Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Metoda MODS w diagnostyce gruźlicy oraz gruźlicy wielolekoopornej

18.7K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/845

⸱

11 sierpnia 2008

 ,  ,  , 
1The Warren Alpert Medical School of Brown University, 2Laboratorio de Investigacion de Enfermedades Infecciosas, Universidad Peruana Cayetano Heredia, 3Department of International Health, Johns Hopkins Bloomberg School of Public Health, 4Wellcome Trust Centre for Clinical Tropical Medicine, Imperial College London

W tym artykule

Podsumowanie

Test wrażliwości na leki metodą obserwacji mikroskopowej (MODS) jest tanim i niedostępnym technologicznie narzędziem do wysokowydajnego wykrywania gruźlicy (TB) oraz gruźlicy wielkoopornej (MDRTB). Niniejszy film opisuje metodę hodowli MODS w pożywkach płynnych.

Streszczenie

Pacjenci z aktywną gruźlicą płuc (TB) zarażają od 10 do 15 innych osób rocznie, co sprawia, że diagnozowanie aktywnej gruźlicy jest niezbędne zarówno dla wyleczenia pacjenta, jak i zapobiegania nowym zakażeniom. Ponadto pojawienie się gruźlicy wielolekoopornej (MDRTB) oznacza, że wykrywanie oporności na leki jest konieczne w celu powstrzymania rozprzestrzeniania się szczepów lekoopornych. Test MODS (microscopic-observation drug-susceptibility) to niskokosztowe, niewymagające zaawansowanych technologii narzędzie do wysokowydajnego wykrywania TB i MDRTB. Test MODS opiera się na trzech zasadach: 1) Mycobacterium tuberculosis (MTB) rośnie szybciej w pożywkach płynnych niż na pożywkach stałych, 2) wzrost MTB obserwowany mikroskopowo można wykryć w pożywkach płynnych wcześniej niż przy oczekiwaniu na makroskopowe pojawienie się kolonii na pożywkach stałych, a sam wzrost jest charakterystyczny dla MTB, co pozwala odróżnić go od nietypowych prątków oraz zanieczyszczeń grzybiczych lub bakteryjnych, 3) leki takie jak izoniazyd i ryfampicyna mogą zostać włączone do testu MODS, co umożliwia jednoczesne bezpośrednie wykrywanie MDRTB, eliminując konieczność pasażowania w celu wykonania pośredniego testu wrażliwości na leki. Konkurencyjne metody diagnostyczne są utrudnione przez niską czułość badania plwociny w rozmazie, długi czas oczekiwania na diagnozę przy hodowli na pożywkach stałych, zaporowe koszty istniejących metod hodowli w pożywkach płynnych oraz konieczność pasażowania do pośredniego badania wrażliwości w celu wykrycia MDRTB. W przeciwieństwie do nich, nieopatentowana metoda MODS charakteryzuje się wysoką czułością w wykrywaniu TB i MDRTB, jest stosunkowo szybką metodą hodowli, zapewnia jednoczesne badanie wrażliwości na leki w przypadku MDRTB i jest dostępna w warunkach ograniczonych zasobów, przy koszcie badania w kierunku TB i MDRTB wynoszącym nieco poniżej 3 USD.

Protokół

  1. Przygotowanie roztworów zapasowych
    1. Zapas buforu fosforanowego
      1. Zmieszać 950ml roztworu fosforanu sodu dwuzasadowego (9,47g fosforanu sodu dwuzasadowego rozpuszczonego w 1000ml wody destylowanej) z 950ml roztworem fosforanu potasu jednowasadowego (9,07g fosforanu potasu jednowasadowego rozpuszczonego w 1000ml wody destylowanej) i wymieszać; zachować 50ml każdego roztworu do ewentualnej regulacji pH
      2. Dostosować pH do 6,8 ± 0,2: dodać roztwór fosforanu sodu dwuzasadowego w celu podwyższenia pH; dodać roztwór fosforanu potasu jednowasadowego w celu obniżenia pH
      3. Autoklawować w temperaturze 121-124°C przez 15 minut w celu sterylizacji
      4. Nanieść alikwot 100μl roztworu buforu fosforanowego na pożywkę agar nutrient w szalce Petriego i inkubować w 37°C przez 48 godzin w celu potwierdzenia sterylności
      5. Przechowywać w lodówce w temperaturze 2-8°C do jednego miesiąca

        Uwaga: Każda próbka plwociny wymaga 10ml roztworu buforu fosforanowego
    2. Zapas do dekontaminacji
      1. Połączyć równe objętości roztworu wodorotlenku sodu (8,0g wodorotlenku sodu rozpuszczonego w 200ml sterylnej wody destylowanej) i roztworu cytrynianu sodu (5,8g cytrynianu sodu rozpuszczonego w 200ml sterylnej wody destylowanej)
      2. Wymieszać i autoklawować w temperaturze 121-124°C przez 15 minut
      3. Przechowywać w lodówce w temperaturze 2-8°C do jednego miesiąca

        Uwaga: Każda próbka plwociny wymaga 2ml zapasu do dekontaminacji
    3. Zapas pożywek hodowlanych
      1. Do 900ml sterylnej wody destylowanej dodać 3,1ml gliceryny, 1,25g kasytonu oraz 5,9g proszku pożywki 7H9; mieszać przy stałym wytrząsaniu do całkowitego rozpuszczenia
      2. Autoklawować w temperaturze 121-124°C przez 15 minut
      3. Ostudzić i podzielić sterylną pożywkę na alikwoty 4,5ml w sterylnych szklanych probówkach 16x 100 mm do przygotowania próbek oraz alikwoty 10,8ml do przygotowania roztworów antybiotyków i kontroli wewnętrznych
      4. Inkubować w 37°C przez 48 godzin w celu weryfikacji sterylności (brak zmętnienia)
      5. Przechowywać w temperaturze 2-8°C z ciasno zamkniętym nakrętką do jednego miesiąca

        Uwaga: Każda próbka plwociny wymaga jednej probówki zawierającej 4,5ml pożywki 7H9
    4. Zapasowe roztwory antybiotyków
      1. A. Zapas izoniazydu (8 mg/ml)
        1. Całkowicie rozpuścić 20 mg izoniazydu w 2,5ml sterylnej wody destylowanej
        2. Przefiltrować za pomocą filtra strzykawkowego 0,2μm do rozpuszczalników wodnych
        3. Przechowywać w alikwotach 20μl w sterylnych probówkach do mikrocentryfugi w -20°C do 6 miesięcy

          Uwaga: Każdy przechowywany alikwot 20μl jest wystarczający dla maksymalnie 100 próbek (wliczając straty)
      2. B. Zapas ryfampicyny (8 mg/ml)
      1. Całkowicie rozpuścić 20mg ryfampicyny w 1,25ml DMSO
      2. Dodać 1,25ml sterylnej wody destylowanej i wymieszać
      3. Przefiltrować za pomocą filtra strzykawkowego 0,2μm do rozpuszczalników organicznych
      4. Przechowywać w alikwotach 20μl w sterylnych probówkach do mikrocentryfugi w -20°C do 6 miesięcy

        Uwaga: Każdy przechowywany alikwot 20μl jest wystarczający dla maksymalnie 100 próbek (wliczając straty)
  2. Przygotowanie roztworów roboczych
    1. Roboczy roztwór do dekontaminacji
      1. Rozpuścić 0,1g kryształów NALC w każdych 20ml wymaganego roztworu do dekontaminacji

        Uwaga: Każda próbka wymaga 2ml roztworu do dekontaminacji

        Uwaga: Wyrzucić każdy nieużyty roztwór do dekontaminacji NaOH-NALC po 24 godzinach, ponieważ NALC traci swoją aktywność mukolityczną z upływem czasu
    2. Roboczy roztwór pożywek hodowlanych
      1. Przygotować:
        1. 1 probówkę z pożywką 7H9 na każdą próbkę plwociny do przetworzenia, plus 1 dodatkową probówkę na każdą płytkę (dla kolumny kontroli negatywnej)
        2. 2 probówki pożywki 7H9 dla kontroli pozytywnych (3, jeśli używane są szczepy monorezystentne)
        3. 1-2 probówki z 10,8ml 7H9 do przygotowania roztworów antybiotyków
      2. Dodać 0,5ml OADC do 4,5ml 7H9 w każdej probówce z próbką
      3. Dodać 1,2ml OADC do probówek z 10,8ml 7H9
      4. Odstawić 2 probówki z 5ml 7H9-OADC dla kontroli pozytywnych oraz probówkę(i) z 12ml 7H9-OADC do przygotowania roztworów antybiotyków (te nie wymagają PANTA)
      5. Zrekonstytuować PANTA i dodać 0,1ml do każdej probówki z próbką oraz do probówek kontroli negatywnej (7H9-OADC-PANTA: objętość całkowita=5,1ml)

        Uwaga: Pożywka kompletna z PANTA (7H9-OADC-PANTA) jest stosowana dla próbek plwociny i kontroli negatywnych; dla kontroli pozytywnych i przygotowania roztworów antybiotyków należy stosować 7H9-OADC bez PANTA
    3. Robocze roztwory antybiotyków
      1. 1. Patrz Rysunek 1 w celu poznania kroków przygotowania roboczego roztworu antybiotyku w nieużywanej płytce 24-dołkowej

        Uwaga: Dla dokładnych wyników podatności krytyczne są końcowe stężenia antybiotyków. Poniższa procedura jest odpowiednia dla laboratoriów wyposażonych w mikropipety. Jeśli mikropipety nie są dostępne, można użyć strzykawek tuberkulinowych z innym szeregiem rozcieńczeń opisanym w dodatku 3 do instrukcji użytkownika na stronie modsperu.org

        Uwaga: Nie zamrażać ponownie ani nie używać ponownie roboczych lub zapasowych roztworów antybiotyków, ponieważ aktywność leku może zostać utracona. Wyrzucić wszystkie nieużyte roztwory antybiotyków na koniec dnia przetwarzania Rysunek 1. Przygotowanie roboczych roztworów antybiotyków (z Instrukcji Użytkownika na stronie modsperu.org)
  3. Przygotowanie próbek plwociny i płytek
    1. Dekontaminacja
      1. Umieścić 2ml próbki plwociny w probówce wirówkowej 15ml (jeśli mniej, uzupełnić do 2ml buforem fosforanowym; jeśli więcej, użyć tylko 2ml)
      2. Dodać 2ml roztworu NaOH-NALC
      3. Mocno zakręcić probówkę i mieszać w wortexie przez 20 sekund; odwrócić probówkę, aby roztwór NaOH-NALC miał kontakt z całą wewnętrzną powierzchnią probówki i zakrętki
      4. Pozostawić na minimum 15 minut – czas można przedłużyć o kilka minut, jeśli próbka jest szczególnie lepka. Aby uniknąć nadmiernego przetwarzania, czas nie powinien przekroczyć 20 minut
      5. Wypełnić probówkę buforem fosforanowym (pH 6,8) do 14ml, aby zneutralizować alkalię i przerwać proces dekontaminacji, a następnie dobrze wymieszać, odwracając probówkę 4 razy
      6. Wirować przy 3000 g przez 15 minut (patrz Dodatek 2 w Instrukcji Użytkownika na stronie modsperu.org w celu uzyskania wzoru na liczbę obrotów na minutę niezbędną do osiągnięcia 3000 g)
      7. Ostrożnie odlać supernatant do pojemnika na odpady ciekłe z 10% podchlorynem sodu lub innym odpowiednim środkiem dezynfekcyjnym i zachować osad
    2. Przygotowanie końcowej zawiesiny próbki i kopii zapasowej
      1. Używając 7H9-OADC-PANTA (z probówki zawierającej 5,1ml), resuspendować osad z próbki w całkowitej objętości 2ml w probówce wirówkowej za pomocą pipety Pasteura; dobrze wymieszać
      2. Pobrać 1ml zawiesiny próbki i przechowywać w probówce do mikrocentryfugi w 2-8°C jako kopię zapasową
      3. Dodać drugie 1ml zawiesiny próbki do probówki z pozostałym 7H9-OADC-PANTA; dobrze wymieszać. Jest to końcowy roztwór próbki gotowy do naniesienia na płytkę
    3. Naniesienie zawiesin próbek na płytkę 24-dołkową
      1. Nanieść 900μl końcowej zawiesiny próbki do każdego z 4 dołków kolumny na płytce 24-dołkowej
      2. Powtórzyć z kolejnymi próbkami, aż wszystkie kolumny płytki, z wyjątkiem kolumny 3, zostaną wypełnione (lub aż wszystkie próbki zostaną naniesione)
      3. Nanieść 900μl pożywki 7H9-OADC bez próbki do 4 dołków kolumny 3 każdej płytki z próbkami (negatywne kontrole wewnętrzne)
    4. Dodawanie antybiotyków do próbek
      1. Używając pipety wielokanałowej, ostrożnie pobrać 100μl z dołków z 7H9-OADC i roboczymi roztworami antybiotyków (kolumna 2 na płytce rozcieńczeń antybiotyków – patrz Rysunek 1)
      2. Dodać alikwoty 100μl do dołków kolumny 1 z 900μl roztworami próbek, nie dotykając płytki ani próbki
      3. Powtórzyć, aż wszystkie kolumny otrzymają dodatkowe 100μl pożywki (dołki bez leku) lub roztworów antybiotyków (w tym kolumna kontroli negatywnej 3)
      4. Zamknąć płytkę pokrywką, umieścić w szczelnym worku polietylenowym (Ziplock) i zamknąć (worka nie otwiera się już od tego momentu)
      5. Inkubować w 37°C (wzbogacenie CO2 nie jest konieczne)
  4.  Kontrola jakości
    1. Na każdej płytce wykonuje się kontrole negatywne.  Obecność jakiegokolwiek wzrostu w którymkolwiek z dołków w kolumnie kontroli negatywnej wskazuje na kontaminację krzyżową, dlatego cała płytka musi zostać wyrzucona, a próbki naniesione ponownie.
    2. Kontrole pozytywne wykonuje się na osobnej płytce na koniec dnia.  W jednej kolumnie prowadzi się szczep w pełni podatny na leki, a w innej szczep oporny na INH i RIF.  Jeśli istnieje obawa przed użyciem szczepu MDR, zamiast szczepu podatnego i MDR można zastosować szczep monorezystentny na INH oraz szczep monorezystentny na RIF.  Wszystkie kontrole pozytywne powinny wykazać wzrost w dołkach bez leku, aby udowodnić, że pożywki wspierają wzrost.  Aby wykazać, że stężenia leków są prawidłowe, szczep podatny nie powinien rosnąć w dołkach z INH lub RIF, natomiast szczep MDR powinien rosnąć również w dołkach z INH i RIF.
  5. Odczyt płytek
    1. Przyjmując dzień naniesienia na płytkę jako „Dzień 0”, odczyt płytek rozpoczyna się w Dniu 5; jeśli wynik jest negatywny, odczyt wykonuje się codziennie (lub co drugi dzień, w zależności od obciążenia pracą) do dnia 14, a następnie co 2-3 dni od dnia 15 do 21.  Płytki badane są pod odwróconym mikroskopem świetlnym z obiektywem 10x
    2. Kulturą pozytywną jest taka, w której w OBU dołkach bez leku znajduje się dwie lub więcej jednostek tworzących kolonie (>2 CFU).  Wczesny wzrost prątków wygląda jak małe zakrzywione przecinki lub spirale (dni 5-9).  Tworzenie kolonii zwykle postępuje do formowania „sznurów” lub „splątań” (patrz biblioteka obrazów na stronie modsperu.org)
    3. W dniu, w którym kultura w 2 dołkach bez leku jest pozytywna, należy odczytać dołki zawierające lek.  Jakikolwiek wzrost w obecności leku wskazuje na oporność na ten lek.

      Uwaga: Jeśli odczyt dołków z lekiem zostanie wykonany >1 tydzień po odnotowaniu pozytywnej kultury w dołkach bez leku, może to nie oznaczać oporności, gdyż sporadycznie obserwuje się wzrost przełamujący
    4. Próbki, które nie są pozytywne do 21 dnia, uznaje się za kultury negatywne
    5. Zmętnienie dołków jest wynikiem przerostu kontaminacji, podczas gdy wzrost prątków nie powoduje zmętnienia
    6. Po upływie 21 dni kultury mogą zostać zutylizowane.  Kultury pozostają w szczelnych workach, są umieszczane w workach do autoklawowania i autoklawowane w 121-124°C przez 45-60 minut

 

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Analiza MODS jest skierowana do ośrodków o ograniczonych zasobach.  Po raz pierwszy MODS umożliwia szybką detekcję gruźlicy oraz gruźlicy wielolekoopornej w kulturach płynnych w ośrodkach o ograniczonych zasobach, przy koszcie poniżej 3 USD za test.  MODS to nieopatentowana, iteracyjna metodologia, a społeczność MODS jest zawsze zainteresowana ulepszeniami, które udało się wprowadzić innym laboratoriom.

Powracającym problemem jest bezpieczeństwo biologiczne hodowli płynnych prątków ...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Podziękowania

Pragniemy podziękować Seanowi Fitzwaterowi i Carmen Gianninie Lunie Colombo za segment wideo z przyspieszonym zapisem wzrostu prątków gruźlicy.  Dziękujemy Marty Roper za wnikliwe i doskonałe uwagi podczas redagowania oraz za współautorstwo Przewodnika Użytkownika, z którego niniejszy protokół został w dużej mierze przejęty niemal słowo w słowo.  Produkcja tego filmu została sfinansowana przez NIH/ Fogarty International Center http://www.fic.nih.gov/. David A.J. Moore przyczynił się do pracy jako Wellcome Trust Clinical Research Fellow w dziedzinie medycyny tropikalnej oraz Reader w zakresie chorób zakaźnych w Imperial College London (numer stypendium 078067/Z/05).  Mark F. Brady przyczynił się do pracy jako badacz stypendialny NIH/Fogarty International Center.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Lodówka/zamrażarkaSprzętdo przechowywania przygotowanych wcześniej roztworów pożywek i roztworów stokowych antybiotyków
Wymieszaj w wirówce vortexSprzętw celu wspomagania dekontaminacji plwociny
WirówkaSprzętdo zagęszczania plwociny; zdolna do osiągnięcia 3000 g; d–nie wymaga przechowywania w lodówce, ale MUSI być bezpieczny biologicznie (pojemniki mogą być szczelnie zamknięte)
Inkubator (37°C)Sprzętdo hodowli; nie wymaga wzbogacenia w CO2
Odwrócony mikroskop świetlnyMikroskopdo odczytu płytek MODS
AutoklawSprzętdo sterylizacji pożywek, PBS i użytych płytek
WagaSprzętodważenie izoniazydy, ryfampicyny i NALC
pożywka Middlebrook 7H9 (Difco)OdczynnikFisher ScientificDF0713-17-9500 g/butelka; baza pożywki hodowlanej
Casitone (kazeina trawiona tryspsyną)OdczynnikFisher ScientificDF0259‐17‐9500 g/butelka; baza pożywki hodowlanej
Glicerol (gliceryna) liofilizowanyOdczynnikSigma-AldrichG‐33‐500500 ml/butelka; baza pożywki hodowlanej
PANTA (liofilizowana mieszanka antybiotyków BD) OdczynnikFisher ScientificB43451146 butelek w opakowaniu; dodatek antybiotykowy do pośrodka
OADC (pożywka wzbogacona Middlebrook OADC BD)OdczynnikFisher ScientificB1188610 x 20 ml/opak.; suplement do pożywek odżywczych
Dimetylosulfotlenek (Hibri-Max)OdczynnikSigma-AldrichD-2650100 ml/butelkę; do przygotowania roztworu zapasu ryfampicyny
Roztwory zapasowe antybiotyków: izoniazydOdczynnikSigma-AldrichI-337750 g/butelkę; bezpośrednie badanie wrażliwości
Roztwory zapasowe antybiotyków: ryfampicynaOdczynnikSigma-AldrichR-35011 g/buteleczkę; bezpośrednie badanie podatności
Wodorotlenek sodu (granulki)OdczynnikSigma-Aldrich221465500 g/butelka; dekontaminacja plwociny
Cytrynian sodu (sol sodowy trójsodowy dwuwodny)OdczynnikSigma-AldrichS-4641500 g/butelka; dekontaminacja plwociny
N-acetyl-L-cysteinaOdczynnikSigma-AldrichA-725050 g/opakowanie; dekontaminacja plwociny
Kryształy fosforanu potasu jednopodstawowego. KH2PO4OdczynnikSigma-AldrichP0662500 g/butelka; dekontaminacja plwociny
Fosforan sodu dwuzasadowy, bezwodny. Na2HPO4OdczynnikSigma-AldrichS0876500 g/opakowanie; dekontaminacja plwociny
Podchloryn soduOdczynnikwybielacz domowydo utylizacji odpadów skażonych
probówki wirówkowe 15 ml (polipropylenowe 15 ml Falcon 35‐2096)Materiały eksploatacyjneFisher Scientific14‐959‐49B500 szt./opak.; do dekontaminacji i zagęszczania plwociny
płytki 24-dołkowe (Plates Tissue 24 wells BD Falcon 35)‐3047)Materiały zużywalneFisher Scientific08-772-150 płytek w opakowaniu; do hodowli i odczytu
Szczelne worki polietylenowe 6 x 6 “ (strunowy)Materiały eksploatacyjnedla zapewnienia bezpieczeństwa biologicznego w celu zabezpieczenia płytki 24-dołkowej
Probówki szklane z nakrętkami (16 x 100 mm i 18 x 145 mm)Materiały zużywalneVWR International47729-583500 probówek/opakowanie; do przechowywania alikwotów przygotowanego bulionu
Probówki do mikrocentryfugi z nakrętką (1,5 ml)Materiały zużywalneFisher Scientific05‐669‐221000 szt./opakowanie; do przechowywania alikwotów zapasów antybiotyków
0.22μfiltry m (rozpuszczalniki wodne) Filtr strzykawkowy Millex blueMateriały eksploatacyjneFisher ScientificSLGL 025 OS50 jednostek/opakowanie; do filtrowania roztworów roboczych antybiotyków
0.22μfiltry m (rozpuszczalniki organiczne) filtr strzykawkowy Millex żółtyMateriały eksploatacyjneFisher ScientificSLGV 033 RS50 jednostek/opakowanie; do filtrowania roztworów gęstych antybiotyków
Jednorazowe pipety Pasteura z borokrzesłowego szkła 9″Materiały zużywalneFisher Scientific13‐678‐20°C720 szt./opak.; do mieszania PANTA z mieszaniną pożywek
Napiwniki z filtrem przeciwaerozolowym 1000 µl‐1300μPrzesuń kursor w lewo.Materiały zużywalneFisher Scientific02‐707‐511000 szt./op.; do dozowania pożywki do płytki
USA Scientific Tips One 1‐200μżółte końcówkiMateriały zużywalneFisher Scientific1111‐00061000 końcówek/opakowanie; do rozcieńczania roztworów zapasowych antybiotyków

Bibliografia

  1. Arias, M. Clinical evaluation of the microscopic-observation drug-susceptibility assay for detection of tuberculosis. Clin Infect Dis. 44, 674-674 (2007).
  2. Caviedes, L. Rapid, efficient detection and drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis in sputum by microscopic observation of broth cultures. The Tuberculosis Working Group in Peru. J Clin Microbiol. 38, 1203-1203 (2000).
  3. Caviedes, L., Moore, D. A. Introducing MODS: a low-cost, low-tech tool for high-performance detection of tuberculosis and multidrug resistant tuberculosis. Indian J Med Microbiol. 25, 87-87 (2007).
  4. Caws, M. Evaluation of the MODS culture technique for the diagnosis of tuberculous meningitis. PLoS ONE. 2, e1173-e1173 (2007).
  5. Ejigu, G. S. Microscopic-observation drug susceptibility assay provides rapid and reliable identification of MDR-TB. Int J Tuberc Lung Dis. 12, 332-332 (2008).
  6. Kim, S. J. Risk of occupational tuberculosis in National Tuberculosis Programme laboratories in Korea. Int J Tuberc Lung Dis. 11, 138-138 (2007).
  7. Mello, F. C. Clinical evaluation of the microscopic observation drug susceptibility assay for detection of Mycobacterium tuberculosis resistance to isoniazid or rifampin. J Clin Microbiol. 45, 3387-3387 (2007).
  8. Moore, D. A. Future prospects for the MODS assay in multidrug-resistant tuberculosis diagnosis. Future Microbiol. 2, 97-97 (2007).
  9. Moore, D. A. Infrequent MODS TB culture cross-contamination in a high-burden resource-poor setting. Diagn Microbiol Infect Dis. 56, 35-35 (2006).
  10. Moore, D. A. Microscopic-observation drug-susceptibility assay for the diagnosis of TB. N Engl J Med. 355, 1539-1539 (2006).
  11. Moore, D. A. Microscopic observation drug susceptibility assay, a rapid, reliable diagnostic test for multidrug-resistant tuberculosis suitable for use in resource-poor settings. J Clin Microbiol. 42, 4432-4432 (2004).
  12. Moore, D. A., Roper, M. H. Diagnosis of smear-negative tuberculosis in people with HIV/AIDS. Lancet. 370, 1033-1033 (2007).
  13. Oberhelman, R. A. Improved recovery of Mycobacterium tuberculosis from children using the microscopic observation drug susceptibility method. Pediatrics. 118, e100-e100 (2006).
  14. Palomino, J. C., Martin, A., Portaels, F. MODS assay for the diagnosis of TB. N Engl J Med. 356, 188-189 (2007).
  15. Park, W. G., Bishai, W. R., Chaisson, R. E., Dorman, S. E. Performance of the microscopic observation drug susceptibility assay in drug susceptibility testing for Mycobacterium tuberculosis. J Clin Microbiol. 40, 4750-4750 (2002).
  16. Shiferaw, G. Evaluation of microscopic observation drug susceptibility assay for detection of multidrug-resistant Mycobacterium tuberculosis. J Clin Microbiol. 45, 1093-1093 (2007).
  17. Tovar, M. Improved diagnosis of pleural tuberculosis using the microscopic- observation drug-susceptibility technique. Clin Infect Dis. 46, 909-909 (2008).
  18. Vargas, D. Diagnosis of sputum-scarce HIV-associated pulmonary tuberculosis in Lima, Peru. Lancet. 365, 150-150 (2005).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

test MODSdiagnostyka gruźlicygruźlica wielolekoopornahodowla w podłożu płynnymobserwacja mikroskopowabadanie wrażliwości na lekidekontaminacja plwocinymikroskopia odwróconakomora z laminarnym przepływem powietrzabufor fosforanowy
Metoda MODS w diagnostyce gruźlicy oraz gruźlicy wielolekoopornej
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki korzystania z usługi

Zasady

Prawa autorskie © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.