Artykuł metodologiczny

Metoda MODS w diagnostyce gruźlicy i gruźlicy wielolekoopornej

DOI:

10.3791/845

⸱

11 sierpnia 2008

 ,  ,  , 
1The Warren Alpert Medical School of Brown University, 2Laboratorio de Investigacion de Enfermedades Infecciosas, Universidad Peruana Cayetano Heredia, 3Department of International Health, Johns Hopkins Bloomberg School of Public Health, 4Wellcome Trust Centre for Clinical Tropical Medicine, Imperial College London

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Test wrażliwości na leki (MODS) z obserwacją mikroskopową jest tanim, niezaawansowanym technologicznie narzędziem do skutecznego wykrywania gruźlicy (TB) i gruźlicy wielolekoopornej (MDRTB). Ten film opisuje metodę hodowli płynnych pożywek MODS.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Pacjenci z czynną gruźlicą płuc (TB) zarażają 10-15 innych osób rocznie, co sprawia, że rozpoznanie aktywnej gruźlicy jest niezbędne zarówno do wyleczenia pacjenta, jak i zapobiegania nowym zakażeniom. Ponadto pojawienie się gruźlicy wielolekoopornej (MDRTB) oznacza, że wykrycie lekooporności jest niezbędne do powstrzymania rozprzestrzeniania się szczepów lekoopornych. Test wrażliwości na leki z obserwacją mikroskopową (MODS) jest tanim, niezaawansowanym technologicznie narzędziem do skutecznego wykrywania gruźlicy i MDRTB. Test MODS opiera się na trzech zasadach: 1) prątki gruźlicy (MTB) rosną szybciej w pożywkach płynnych niż na podłożach stałych 2) mikroskopijny wzrost MTB można wykryć wcześniej w pożywkach płynnych niż w oczekiwaniu na makroskopowe pojawienie się kolonii na pożywkach stałych, a wzrost ten jest charakterystyczny dla MTB, co pozwala na odróżnienie go od nietypowych prątków lub zanieczyszczenia grzybiczego lub bakteryjnego 3) leki izoniazyd i ryfampicyna mogą być włączone do MODS test umożliwiający jednoczesne bezpośrednie wykrycie MDRTB, eliminując potrzebę wykonywania pośredniego testu wrażliwości na leki przez subkulturę. Konkurencyjna obecnie diagnostyka jest utrudniona ze względu na niską czułość w przypadku rozmazu plwociny, długie opóźnienia do diagnozy za pomocą posiewu pożywek stałych, zbyt wysokie koszty przy użyciu istniejących metod hodowli płynnych pożywek oraz konieczność wykonania subkultury do pośrednich testów wrażliwości na leki w celu wykrycia MDRTB. W przeciwieństwie do tego, niezastrzeżona metoda MODS ma wysoką czułość dla gruźlicy i MDRTB, jest stosunkowo szybką metodą hodowli, zapewnia jednoczesne testowanie wrażliwości na leki w kierunku MDRTB i jest dostępna dla ustawień o ograniczonych zasobach za nieco poniżej 3 USD za testy na gruźlicę i MDRTB.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Przygotuj roztwory
      podstawowe
    1. Bufor
        fosforanowy
      1. Zmieszać 950 ml roztworu dwuzasadowego sodu (9,47 g dwuzasadowego fosforanu sodu rozpuszczonego w 1000 ml wody destylowanej) z 950 ml jednozasadowego roztworu fosforanu potasu (9,07 g jednozasadowego fosforanu potasu rozpuszczonego w 1000 ml wody destylowanej) i wymieszać; zachować 50 ml każdego roztworu, aby w razie potrzeby dostosować pH
      2. Dostosuj pH do 6,8 ± 0,2: dodaj dwuzasadowy roztwór fosforanu sodu, aby podnieść pH; dodaj jednozasadowy roztwór fosforanu potasu, aby obniżyć pH
      3. Autoklaw w temperaturze 121-124°C przez 15 minut w celu sterylizacji
      4. Umieścić 100 μl podwielokrotności buforu fosforanowego na pożywce agarowej na pożywce na szalce Petriego i inkubować w temperaturze 37 °C przez 48 godzin w celu potwierdzenia sterylności
      5. Przechowywać w lodówce w temperaturze 2-8°C przez okres do jednego miesiąca

        Uwaga: Każda próbka plwociny wymaga 10 ml roztworu buforu fosforanowego
    2. Zapas
        do dekontaminacji
      1. Połączyć równe objętości roztworu wodorotlenku sodu (8,0 g wodorotlenku sodu rozpuszczonego w 200 ml sterylnej wody destylowanej) i roztworu cytrynianu sodu (5,8 g cytrynianu sodu destylowanego w 200 ml sterylnej wody destylowanej)
      2. Mieszać i sterylizować w autoklawie w temperaturze 121-124°C przez 15 minut
      3. Przechowywać w lodówce w temperaturze 2-8°C przez okres do jednego miesiąca

        Uwaga: Każda próbka plwociny wymaga 2 ml bulionu do odkażania
    3. Zapas
        pożywek hodowlanych
      1. Do 900 ml sterylnej wody destylowanej dodać 3,1 ml glicerolu i 1,25 g kazytonu oraz 5,9 g pożywki 7H9 w proszku; mieszać ciągle mieszając aż do całkowitego rozpuszczenia
      2. Autoklaw w temperaturze 121-124°C przez 15 minut
      3. Schłodzić i podzielić sterylne podłoże na 4,5 ml podwielokrotności w sterylnych szklanych probówkach 16 x 100 mm do przygotowania próbki i 10,8 ml podwielokrotności do przygotowania roztworów antybiotyków i kontroli wewnętrznej
      4. Inkubować w temperaturze 37°C przez 48 godzin w celu sprawdzenia sterylności (braku zmętnienia)
      5. Przechowywać w temperaturze 2-8°C ze szczelnie zamkniętą nakrętką przez okres do jednego miesiąca

        Uwaga: Każda próbka plwociny wymaga jednej probówki zawierającej 4,5 ml 7H9 medium
    4. Roztwory
        podstawowe antybiotyków
      1. A. Zapas izoniazydu (8 mg/ml)
        1. Całkowicie rozpuścić 20 mg izoniazydu w 2,5 ml sterylnej wody destylowanej
        2. Filtr z filtrem strzykawkowym 0,2 μm do wodnego rozpuszczalnika
        3. Przechowywać w 20 μl porcji w sterylnych mikroprobówkach wirówkowych w temperaturze -20°C do 6 miesięcy

          Uwaga: Każda przechowywana porcja 20 μl wystarcza na maksymalnie 100 próbek (w tym odpady)
      2. B. Zapas ryfampicyny (8 mg/ml)
      1. Całkowicie rozpuść 20 mg ryfampicyny w 1,25 ml DMSO
      2. Dodaj 1,25 ml sterylnej wody destylowanej i wymieszaj
      3. Filtr z filtrem strzykawkowym 0,2 μm do rozpuszczalnika organicznego
      4. Przechowywać w 20 μl porcji w sterylnych probówkach do mikrowirówek w temperaturze -20°C przez okres do 6 miesięcy

        Uwaga: Każda przechowywana porcja o pojemności 20 μl wystarcza na maksymalnie 100 próbek (w tym odpady)
  2. Przygotuj działające rozwiązania
    1. Roztwór
        roboczy do dekontaminacji
      1. Rozpuść 0,1 g kryształów NALC w każdych 20 ml wymaganego roztworu do odkażania

        Uwaga: Każda próbka wymaga 2 ml roztworu do odkażania

        Uwaga: Wyrzuć wszelkie roztwory do odkażania NaOH-NALC, które pozostają niewykorzystane po 24 godzinach, ponieważ NALC z czasem traci swoją aktywność mukolityczną
    2. Roztwór
        roboczy do pożywek hodowlanych
      1. wyruszyć:
        1. 1 probówka z podłożem 7H9 na każdą próbkę plwociny, która ma być poddana obróbce, plus 1 dodatkowa probówka na każdą płytkę (dla kolumny kontroli ujemnej)
        2. 2 probówki z pożywką 7H9 do kontroli dodatnich (3 w przypadku stosowania szczepów jednoopornych)
        3. 1-2 probówki z 10,8 ml 7H9 do przygotowania roztworu antybiotyku
      2. Dodać 0,5 ml OADC do 4,5 ml 7H9 w każdej probówce z próbką
      3. Dodaj 1,2 ml OADC do probówek z 10,8 ml 7H9
      4. Odłożyć na bok 2 probówki z 5 ml 7H9-OADC do kontroli pozytywnej i probówkę (probówki) z 12 ml 7H9-OADC do użycia do przygotowania roztworu antybiotyku (nie wymagają one PANTA)
      5. Rozpuść PANTA i dodaj 0,1 ml do każdej probówki z próbką oraz do probówek kontroli ujemnej (7H9-OADC-PANTA: całkowita objętość = 5,1 ml)
        / >Uwaga: Kompletna pożywka z PANTA (7H9-OADC-PANTA) jest używana do próbek plwociny i kontroli ujemnych; użyj 7H9-OADC bez PANTA do kontroli pozytywnych i do przygotowania roztworu antybiotyku
    3. Roztwory
        robocze z antybiotykami
      1. 1. Zobacz Rysunek 1, aby zapoznać się z krokami przygotowania roztworu roboczego antybiotyku na nieużywanej płytce 24-dołkowej

        Uwaga: Aby uzyskać dokładne wyniki wrażliwości, końcowe stężenia antybiotyku są krytyczne. Poniższa procedura jest odpowiednia dla laboratoriów wyposażonych w mikropipety. Jeśli mikropipety nie są dostępne, strzykawki tuberkulinowe mogą być używane z inną serią rozcieńczeń opisanych w Podręczniku użytkownika Dodatek 3 pod adresem modsperu.org

        Uwaga: Nie zamrażaj ponownie ani nie używaj ponownie roztworów roboczych lub podstawowych antybiotyków, ponieważ może to spowodować utratę aktywności leku. Wyrzucić wszystkie niewykorzystane roztwory antybiotyków pod koniec dnia przetwarzania Rysunek 1. Przygotowanie roztworów roboczych antybiotyków (z Podręcznika użytkownika pod adresem modsperu.org )
  3. Przygotowanie
      próbki plwociny i płytki
    1. odkażanie
      1. Umieścić 2 ml próbki plwociny w probówce wirówkowej o pojemności 15 ml (jeśli mniej, uzupełnić do 2 ml buforem fosforanowym; jeśli więcej, użyj tylko 2 ml)
      2. Dodaj 2 ml roztworu NaOH-NALC
      3. Szczelnie zamknij probówkę i wiruj przez 20 sekund; odwróć probówkę, aby upewnić się, że roztwór NaOH-NALC styka się z całą wewnętrzną powierzchnią probówki i pokrywki
      4. Odstawić na co najmniej 15 minut – może przedłużyć o kilka minut, jeśli próbka jest szczególnie lepka. Aby uniknąć nadmiernego traktowania, nie powinien przekraczać 20 minut
      5. Napełnij probówkę do 14 ml buforem fosforanowym (pH 6,8), aby zneutralizować zasady i zakończyć proces odkażania, a następnie dobrze wymieszaj, odwracając probówkę 4 razy
      6. Wirować przy 3000 g przez 15 minut (patrz Dodatek 2 w Podręczniku użytkownika pod modsperu.org w celu uzyskania równania obrotów na minutę niezbędnych do osiągnięcia 3000 g)
      7. Ostrożnie wylać supernatant do pojemnika na odpady płynne z 10% podchlorynem sodu lub innym odpowiednim środkiem dezynfekującym i zachować osad
    2. Przygotowanie zawiesiny próbki końcowej i kopii zapasowej
      1. Używając 7H9-OADC-PANTA (z probówki zawierającej 5,1 ml), ponownie zawiesić osad próbki o łącznej objętości 2 ml w probówce wirówkowej za pomocą pipety Pasteura; dobrze wymieszać
      2. Usunąć 1 ml zawiesiny próbki i przechowywać w probówce mikrowirówkowej w temperaturze 2-8°C jako kopię zapasową
      3. Dodać drugi 1 ml zawiesiny próbki do probówki z pozostałą ilością 7H9-OADC-PANTA; dobrze wymieszać. Jest to końcowa próbka roztworu gotowa do powlekania
    3. Umieszczanie zawiesin próbek w płytce
        24-dołkowej
      1. Umieścić 900 μl zawiesiny próbki końcowej w każdym z 4 dołków kolumny na płytce 24-dołkowej
      2. Powtarzać z dodatkowymi próbkami, aż wszystkie kolumny płytki, z wyjątkiem kolumny 3, zostaną wypełnione (lub do momentu, gdy wszystkie próbki zostaną pokryte powłoką)
      3. Umieść 900 μl pożywki 7H9-OADC bez próbki w 4 dołkach kolumny 3 każdej płytki z próbką (ujemne kontrole wewnętrzne)
    4. Dodawanie antybiotyków do próbek
      1. Za pomocą pipety wielokanałowej ostrożnie napełnij 4 końcówki 100 μl ze studzienek roztworami roboczymi 7H9-OADC i antybiotyku (kolumna 2 na płytce do rozcieńczania antybiotyków - patrz rysunek 1)
      2. Dodaj 100 μl podwielokrotności do studzienek kolumny 1 z roztworami próbek 900 μl bez dotykania płytki lub próbki
      3. Powtarzać tę czynność do momentu, gdy wszystkie kolumny otrzymają dodatkowe 100 μl pożywki (studzienki wolne od leków) lub roztworów antybiotyków (w tym kolumna kontroli ujemnej 3)
      4. Zamknij płytkę pokrywką i umieść ją w zamykanej torbie polietylenowej (Ziplock) i zamknij (torba nie jest ponownie otwierana od tego momentu)
      5. Inkubować w temperaturze 37°C (wzbogacanie w CO2 nie jest konieczne)
  4.  Kontrola
      jakości
    1. Na każdej płycie przeprowadzane są kontrole negatywne.  Obecność jakiegokolwiek narośla w którymkolwiek z dołków w kolumnie kontroli ujemnej wskazuje na zanieczyszczenie krzyżowe, dlatego cała płytka musi zostać wyrzucona, a próbki ponownie platerowane.
    2. Pozytywne kontrole są przeprowadzane na osobnej tabliczce na koniec dnia.  Jeden w pełni wrażliwy na lek szczep jest uruchamiany w kolumnie, a szczep odporny na INH i RIF jest uruchamiany w innej kolumnie.  Jeśli istnieje obawa co do uruchomienia szczepu MDR, zarówno szczep monooporny INH, jak i szczep monooporny RIF mogą być uruchamiane w miejsce szczepów podatnych i MDR.  Wszystkie kontrole pozytywne powinny wykazywać wzrost w studzienkach wolnych od leków, aby wykazać, że pożywki wspierają wzrost.  Aby wykazać, że stężenia leku są prawidłowe, podatny szczep nie powinien rosnąć w studniach INH lub RIF, ale szczep MDR powinien rosnąć również w studniach INH i RIF.
  5. Odczyt
      płyty
    1. Z dniem posiewu jako "dniem 0", odczyt płytki rozpoczyna się w dniu 5, a jeśli jest ujemny w dniu 5, odczyt jest wykonywany codziennie (lub co drugi dzień w zależności od obciążenia pracą) do dnia 14, a następnie co 2-3 dni od dnia 15-21.  Płytki są badane pod mikroskopem światła odwróconego z obiektywem 10x
    2. A pozytywna kultura to taka, w której istnieją dwie lub więcej jednostek tworzących kolonie (>2 CFU) w OBU studniach wolnych od leków.  Wczesny wzrost prątków wygląda jak małe zakrzywione przecinki lub spirale (dni 5-9).  Tworzenie kolonii zwykle postępuje do "sznurów" lub "splątań"  (zobacz bibliotekę obrazów na modsperu.org )
    3. W dniu, w którym posiew jest dodatni w 2 dołkach wolnych od leków, należy odczytać studzienki zawierające lek.  Każdy wzrost w obecności leku wskazuje na oporność na ten lek.

      >Uwaga: Jeśli odczyt studni zawierających lek zostanie wykonany >1 tydzień po odnotowaniu dodatniej hodowli w studniach wolnych od leków, może to nie oznaczać oporności, ponieważ czasami obserwuje się przełomowy wzrost
    4. Próbki, które nie są dodatnie do 21 dnia, są uważane za kultury ujemne
    5. Zmętnienie studni jest wynikiem przerostu zanieczyszczeń, podczas gdy rozwój prątków nie powoduje zmętnienia
    6. Po upływie 21 dni kultury mogą zostać odrzucone.  Kultury pozostają w szczelnie zamkniętych workach i są umieszczane w workach autoklawowych i sterylizowane w autoklawie w temperaturze 121-124°C przez 45-60 minut

 

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Test MODS jest ukierunkowany na ustawienia o ograniczonych zasobach.  Po raz pierwszy MODS zapewnia możliwość szybkiego wykrywania gruźlicy i gruźlicy wielolekoopornej w płynnych kulturach w warunkach o ograniczonych zasobach za nieco poniżej 3 USD za test.  MODS jest niezastrzeżoną, iteracyjną metodologią, a społeczność MODS jest zawsze zainteresowana ulepszeniami, które udało się wprowadzić innym laboratoriom.

Powtarzającym się problemem jest bezpieczeństwo biologiczne hodowli płynnych poży...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Chcielibyśmy podziękować Seanowi Fitzwaterowi i Carmen Gianninie Lunie Colombo za segment filmów poklatkowych o wzroście gruźlicy.  Dziękujemy Marty Roper za jej dokładne i doskonałe opinie podczas edycji i współtworzenia Podręcznika użytkownika, z którego obecny protokół został w większości dosłownie zaczerpnięty.  Produkcja tego filmu została sfinansowana przez NIH/ Fogarty International Center http://www.fic.nih.gov/ David A.J. Moore był stypendystą Wellcome Trust Clinical Research Fellow w dziedzinie medycyny tropikalnej oraz wykładowcą chorób zakaźnych w Imperial College London (stypendium numer 078067/Z/05).  Mark F. Brady wniósł swój wkład jako pracownik naukowy NIH/Fogarty International Center.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Lodówka/zamrażarkaSprzętdo przechowywania wstępnie przygotowanego bulionu i zapasów antybiotyków
Sprzętwirowywspomagający odkażanie plwociny
WirówkaSprzętdo zagęszczania plwociny; może osiągnąć 3000 g; D– s nie muszą być przechowywane w lodówce, ale MUSZĄ być bezpieczne biologicznie (wiadra mogą być szczelnie zamknięte)
Inkubator (37 stopni C)Sprzętdo hodowli; nie musi być wzbogacony w CO2
Mikroskop ze światłem odwróconymMikroskopdo odczytu płytek MODS
AutoklawSprzętdo sterylizacji pożywki, PBS i zużytych płytek
Sprzętdo równowagido ważenia izoniazydu, ryfampicyny i NALC
Middlebrook 7H9 bulion (Difco)OdczynnikFisher ScientificDF0713-17-9500gr/butelkę; baza pożywki hodowlanej
Casitone (kazeina trawienna trzustki)OdczynnikFisher ScientificDF0259‐ 17‐ 9500gr / butelkę; baza pożywki hodowlanej:
glicerol (gliceryna) liofilizowanyodczynnikSigma-AldrichG‐ 33‐ 500500 ml / butelkę; baza pożywki
hodowlanej PANTA (Mieszanina antybiotyków liofilizowana BD) Odczynnik Fisher Scientific B43451146 butelek / opakowanie; suplement pożywki
antybiotykowej OADC (Middlebrook OADC enrichment BD)OdczynnikFisher ScientificB1188610 x 20 ml / opakowanie; suplement diety
Dimethyl sulphoxide (Hibri-Max)OdczynnikSigma-AldrichD-2650100 ml / butelkę; do przygotowania wywaru ryfampicyny
Zapasy antybiotyków: odczynnik izoniazyduSigma-AldrichI-337750gr / butelkę; bezpośrednie badanie wrażliwości
Zapasy antybiotyków: ryfampicynaOdczynnikSigma-AldrichR-35011gr / butelkę; bezpośrednie badanie wrażliwości
Wodorotlenek sodu (granulki)OdczynnikSigma-Aldrich221465500gr / butelkę; odkażanie plwociny
Cytrynian sodu (sól trisodowa dwuwodna)OdczynnikSigma-AldrichS-4641500gr / butelkę; odkażanie plwociny
OdczynnikN-acetylo-L-cysteinaSigma-AldrichA-725050gr / butelka; odkażanie plwociny
Fosforan potasu Monobasic crystal. KH2PO4OdczynnikSigma-AldrichP0662500gr / butelkę; odkażanie plwociny
Fosforan sodu dwuzasadowy, bezwodny. Odczynnik Na2HPO4Sigma-AldrichS0876500gr / butelkę; odkażanie plwociny
Podchloryn soduOdczynnikwybielaczdo wyrzucania zanieczyszczonych odpadów
15ml probówki wirówkowe (polipropylen 15ml Falcon 35‐ 2096)Materiały eksploatacyjneFisher Scientific14‐ 959‐ 49B500ea/skrzynka; do odkażania i zagęszczania plwociny
płytki 24-dołkowe (Plates Tissue 24 dołki BD Falcon 35‐ 3047)Materiały eksploatacyjneFisher Scientific08-772-150 talerzy/skrzynka; do kultury i czytania
Zamykane torby polietylenowe 6 X 6 “ (zamek błyskawiczny)Materiałdo bioasekuracji zawierający 24-dołkową płytkę
Szklane probówki z pokrywką (16 x 100 mm i 18 x 145 mm)Materiały eksploatacyjneVWR international47729-583500 probówek/skrzynka; do przechowywania porcji przygotowanego bulionu
Probówki do mikrowirówek z nakrętką (1,5 ml)Materiały eksploatacyjneFisher Scientific05‐ 669‐ 221000 szt./szt.; do przechowywania podwielokrotności zapasów antybiotyków
0,22μ m filtry (rozpuszczalniki wodne) Filtr strzykawkowy Millex niebieskiMateriał eksploatacyjnyFisher ScientificSLGL 025 OS50 szt./skrzynkę; do filtrowania zapasów antybiotyków
0,22μ m filtry (rozpuszczalniki organiczne) Filtr strzykawkowy Millex żółtyMateriał eksploatacyjnyFisher ScientificSLGV 033 RS50 jednostek/skrzynka; do filtrowania zapasów antybiotyków
Jednorazowe pipety Pasteura szkło borokrzemianowe 9″Materiały eksploatacyjneFisher Scientific13‐ 678‐ 20C720ea/opakowanie; do mieszania PANTA z mediami
mix Końcówki barierowe aerozolowe 1000‐ 1300μ lMateriały eksploatacyjneFisher Scientific02‐ 707‐ 511000ea/pk; do dozowania pożywki na płytkę
USA Scientific Tips One 1‐ 200μ l żółte końcówkiMateriał eksploatacyjnyFisher Scientific1111‐ 00061000 końcówek/worek; do rozcieńczania zapasów antybiotyków
domowy eksploatacyjny

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Arias, M. Clinical evaluation of the microscopic-observation drug-susceptibility assay for detection of tuberculosis. Clin Infect Dis. 44, 674-674 (2007).
  2. Caviedes, L. Rapid, efficient detection and drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis in sputum by microscopic observation of broth cultures. The Tuberculosis Working Group in Peru. J Clin Microbiol. 38, 1203-1203 (2000).
  3. Caviedes, L., Moore, D. A. Introducing MODS: a low-cost, low-tech tool for high-performance detection of tuberculosis and multidrug resistant tuberculosis. Indian J Med Microbiol. 25, 87-87 (2007).
  4. Caws, M. Evaluation of the MODS culture technique for the diagnosis of tuberculous meningitis. PLoS ONE. 2, e1173-e1173 (2007).
  5. Ejigu, G. S. Microscopic-observation drug susceptibility assay provides rapid and reliable identification of MDR-TB. Int J Tuberc Lung Dis. 12, 332-332 (2008).
  6. Kim, S. J. Risk of occupational tuberculosis in National Tuberculosis Programme laboratories in Korea. Int J Tuberc Lung Dis. 11, 138-138 (2007).
  7. Mello, F. C. Clinical evaluation of the microscopic observation drug susceptibility assay for detection of Mycobacterium tuberculosis resistance to isoniazid or rifampin. J Clin Microbiol. 45, 3387-3387 (2007).
  8. Moore, D. A. Future prospects for the MODS assay in multidrug-resistant tuberculosis diagnosis. Future Microbiol. 2, 97-97 (2007).
  9. Moore, D. A. Infrequent MODS TB culture cross-contamination in a high-burden resource-poor setting. Diagn Microbiol Infect Dis. 56, 35-35 (2006).
  10. Moore, D. A. Microscopic-observation drug-susceptibility assay for the diagnosis of TB. N Engl J Med. 355, 1539-1539 (2006).
  11. Moore, D. A. Microscopic observation drug susceptibility assay, a rapid, reliable diagnostic test for multidrug-resistant tuberculosis suitable for use in resource-poor settings. J Clin Microbiol. 42, 4432-4432 (2004).
  12. Moore, D. A., Roper, M. H. Diagnosis of smear-negative tuberculosis in people with HIV/AIDS. Lancet. 370, 1033-1033 (2007).
  13. Oberhelman, R. A. Improved recovery of Mycobacterium tuberculosis from children using the microscopic observation drug susceptibility method. Pediatrics. 118, e100-e100 (2006).
  14. Palomino, J. C., Martin, A., Portaels, F. MODS assay for the diagnosis of TB. N Engl J Med. 356, 188-189 (2007).
  15. Park, W. G., Bishai, W. R., Chaisson, R. E., Dorman, S. E. Performance of the microscopic observation drug susceptibility assay in drug susceptibility testing for Mycobacterium tuberculosis. J Clin Microbiol. 40, 4750-4750 (2002).
  16. Shiferaw, G. Evaluation of microscopic observation drug susceptibility assay for detection of multidrug-resistant Mycobacterium tuberculosis. J Clin Microbiol. 45, 1093-1093 (2007).
  17. Tovar, M. Improved diagnosis of pleural tuberculosis using the microscopic- observation drug-susceptibility technique. Clin Infect Dis. 46, 909-909 (2008).
  18. Vargas, D. Diagnosis of sputum-scarce HIV-associated pulmonary tuberculosis in Lima, Peru. Lancet. 365, 150-150 (2005).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

test MODSdiagnostyka gru licygru lica wielolekoopornahodowla w pod o u p ynnymobserwacja mikroskopowabadanie wra liwo ci na lekidekontaminacja plwocinymikroskopia odwr conakomora z laminarnym przep ywem powietrzabufor fosforanowy

Powiązane artykuły