Name: Wiedza o tym, co się liczy: bezstronna stereologia w mózgu naczelnych innych niż człowiek (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-05-14T00:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 25 s
Description: Poznaj bezstronną stereologię do szacowania liczby neuronów w mózgu naczelnych. Ta metoda pozwala dokładnie określić populacje komórkowe w zdefiniowanych obszarach mózgu.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy pragną podziękować Ikielowi Ptito za nieustające wsparcie techniczne. Grant NSERC dla MP.

<ol><li>West, M., Slomianka, L., Gundersen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unbiased+stereological+estimation+of+the+total+number+of+neurons+in+the+subdivisions+of+the+rat+hippocampus+using+the+optical+fractionator%5BTitle%5D)+AND+%22Aat+Rec%22%5BJournal%5D)">Unbiased stereological estimation of the total number of neurons in the subdivisions of the rat hippocampus using the optical fractionator.</a> Aat Rec. 231, 482-497 (1991).</li>
<li>Saper, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Any+way+you+cut+it%3A+a+new+journal+policy+for+the+use+of+unbiased+counting+methods%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Any way you cut it: a new journal policy for the use of unbiased counting methods.</a> J Comp Neurol. 364, 5-5 (1996).</li>
<li>Sterio, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+unbiased+estimation+of+number+and+sizes+of+arbitrary+particles+using+the+disector%5BTitle%5D)+AND+%22J+Microsc%22%5BJournal%5D)">The unbiased estimation of number and sizes of arbitrary particles using the disector.</a> J Microsc. 134, 127-136 (1984).</li>
<li>Mouton, P. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMouton%2C+PR+%22Principles+and+Practices+of+Unbiased+Stereology%22">Principles and Practices of Unbiased Stereology</a>. , The Johns Hopkins University Press. Baltimore. (2002).</li>
<li>Burke, M. W., Zangenehpour, S., Boire, D., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissecting+the+non-human+primate+brain+in+stereotaxic+space%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Dissecting the non-human primate brain in stereotaxic space.</a> J Vis Exp. 29, (2009).</li>
<li>Burke, M. W., Zangenehpour, S., Boire, D., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+banking%3A+Making+the+most+of+your+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Brain banking: Making the most of your research.</a> J Vis Exp. 29, (2009).</li>
<li>Manaye, K. F., Wang, P., O'Neil, J., Huafu, S., Tizabi, Y., Thompson, N., Ottinger, M. A., Ingram, D. K., Mouton, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuropathological+Quantification+Of+Dtg+APP%2FPS1%3A+Neuroimaging%2C+Stereology%2C+And+Biochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22AGE%22%5BJournal%5D)">Neuropathological Quantification Of Dtg APP/PS1: Neuroimaging, Stereology, And Biochemistry.</a> AGE. 29, 87-96 (2009).</li>
<li>Burke, M. W., Palmour, R. M., Ervin, F. R., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+reduction+in+frontal+cortex+of+primates+after+prenatal+alcohol+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Neuronal reduction in frontal cortex of primates after prenatal alcohol exposure.</a> Neuroreport. 20, 13-17 (2009).</li>
<li>Zangenehpour, S., Burke, M. W., Chaudhuri, A., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Batch+immunostaining+for+large-scale+protein+detection+in+the+whole+monkey+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Batch immunostaining for large-scale protein detection in the whole monkey brain.</a> J Vis Exp. 29, (2009).</li>
</ol>

Obiektywna stereologia w mózgu naczelnych jest podobna do tej stosowanej w innych próbkach biologicznych. Jednakże, biorąc pod uwagę rozmiar mózgu naczelnych, zaleca się staranne zaplanowanie procesu, ponieważ pojedyncza półkula małpy werwetkowej daje ponad 1200 sekcji przy cięciu o grubości 50µm. W pierwszej kolejności zalecamy stereotaksyczne dzielenie mózgu na bloki o wymiarach 1cm, co zapewnia standardową płaszczyznę cięcia pomiędzy blokami i osobnikami, minimalizuje liczbę sekcji częściowych pomiędzy blokami oraz za...

<table><tbody><tr><td>Stereologer</td><td>Stereology Resource Center (Chester, MD)</td><td>www.disector.com</td><td></td></tr><tr><td>System Stereology Tool-Kit Stereologer</td><td>BioQuant Life Sciences (Nashville, TN)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>StereoInvestigator</td><td>MBF Bioscience</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

wiedza o tym, co liczy się w analizie: nieobciążona stereologia w mózgu naczelnych zwierząt niebędących ludźmi

Knowing What Counts: Unbiased Stereology in the Non-human Primate Brain

Nieludzkie naczelne stanowią ważny gatunek translacyjny dla zrozumienia prawidłowego funkcjonowania i procesów chorobowych ludzkiego mózgu. Bezośrodkowa stereologia, metoda uznana za najnowocześniejszą w zakresie kwantyfikacji obiektów biologicznych w przekrojach tkanek2generuje wiarygodne dane strukturalne dotyczące cech biologicznych w mózgu ssaków3Kluczowymi elementami tego podejścia są nieobciążone (systematyczno-losowe) próbkowanie struktur zdefiniowanych anatomicznie (przestrzeni referencyjnych), połączone z kwantyfikacją liczby i wielkości komórek, długości włókien i kapilar, powierzchni, objętości regionalnych oraz rozmieszczenia przestrzennego obiektów biologicznych w obrębie przestrzeni referencyjnej4Jedną z zalet tych podejść stereologicznych w porównaniu z poprzednimi metodami jest uniknięcie wszystkich znanych źródeł błędów systematycznych (nielosowych), wynikających z błędnych założeń i nieweryfikowalnych modeli. Niniejsze badanie dokumentuje biologiczne zastosowanie stereologii komputerowej do oszacowania całkowitej populacji neuronów w korze przedczołowej mózgu małpy wierzchołkowej (Chlorocebus aethiops sabeus), przy wsparciu dwóch dostępnych komercyjnie programów stereologicznych: BioQuant Life Sciences oraz Stereologer (Rysunek 1). Oprócz kontrastu i porównania wyników z obu programów BioQuant iStereologersystemy, niniejsze badanie dostarcza szczegółowego protokołu dlaStereologer system

Anatomiczna organizacja mózgu naczelnych może dostarczyć istotnych informacji na temat stanów prawidłowych i patologicznych u ludzi. Obiektywna stereologia jest metodą dokładnego i wydajnego szacowania całkowitej liczby neuronów (lub innego typu komórek) w danym obszarze referencyjnym1.

Wiedza o tym, co liczy się w analizie: nieobciążona stereologia w mózgu naczelnych zwierząt niebędących ludźmi

Nieludzkie naczelne są istotnym gatunkiem translacyjnym w badaniach nad prawidłowym funkcjonowaniem oraz procesami chorobowymi ludzkiego mózgu. Obiektywne...

Procedurę rozpoczyna się od zdefiniowania przestrzeni odniesienia. W wyznaczaniu granic obszaru zainteresowania pomocny może być atlas stereotaksyczny. Następnie należy uporządkować preparaty i określić częstotliwość pobierania przekrojów.Wprowadź pierwszy przekrój przeznaczony do pobierania próbek do mikroskopu i uzupełnij parametry próbkowania. W systemie stereologicznym nad obszarem referencyjnym zostanie umieszczona siatka, a w każdym punkcie przecięcia pobierana będzie próbka za pomocą dysektora optycznego. Po pobraniu wszystkich dysektorów optycznych z każdego przekroju, system stereologiczny dostarczy wyników badania.Dzień dobry, jestem dr Mark Burke z Laboratorium Neuronauk Wizualnych w Szkole Optometrii na Uniwersytecie w Montrealu. Dzień dobry, jestem dr Shaheen Zur, również z Laboratorium Neuronauk Wizualnych w Szkole Optometrii na Uniwersytecie w Montrealu. Witam, jestem dr Morris Petto, dyrektor Laboratorium Neuronauk Wizualnych w Szkole Optometrii na Uniwersytecie w Montrealu.Dzisiaj przedstawimy procedurę przeprowadzania bezstronnej stereotaksji u naczelnych niebędących ludźmi. Stosujemy tę procedurę w naszym laboratorium w celu oszacowania całkowitej liczby populacj

knowing-what-counts-unbiased-stereology-in-the-non-human-primate-brain

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Znajomość tego, co liczy się: Niezaangażowana stereologia w mózgu naczelnych poza człowiekiem

Nieludzkie naczelne są istotnym gatunkiem translacyjnym dla naszego zrozumienia prawidłowych procesów zachodzących w mózgu. Organizacja anatomiczna mózgu naczelnych może dostarczyć ważnych informacji na temat stanów prawidłowych i patologicznych u ludzi.

Disekcja mózgu naczelnych zwierząt niebędących ludźmi w przestrzeni stereotaksycznej

Bankowanie mózgu i systematyczne pobieranie próbek materiału biologicznego stanowią podstawę do bezstronnej stereologii i pozwalają na maksymalne wykorzystanie danych uzyskanych z każdego preparatu.

Bankowanie mózgów: maksymalne wykorzystanie materiału badawczego

Źródło: Olesen, M. V., et al. Technika frakcjonowania optycznego do szacowania liczby komórek w szczurzym modelu terapii elektrowstrząsowej. J. Vis. exp. (2017).  Film demonstruje technikę ilościowego określania nowo wygenerowanych neuronów w tkance mózgowej. Wycinki tkanki hipokampa zawierające neurony znakowane bromodeoksyurydyną (BrdU) wybarwiono za pomocą immunohistochemii, a następnie określono ilościowo na całej grubości tkanki przy użyciu techniki frakcjonowania optycznego.

Kwantyfikacja nowo wygenerowanych neuronów w tkance mózgowej szczura przy użyciu techniki frakcjonowania optycznego

Zorganizowane procedury cięcia mózgu są konieczne, aby skorelować określone zjawiska neuropsychiatryczne z ostatecznymi diagnozami neuropatologicznymi. Cięcia mózgu są wykonywane w różny sposób w zależności od różnych kliniczno-akademickich okoliczności. Protokół ten opisuje symetryczną procedurę dwupółkulowego cięcia mózgu w celu zbadania różnic półkulowych w patologiach ludzkiego mózgu oraz maksymalizacji obecnych i przyszłych technik biomolekularnych/neuroobrazowania.

Symetryczne pośmiertne cięcie mózgu w bihemferze w celu zbadania zdrowych i patologicznych stanów mózgu u ludzi

Ten protokół opisuje zakrojone na szeroką skalę rekonstrukcje selektywnych populacji neuronów, oznaczonych po wstecznym zakażeniu zmodyfikowanym wirusem wścieklizny wyrażającym markery fluorescencyjne, oraz niezależne, bezstronne analizy klastrów, które umożliwiają kompleksową charakterystykę wskaźników morfologicznych wśród różnych podklas neuronów.

Rekonstrukcje na dużą skalę i niezależne, bezstronne grupowanie oparte na wskaźnikach morfologicznych w celu klasyfikacji neuronów w selektywnych populacjach

Tutaj prezentujemy metodę stereologiczną, frakcjonator optyczny, używany do ilościowego określenia powstawania nowych neuronów i ich przeżycia w hipokampie szczura po stymulacji elektrowstrząsowej. Przy prawidłowym wdrożeniu, czułość i wydajność metod stereologicznych zapewnia dokładne oszacowania ze stałą i z góry określoną precyzją.

Technika frakcjonowania optycznego do szacowania liczby komórek w szczurzym modelu terapii elektrowstrząsowej

Ta praca przedstawia krok po kroku protokół bezstronnego stereologicznego szacowania liczby komórek neuronalnych dopaminergicznych w istocie czarnej myszy przy użyciu standardowego sprzętu mikroskopowego (tj. mikroskopu świetlnego, zmotoryzowanej tabeli obiektów (płaszczyzna x, y, z) oraz oprogramowania do cyfrowej analizy obrazu.

Stereologiczne oszacowanie liczby neuronów dopaminergicznych w istocie czarnej myszy przy użyciu frakcjonatora optycznego i standardowego sprzętu mikroskopowego

Opisana poniżej metoda ma na celu dostarczenie kompleksowego protokołu do przygotowania neurochirurgii na naczelnych (NHP) przy użyciu nowatorskiego połączenia metod drukowania trójwymiarowego (3D) i ekstrakcji danych MRI.

Zestaw narzędzi oparty na rezonansie magnetycznym do planowania neurochirurgicznego u naczelnych

Ten protokół opisuje metody przeprowadzania rezonansu magnetycznego, oczyszczania i znakowania immunologicznego nienaruszonych mózgów myszy za pomocą iDISCO+, a następnie szczegółowy opis obrazowania za pomocą mikroskopii świetlnej i dalszych analiz za pomocą NuMorph.

Obrazowanie i analiza pojedynczych komórek całego mózgu nienaruszonych mózgów noworodków myszy za pomocą rezonansu magnetycznego, oczyszczania tkanek i mikroskopii świetlnej

Seryjna tomografia dwufotonowa (STPT) to technika obrazowania masy tkanki w jej trójwymiarowym kształcie poprzez połączenie obrazowania dwufotonowego z automatyczną kontrolą etapu i krojeniem mikrotomów. Tutaj opisujemy protokół jego implementacji dla mózgów marmozet, aby lepiej zrozumieć ich cechy strukturalne.

Seryjna tomografia dwufotonowa całego mózgu marmozety do analiz neuroanatomicznych

Współczesne neurobiologie muszą badać różnice między wieloma gatunkami, w tym gryzoniami laboratoryjnymi i ludźmi. Jednak trudności techniczne pojawiają się, gdy w grę wchodzą ssaki o dużym mózgu. Podejście to dotyczy zmienności międzygatunkowej populacji neuronalnych u bardzo różnych ssaków, co pozwala na porównywalne wyniki do mapowania w celu ujawnienia wzorców ewolucyjnych.

Podejście porównawcze do ilościowych badań liczenia komórek w bardzo różnych mózgach ssaków

Poznaj bezstronną stereologię do szacowania liczby neuronów w mózgu naczelnych. Ta metoda pozwala dokładnie określić populacje komórkowe w zdefiniowanych obszarach mózgu.

Wiedza o tym, co liczy się w analizie: nieobciążona stereologia w mózgu naczelnych zwierząt niebędących ludźmi

Przeglądaj więcej filmów