Strategie patogenności prątków są wciąż słabo poznane. Powolny tempo wzrostu większości gatunków, nieprzenikniona natura ściany komórkowej oraz zagrożenia związane z pracą z patogenami sprawiają, że prątki są trudne do badania, co w dużej mierze odpowiada za naszą ograniczoną wiedzę na temat tych organizmów. W tym filmie zaprezentujemy technikę elektroporacji, która polega na poddaniu komórek krótkiemu impulsowi o wysokim napięciu elektrycznym w celu umożliwienia wniknięcia DNA. Jest to najszerzej stosowana metoda wprowadzania DNA do komórek prątków.
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Wysoka wydajność transformacji stanowi istotne ograniczenie w badaniach nad prątkami. Rodzaj Mycobacterium może być trudny do transformacji; wynika to głównie z obecności grubiej i woskowej ścian komórkowej, jednak sytuację pogarsza fakt, że większość technik molekularnych została opracowana dla gatunków dalekich krewniaczo, takich jak Escherichia coli i Bacillus subtilis. Pomimo tych przeszkód zidentyfikowano plazmidy prątkowe, a transformację DNA wielu gatunków Mycobacterium opisano już w literaturze. Najskuteczniejszą metodą wprowadzania DNA do prątków jest elektroporacja. Na sukces transformacji wpływa wiele parametrów, w tym gatunek/szczep, charakter transformowanego DNA, zastosowany marker selekcyjny, pożywka hodowlana oraz warunki impulsu elektroporacyjnego. W niniejszym opracowaniu szczegółowo opisano zoptymalizowane metody transformacji zarówno dla prątków wolno- i szybko rosnących. Przedstawiono wydajność transformacji dla różnych gatunków Mycobacterium oraz przy użyciu różnych markerów selekcyjnych.
Oświadczenia
Autorzy nie zgłaszają żadnych konfliktów interesów.
Przedruki i uprawnienia
