR w czasie rzeczywistym QuantStudio 6 Pro | Applied Biosystems, Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, USA) | QuantStudio 6 Pro | Amplifikacja RT-qPCR, pozyskiwanie krzywej topnienia, rejestracja wartości Ct |
| Oprogramowanie QuantStudio Real-Time PCR | Applied Biosystems, USA | v1.7 | Eksport surowych danych qPCR, analiza wartości Ct |
| Chłodząca wirówka laboratoryjna | Xiangyi Centrifuge Instrument Co., Ltd., Hunan, Chiny | TDZ5-WS | Oddzielanie surowicy z krwi pełnej (2700 × g, 4 °C) |
| Zestaw do odwrotnej transkrypcji RevertAid RT Reverse Transcription Kit | Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA | K1691 | Odwrotna transkrypcja miRNA z surowicy do cDNA |
| Probiówki do mikrocentryfugi 1,5 ml wolne od RNaz | Axygen, USA | MCT-150-C | Aliquotowanie i przechowywanie odseparowanej surowicy |
| Odczynnik do izolacji RNA TRIzol | Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA | 15596026 | Ekstrakcja całkowitego RNA z próbek ludzkiej surowicy |
| Zamrażarka ultra niskotemperaturowa | Haier Biomedical, Shandong, Chiny | DW-86L388 | Długoterminowe przechowywanie próbek surowicy w temperaturze −80 °C |
| Monitor polisomnograficzny YH-600B | BMC Medical Co., Ltd., Pekin, Chiny | YH-600B | Nocny monitoring snu i obliczanie wskaźnika AHI w diagnostyce OSAS |
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.