Name: Zakażenie wirusem krowianki i czasowa analiza ekspresji genów wirusa: część 1 (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-04-08T00:00:00.000+00:00
Duration: 12 min
Description: Poznaj metodę zakażenia komórek HeLa wirusem krowianki i ekstrakcji RNA w różnych punktach czasowych. Ta technika umożliwia analizę ekspresji genów wirusa i gospodarza.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Fundusze dla stypendystów Whitehead Institute

Część 1: Przygotowanie zakażenia
<ol>
<li>Hodować komórki HeLa w kolbach i czekać, aż osiągną konfluencję na poziomie około 80%.</li>
<li>Przygotować odpowiednią ilość pożywki do wzrostu wirusa na potrzeby eksperymentu: standardowe DMEM z 2% FBS bez dodatku antybiotyków.</li>
<li>Infekcję można przeprowadzić, używając albo surowego stoku wirusa vaccinia o znanym mianie, albo wirusa oczyszczonego sacharozą o znanym mianie, jeśli istotna jest kwestia ekspresji genów gospodarza.</li>
<li>W przypadku użycia wirusa oczyszczonego sacharozą należy przejść bezpośrednio do części 2.</li>
<li>W przypadku użycia surowego stoku wirusa vaccinia, bezpośrednio przed infekcją, poddać alikwot wirusa działaniu sonikatora kubkowego w kąpieli składającej się głównie z lodu i niewielkiej ilości wody.
<ul style="list-style-type:lower-alpha;">
<li>Sonikować przy mocy około 30W przez 20 sekund.</li>
<li>Wymieszać zawartość probówki w wirówce typu vortex i powtórzyć sonikację 3 razy, dodając w razie potrzeby więcej lodu, aby utrzymać kubek wypełniony lodem i schłodzony.</li>
<li>Mieszać w vortexie pomiędzy każdym etapem sonikacji.</li>
<li>Przejść do części 2.</li>
</ul>
</li>
<li>Alternatywnie, w przypadku braku sonikatora kubkowego, zmieszać równą objętość surowego stoku wirusa i trypsyny w stężeniu 0.25mg/mL.
<ul style="list-style-type:lower-alpha;">
<li>Wymieszać energicznie w vortexie.</li>
<li>Inkubować mieszaninę stoku wirusa i trypsyny w kąpieli wodnej o temperaturze 37°C przez 30 minut.</li>
<li>Mieszać w vortexie w odstępach 5-10 minut.</li>
<li>Przejść do części 2.</li>
</ul>
</li>
</ol>
Część 2: Infekowanie komórek
<ol>
<li>Oblicz ilość cząsteczek wirusa potrzebną do zainfekowania monowarstwy przy pożądanej wielokrotności infekcji (MOI). Zazwyczaj do przebiegu czasowego infekcji stosuje się wysoką wartość MOI (między 5 a 10).</li>
<li>Dodaj pożądaną ilość wirusa oczyszczonego sacharozą lub surowego wirusa poddanego trypsynizacji do pożywki do wzrostu wirusa o temperaturze 37°C i dobrze wymieszaj. Należy użyć takiej ilości pożywki, aby zaledwie pokryła dno kolby. Na przykład 10 mL pożywki dla kolby T-175.</li>
<li>Usuń pożywkę z komórek i wypłucz je PBS w temperaturze pokojowej.</li>
<li>Dodaj wirusa w pożywce do wzrostu wirusa do każdej kolby.
<ul style="list-style-type:lower-alpha;">
<li>Delikatnie zamieszaj, przechyl płytki i inkubuj w temperaturze 37°C w inkubatorze z 5% CO2 przez 1 godzinę.</li>
<li>Przechylaj i zamieszaj płytki co 15 minut, aby równomiernie rozprowadzić wirusa i utrzymać komórki w stanie wilgotnym.</li>
<li>Dla punktu czasowego 0 h/kontrolnego (Mock), dodaj samą pożywkę do wzrostu wirusa, bez dodatku wirusa.</li>
</ul>
</li>
<li>Po 1-godzinnej inkubacji usuń pożywkę zawierającą wirusa i wypłucz trzy razy PBS w temperaturze pokojowej.</li>
<li>Dodaj maksymalną ilość pożywki do wzrostu wirusa do każdej kolby. Na przykład 30 mL pożywki dla kolby T-175. Przyjmij ten moment jako punkt czasowy 0 h.</li>
</ol>
Część 3: Pozyskiwanie komórek
<ol>
<li>Obejrzeć komórki pod mikroskopem i odnotować wszelki efekt cytopatyczny (CPE).</li>
<li>Usunąć medium i wypłukać komórki 30 mL PBS o temperaturze pokojowej.</li>
<li>Dodać do komórek 15 mL trypsyny i inkubować przez 2-5 min w temperaturze 37°C.</li>
<li>Sprawdzić pod mikroskopem odłączenie się komórek i delikatnie opukać kolbę, aby oderwać komórki.</li>
<li>Przenieść komórki za pomocą sterylnej pipety serologicznej do probówki stożkowej o pojemności 50 mL.</li>
<li>Przepłukać kolbę równą objętością medium wzrostowego, a następnie dodać to medium do trypsynizowanych komórek w probówce stożkowej.</li>
<li>Odwirować komórki przy 300 x g przez 5 minut w temperaturze pokojowej.</li>
<li>Usunąć trypsynę/medium znad osadu komórkowego.</li>
<li>Resuspender osad komórkowy w odczynniku TRIzol lub buforze lizującym z wybranego zestawu do izolacji RNA.</li>
<li>W przypadku użycia TRIzolu, podzielić próbkę na alikwoty po 1 mL w opisanych probówkach Eppendorf 1,5 mL i zamrozić w temperaturze -80°C.</li>
<li>Powtórzyć procedurę dla wszystkich punktów czasowych, zbierając jedną kolbę dla każdego punktu czasowego.</li>
</ol>
Część 4: Ekstrakcja RNA z próbek w TRIzol
<ol>
<li>Na tym etapie próbki powinny być resuspenderowane w odczynniku TRIzol i gotowe do dalszej obróbki.</li>
<li>Do każdej probówki dodaj 200µL odczynnika do separacji faz BCP na każdy 1 mL TRIzol. W przypadku rozpoczęcia pracy z dużą ilością TRIzol może być konieczne przeniesienie próbki do większej probówki.</li>
<li>Wymieszaj intensywnie za pomocą wortexa lub wstrząsając i inkubuj w temperaturze pokojowej przez 2-3 minuty.</li>
<li>Odwirowuj próbkę przy 12,000 x g przez 15 minut.</li>
<li>Przenieś fazę wodną do nowej probówki. Faza wodna to przejrzysta warstwa na górze. Powinieneś odzyskać około 600µL na każdy 1mL TRIzol użyty na początku.</li>
<li>Przeprowadź drugą ekstrakcję fenol-chloroformową, tym razem stosując 500µL chloroformu na 1 ml TRIzol zamiast BCP.</li>
<li>Wymieszaj intensywnie za pomocą wortexa lub wstrząsając i inkubuj w temperaturze pokojowej przez 2-3 minuty.</li>
<li>Odwirowuj próbkę przy 12,000 x g przez 15 minut.</li>
<li>Przenieś fazę wodną do nowej probówki. Faza wodna to przejrzysta warstwa na górze.</li>
<li>Do każdej próbki dodaj 20µg liniowej akrylamidu. Liniowy akrylamid działa jako nośnik i pomaga w wytrącaniu RNA.</li>
<li>Do każdej próbki dodaj 500µL izopropanolu na każdy 1 ml TRIzol użyty na początku i dokładnie wymieszaj.</li>
<li>Inkubuj próbki w temperaturze pokojowej przez 10 minut.</li>
<li>Odwirowuj w mikrowirówce z maksymalną prędkością przez 10-15 minut.</li>
<li>Osad RNA będzie widoczny na dnie probówki. Bardzo ostrożnie usuń nadsącz z probówki, używając aspiratora próżniowego lub pipety. Nie naruszaj osadu.</li>
<li>Przemyj osad 1 mL 70% etanolu.
<ul style="list-style-type:lower-alpha;">
<li>Dodaj 1 mL 70% etanolu do osadu.</li>
<li>Odwirowuj z maksymalną prędkością 14,000g przez 5-7 minut.</li>
<li>Bardzo ostrożnie usuń etanol z probówki za pomocą aspiratora próżniowego lub pipety. Upewnij się, że osad jest widoczny na dnie probówki.</li>
<li>Odrzuć nadsącz.</li>
</ul>
</li>
<li>Powtórz etap przemywania. Po usunięciu nadsączu zaznacz na probówce miejsce, w którym znajduje się osad.</li>
<li>Susz osad na powietrzu nie dłużej niż przez 5 minut. Nie wysusz go zbyt mocno, w przeciwnym razie RNA będzie trudne do resuspensji!</li>
<li>Jeśli chcesz przeprowadzić opcjonalne traktowanie DNazą w celu usunięcia pozostałego DNA z próbki, resuspenderuj osad w 17µL wody wolnej od nukleaz. W przeciwnym razie resuspenderuj osad w 20µL wody wolnej od nukleaz i przejdź do kroku 22.</li>
<li>(Opcjonalne traktowanie DNazą) Korzystając z zestawu DNazy wolnej od RNazy firmy Qiagen, dodaj 2µL buforu RDD i 1µL zrekonstytuowanej DNazy I wolnej od RNazy do resuspenderowanego RNA. Wymieszaj delikatnie.</li>
<li>(Opcjonalne traktowanie DNazą) Inkubuj w temperaturze 37°C przez 30 minut.</li>
<li>(Opcjonalne traktowanie DNazą) Dodaj 2µL 2,5 mM EDTA i inkubuj w temperaturze 65°C przez 5 minut, aby inaktywować DNazę. Nie przekraczaj czasu ani temperatury inaktywacji, ponieważ dłuższy czas lub wyższa temperatura mogą spowodować degradację RNA.</li>
<li>Sprawdź stężenie RNA za pomocą spektrofotometru.</li>
<li>Przechowuj próbkę RNA w temperaturze -80°C.</li>
<li>(Opcjonalna kontrola jakości) Sprawdź jakość RNA za pomocą Agilent BioAnalyzer lub poprzez rozdzielenie próbki na żelu denaturującym i sprawdzenie odczytów O.D. (260nm oraz stosunku 260/280).</li>
</ol>

<ol><li>KH, R. ubins, LE, H. ensley, GW, B. ell, Wang, C., EJ, L. efkowitz, PO, B. rown, DA, R. elman <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+viral+gene+expression+programs+during+poxvirus+infection%3A+a+transcriptional+map+of+the+vaccinia+and+monkeypox+genomes%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of viral gene expression programs during poxvirus infection: a transcriptional map of the vaccinia and monkeypox genomes.</a> PLoS ONE. 3 (7), e2628-e2628 (2008).</li>
<li>Assarsson, E., Greenbaum, J. A., Sundström, M., Schaffer, L., Hammond, J. A., Pasquetto, V., Oseroff, C., Hendrickson, R. C., Lefkowitz, E. J., Tscharke, D. C., Sidney, J., Grey, H. M., Head, S. R., Peters, B., Sette, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetic+analysis+of+a+complete+poxvirus+transcriptome+reveals+an+immediate-early+class+of+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Kinetic analysis of a complete poxvirus transcriptome reveals an immediate-early class of genes.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 105 (6), 2140-2145 (2008).</li>
<li>Satheshkumar, P. S., Moss, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poxvirus+transcriptome+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Poxvirus transcriptome analysis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, E62-E62 (2008).</li>
<li>Assarsson, E., Greenbaum, J. A., Sundström, M., Schaffer, L., Hammond, J. A., Pasquetto, V., Oseroff, C., Hendrickson, R. C., Lefkowitz, E. J., Tscharke, D. C., Sidney, J., Grey, H. M., Head, S. R., Peters, B., Sette, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A.+Reply+to+Satheshkumar+and+Moss%3A+Poxvirus+transcriptome+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">A. Reply to Satheshkumar and Moss: Poxvirus transcriptome analysis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, E63-E64 (2008).</li>
<li>Guerra, S., López-Fernández, L. A., Pascual-Montano, A., Muñoz, M., Harshman, K., Esteban, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+gene+expression+survey+of+vaccinia+virus+infection+of+human+HeLa+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Cellular gene expression survey of vaccinia virus infection of human HeLa cells.</a> J Virol. 77 (11), 6493-6506 (2003).</li>
<li>Guerra, S., López-Fernández, L. A., Conde, R., Pascual-Montano, A., Harshman, K., Esteban, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microarray+analysis+reveals+characteristic+changes+of+host+cell+gene+expression+in+response+to+attenuated+modified+vaccinia+virus+Ankara+infection+of+human+HeLa+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Microarray analysis reveals characteristic changes of host cell gene expression in response to attenuated modified vaccinia virus Ankara infection of human HeLa cells.</a> J Virol. 78 (11), 5820-5824 (2004).</li>
<li>Guerra, S., López-Fernández, L. A., Pascual-Montano, A., Nájera, J. L., Zaballos, A., Esteban, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host+response+to+the+attenuated+poxvirus+vector+NYVAC%3A+upregulation+of+apoptotic+genes+and+NF-kappaB-responsive+genes+in+infected+HeLa+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Host response to the attenuated poxvirus vector NYVAC: upregulation of apoptotic genes and NF-kappaB-responsive genes in infected HeLa cells.</a> J Virol. 80 (2), 985-998 (2006).</li>
<li>Guerra, S., Nájera, J. L., González, J. M., López-Fernández, L. A., Climent, N., JM, G. atell, Gallart, T., Esteban, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+gene+expression+profiling+after+infection+of+immature+human+monocyte-derived+dendritic+cells+by+the+attenuated+poxvirus+vectors+MVA+and+NYVAC%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Distinct gene expression profiling after infection of immature human monocyte-derived dendritic cells by the attenuated poxvirus vectors MVA and NYVAC.</a> 81 (16), 8707-8721 (2007).</li>
</ol>

Kluczowe etapy
Część 1 i 2
Istnieje kilka krytycznych etapów przygotowania synchronicznej infekcji wirusem vaccinia, z których pierwszym jest staranna sonikacja (lub trypsynizacja) wirusa w celu rozbicia agregatów cząstek wirusowych. Wirus vaccinia ma silną tendencję do agregacji, a rozproszenie cząstek wirusowych jest istotne dla zapewnienia równomiernej infekcji komórek. Aby uzyskać synchroniczną infekcję, należy zastosować wysoką wielokrotność infekcji (MOI powyżej ...

<table><tbody><tr><td>Odczynnik TRIzol</td><td>Odczynnik</td><td>Invitrogen</td><td>15596-026</td><td>Można również zastosować podobne odczynniki, takie jak TriPure firmy Roche.</td></tr><tr><td>Odczynnik do separacji faz BCP</td><td>Odczynnik</td><td>Molecular Research Center</td><td>BP151</td><td></td></tr><tr><td>Zestaw DNazy wolnej od RNaz</td><td>Odczynnik</td><td>Qiagen</td><td>79254</td><td>Obróbka DNazą jest krokiem opcjonalnym.</td></tr></tbody></table>

infekcja wirusem vaccinia oraz analiza czasowa ekspresji genów wirusa: część 1

Vaccinia Virus Infection &amp; Temporal Analysis of Virus Gene Expression: Part 1

RodzinaPoxviridaeskłada się z dużych dwuniciowych cząsteczek DNA zawierających wirusy, które replikują się wyłącznie w cytoplazmie zainfekowanych komórek. Przedstawiciele tejorthopoxrodzaj obejmuje variola, czynnik etiologiczny ospy prawdziwej u ludzi, monkeypox oraz vaccinia (VAC), prototypowego przedstawiciela rodziny wirusów. W obrębie stosunkowo dużego (~ 200 kb) genomu vaccinia kodowane są trzy klasy genów: wczesne, pośrednie i późne. Choć wszystkie trzy klasy są transkrybowane przez kodowane wirusowo polimerazy RNA, każda z nich pełni inną funkcję w cyklu życiowym wirusa. Poxwirusy stosują wiele strategii modulacji środowiska komórkowego gospodarza podczas infekcji. Aby zrozumieć regulację ekspresji genów zarówno gospodarza, jak i wirusa, zastosowaliśmy podejścia całogenomowe do analizy obfitości transkryptów z komórek wirusa i gospodarza. W niniejszym materiale demonstramosmy przebieg infekcji komórek HeLa wirusem Vaccinia oraz pobieranie RNA w kilku punktach czasowych po infekcji. Całkowite RNA gospodarza i wirusa jest izolowane i amplifikowane w celu hybrydyzacji z macierzami mikroarray do analizy ekspresji genów.

Protokół infekcji komórek HeLa wirusem Vaccinia oraz analizy ekspresji genów gospodarza i wirusa. Część 1 z 3.

Infekcja wirusem vaccinia oraz analiza czasowa ekspresji genów wirusa: Część 1

Rodzina Poxviridae składa się z dużych wirusów zawierających dwuniciowy DNA, które replikują się wyłącznie w cytoplazmie zainfekowanych komórek. Członkowie ...

Badanie przebiegu czasowego infekcji komórek HeLa wirusem vaccinia rozpoczyna się od przygotowania infekcji wirusowej, zainfekowania komórek, a następnie wyizolowania RNA z zainfekowanych komórek w kilku punktach czasowych po infekcji. RNA to może zostać później amplifikowane w celu hybrydyzacji z mikromacierzami do analizy ekspresji genów. Witam, nazywam się Judy Ann z laboratorium Kate Irvins w Whitehead Institute for Biomedical Research.Dzisiaj zaprezentujemy procedurę zakażenia wirusem vaccinia w komórkach ssaczych w określonych odstępach czasu oraz następującą po nim ekstrakcję RNA z zakażonych komórek w różnych punktach czasowych po zakażeniu. Technika ta jest wstępnym etapem szerszego protokołu mającego na celu ekstrakcję i amplifikację RNA w celu oceny ekspresji genów wirusa podczas infekcji, co zostanie omówione w dwóch kolejnych filmach JoVE. Przejdźmy zatem do realizacji. Aby przygotować się do zakażenia, należy wyhodować komórki HeLa w kolbach i poczekać, aż komórki osiągną około 80% konfluencji.Następnie należy przygotować wystarczającą ilość pożywki do wzrostu wirusów na potrzeby eksperymentu. Wykorzystując standardowe DMEM z 2% FBS i bez dodatku antybiotyków, infekcj

vaccinia-virus-infection-temporal-analysis-virus-gene-expression-part

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Zakażenie wirusem ospy prawdziwej i czasowa analiza ekspresji genów wirusa: Część 1

Protokół infekcji komórek HeLa wirusem Vaccinia oraz analizy ekspresji genów gospodarza i wirusa. Część 2 z 3.

Infekcja wirusem vaccinia i analiza czasowa ekspresji genów wirusa: część 2

Protokół infekcji komórek HeLa wirusem Vaccinia oraz analizy ekspresji genów gospodarza i wirusa. Część 3 opisuje proces znakowania fluorescencyjnego namnożonego RNA z próbek gospodarza i wirusa poprzez sprzęganie barwników za pomocą grup aminoallilowych. Część 3 z 3.

Infekcja wirusem vaccinia i analiza czasowa ekspresji genów wirusowych: Część 3

Nowe czynniki gospodarza zaangażowane w infekcje wirusowe można zidentyfikować za pomocą komórkowego przesiewu RNAi w celu utraty funkcji w skali całego genomu. Model hodowli komórkowej Drosophila jest szczególnie podatny na to podejście ze względu na łatwość i wydajność RNAi. W niniejszym materiale prezentujemy tę technikę, posługując się wirusem vaccinia jako przykładem.

Przesiew RNAi w poszukiwaniu czynników gospodarza zaangażowanych w infekcję wirusem Vaccinia z wykorzystaniem komórek Drosophila

Wirusy onkolityczne stanowią obiecującą metodę terapeutyczną w leczeniu nowotworów. Zdolność do oceny podatności na zakażenie żywych próbek tkanek pobranych od pacjentów przed rozpoczęciem leczenia jest unikalną zaletą tego podejścia terapeutycznego. Niniejszy protokół opisuje sposób przygotowania tkanek do zakażenia ex vivo wirusem onkolitycznym oraz późniejszą kwantyfikację wirusa.

Ex Vivo zakażanie żywej tkanki wirusami onkolitycznymi

Opisujemy protokół służący do identyfikacji kluczowych ról cząsteczek sygnałowych gospodarza w litycznej replikacji modelowego herpeswirusa, gamma herpeswirusa 68 (γHV68). Wykorzystując genetycznie zmodyfikowane szczepy myszy oraz fibroblasty zarodkowe do litycznej replikacji γHV68, protokół ten umożliwia zarówno charakterystykę fenotypową, jak i analizę molekularną oddziaływań wirus-gospodarz podczas litycznej replikacji wirusa.

Analiza oddziaływań gospodarz-wirus podczas litycznej replikacji modelowego herpeswirusa

Opisano metodę śledzenia neuronów połączonych synaptycznie. Wykorzystujemy specyficzność TVA w komórce upstream, aby zbadać, czy interesująca nas populacja komórek otrzymuje sygnały synaptyczne od genetycznie zdefiniowanych typów komórek.

Wirusowe śledzenie genetycznie zdefiniowanych obwodów neuronalnych

Szybki i modułowy protokół generowania rekombinowanych wirusów krowianki wyrażających fluorescencyjnie znakowane białka jednocześnie przy użyciu metody przejściowej selekcji dominującej jest opisany tutaj.

Metodologia wydajnego wytwarzania znakowanych fluorescencyjnie białek wirusa krowianki

Opisujemy użycie fluorescencyjnego wirusa krowianki reporterowej, który umożliwia pomiar zakaźności wirusa i ekspresji genów w czasie rzeczywistym poprzez specyficzną dla etapu ekspresję spektralnie odrębnych fluoroforów reporterowych. Szczegółowo opisujemy metodę opartą na płytkach do dokładnej identyfikacji etapu, na którym replikacja wirusa jest zaburzona w odpowiedzi na hamowanie małych cząsteczek.

Wirusy reporterowe krowianki do ilościowego określania funkcji wirusa na wszystkich etapach ekspresji genów

Wirus krowianki (VV) jest szeroko stosowany w badaniach biomedycznych i poprawie zdrowia ludzkiego. W tym artykule opisano prostą, bardzo wydajną metodę edycji genomu VV przy użyciu systemu CRISPR-Cas9.

Proste i skuteczne podejście do konstruowania zmutowanych wektorów wirusa krowianki

Tutaj prezentujemy protokoły identyfikacji 1) kodowanych przez wirusa immunomodulatorów, które promują replikację arbowirusa i 2) eukariotycznych czynników gospodarza, które ograniczają replikację arbowirusa. Te metody oparte na fluorescencji i luminescencji pozwalają naukowcom szybko uzyskać ilościowe odczyty replikacji arbowirusa w uproszczonych testach o niskim stosunku sygnału do szumu.

Zakażenia arbowirusem jako narzędzia przesiewowe do identyfikacji immunomodulatorów wirusa i czynników przeciwwirusowych gospodarza

ICP0 ulega translokacji jądrowej do cytoplazmatycznej podczas infekcji HSV-1. Mechanizm molekularny tego zdarzenia nie jest znany. W tym miejscu opisujemy zastosowanie mikroskopu konfokalnego jako narzędzia do ilościowego określania ruchu ICP0 w zakażeniu HSV-1, co stanowi podstawę do ilościowej analizy translokacji ICP0 w przyszłych badaniach mechanistycznych.

Analiza czasowa translokacji jądrowej do cytoplazmatycznej białka wirusa opryszczki pospolitej 1 za pomocą immunofluorescencyjnej mikroskopii konfokalnej

Poznaj metodę zakażenia komórek HeLa wirusem krowianki i ekstrakcji RNA w różnych punktach czasowych. Ta technika umożliwia analizę ekspresji genów wirusa i gospodarza.

Infekcja wirusem vaccinia oraz analiza czasowa ekspresji genów wirusa: Część 1

Przeglądaj więcej filmów