W niniejszym badaniu retrospektywnym przeprowadzonym u 125 pacjentek z uporczywą infekcją HR-HPV i zespołem niedoboru śledziony stwierdzono, że zastosowanie WDT wraz z rhIFN-α-2b wiązało się z korzystniejszymi wynikami w zakresie HPV, mikroekologii pochwy, podzbiorów obwodowych limfocytów T oraz objawów klinicznych niż stosowanie samego rhIFN-α-2b, przy braku istotnych różnic w całkowitej liczbie odnotowanych zdarzeń niepożądanych.
Artykuł badawczy
Retrospektywne badanie zastosowania wywaru Wandai w połączeniu z rekombinowaną ludzką interferonem alfa-2b w uporczywym zakażeniu wysokiego ryzyka Human Papillomavirus
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
W niniejszym badaniu retrospektywnym oceniono wyniki kliniczne związane ze stosowaniem wywaru Wandai (WDT) w połączeniu z rekombinowanym ludzkim interferonem α-2b (rhIFN-α-2b) u pacjentek z uporczywą infekcją wirusem ludzkiego brodawczaka o wysokim ryzyku (HR-HPV) i zespołem niedoboru śledziony, ze szczególnym uwzględnieniem mikroekologii pochwy oraz subpopulacji obwodowych limfocytów T. Przeanalizowano dane kliniczne 125 pacjentek leczonych między marcem 2024 r. a wrześniem 2025 r. Zgodnie ze schematem leczenia, 57 pacjentek otrzymało doustnie WDT oraz czopki dopochwowe rhIFN-α-2b, natomiast 68 pacjentek otrzymało wyłącznie rhIFN-α-2b. Obie grupy przeszły trzy kolejne cykle leczenia. Po leczeniu grupa obserwacyjna wykazała wyższy całkowity wskaźnik skuteczności niż grupa kontrolna (89,47% vs. 72,06%, p = 0,015) oraz krótszy czas do pierwszej konwersji HPV (P = 0,028), podczas gdy ogólny rozkład wyników HPV w czterech kategoriach (P = 0,060) oraz wskaźnik konwersji specyficzny dla HPV16/18 (P = 0,138) nie różniły się istotnie. Korzystniejsze wyniki mikroekologiczne pochwy obejmowały niższe pH, rzadszą dodatnią reakcję na esterazę leukocytową i test aminowy, a także wyższe wskaźniki prawidłowego poziomu nadtlenku wodoru, stopnia I–II czystości pochwy oraz przewagi Lactobacillus (P < 0,05). Rzadziej stwierdzano obecność grzybów, nieprawidłowości związane z bakteryjną vagozą oraz infekcje mieszane (P < 0,05). W grupie obserwacyjnej po leczeniu odnotowano wyższy odsetek limfocytów T CD4+ oraz wyższy stosunek CD4+/CD8+, natomiast niższy odsetek limfocytów T CD8+ (P < 0,05). Bardziej korzystne wyniki zaobserwowano również w zakresie całkowitej punktacji zespołów w tradycyjnej medycynie chińskiej, nieprawidłowego koloru szyjki macicy oraz krwawienia kontaktowego. Ogólny wskaźnik zarejestrowanych zdarzeń niepożądanych nie różnił się istotnie między grupami (P = 0,057). Stosowanie WDT wraz z rhIFN-α-2b wiązało się z korzystniejszymi wynikami w zakresie eliminacji HPV, mikroekologii pochwy, subpopulacji obwodowych limfocytów T oraz objawów; jednak retrospektywny charakter badania i pozostałe czynniki zakłócające wykluczają interpretację przyczynowo-skutkową.
Wprowadzenie
Rak szyjki macicy jest jednym z częstych nowotworów złośliwych żeńskiego układu rozrodczego, a uporczywa infekcja wirusem brodawczaka ludzkiego wysokiego ryzyka (HR-HPV) stanowi istotną podstawę jego występowania i progresji1. Dane epidemiologiczne wykazały, że w 2020 roku na całym świecie odnotowano około 600 000 nowych przypadków raka szyjki macicy i 340 000 związanych z nim zgonów2. Po uporczywej infekcji HR-HPV wczesne białka wirusowe E6 i E7 mogą ingerować w szlaki powiązane z supresorami nowotworowymi, takie jak P53 i RB, promując niekontrolowaną proliferację komórek nabłonka szyjki macicy, a tym samym zwiększając ryzyko wystąpienia zmian wewnątrznabłonkowych oraz raka szyjki macicy3. Dlatego też wspomaganie eliminacji HR-HPV przed rozwojem zmian w obrębie szyjki macicy pozostaje istotnym krokiem w redukcji ryzyka progresji choroby.
W praktyce klinicznej rekombinowany ludzki interferon α-2b (rhIFN-α-2b) jest powszechnie stosowanym miejscowym lekiem przeciwwirusowym w zakażeniach HR-HPV. Jego działanie nie polega jedynie na bezpośrednim niszczeniu wirusa, lecz na hamowaniu replikacji wirusowej i przetrwałego zakażenia poprzez indukcję ekspresji białek przeciwwirusowych, wzmacnianie odpowiedzi odpornościowej komórkowej oraz regulację reakcji zapalnych4. Podanie dopochwowe pozwala na koncentrację leku w obrębie zmian szyjkowych i pochwowych. Jest to metoda stosunkowo łatwa do wykonania, zapewniająca wysokie miejscowe stężenie leku i wywołująca mniej systemowych reakcji niepożądanych5. Jednakże u niektórych pacjentek nadal obserwuje się powolną konwersję do wyniku negatywnego, trwałą pozytywność lub nawroty po leczeniu. Powtarzane podawanie dopochwowe może również zaburzyć lokalną równowagę mikroekologiczną, prowadząc do zwiększenia pH pochwy, zmniejszenia przewagi Lactobacillus, osłabienia produkcji nadtlenku wodoru oraz nieprawidłowości w poziomie esterazy leukocytarnej i sialidazy. W poważniejszych przypadkach może to zwiększyć ryzyko kandydozy sromowo-pochwowej, bakteryjnej vagozy (BV) i zakażeń mieszanych6,7. Gdy mikroekologia pochwy ulegnie zaburzeniu, bariera śluzówkowa i miejscowa obrona immunologiczna zostają osłabione, co utrudnia eliminację HPV8.
Odpowiednie badania z zakresu tradycyjnej medycyny chińskiej (TCM) często interpretują objawy kliniczne związane z uporczywą infekcją HR-HPV z perspektywy patogenu wilgoci, nieprawidłowej leukoroi oraz niedoboru zdrowej energii qi, zazwyczaj wiążąc je ze zwiększonym wydzieleniem z pochwy, nieprawidłowym kolorem i teksturą wydzieliny, zmęczeniem, brakiem apetytu, wzdęciem brzucha i luźnymi stolcami9. Odwar Wandai (WDT) jest powszechnie stosowanym preparatem ginekologicznym. W niniejszym badaniu został on zastosowany zgodnie z patogenezą niedoboru śledziony z nagromadzeniem wilgoci i dysfunkcją Naczynia Opasującego. Niedawne badania wykazały, że WDT może poprawić strukturę flory pochwy u pacjentek z kandydozą sromkowe-pochwową o wzorcu niedoboru śledziony i nagromadzenia wilgoci, co sugeruje jego potencjalną rolę w regulacji mikroekologii pochwy10. Z perspektywy nowoczesnej farmakologii, zawarte w preparacie składniki lecznicze wykazują działanie przeciwzapalne i immunomodulacyjne oraz mogą poprawiać barierę śluzową i hamować nieprawidłowy wzrost drobnoustrojów. Efekty te mogą pomóc w przywróceniu lokalnej homeostazy pochwy, łagodzić objawy leukoroi i poprawić niską odpowiedź immunologiczną związaną z uporczywą infekcją HR-HPV11.
Zgłaszano rolę rhIFN-α-2b oraz niektórych chińskich preparatów leczniczych lub receptur ziołowych w leczeniu zakażeń HR-HPV12,13. Interferon działa głównie poprzez miejscowe efekty przeciwwirusowe i aktywację odpornościową, podczas gdy WDT ma na celu wzmocnienie śledziony, usuwanie wilgoci, wspieranie zdrowego qi, eliminację patogenów, poprawę stanu białoprzetok oraz regulację mikroekologii. Teoretycznie połączenie tych dwóch metod jest dobrze dopasowane. Może ono pomóc w zmniejszeniu niekorzystnego wpływu samej terapii miejscowej na mikroekologię pochwy, wspomóc przywrócenie przewagi Lactobacillus, poprawić zaburzenia w podzbiorach obwodowych limfocytów T oraz jednocześnie złagodzić zespoły związane z białoprzetoką wynikającą z niedoboru śledziony. Jednakże dowody bezpośrednio wspierające tę tezę pozostają ograniczone.
W związku z powyższym, niniejsze badanie objęło pacjentki z uporczywym zakażeniem HR-HPV o wzorcu niedoboru śledziony i porównyło zastosowanie WDT w połączeniu z rhIFN-α-2b z samym rhIFN-α-2b pod kątem skuteczności klinicznej, wyników w zakresie HPV, mikroekologii pochwy oraz innych aspektów, aby dostarczyć dowodów klinicznych dla poprawy eliminacji HR-HPV, korekcji zaburzeń mikroekologicznych pochwy, łagodzenia objawów leucorrhoea związanych z niedoborem śledziony oraz optymalizacji zintegrowanych strategii leczenia chińską i zachodnią medycyną.
Protokół
Protokół badania został przeanalizowany i zatwierdzony przez Szpital Zdrowia Matki i Dziecka w powiecie Changxing (numer zatwierdzenia kyl1-1x-2023 (045)). Ponieważ była to analiza retrospektywna istniejących dokumentacji klinicznych, wymóg uzyskania świadomej zgody został zniesiony. Narzędzia badawcze wykorzystane w niniejszym protokole są wyszczególnione w Tabeli materiałów.
1. Obiekty badań
Retrospektycznie zebrano dane kliniczne pacjentek z uporczywą infekcją wysokoryzykownego wirusa papilomiaszkowatego (HR-HPV) i zespołem niedoboru śledziony, leczonych w Szpitalu Położniczym i Dziecięcym w powiecie Changxing w okresie od marca 2024 do września 2025 roku. Zgodnie z rzeczywistym schematem leczenia, pacjentki otrzymujące doustnie wywar Wandai (WDT) jako uzupełnienie terapii rekombinowanym ludzkim interferonem α-2b (rhIFN-α-2b) przydzielono do grupy obserwacyjnej (n = 57), natomiast pacjentki leczone wyłącznie rhIFN-α-2b przydzielono do grupy kontrolnej (n = 68). Wszystkie dane przypadków pozyskano z elektronicznej dokumentacji medycznej pacjentek ambulatoryjnych, systemu informacji laboratoryjnej oraz innych szpitalnych baz danych.
2. Kryteria diagnostyczne i różnicowanie wzorców
Trwałą infekcję HR-HPV zdefiniowano operacyjnie jako wykrycie co najmniej jednego identycznego genotypu HR-HPV w dwóch kolejnych próbkach z szyjki macicy pobranych w odstępie co najmniej 3 miesięcy przed rozpoczęciem leczenia. W przypadku pacjentek z infekcjami wielokrotnymi trwałość zdefiniowano jako obecność co najmniej jednego genotypu HR-HPV w obu punktach czasowych14. Pacjentki mogły wykazywać nieprawidłową wydzielinę z pochwy, miejscowe objawy zapalne szyjki macicy lub nieprawidłowy obraz cytologiczny szyjki macicy; jednak nie włączono pacjentek z wysokostopniowymi zmianami w obrębie szyjki macicy lub nowotworem szyjki macicy wymagającym natychmiastowej operacji, leczenia fizycznego lub opieki onkologicznej.
Różnicowanie wzorców w tradycyjnej medycynie chińskiej (TCM) przeprowadzono zgodnie z kryteriami zespołów dla „choroby białopływowej” zawartymi w Guiding Principles for Clinical Research of New Chinese Medicines15. Rozpoznano wzorzec niedoboru śledziony, gdy wystąpiły co najmniej dwie z trzech głównych objawów: zwiększona ilość białopływu, wydzielina biała lub bladożółta oraz wydzielina rzadka, wraz z co najmniej jednym objawem wtórnym, obejmującym bladą lub ziemistą cerę, zmęczenie kończyn lub obrzęki, brak apetytu, luźne stolce bądź dyskomfort w nadbrzuszu lub podżebrzu, przy zgodnych wynikach badania języka i tętna. Klasyfikacja wzorców nie opierała się na numerycznym progu całkowitej oceny punktowej. W celu oceny wyników zastosowano całkowity wskaźnik zespołu TCM obejmujący osiem elementów – ilość białopływu, kolor, konsystencję, cerę, zmęczenie kończyn lub obrzęki, apetyt, konsystencję stolca oraz dyskomfort w nadbrzuszu lub podżebrzu – z których każdy oceniano w skali 0–3 zgodnie z określonymi kryteriami nasilenia (Tabela uzupełniająca 1), co dawało wynik całkowity w zakresie 0–24; wyższe wyniki wskazywały na większe nasilenie objawów.
3. Kryteria włączenia i wykluczenia
Kryteria włączenia obejmowały pacjentki w wieku 18–65 lat; dodatni wynik testu na HR-HPV przed leczeniem i spełnienie definicji przetrwałej infekcji; różnicowanie wzorca TCM zgodne z chorobą białoplorzaLeia wynikającą z niedoboru śledziony; leczenie samym rhIFN-α-2b lub WDT w połączeniu z rhIFN-α-2b; dostępność danych z co najmniej przed- i po-terapeutycznego testowania HPV, badania mikroekologicznego pochwy, oceny punktowej zespołów TCM oraz danych oceny skuteczności; a także dokumentacji medycznej i danych z obserwacji wystarczających do analizy głównych punktów końcowych.
Kryteria wykluczenia obejmowały: ciążę lub okres laktacji; wysokostopniowe zmiany dysplastyczne szyjki macicy, raka szyjki macicy lub inne zmiany w obrębie szyjki macicy wymagające natychmiastowej interwencji chirurgicznej; ciężkie choroby serca, wątroby, nerek lub układu krwiotwórczego, nowotwór złośliwy lub chorobę z niedoborem odporności; niedawne stosowanie leków immunosupresyjnych, glikokortykosteroidów lub innych leków, które mogłyby znacząco wpłynąć na funkcję odpornościową; jednoczesne stosowanie innych leków przeciw-HPV, preparatów mikroekologicznych do pochwy, leków przeciwbakteryjnych lub innych terapii, które mogłyby wpłynąć na ocenę skuteczności podczas leczenia; chorobę psychiczną skutkującą niezdolnością do współpracy przy leczeniu lub podczas obserwacji; oraz brak głównych wskaźników obserwacyjnych, co uniemożliwiało określenie wyników w stosunku do HPV lub skuteczności klinicznej.
4. Metody traktowania
Grupa kontrolna otrzymywała czopki dopochwowe z rhIFN-α-2b. Przed snem oczyszczano srom i ręce, zakładano palczaki z folii, a czopek umieszczano w tylnym sklepieniu pochwy w pobliżu szyjki macicy. Każda seria leczenia rhIFN-α-2b obejmowała dziewięć podań dopochwowych, przeprowadzanych co drugi dzień. Przepisano trzy kolejne serie, co łącznie odpowiadało 27 zaplanowanym podaniom. Pacjentki z regularnymi miesiączkami rozpoczynały przyjmowanie leku w trzecim dniu po zakończeniu miesiączki, a podawanie leku zawieszano w czasie krwawienia. Pacjentki z nieregularnymi miesiączkami stosowały lek zgodnie z cyklem leczenia, z przerwami w czasie miesiączki. Pacjentki w okresie pomenopauzalnym rozpoczynały leczenie w dniu następującym po otrzymaniu leku. W trakcie leczenia zalecano pacjentkom ograniczenie częstotliwości stosunków płciowych oraz prawidłowe stosowanie prezerwatyw. Skuteczność oceniano po trzech kolejnych seriach leczenia.
Grupa obserwacyjna otrzymała WDT jako uzupełnienie powyższego leczenia. Receptura obejmowała Codonopsis Radix (15 g), Atractylodis Macrocephalae Rhizoma (15 g), Dioscoreae Rhizoma (30 g), Paeoniae Radix Alba (10 g), Atractylodis Rhizoma (10 g), Plantaginis Herba (10 g), Schizonepetae Spica Carbonisata (5 g), Citri Reticulatae Pericarpium (5 g), Bupleuri Radix (10 g) oraz Glycyrrhizae Radix et Rhizoma (6 g). Susze do odwarów ziołowych zostały dostarczone przez ambulatoryjną aptekę chińską Szpitala Zdrowia Matki i Dziecka w powiecie Changxing. Każda dobowa dawka była namaczana w wodzie pitnej przez 30 min, przy czym poziom wody znajdował się około 2–5 cm powyżej ziół, a następnie gotowana dwukrotnie: przez 25 min podczas pierwszego odwaru i 20 min podczas drugiego. Oba ekstrakty połączono i doprowadzono do końcowej objętości 400 mL, przyjmując po 200 mL rano i 200 mL wieczorem. Tożsamość surowców roślinnych, masa wydawanych składników oraz zgodność z recepturą były sprawdzane przez licencjonowanych farmaceutów TCM zgodnie ze standardową procedurą operacyjną apteki szpitalnej; zachowano zapisy dotyczące dostawcy/partii, przygotowania oraz wydawania leków. Każda seria obejmowała 14 dni leczenia, a terapia była kontynuowana przez trzy serie, z przerwami w podawaniu leku podczas miesiączki. Przestrzeganie zaleceń oceniano retrospektywnie na podstawie recept i zapisów z wizyt kontrolnych. Za przestrzeganie zaleceń uznano ukończenie wszystkich trzech przepisanych serii bez odnotowanego przedwczesnego przerwania leczenia, natomiast zdefiniowane w protokole przerwy podczas miesiączki nie były uznawane za brak przestrzegania zaleceń. Każde przedwczesne przerwanie leczenia odnotowano jako oddzielny wynik dotyczący bezpieczeństwa.
5. Wskaźniki obserwacji
- Skuteczność kliniczna i wyniki w odniesieniu do HPV
Wykrywanie i genotypowanie DNA HR-HPV przeprowadzono przy użyciu komercyjnego testu do genotypowania HPV. Amplifikacji metodą reakcji łańcuchowej polimerazy towarzyszyła hybrydyzacja przepływowa. Test wykrywa HPV 6, 11, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 42, 43, 44, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68 oraz 81. W niniejszym badaniu HR-HPV zdefiniowano jako wynik dodatni dla HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 lub 68.
Wyjściowe próbki złuszczonych komórek szyjki macicy pobrano w ciągu 7 dni przed rozpoczęciem pierwszego cyklu leczenia. Kontrolne badania w kierunku HPV przeprowadzano po każdym cyklu leczenia w odstępach około miesięcznych w celu ustalenia czasu do pierwszej konwersji, a końcową próbkę po leczeniu pobrano około 4 tygodnie po zakończeniu trzeciego cyklu. Po delikatnym usunięciu nadmiaru śluzu szyjkowego sterylną szczoteczkę do szyjki macicy wprowadzono do ujścia szyjki i obrócono pięciokrotnie, a następnie niezwłocznie umieszczono ją w dostarczonym medium konserwującym. Próbki oznaczono unikalnym identyfikatorem pacjenta oraz datą pobrania i przechowywano w 4 °Ci przetestowano w ciągu 48 h. Próbki wyjściowe i kontrolne przetworzono w tym samym laboratorium, stosując ten sam test, platformę oraz kryteria interpretacji.
Każde badanie obejmowało określone dla danego testu kontrole pozytywne i negatywne, wraz z wewnętrzną kontrolą amplifikacji oraz kontrolą hybrydyzacji z biotyną; wyniki akceptowano tylko wtedy, gdy wszystkie wymagane kontrole były poprawne. Próbki z nieprawidłową kontrolą wewnętrzną lub niejednoznacznym wzorem hybrydyzacji poddano ponownej ekstrakcji i ponownemu badaniu. W przypadku, gdy powtórne badanie nadal pozostawało nieprawidłowe, pobrano nową próbkę. W okresie prowadzenia badania laboratorium uczestniczyło w programie zewnętrznej oceny jakości genotypowania HPV organizowanym przez National Center for Clinical Laboratories. Klasyfikacja grup badawczych została przeprowadzona retrospektywnie podczas ekstrakcji danych, w związku z czym personel laboratoryjny nie miał do niej dostępu w momencie interpretacji wyników HPV.
Wyniki HR-HPV po leczeniu zaklasyfikowano do czterech wzajemnie wykluczających się kategorii: całkowita konwersja do wyniku negatywnego, częściowa konwersja do wyniku negatywnego, uporczywa pozytywność lub nowo wykryty genotyp HPV. W przypadku pacjentów z wielokrotnymi infekcjami, całkowita konwersja wymagała, aby wszystkie genotypy HR-HPV obecne w punkcie wyjściowym stały się niewykrywalne; konwersja częściowa wymagała eliminacji co najmniej jednego, ale nie wszystkich genotypów wyjściowych; uporczywa pozytywność oznaczała dalsze wykrywanie jednego lub więcej genotypów wyjściowych bez wykrycia nowego genotypu; natomiast w przypadku wykrycia jakiegokolwiek nowego genotypu HR-HPV podczas wizyty kontrolnej, przypisywano taki przypadek do kategorii nowo pozytywnych w ramach analizy czterokategorycznej. Całkowity wskaźnik skuteczności zdefiniowano jako odsetek pacjentów z konwersją całkowitą lub częściową. Dla pacjentów z wynikiem pozytywnym w kierunku HPV16 i/lub HPV18 w punkcie wyjściowym, konwersja specyficzna dla HPV16/18 wymagała, aby odpowiadający im wyjściowy genotyp lub genotypy HPV16/18 stały się niewykrywalne, niezależnie od tego, czy inny genotyp HR-HPV nadal był obecny. Czas do pierwszej konwersji HPV obliczano od momentu rozpoczęcia leczenia do pierwszej udokumentowanej konwersji całkowitej lub częściowej. - Wskaźniki fizykochemiczne, enzymatyczne i punktowe mikroekologii pochwy
Próbki wydzieliny z pochwy pobrano przed i po leczeniu w celu badania mikroekologii pochwy, obejmującego pH pochwy, nadtlenek wodoru, esterazę leukocytową, sialidazę, test aminowy oraz czystość pochwy. Wynik w skali Nugenta16, skala Dondersa17oraz wyekstrahowano określenie prawidłowej lub zaburzonej mikroekologii. Na podstawie raportów z mikroekologii pochwy odnotowano przewagę Lactobacillus, wykrycie grzybów, wykrycie Trichomonas, nieprawidłowości związane z bakteryjną waginozą (BV) oraz zakażenia mieszane. Powrót przewagi Lactobacillus po leczeniu oceniono u pacjentek, u których w punkcie wyjścia nie stwierdzono przewagi Lactobacillus. Rutynowe badanie mikroekologiczne klasyfikowało przewagę Lactobacillus bez identyfikacji na poziomie gatunkowym i nie rozróżniało H₂O₂-produkujące z nie-H₂O₂szczepy produkujące. - Wskaźniki obwodowej funkcji odpornościowej
Krew żylną obwodową pobrano przed i po leczeniu. Odsetki limfocytów T CD4+ i CD8+ zmierzono metodą cytometrii przepływowej przy użyciu odczynnika do analizy subpopulacji limfocytów T w czterech kolorach, a następnie obliczono stosunek CD4+/CD8+. - Miejscowe objawy szyjki macicy i wyniki badania ginekologicznego
Z zapisów badań ginekologicznych wyodrębniono miejscowe objawy szyjki macicy, w tym ektropion nabłonka cylindrycznego szyjki macicy, nieprawidłowy kolor szyjki macicy, przerost szyjki macicy, polipy szyjki macicy lub zmiany przypominające nowotwór oraz krwawienie kontaktowe. - Wielkość poprawy głównych punktów końcowych
Obliczono redukcję wyniku w skali Nugenta, skali Dondersa oraz całkowitego wyniku zespołu TCM. Przywrócenie dominacji Lactobacillus oceniono u pacjentek bez dominacji Lactobacillus w punkcie wyjścia, natomiast normalizację mikroekologiczną oparto na końcowej zintegrowanej klasyfikacji w rutynowym raporcie mikroekologicznym pochwy.
6. Bezpieczeństwo
Reakcje niepożądane w trakcie i po leczeniu, w tym świąd pochwy, uczucie pieczenia w pochwie oraz inne objawy, zostały wyodrębnione z dokumentacji medycznej i zapisów z wizyt kontrolnych. Nieprawidłowości mikroekologiczne pochwy wykryte laboratoryjnie nie były klasyfikowane jako zdarzenia niepożądane, chyba że w dokumentacji medycznej lub zapisach z wizyt kontrolnych odnotowano odpowiadającą im diagnozę kliniczną lub objawy.
7. Metody statystyczne
Analizy statystyczne przeprowadzono przy użyciu oprogramowania statystycznego. W pierwszej kolejności sprawdzono rozkład danych ilościowych pod kątem normalności. Dane o rozkładzie normalnym przedstawiono jako średnia ± odchylenie standardowe, a porównania międzygrupowe przeprowadzono za pomocą testu t dla prób niezależnych, natomiast porównania wewnątrzgrupowie przed i po leczeniu przeprowadzono za pomocą testu t dla prób zależnych. Dane o rozkładzie nienormalnym przedstawiono jako mediana (rozstęp międzykwartylny), a porównania międzygrupowe przeprowadzono za pomocą testu U Manna–Whitneya, natomiast porównania wewnątrzgrupowie przed i po leczeniu przeprowadzono za pomocą testu znaków Wilcoxona. Dane liczbowe przedstawiono jako liczbę przypadków i procent, a porównania międzygrupowe przeprowadzono za pomocą testu χ2 lub dokładnego testu Fishera. Dane uporządkowane analizowano za pomocą testu sum rang.
Aby zbadać odporność związku między leczeniem a całkowitym wskaźnikiem skuteczności na zmierzone różnice wyjściowe, zastosowano zmodyfikowany model regresji Poissona z robust variance, uwzględniając jako współzmienne grupę terapeutyczną, wiek, czas trwania choroby, wskaźnik masy ciała, wyjściową liczbę genotypów HPV-dodatnich oraz wyjściowy status HPV16/18. Raportowano skorygowane ryzyka względne (RRs) i 95% przedziały ufności (CIs). Powiązanie między przewagą Lactobacillus a prawidłowym statusem nadtlenku wodoru po leczeniu zbadano w sposób eksploracyjny za pomocą testu χ2, stosując tabele krzyżowe specyficzne dla grup terapeutycznych w celu oceny spójności kierunku. Wartość P < 0,05 uznano za statystycznie istotną.
Wyniki
Porównanie cech charakterystycznych w okresie wyjściowym
Przed leczeniem nie zaobserwowano istotnych statystycznie różnic między dwiema grupami pod względem wieku, czasu trwania choroby, wskaźnika masy ciała (BMI), statusu menstruacyjnego, liczby genotypów zakażonych HPV ani innych cech podstawowych (P > 0.05; Tabela 1).
| Grupa obserwacyjna (n=57) | Grupa kontrolna (n=68) | Statystyka | wartość p | |
| Wiek (lata) | 41.37±8.21 | 42.07±8.75 | t=-0,461 | 0.645 |
| Czas trwania choroby (miesiące) | 14.82±5.76 | 15.26±6.14 | t=-0,410 | 0.682 |
| BMI (kg/m²) | 22.67±2.58 | 22.94±2.64 | t=-0,573 | 0.567 |
| Regularna menstruacja | 42 (73.68) | 50 (73.53) | χ2=0.120 | 0.942 |
| Nieregularne miesiączkowanie | 10 (17.54) | 13 (19.12) | ||
| Menopauza | 5 (8.77) | 5 (7.35) | ||
| Zakażenie pojedynczym genotypem | 36 (63.16) | 42 (61.76) | χ2=0.026 | 0.873 |
| Zakażenie wieloma genotypami | 21 (36.84) | 26 (38.24) | ||
| pozytywny pod kątem HPV16/18 | 20 (35.09) | 25 (36.76) | χ2=0.038 | 0.846 |
| Liczba genotypów HPV-dodatnich | 1.39±0.53 | 1.41±0.58 | t=-0,259 | 0.796 |
| TCT NILM | 42 (73.68) | 50 (73.53) | χ2=0.000 | 1 |
| TCT ASC-US | 10 (17.54) | 12 (17.65) | ||
| TCT LSIL | 5 (8.77) | 6 (8.82) | ||
| Początkowe pH pochwy | 5.18±0.43 | 5.22±0.45 | t=-0,489 | 0.626 |
| Początkowy poziom CD4+/CD8+ | 1.17±0.25 | 1.15±0.27 | t=0,441 | 0.66 |
| Początkowy całkowity wynik objawów zespołu TCM (punkty) | 18.46±4.09 | 18.22±4.36 | t=0,309 | 0.758 |
Tabela 1: Charakterystyka wyjściowa obu grup. Podstawowe dane demograficzne i charakterystyka kliniczna grup obserwowanej i kontrolnej, w tym wiek, czas trwania choroby, wskaźnik masy ciała, stan cyklu menstruacyjnego, cechy zakażenia HPV, wyniki cytologii szyjki macicy, odczyn pH pochwy, stosunek CD4+/CD8+ oraz całkowity wynik skali zespołu w tradycyjnej medycynie chińskiej
Porównanie skuteczności klinicznej i wyników dotyczących HPV
Po leczeniu całkowity wskaźnik skuteczności był wyższy w grupie obserwowanej niż w grupie kontrolnej (89,47%) w porównaniu z 72.06%; χ2 = 5,878, P = 0,015) oraz związek ten utrzymywał się po dostosowaniu do mierzonych zmiennych towarzyszących w okresie podstawowym (skorygowane RR = 1,23, 95% CI 1,08–1,40, P = 0,002). Pełna konwersja na wynik negatywny wystąpiła odpowiednio u 66,67% i 45,59% pacjentów; jednakże ogólny rozkład wyników HPV w czterech kategoriach nie osiągnął istotności statystycznej (χ2 = 7,406, P = 0,060). Czas do pierwszej konwersji HPV był krótszy w grupie obserwacyjnej (P = 0,028), natomiast wskaźnik specyficznej konwersji dla HPV16/18 nie różnił się istotnie między grupami (70,00%) w porównaniu do 48,00%, P = 0,138; Tabela 2). W analizach eksploracyjnych uwzględniających stan HPV16/18 w okresie podstawowym, całkowita konwersja HR-HPV wystąpiła u 1/20 (5,00%) w porównaniu z 0/25 (0,00%) pacjentów pozytywnych pod kątem HPV16/18 (Fisher)’s dokładnym P = 0,444) oraz u 37 na 37 (100,00%) w porównaniu z 31/43 (72,09%) pacjentów negatywnych pod kątem HPV16/18 (Fisher)’s dokładne P < 0,001) w grupie obserwacyjnej i kontrolnej, odpowiednio. Większość zakażeń pozytywnych pod kątem HPV16/18 była zakażeniami wielotypowymi na początku badania (17/20 i 24/25, odpowiednio; Tabela uzupełniająca 1).
| Grupa obserwacyjna (n=57) | Grupa kontrolna (n=68) | Statystyka | wartość P | |
| Całkowity wskaźnik skuteczności | 51 (89.47) | 49 (72.06) | χ2=5.878 | 0.015 |
| Pełna konwersja na ujemne | 38 (66.67) | 31 (45.59) | χ2=7.406 | 0.06 |
| Częściowa konwersja na ujemne | 13 (22.81) | 18 (26.47) | ||
| Trwała pozytywność | 5 (8.77) | 15 (22.06) | ||
| Nowo pozytywny genotyp HPV | 1 (1.75) | 4 (5.88) | ||
| konwersja HPV16/18 na wynik negatywny | 14/20 (70.00) | 12/25 (48.00) | χ2=2.204 | 0.138 |
| Czas do pierwszej konwersji HPV (miesiące, przypadki efektywne) | 2.25±0.74 | 2.59±0.76 | t=-2,238 | 0.028 |
Tabela 2: Skuteczność kliniczna i wyniki dotyczące HPV po leczeniu. Kliniczna skuteczność po leczeniu oraz wyniki dotyczące HPV w grupach obserwacyjnej i kontrolnej, w tym całkowita konwersja na negatywny, częściowa konwersja na negatywny, trwała pozytywność, nowo pojawiający się pozytywny genotyp HPV, całkowita skuteczność oraz specyficzna konwersja HPV16/18 i czas do pierwszej konwersji HPV. Ogólna porównawczość w obrębie czterech kategorii wyników HPV była χ2 = 7,406, P = 0,060.
Porównanie wskaźników fizykochemicznych i enzymatycznych mikroekologii pochwy
Przed leczeniem nie zaobserwowano różnic w wynikach badania mikroekologicznego pochwy między dwiema grupami (P<0,05). > 0,05). Po leczeniu odczyn pH pochwy był niższy w grupie obserwowanej niż w grupie kontrolnej (P < 0,001), a obniżenie pH pochwy było większe w grupie obserwowanej (P = 0,004). Ponadto odsetek normalnego stężenia nadtlenku wodoru oraz proporcja stopnia czystości pochwy I–II były wyższe w grupie obserwacyjnej niż w grupie kontrolnej (odpowiednio P = 0,015 i P = 0,007), natomiast stwierdzanie pozytywnej reakcji na esterazę leukocytarną i pozytywnej reakcji aminowej było niższe (odpowiednio P = 0,022 i P = 0,026). Różnica w częstości pozytywnej reakcji na sialidazę między obiema grupami nie była statystycznie istotna (P = 0,055; Tabela 3).
| Grupa obserwacyjna (n=57) | Grupa kontrolna (n=68) | Statystyka | wartość P | |
| pH pochwy (przed leczeniem) | 5.18±0.43 | 5.22±0.45 | t=-0,489 | 0.626 |
| pH pochwy (po leczeniu) | 4.54±0.31 | 4.78±0.34 | t=-4,150 | <0.001 |
| Obniżenie pH pochwy | 0.63±0.36 | 0.43±0.41 | t=2,906 | 0.004 |
| Normalny nadtlenek wodoru (przed leczeniem) | 19 (33.33) | 21 (30.88) | χ2=0.086 | 0.77 |
| Normalny nadtlenek wodoru (po leczeniu) | 43 (75.44) | 37 (54.41) | χ2=5.950 | 0.015 |
| Estryaza leukocytarna dodatnia (przed leczeniem) | 41 (71.93) | 50 (73.53) | χ2=0.040 | 0.841 |
| Estryaza leukocytarna dodatnia (po leczeniu) | 17 (29.82) | 34 (50.00) | χ2=5.226 | 0.022 |
| Sialydaza dodatnia (przed leczeniem) | 31 (54.39) | 39 (57.35) | χ2=0.111 | 0.739 |
| Sialidaza dodatnia (po leczeniu) | 12 (21.05) | 25 (36.76) | χ2=3.673 | 0.055 |
| Test amin pozytywny (przed leczeniem) | 29 (50.88) | 35 (51.47) | χ2=0.004 | 0.947 |
| Test aminowy pozytywny (po leczeniu) | 10 (17.54) | 24 (35.29) | χ2=4.934 | 0.026 |
| I–II stopień czystości pochwy (przed leczeniem) | 18 (31.58) | 20 (29.41) | χ2=0.069 | 0.793 |
| Stopień czystości pochwy I-II (po leczeniu) | 45 (78.95) | 38 (55.88) | χ2=7.394 | 0.007 |
Tabela 3: Wskaźniki fizykochemiczne i enzymatyczne pochwy przed i po leczeniu. Porównanie pH pochwy, obecności nadtlenku wodoru, pozytywnego wyniku testu na leucytoesterazę, pozytywnego wyniku testu na sialidazę, pozytywnego wyniku testu na aminy oraz stopnia czystości pochwy przed i po leczeniu w grupie obserwacyjnej i grupie kontrolnej.
Porównanie mikroflory pochwy i wykrywania drobnoustrojów chorobotwórczych
Po leczeniu dominacja Lactobacillus występowała częściej w grupie obserwacyjnej niż w grupie kontrolnej (P = 0,008), natomiast wykrywanie grzybów, zaburzenia związane z bakteryjnym zapaleniem pochwy (BV) oraz infekcje mieszane występowały rzadziej (P < 0,05). Wykrycie Trichomonas nie różniło się między grupami (P = 0,500; Tabela 4). U wszystkich pacjentów normalny poziom nadtlenku wodoru po leczeniu występował częściej w obecności dominacji Lactobacillus niż w jej braku (62/81 [76,54%] w porównaniu z 18/44 [40.91%]; χ2 = 15,714, P < 0,001). Ten sam kierunek zaobserwowano w grupie obserwacyjnej (84,09%) w porównaniu z 46,15%) oraz grupie kontrolnej (67,57%) w porównaniu z 38.71%).
| Grupa obserwacyjna (n=57) | Grupa kontrolna (n=68) | Statystyka | wartość P | |
| Dominacja Lactobacillus (przed leczeniem) | 20 (35.09) | 22 (32.35) | χ2=0.104 | 0.747 |
| Dominacja Lactobacillus (po leczeniu) | 44 (77.19) | 37 (54.41) | χ2=7.055 | 0.008 |
| Wykrywanie grzybów (przed leczeniem) | 7 (12.28) | 9 (13.24) | χ2=0.025 | 0.874 |
| Wykrywanie grzybów (po leczeniu) | 3 (5.26) | 12 (17.65) | χ2=4.503 | 0.034 |
| Wykrywanie trichomoniasis (przed leczeniem) | 2 (3.51) | 3 (4.41) | Fisher | 1 |
| Wykrywanie trichomonas (po leczeniu) | 0 (0.00) | 2 (2.94) | Fisher | 0.5 |
| Nieprawidłowości związane z BV (przed leczeniem) | 30 (52.63) | 36 (52.94) | χ2=0.001 | 0.972 |
| Nieprawidłowości związane z BV (po leczeniu) | 9 (15.79) | 23 (33.82) | χ2=5.295 | 0.021 |
| Zakażenie mieszane (przed leczeniem) | 13 (22.81) | 16 (23.53) | χ2=0.009 | 0.924 |
| Zakażenie mieszane (po leczeniu) | 4 (7.02) | 14 (20.59) | χ2=4.633 | 0.031 |
Tabela 4: Flora pochwy i wykrywanie mikroorganizmów przed i po leczeniu. Porównanie dominacji Lactobacillus, wykrywalności grzybów, wykrywalności Trichomonas, zaburzeń związanych z bakteryjnym zapaleniem pochwy oraz zakażeń mieszanych przed i po leczeniu w grupie obserwacyjnej i kontrolnej.
Porównanie wskaźników podzbiorów limfocytów T obwodowych
Przed leczeniem nie zaobserwowano różnic między grupami w pomiarach podzbiorów limfocytów T (P > 0,05). Po leczeniu odsetek komórek T CD4+ był wyższy w grupie obserwacyjnej niż w grupie kontrolnej (P = 0,006), odsetek komórek T CD8+ był niższy (P = 0,024), a stosunek CD4+/CD8+ był wyższy (P < 0,001). Zwiększenie liczby komórek T CD4+ oraz stosunku komórek CD4+/CD8+ oraz zmniejszenie liczby komórek T CD8+ były również większe w grupie obserwowanej (P < 0,001, P = 0,004 i P < 0,001, odpowiednio; Rycina 1).
Rycina 1: Pomiar podgrup limfocytów T obwodowych przed i po leczeniu. (A) Procenty komórek T CD4+ przed i po leczeniu oraz odpowiadające im zwiększenie. (B) Procenty komórek T CD8+ przed i po leczeniu oraz odpowiadające im zmniejszenie (C) Stosunki CD4+/CD8+ przed i po leczeniu oraz odpowiadające im zwiększenie. Zmiany w liczbie limfocytów T CD4+ i CD8+ wyrażono w punktach procentowych, natomiast zmiany w stosunku CD4+/CD8+ są bezjednostkowe. #P < 0.05 w porównaniu z odpowiednia wartość przed leczeniem; &P < 0.05 w porównaniu do grupa obserwacyjna Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.
Porównanie lokalnych objawów szyjki macicy i wyników badania ginekologicznego
Po leczeniu częstość występowania nieprawidłowego zabarwienia szyjki macicy oraz krwawienia kontaktowego była niższa w grupie obserwowanej niż w grupie kontrolnej (odpowiednio P = 0,015 i P = 0,038). Nie stwierdzono różnic między grupami w zakresie występowania ektopii nabłonka cylindrycznego szyjki macicy, przerostu szyjki macicy ani polipów/nowotworopodobnych zmian szyjki macicy (P > 0.05; Tabela 5).
| Grupa obserwacyjna (n=57) | Grupa kontrolna (n=68) | Statystyka | wartość P | |
| Ektopia nabłonka cylindrycznego szyjki macicy (przed leczeniem) | 34 (59.65) | 42 (61.76) | χ2=0.058 | 0.809 |
| Egzulcja nabłonka cylindrycznego szyjki macicy (po leczeniu) | 15 (26.32) | 27 (39.71) | χ2=2.492 | 0.114 |
| Nieprawidłowy kolor szyjki macicy (przed leczeniem) | 46 (80.70) | 55 (80.88) | χ2=0.001 | 0.98 |
| Nieprawidłowy kolor szyjki macicy (po leczeniu) | 14 (24.56) | 31 (45.59) | χ2=5.950 | 0.015 |
| Przerost szyjki macicy (przed leczeniem) | 22 (38.60) | 25 (36.76) | χ2=0.044 | 0.833 |
| Zgrubnienie szyjki macicy (po leczeniu) | 9 (15.79) | 19 (27.94) | χ2=2.634 | 0.105 |
| Polipy szyjki macicy/zmiany podobne do nowotworu (przed leczeniem) | 5 (8.77) | 7 (10.29) | χ2=0.083 | 0.774 |
| Polipy szyjki macicy/zmiany nowotworopodobne (po leczeniu) | 3 (5.26) | 5 (7.35) | Fisher | 0.726 |
| Krwiawienie kontaktowe (przed leczeniem) | 26 (45.61) | 32 (47.06) | χ2=0.026 | 0.872 |
| Krwiawienie kontaktowe (po leczeniu) | 6 (10.53) | 17 (25.00) | χ2=4.326 | 0.038 |
Tabela 5: Wyniki lokalnego badania szyjki macicy przed i po leczeniu. Porównanie występowania ektropionu nabłonka cylindrycznego szyjki macicy, nieprawidłowego zabarwienia szyjki macicy, przerostu szyjki macicy, polipów szyjki macicy lub zmian podobnych do nowotworu oraz krwawienia kontaktowego przed i po leczeniu w grupie obserwowanej i grupie kontrolnej.
Porównanie wielkości poprawy w głównych wynikach
Zmniejszenie wyniku w skali Nugent, skali Dondersa oraz całkowitego wyniku objawów TCM było większe w grupie obserwowanej niż w grupie kontrolnej (we wszystkich przypadkach P < 0,05). < 0,001). W grupie obserwowanej odsetek dominacji Lactobacillus oraz wskaźnik normalizacji mikroekologii były również wyższe (81,08%) w porównaniu z 58,70%, P = 0,029; 70,18% w porównaniu z 50,00%, P = 0,022; Tabela 6).
| Grupa obserwacyjna (n=57) | Grupa kontrolna (n=68) | Statystyka | wartość p | |
| Zmniejszenie wyniku skali Nugenta (punkty) | 3.21±1.68 | 2.16±1.55 | t=3,628 | <0.001 |
| Zmniejszenie wyniku w teście Dondersa (punkty) | 3.05±1.44 | 2.03±1.37 | t=4,056 | <0.001 |
| Zmniejszenie całkowitego wyniku objawów zespołu TCM (punkty) | 11.74±3.91 | 8.38±3.78 | t=4,865 | <0.001 |
| Odzyskanie dominacji Lactobacillus | 30/37 (81.08) | 27/46 (58.70) | χ2=4.777 | 0.029 |
| Normalizacja mikroekologiczna | 40 (70.18) | 34 (50.00) | χ2=5.226 | 0.022 |
Tabela 6: Dodatkowe wyniki dotyczące zmian w wynikach i normalizacji mikroekologicznej. Porównanie zmniejszenia wyniku skali Nugenta, skali Dondersa i całkowitego wyniku syndromu tradycyjnej chińskiej medycyny, oraz przywrócenia dominacji Lactobacillus i normalizacji mikroekologii między grupą obserwowaną a grupą kontrolną.
Bezpieczeństwo i działania niepożądane
W trakcie leczenia zarejestrowane działania niepożądane wystąpiły u 15/57 (26,32%) pacjentek w grupie obserwowanej oraz u 29/68 (42,65%) pacjentek w grupie kontrolnej; różnica między grupami nie osiągnęła istotności statystycznej (P = 0,057). Zwiększone wydzieliny pochwy, kandydozę pochwowo-lonową oraz bakteryjne zapalenie pochwy rejestrowano rzadziej w grupie obserwowanej (odpowiednio P = 0,040, P = 0,034 i P = 0,049), natomiast dolegliwości żołądkowo-jelitowe występowały liczbowo częściej (12,28%) w porównaniu z 2,94%; Fisher’s dokładnym P = 0,078). Poszczególne porównania te nie powinny być interpretowane jako dowód ogólnego korzyści pod względem bezpieczeństwa (Tabela 7).
| Wskaźnik działania niepożądanego/bezpieczeństwa | Grupa obserwacyjna (n=57) | Grupa kontrolna (n=68) | Statystyka | wartość P |
| Świerzbienie pochwy | 6 (10.53) | 14 (20.59) | χ2=2.336 | 0.126 |
| Odczucie pieczenia we wodzianiu | 4 (7.02) | 11 (16.18) | χ2=2.463 | 0.117 |
| Rozdęcie brzucha w okolicy dolnej | 5 (8.77) | 12 (17.65) | χ2=2.079 | 0.149 |
| Zwiększony upław pochwy | 8 (14.04) | 20 (29.41) | χ2=4.218 | 0.04 |
| Nieprawidłowe krwawienie z pochwy | 1 (1.75) | 3 (4.41) | Fisher | 0.625 |
| Kandydoza narządów płciowych kobiety | 3 (5.26) | 12 (17.65) | χ2=4.503 | 0.034 |
| Zakażenie bakteryjne pochwy | 4 (7.02) | 13 (19.12) | χ2=3.864 | 0.049 |
| Niedogodności żołądkowo-jelitowe | 7 (12.28) | 2 (2.94) | Fisher | 0.078 |
| Przerwanie leczenia | 1 (1.75) | 4 (5.88) | Fisher | 0.375 |
| Łączna liczba działań niepożądanych | 15 (26.32) | 29 (42.65) | χ2=3.626 | 0.057 |
Tabela 7: Zarejestrowane zdarzenia niepożądane podczas leczenia. Porównanie zarejestrowanych zdarzeń niepożądanych w grupie obserwowanej i grupie kontrolnej, w tym swędzenia pochwy, uczucia pieczenia w pochwie, napięcia w dolnej części brzucha, zwiększonego wydzielania z pochwy, nietypowego krwawienia z pochwy, kandydozy pochwowo-lonowej, bakteryjnego zapalenia pochwy, dolegliwości żołądkowo-jelitowych, przerwania leczenia oraz całkowitej liczby reakcji niepożądanych.
Dostępność danych
Nieidentyfikowane dane pierwotne na poziomie uczestników, które potwierdzają wnioski niniejszego badania, są dostarczone w Plik uzupełniający 1.
Tabela uzupełniająca 1: Kryteria oceny wyniku syndromu w tradycyjnej medycynie chińskiej.
Kryteria oceny ośmiu elementów wchodzących w skład całkowitego wyniku zespołu chorobowego w tradycyjnej medycynie chińskiej. Każdy element ocenia się w skali od 0–3 w zależności od nasilenia objawów, przy czym wyższe wyniki wskazują na większe nasilenie. Kliknij tutaj, aby pobrać ten plik.
Dodatkowa tabela 2: Badawcze wyniki dotyczące HPV, ustratyfikowane według stanu HPV16/18 w okresie wyjściowym.
Porównawcze badanie wyników zakażenia HPV w zależności od stanu HPV16/18 na początku badań. Pacjenci negatywni pod kątem HPV16/18 mieli zakażenie HR-HPV obejmujące jeden lub więcej innych genotypów HR-HPV objętych testem. Oznaczenia poszczególnych genotypów innych niż 16/18 nie zostały zachowane w anonimizowanym zbiorze danych analitycznych; w związku z tym oszacowań wyczyszczenia typu specyficznego dla poszczególnych genotypów innych niż 16/18 nie odtworzono. Analizy te miały charakter eksploracyjny. Kliknij tutaj, aby pobrać ten plik.
Plik uzupełniający 1: Surowe dane na poziomie uczestników pozbawione identyfikatorów dla protokołu. Kliknij tutaj, aby pobrać ten plik.
Dyskusja
W niniejszym badaniu retrospektywnym stwierdzono, że połączenie WDT z rhIFN-α-2b wiązało się z korzystniejszymi wynikami w zakresie HPV oraz rutynowej mikroekologii pochwy niż stosowanie samego rhIFN-α-2b, wraz z różnicami w pomiarach subpopulacji obwodowych limfocytów T, podczas gdy ogólna liczba odnotowanych zdarzeń niepożądanych nie różniła się istotnie pomiędzy grupami. Wyniki te uzasadniają dalszą prospektywną ocenę WDT jako terapii wspomagającej i powinny być interpretowane z uwzględnieniem nierandomizowanego projektu badania oraz retrospekcyjnego ustalania wyników.
Z perspektywy wirusologicznej, wyższa całkowita stopa skuteczności oraz krótszy czas do pierwszej konwersji przemawiały na korzyść grupy obserwacyjnej, jednak ogólny rozkład wyników HPV w czterech kategoriach nie różnił się statystycznie. Skorygowana analiza wrażliwości wykazała podobny związek w przypadku całkowitej stopy skuteczności, choć retrospektywny charakter badania nie pozwala na ustalenie związku przyczynowo-skutkowego. Może to wynikać częściowo z faktu, że rhIFN-α-2b, jako miejscowa terapia przeciwwirusowa, wykazuje wartość kliniczną, a badania nad medycyną chińską w połączeniu z rhIFN-α-2b w leczeniu infekcji HPV szyjki macicy lub zmian z nią związanych sugerują również potencjalne korzyści w zakresie eliminacji HPV i wskaźników związanych z odpornością18,19. Jednak eliminacja trwałych zakażeń HR-HPV nie zależy wyłącznie od miejscowej terapii przeciwwirusowej, lecz jest również wpływana przez stan odpornościowy gospodarza, miejscowy stan zapalny szyjki macicy i pochwy oraz stabilność mikroekologiczną20. Nawet przy standaryzowanym leczeniu interferonem może dojść do powolnej konwersji na wynik negatywny lub utrzymującej się pozytywności ze względu na upośledzenie barier miejscowych, przewlekły stan zapalny lub niewystarczającą odpowiedź odpornościową komórkowej21. Dodanie WDT może poprawić środowisko miejscowe, w którym działa interferon, poprzez korygowanie niedoboru śledziony z akumulacją wilgoci, redukcję nieprawidłowej białej wydzieli oraz zmniejszenie miejscowego podrażnienia zapalnego. Wcześniejsze badania wskazały, że medycyna chińska w połączeniu z interferonem może poprawić skuteczność kliniczną leczenia zakażeń HR-HPV oraz zredukować nieprawidłową wydzielinę z pochwy i związane z nią objawy22,23, co jest zgodne z niniejszymi wynikami. Odsetek konwersji specyficznej dla HPV16/18 był liczbowo wyższy w grupie obserwacyjnej niż w grupie kontrolnej, jednak różnica ta nie była istotna statystycznie. Większość pacjentek z wynikiem dodatnim dla HPV16/18 miała w punkcie wyjściowym infekcję wielotypową; w związku z tym całkowita konwersja HR-HPV w tej podgrupie zależała od eliminacji współistniejących genotypów, a nie tylko HPV16/18. W eksploracyjnej podgrupie z wynikiem negatywnym dla HPV16/18 całkowita konwersja HR-HPV występowała częściej w grupie obserwacyjnej; jednak badanie nie miało odpowiedniej mocy dla porównań z rozwarstwieniem według genotypu, nie określono wcześniej analizy interakcji, a poszczególne oznaczenia genotypów innych niż 16/18 były niedostępne w zanonimizowanym zbiorze danych analitycznych. Wyniki dotyczące tych podgrup należy zatem interpretować z ostrożnością i nie stanowią one dowodu na różnicowanie skuteczności w zależności od genotypu HPV.
Wyniki mikroekologiczne pochwy wykazały również większą poprawę po leczeniu w grupie obserwacyjnej. Lactobacillus pochwy jest kluczowym elementem homeostazy mikroekologicznej pochwy i przyczynia się do utrzymania kwaśnego środowiska poprzez produkcję kwasu mlekowego, nadtlenku wodoru oraz substancji przeciwbakteryjnych, ograniczając tym samym nadmierną proliferację patogenów oportunistycznych24. Gdy pH wzrasta, a liczba Lactobacillus spada lub tracą one swoją funkcję, bariera miejscowa słabnie, co zwiększa ryzyko wystąpienia flory związanej z bakteryjną vagozą (BV), infekcji grzybiczych oraz infekcji mieszanych; może to również stwarzać warunki do uporczywej infekcji HPV25. Związek między dominacją Lactobacillus a prawidłowym statusem nadtlenku wodoru był spójny w obu grupach leczonych, co potwierdza wewnętrzną relację między tymi rutynowymi wskaźnikami mikroekologicznymi. Jednakże badanie nie zidentyfikowało gatunków Lactobacillus ani specyficznej dla szczepów produkcji H₂O₂; w związku z tym wyniki te nie mogą wykazać przywrócenia konkretnej, ochronnej społeczności Lactobacillus. Badania nad interwencją WDT w przypadku zapalenia pochwy i miejscowych objawów pochwy wykazały poprawę objawów pochwowych oraz regulację środowiska miejscowego26, co jest zgodne z odzyskaniem dominacji Lactobacillus i poprawą mikroekologii zaobserwowaną w niniejszym badaniu. Niemniej jednak, mimo że wskaźnik dodatni sialidazy wykazywał tendencję spadkową, różnica ta nie osiągnęła istotności statystycznej. Może to być związane z ciężkością BV, punktami czasowymi pobierania próbek oraz czułością metody detekcji.
Zmiany w podzbiorach obwodowych limfocytów T należy interpretować jako zmiany w ogólnoustrojowym składzie układu odpornościowego, a nie jako bezpośredni dowód na wzmocnienie odporności przeciwko HPV. Chociaż w grupie obserwacyjnej odnotowano wyższy stosunek CD4+/CD8+ po leczeniu oraz większy spadek procentowego udziału obwodowych limfocytów T CD8+, cytotoksyczne limfocyty T CD8+ są istotne w odpowiedziach przeciwwirusowych, a niższy odsetek w krążeniu obwodowym nie jest z natury korzystny. Nie mierzono funkcji limfocytów T specyficznych dla HPV ani odporności śluzówkowej szyjki macicy i pochwy; w związku z tym związek między tymi zmianami obwodowymi a lokalnym usuwaniem wirusa pozostaje niepewny. Równoległe zmiany w wskaźnikach wirusologicznych i obwodowych parametrach immunologicznych należy zatem traktować jako generujące hipotezy, a nie jako dowód na przyczynowy mechanizm immunologiczny. Numerycznie niższy całkowity wskaźnik odnotowanych zdarzeń niepożądanych w grupie obserwacyjnej nie był istotny statystycznie i nie powinien być interpretowany jako efekt ochronny WDT. Niższa częstość występowania kilku miejscowych zdarzeń pochwowych była spójna kierunkowo z rutynowymi wynikami mikroekologicznymi, podczas gdy dyskomfort żołądkowo-jelitowy występuje numerycznie częściej w grupie obserwacyjnej. Jednakże ustalenie zdarzeń niepożądanych opierało się na retrospektywnej dokumentacji klinicznej; zatem nie można wykluczyć niedorejestrowania zdarzeń łagodnych lub przejściowych oraz różnic w dokumentowaniu. Do wyjaśnienia profilu bezpieczeństwa niezbędne są badania prospektywne z predefiniowanym nadzorem nad zdarzeniami niepożądanymi.
Chociaż zmierzone charakterystyki wyjściowe były porównywalne, a analiza wrażliwości uwzględniała zarejestrowane współzmienne wyjściowe, częstotliwość współżycia, metodę antykoncepcji, status HPV partnera, historię nawracającego zapalenia pochwy, palenie tytoniu, spożycie alkoholu oraz inne czynniki stylu życia nie były spójnie dostępne w dokumentacji retrospektywnej i nie mogły zostać uwzględnione w analizie. W związku z tym możliwe jest występowanie resztkowego zakłócenia, a zaobserwowane powiązania między grupami nie powinny być interpretowane jako przyczynowe efekty terapeutyczne. Ponadto w zanonimizowanym zbiorze danych analitycznych nie zachowano etykiet poszczególnych genotypów innych niż 16/18, co ograniczyło możliwość przeprowadzenia bardziej szczegółowych analiz eliminacji i persistencji dla konkretnych typów wirusa. Czas obserwacji był stosunkowo krótki i niewystarczający do oceny długoterminowej utrzymującej się negatywności na HPV, częstości nawrotów lub progresji zmian szyjki macicy. Do dalszej weryfikacji tych wyników niezbędne są prospektywne, wieloośrodkowe badania na dużych próbach z wydłużonym okresem obserwacji.
Wnioski:
U pacjentek z uporczywą infekcją HR-HPV i wzorcem niedoboru śledziony, zastosowanie WDT w połączeniu z rhIFN-α-2b wiązało się z korzystniejszymi efektami w zakresie HPV, mikroekologii pochwy, subpopulacji obwodowych limfocytów T oraz objawów klinicznych w porównaniu do monoterapii rhIFN-α-2b. Nie zaobserwowano istotnych różnic między grupami w ogólnym wskaźniku odnotowanych zdarzeń niepożądanych. Ze względu na nielosowy przydział do grup terapeutycznych oraz brak danych dotyczących kilku potencjalnych czynników zakłócających, wyniki te należy interpretować jako zależności wymagające potwierdzenia w badaniach prospektywnych.
Oświadczenia
Autor oświadcza, że nie ma żadnych konfliktów interesów.
Podziękowania
Niniejsze badanie było wspierane przez Huzhou Municipal Science and Technology Bureau (Grant nr 2023GY58).
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Zestaw diagnostyczny 21 HPV GenoArray | HybriBio Ltd., Chaozhou, Guangdong, China | HBGA-21PKG | Wiele partii klinicznych, możliwe do odtworzenia w dokumentacji laboratoryjnej |
| Odczynnik BD Multitest CD3 FITC/CD8 PE/CD45 PerCP/CD4 APC | BD Biosciences | Cat. No. 340499 | Wiele partii klinicznych, możliwe do odtworzenia w dokumentacji laboratoryjnej |
| Szybki analizator hybrydyzacji molekularnej kwasów nukleinowych | HybriBio Ltd., Chaozhou, Guangdong, China | HMM-2 | Model urządzenia |
| Zestaw do pobierania próbek od kobiet | HybriBio Ltd., Chaozhou, Guangdong, China | HBCK-F | Pobieranie złuszczonych komórek szyjki macicy |
| Cytometr przepływowy | Mindray, Shenzhen, China | BriCyte E6 | Model urządzenia |
| Analizator amplifikacji DNA HPV | Hangzhou Bioer Technology Co., Ltd., Hangzhou, China | TC-96/G/H6 | Model urządzenia |
| Rekombinowany ludzki interferon α-2b w czopkach dopochwowych | Changchun Institute of Biological Products Co., Ltd. | 500,000 IU/piece | Krajowy numer zatwierdzenia leku S19991019; wiele partii klinicznych, możliwe do odtworzenia w dokumentacji aptecznej |
Bibliografia
- Hewavisenti RV, Arena J, Ahlenstiel CL, Sasson SC. Human papillomavirus in the setting of immunodeficiency: Pathogenesis and the emergence of next-generation therapies to reduce the high associated cancer risk. Front Immunol. 2023;14:1112513. doi: 10.3389/fimmu.2023.1112513
- Singh D, et al. Global estimates of incidence and mortality of cervical cancer in 2020: a baseline analysis of the WHO Global Cervical Cancer Elimination Initiative. Lancet Glob Health. 2023;11(2):e197-e206.
- Basukala O, Banks L. The Not-So-Good, the Bad and the Ugly: HPV E5, E6 and E7 Oncoproteins in the Orchestration of Carcinogenesis. Viruses. 2021;13(10):1511. doi: 10.3390/v13101511
- Dalskov L, Gad HH, Hartmann R. Viral recognition and the antiviral interferon response. EMBO J. 2023;42(14):e112907. doi: 10.15252/embj.2022112907
- Tang Y, Tong Q, Dai N, Xu C. Evaluation of the clinical efficacy of vaginal treatment options for persistent high-risk human papillomavirus infection after excisional treatment of cervical high-grade squamous intraepithelial lesions: a systematic review and Bayesian network meta-analysis. Virol J. 2023;20(1):47. doi: 10.1186/s12985-023-01997-3
- Sharifian K, Shoja Z, Jalilvand S. The interplay between human papillomavirus and vaginal microbiota in cervical cancer development. Virol J. 2023;20(1):73. doi: 10.1186/s12985-023-02035-2
- Zeng M, et al. Roles of vaginal flora in human papillomavirus infection, virus persistence and clearance. Front Cell Infect Microbiol. 2022;12:1036869. doi: 10.3389/fcimb.2022.1036869
- Bautista J, Altamirano-Colina A, López-Cortés A. The vaginal microbiome in HPV persistence and cervical cancer progression. Front Cell Infect Microbiol. 2025;15:1634251. doi: 10.3389/fcimb.2025.1634251
- Ding W, Li X, Ji B, Wang Z. Functions of Traditional Chinese Medicine Combined with Recombinant Human Interferon α2b in Cervical Intraepithelial Neoplasias Patients. Evid Based Complement Alternat Med. 2021;2021:6881720. doi: 10.1155/2021/6881720
- Han Y, Shen S, Fu J, Ren Q. Mechanisms of Wandai Decoction in Improving Vaginal Flora of Vulvovaginal Candidiasis of the Spleen Deficiency and Excessive Dampness Type: A Study Based on Metagenomics and Metabolomics. Sichuan Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban. 2025;56(1):68-73.
- You H, et al. Modulation of metabolic pathways and EndMT inhibition by a traditional Chinese herbal formula in the treatment of high-risk infections. Front Cell Infect Microbiol. 2024;14:1497965. doi: 10.3389/fcimb.2024.1497965
- He C, et al. Meta-analysis of the effect and safety of recombinant human interferon α-2b combined with Baofukang suppository in the treatment of HPV infection. Am J Transl Res. 2022;14(11):7632-7642.
- Wang ZZ, et al. Traditional Chinese Medicine Erhuang Suppository for Treatment of Persistent High-risk Human Papillomavirus Infection and Its Impact on Transcriptome of Uterine Cervix. Curr Med Sci. 2024;44(4):841-853.
- Perkins RB, et al. 2019 ASCCP Risk-Based Management Consensus Guidelines: Updates Through 2023. J Low Genit Tract Dis. 2024;28(1):3-6.
- Xiaoyu Z. Guiding principles for clinical research of new Chinese medicine. China Medical Science and Technology Press; 2002.
- Theiler T, et al. Bacterial vaginosis in pregnant women: A comparison of the Nugent Score with a multiplex PCR. Diagn Microbiol Infect Dis. 2024;110(1):116403. doi: 10.1016/j.diagmicrobio.2024.116403
- Zeng Z, et al. Characteristics and potential diagnostic ability of vaginal microflora in patients with aerobic vaginitis using 16S Ribosomal RNA sequencing. Diagn Microbiol Infect Dis. 2023;105(1):115806. doi: 10.1016/j.diagmicrobio.2022.115806
- Zhang S, Huang X, Liu X. Clinical efficacy of recombinant human interferon α-2b gel combined with LEEP conization in treating cervical intraepithelial neoplasia with comorbid high-risk HPV infection. Am J Transl Res. 2024;16(10):5649-5658.
- Ma K, et al. Network Meta-analysis of Chinese patent medicines combined with recombinant human interferon α-2b in treatment of cervical human papillomavirus infections. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. 2024;49(24):6784-6802.
- Schellekens HCJ, et al. Vaginal Microbiota and Local Immunity in HPV-Induced High-Grade Cervical Dysplasia: A Narrative Review. Int J Mol Sci. 2025;26(9):4321. doi: 10.3390/ijms26094321
- Lv Z, et al. Outcomes and associated factors of cervical human papillomavirus infection among 608 women in Shenzhen, China, 2018-2023. Front Public Health. 2024;12:1523839. doi: 10.3389/fpubh.2024.1523839
- Li X, et al. Jiawei Ermiao Granules (JWEMGs) clear persistent HR-HPV infection though improving vaginal microecology. J Ethnopharmacol. 2025;341:119342. doi: 10.1016/j.jep.2024.119342
- He N, et al. Clinical efficacy analysis of the Chinese medicine Paiteling applied to human papillomavirus infection: A retrospective study. PLoS One. 2024;19(12):e0315376. doi: 10.1371/journal.pone.0315376
- France M, et al. Towards a deeper understanding of the vaginal microbiota. Nat Microbiol. 2022;7(3):367-378.
- Frąszczak K, Barczyński B, Kondracka A. Does Lactobacillus Exert a Protective Effect on the Development of Cervical and Endometrial Cancer in Women? Cancers (Basel). 2022;14(19):4723. doi: 10.3390/cancers14194723
- Wu Y, Tang L. Efficacy Analysis of Wandai Decoction Combined with Traditional Chinese Medicine Fumigation and Washing in Patients with Chronic Vaginitis After Sintilimab Treatment for Small Cell Lung Cancer. Altern Ther Health Med. 2023;29(6):268-273.