Usuwanie związków rozgałęzionych i cyklicznych przez addukcję mocznika w paleotermometrii U^k'37

1. Ustawienie i przygotowanie materiałów

1. Uzyskać całkowity ekstrakt lipidowy (TLE) przy użyciu metody ekstrakcji rozpuszczalnikiem (Sonication, Soxhlet lub przyspieszona ekstrakcja rozpuszczalnikiem (ASE)).
2. Kup następujące materiały w dowolnym sklepie chemicznym: pipety i żarówki ze spalonego szkła borokrzemianowego; czysta woda; heksan; dichlorometan (DCM); metanol; mocznik.
   1. Odczynniki powinny być czyste i wolne od węglowodorów. Alternatywnie, czystą wodę można uzyskać w laboratorium przy użyciu systemu oczyszczania wody.
3. Zaopatrz się w 4-mililitrowe fiolki ze szkła borokrzemianowego z nakrętkami wyłożonymi PTFE.

2. Metody

1. Przygotuj mieszaninę 2:1 DCM:Hexane (v:v).
   1. W kolbie Erlenmeyera wymieszać 200 ml DCM i 100 ml heksanu.
2. Przygotować mieszaninę mocznika z metanolem (100 mg/ml).
   1. Wlać 300 ml metanolu do kolby Erlenmeyera.
   2. Dodaj 300 mg mocznika.
   3. Mieszać na automatycznej płytce mieszającej, aż mocznik całkowicie się rozpuści.
3. Zacznij od suchej próbki w fiolce o pojemności 4 ml.
4. Zawiesić próbkę w 1,5 ml mieszaniny DCM:Hexane (v:v) w stosunku 2:1.
   1. Jeśli próbka nie rozpuści się całkowicie, należy przeprowadzić sonikację przez 5 minut.
5. Do tej mieszaniny dodaj 1,5 ml mocznika w metanolu.
   1. Po tym dodaniu obserwuj, czy nie utworzy się biały osad. Sygnalizuje to tworzenie się kryształów mocznika.
6. Delikatnie osusz kryształy pod azotem, używając delikatnego ciepła. Upewnij się, że cały rozpuszczalnik wyparował przed przejściem do następnego kroku.
7. Przepłucz kryształy 3x około 1 ml heksanu. Usuń heksan między każdym płukaniem za pomocą szklanej pipety, aby przenieść go do fiolki oznaczonej jako "non-addduct".
8. Rozpuść kryształy w 2 ml czystej wody. Wstrząśnij, aby zapewnić całkowite rozpuszczenie.
9. Wyekstrahuj fazę wodną heksanem, dodając 1 ml i delikatnie wstrząsając przez 5 s.
10. Pozwól, aby heksan i woda całkowicie się rozdzieliły, a następnie usuń około 75% heksanu za pomocą szklanej pipety i przenieś go do fiolki oznaczonej "adduktem".
11. Powtórz krok 2.10 dwa razy.
12. Wodę i roztwór mocznika należy wyrzucić do odpowiedniego pojemnika na odpady.