Name: Standaryzowane przygotowanie zawiesin jednokomórkowych z tkanki płucnej myszy przy użyciu dysocjatora gentleMACS (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-02T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 3 s
Description: Naucz się przygotowywać zawiesiny jednokomórkowe z tkanki płucnej myszy za pomocą dysocjatora gentleMACS. Ta metoda zapewnia wysoką liczbę żywych leukocytów i komórek śródbłonowych do dalszych badań.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy są pracownikami firmy Miltenyi Biotec GmbH, Niemcy.

Aby pracować w warunkach sterylnych, zaleca się wykonywanie wszystkich etapów w komorze z laminarnym przepływem powietrza.
1. Materiały
<ol>
<li>Bufor HEPES: 10 mM HEPES-NaOH pH 7.4, 150 mM NaCl, 5 mM KCl, 1 mM MgCl2, 1.8 mM CaCl2) </li>
<li>Roztwór kolagenazy D: Kolagenaza D: 100 mg/mL (Kolagenaza D &gt; 0.15 U/mg), w buforze HEPES </li>
<li>Roztwór DNazy I: 20 000 U/mL DNazy I </li>
<li>Bufor PBS o pH 7.2 </li>
<li>Bufor PEB: 1 część roztworu zapasowego BSA w 20 częściach roztworu płuczącego autoMACS </li>
<li>Tkanka: płuco pochodzące od dorosłej samicy myszy BALB/C w wieku 6/7 tygodni, oczyszczone z przyległych narządów.</li>
<li>Opcjonalnie: CD11c MicroBeads, kolumny MACS MS, separator MACS do izolacji komórek dendrytycznych z zawiesiny pojedynczych komórek płuca myszy</li>
</ol>
2. Dysocjacja tkanki płucnej
<ol>
<li>Płucz tkankę w szalce Petri z PBS w celu usunięcia erytrocytów.</li>
<li>Przenieś maksymalnie 450 mg tkanki płucnej do probówki gentleMACS C Tube zawierającej 4,9 mL buforu HEPES.</li>
<li>Dodaj 100 μL roztworu kolagenazy D, aby uzyskać stężenie końcowe 2 mg/ml kolagenazy D.</li>
<li>Dodaj 10 μL roztworu DNazy I dla maksymalnie 150 mg tkanki (stężenie końcowe 40 U/ml DNazy I) lub 20 μL DNazy I dla 150-450 mg tkanki płucnej (stężenie końcowe 80 U/mL DNazy I).</li>
<li>Szczelnie zamknij probówkę C Tube i zamocuj ją w dysocjatorze gentleMACS. Następnie uruchom program „m_lung_01”.</li>
<li>Inkubuj przez 30 min w temperaturze 37°C przy automatycznej rotacji lub obracając probówkę ręcznie co 5 min.</li>
<li>Umieść próbkę z powrotem w dysocjatorze gentleMACS i uruchom program „m_lung_02”.</li>
</ol>
3. Filtracja
<ol>
<li>Przygotuj probówkę 50 mL do zbierania przefiltrowanych komórek, zastępując nakrętkę sitkiem komórkowym o rozmiarze oczek 70 μm.</li>
<li>Po zakończeniu drugiego programu gentleMACS można krótko odwirować probówkę w celu zebrania materiału próbki na dnie, w zależności od rozkładu materiału w probówce.</li>
<li>Pobierz komórki przez szczelną membranę nakrętki probówki C za pomocą odpowiedniej końcówki do pipety 1000 μl i nanieś je na sitko komórkowe.</li>
<li>Przemyj sitko komórkowe 5 ml buforu HEPES w RT.</li>
<li>Odwirowuj komórki w probówce 50 mL z prędkością 300xg przez 10 min, aby uzyskać osad.</li>
<li>Odsącz nadsącz i resuspenduj osad komórkowy w pożądanej objętości buforu PEB.</li>
</ol>
Część 4: Reprezentatywne wyniki:
<img src="/files/ftp_upload/1266/1266fig1.jpg" alt="Wykres kropkowy z cytometrii przepływowej, FL-2 vs. FL-3, marker PI, analiza 92% populacji komórek." data-altupdatedat="1761735611000" data-alt="Rysunek 1"> Rysunek 1. Dysocjacja płuc z użyciem dysocjatora gentleMACS™ pozwoliła na uzyskanie 92% żywych komórek. Martwe komórki zostały zabarwione fluorescencyjnie jodkiem propidyny (PI) (prawy wykres kropkowy; lewy wykres kropkowy: brak zabarwienia PI).
<img src="/files/ftp_upload/1266/1266fig2.jpg" alt="Wykresy kropkowe cytometrii przepływowej, CD45-PE vs. CD146-FITC i CD31-FITC, analiza populacji komórek." data-altupdatedat="1761735611000" data-alt="Rysunek 2"> Rysunek 2. Dysocjacja tkanki płuc myszy przy użyciu systemu gentleMACS Dissociator skutkuje wysokim odsetkiem żywych leukocytów i komórek śródbłonka. Otrzymane zawiesiny jednokomórkowe barwiono przeciwciałami CD45-PE i CD146-FITC lub CD31-FITC, a następnie analizowano metodą cytometrii przepływowej.
<img src="/files/ftp_upload/1266/1266figure2c.png" alt="Wykres kropkowy z cytometrii przepływowej, Anti-mPDCA-1 vs. CD11c, immunofenotypowanie, analiza populacji komórek." data-altupdatedat="1761735611000" data-alt="Rycina 2C"> Rycina 3. Zawiesina pojedynczych komórek uzyskana z tkanki płuc myszy została zabarwiona przeciwciałami CD11c-FITC oraz Anti-mPDCA-1-APC w celu wykrycia mysich plazmacytoidalnych komórek dendrytycznych CD11clow m-PDCA-1+ oraz komórek CD11chigh.
 <img src="/files/ftp_upload/1266/1266fig4.jpg" alt="Analiza cytometrii przepływowej; wykresy kropkowe CD11c-PE względem Anti-MHC Class II-FITC przed i po wzbogaceniu." data-altupdatedat="1761735611000" data-alt="Rycina 4"> Rycina 4. Wzbogacenie komórek dendrytycznych przy użyciu CD11c MicroBeads, separatora MiniMACS i dwóch kolumn MS.

<ol><li>Swanson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flt3-Ligand%2C+IL-4%2C+GM-CSF%2C+and+Adherence-Mediated+Isolation+of+Murine+Lung+Dendritic+Cells%3A+Assessment+of+Isolation+Technique+on+Phenotype+and+Function%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Flt3-Ligand, IL-4, GM-CSF, and Adherence-Mediated Isolation of Murine Lung Dendritic Cells: Assessment of Isolation Technique on Phenotype and Function.</a> J. Immunol. 173, 4875-4881 (2004).</li>
<li>Vermaelen, K., Pauwels, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accurate+and+simple+discrimination+of+mouse+pulmonary+dendritic+cell+and+macrophage+populations+by+flow+cytometry%3A+Methodology+and+new+insights%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+Part+A%22%5BJournal%5D)">Accurate and simple discrimination of mouse pulmonary dendritic cell and macrophage populations by flow cytometry: Methodology and new insights.</a> Cytometry Part A. 61A, 170-177 (2004).</li>
</ol>

Autorzy są pracownikami firmy Miltenyi Biotec GmbH, która produkuje instrument wykorzystany w niniejszym artykule.

W tym filmie przedstawiamy nową metodę dysocjacji tkanki płuc myszy. Wykazujemy, że połączenie obróbki mechanicznej i enzymatycznej tkanki płucne pozwoliło na uzyskanie wysokiego odsetka żywotnych leukocytów oraz komórek śródbłonka. W szczególności dezintegracja mechaniczna tkanki została przeprowadzona za pomocą urządzenia gentleMACS Dissociator. Probówki gentleMACS C Tubes zawierają system rotor-stator, który dysocjuje tkankę w sposób łagodny. Procedura jest sterowana przez ustawienia programu urządzenia. Parametry zos...

<table><tbody><tr><td>Probówki C Tube</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Nr katalogowy 130-093-237</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>gentleMACS&amp;#8482; Zestaw startowy</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Nr zamówienia 130-093-235</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>MACSmix&amp;#8482; Rotator do probówek</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Nr zamówienia 130-090-753</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_251_MACSmix_Tube_Rotator.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_251_MACSmix_Tube_Rotator.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>autoMACS&amp;#8482; roztwór płuczący</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Nr kat. 130-091-222</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>MACS&amp;#174; roztwór zapasowy BSA</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Nr zamówienia 130-091-376</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>CD11c MicroBeads</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Nr zamówienia 130-052-001</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_93_132_CD11c_MicroBeads.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_93_132_CD11c_MicroBeads.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>CD11c-FITC, CD11c-PE</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Nr zamówienia 130-092-026130-091-830</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_329_CD11c.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_329_CD11c.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Anti-mPDCA-1-APC</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Nr zamówienia 130-091-963</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_325_Anti_mPDCA_1.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_325_Anti_mPDCA_1.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>CD146-FITC</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Nr zamówienia 130-092-026</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_417_CD146_LSEC_.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_417_CD146_LSEC_.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>CD45-PE</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Nr katalogowy 130-091-610</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_331_CD45.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_331_CD45.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Roztwór jodku propidyny</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Nr zamówienia 130-093-233</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Końcówki do pipet z wydłużonym zasięgiem Art 1000</td><td>Molecular BioProducts</td><td>Nr zamówienia 2079</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.mbpinc.com/ASP/products.aspx?query_TipID=61&quot;&gt;http://www.mbpinc.com/ASP/products.aspx?query_TipID=61&lt;/a&gt;&lt;W celu zapewnienia pracy w warunkach sterylnych zaleca się wykonywanie wszystkich etapów w komorze z laminarnym przepływem powietrza.

1. Materiały
Bufor HEPES: 10 mM HEPES-NaOH pH 7,4, 150 mM NaCl, 5 mM KCl, 1 mM MgCl2, 1,8 mM CaCl2
Roztwór kolagenazy D: Kolagenaza D: 100 mg/ml (Kolagenaza D > 0,15 U/mg) w buforze HEPES
Roztwór DNazy I: 20 000 U/ml DNazy I
Bufor PBS o pH 7,2
Bufor PEB: 1 część roztworu zapasowego BSA w 20 częściach roztworu płuczącego autoMACS
Tkanka: płuco pobrane od dorosłej samicy myszy BALB/C w wieku 6/7 tygodni, oczyszczone z przyległych narządów.
Opcjonalnie: CD11c MicroBeads, kolumny MACS MS, separator MACS do izolacji komórek dendrytycznych z zawiesiny pojedynczych komórek płuca mysiego.

2. Dysocjacja tkanki płucnej
Opłukać tkankę w naczyniu Petriego zawierającym PBS w celu usunięcia erytrocytów. Przenieść maksymalnie 450 mg tkanki płucnej do probówki gentleMACS C Tube zawierającej 4,9 ml buforu HEPES. Dodać 100 μl roztworu kolagenazy D do uzyskania stężenia końcowego 2 mg/ml kolagenazy D. Dodać 10 μl roztworu DNazy I dla ilości tkanki do 150 mg (stężenie końcowe 40 U/ml DNazy I) lub 20 μl DNazy I dla 150–450 mg tkanki płucnej (stężenie końcowe 80 U/ml DNazy I). Szczelnie zamknąć probówkę C Tube i zamocować ją w dysocjatorze gentleMACS. Następnie uruchomić program „m_lung_01”. Inkubować przez 30 min w temperaturze 37°C przy automatycznej rotacji lub ręcznym obracaniu co 5 min. Umieścić próbkę ponownie w dysocjatorze gentleMACS i uruchomić program „m_lung_02”.

3. Filtracja
Przygotować probówkę 50 ml do zbierania przefiltrowanych komórek, zastępując zakrętkę sitkiem komórkowym o rozmiarze oczek 70 μm. Po zakończeniu drugiego programu gentleMACS, w zależności od rozkładu materiału w probówce, można krótko odwirować probówkę, aby zebrać materiał na dnie. Pobrać komórki przez szczelną membranę zakrętki probówki C Tube za pomocą odpowiedniej końcówki do pipety 1000 μl i nanieść je na sitko komórkowe. Przemyć sitko komórkowe 5 ml buforu HEPES w temperaturze pokojowej. Odwirować komórki w probówce 50 ml przy 300xg przez 10 min do uzyskania osadu. Odessać supernatat i resuspender osad komórkowy w pożądanym objętości buforu PEB.

Część 4: Reprezentatywne wyniki
Rysunek 1. Dysocjacja płuc za pomocą dysocjatora gentleMACS™ pozwoliła uzyskać 92% żywych komórek. Komórki martwe zabarwiono fluorescencyjnie jodkiem propidyny (PI) (wykres kropkowy po prawej; wykres kropkowy po lewej: bez barwienia PI).
Rysunek 2. Dysocjacja tkanki płucnej myszy przy użyciu dysocjatora gentleMACS skutkuje wysokim odsetkiem żywych leukocytów i komórek śródbłonkowych. Otrzymane zawiesiny pojedynczych komórek zabarwiono przeciwciałami CD45-PE i CD146-FITC lub CD31-FITC, a następnie poddano analizie w cytometrii przepływowej.
Rysunek 3. Zawiesina pojedynczych komórek pochodząca z tkanki płucnej myszy została zabarwiona przeciwciałami CD11c-FITC i Anti-mPDCA-1-APC w celu wykrycia mysich plazmocytoidalnych komórek DC CD11clow m-PDCA-1+ oraz komórek CD11chigh.
Rysunek 4. Wzbogacenie komórek dendrytycznych przy użyciu CD11c MicroBeads, separatora MiniMACS i dwóch kolumn MS.&gt;&lt;a href=&quot;http://www.mbpinc.com/html/products/art/display.html&quot;&gt;http://www.mbpinc.com/html/products/art/display.html&lt;/a&gt;</td></tr></tbody></table>

standaryzowane przygotowanie zawiesin pojedynczych komórek z tkanki płuc myszy przy użyciu dysocjatora gentlemacs

Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator

Przygotowanie zawiesin pojedynczych komórek z tkanek jest istotnym warunkiem wstępnym dla wielu eksperymentów w badaniach nad komórkami. Proces dysocjacji całych narządów wymaga zastosowania specyficznych parametrów, aby w sposób powtarzalny uzyskać wysoką liczbę żywych komórek. Urządzenie gentleMACS Dissociator optymalizuje to zadanie dzięki prostemu i praktycznemu protokołowi. Instrument posiada zaprogramowane ustawienia zoptymalizowane pod kątem wydajnej, a zarazem łagodnej dysocjacji różnych typów tkanek, w tym płuc myszy. W niniejszej publikacji zaprezentowano zastosowanie urządzenia gentleMACS Dissociator w odniesieniu do tkanki płucnej pochodzącej od myszy.

Dysocjacja komórek z określonych typów tkanek wymaga zastosowania specyficznych parametrów agitacji tkanki, aby uzyskać dużą liczbę żywotnych komórek zdolnych do hodowli. Dysocjator Miltenyi gentleMACS optymalizuje to zadanie dzięki prostemu i praktycznemu protokołowi. W niniejszej publikacji wyjaśniono sposób wykorzystania tego urządzenia w odniesieniu do tkanki płucnej.

Standaryzowane przygotowanie zawiesin pojedynczych komórek z tkanki płuc myszy przy użyciu dysocjatora gentleMACS

Przygotowanie zawiesin pojedynczych komórek z tkanek jest istotnym warunkiem wstępnym dla wielu eksperymentów w badaniach nad komórkami. Proces...

W tym protokole wideo dowiedzą się Państwo, jak dysocjować tkankę płuc dorosłej myszy przy użyciu zestawu GentleMACS po uprzedniej dysocjacji tkanki płucnej. W obecności kolagenazy D i DNazy I zawiesiny komórkowe są filtrowane przez sitko komórkowe o rozmiarze 70 µm, wirowane i zawieszane do dalszych zastosowań. Witajcie, nazywam się Melanie Mlu z Miltenyi Biotec w Niemczech.Dzisiaj zaprezentuję powtarzalną i zautomatyzowaną procedurę przygotowania zawiesiny pojedynczych komórek z tkanki płuca myszy przy użyciu systemu dysocjacji GenX. W naszym laboratorium stosujemy tę procedurę do przygotowania zawiesin pojedynczych komórek w celu wyizolowania leukocytów lub komórek śródbłonka. Zatem zaczynajmy.Przed rozpoczęciem protokołu należy przygotować kilka standardowych roztworów. Po pierwsze, będziemy potrzebować buforu Hebes. Po drugie, roztworu kolagenazy D zawierającego 100 mg/mL enzymu w buforze Hebes.Po trzecie, roztwór dase one zawierający 20 000 jednostek na mililitr dase one. Na koniec dwa powszechnie stosowane roztwory buforowe: typowy bufor PBS o pH 7,2 oraz bufor PEB przygotowany z roztworu płuczącego AutoMax i roztworu zapasowego BSA.Protokół rozpoczynamy od wypreparowanego p

standardized-preparation-single-cell-suspensions-from-mouse-lung

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Standaryzowane przygotowanie zawiesin jednokomórkowych z tkanki płucnej myszy przy użyciu dysocjatora gentleMACS

Niniejszy film opisuje prostą i oszczędzającą czas technikę automatycznej dysocjacji tkanek z użyciem dysocjatora gentleMACS w celu przygotowania zawiesin pojedynczych komórek splenocytów mysich.

Przygotowanie zawiesin pojedynczych komórek ze śledziony myszy z użyciem dysocjatora gentleMACS

Dysocjacja komórek z konkretnych typów tkanek wymaga zastosowania specyficznych parametrów agitacji tkanki, aby uzyskać wysoką liczbę żywych komórek zdolnych do hodowli. Urządzenie Miltenyi gentleMACS Dissociator optymalizuje to zadanie dzięki prostemu, praktycznemu protokołowi. W niniejszej publikacji wyjaśniono zastosowanie tego urządzenia w odniesieniu do tkanki nerwowej.

Przygotowanie zawiesin pojedynczych komórek z tkanki nerwowej myszy

W niniejszym artykule prezentujemy izolację mysich rezydentnych mezenchymalnych komórek macierzystych płuc (lung MSC), ich ekspansję, charakterystykę oraz analizę właściwości immunomodulacyjnych.

Izolacja &amp;#38; Charakterystyka barwnika Hoechstniski CD45ujemny Mezenchymalne komórki macierzyste płuc myszy

Opisano metodę otrzymywania wysoce oczyszczonej preparacji komórek dendrytycznych z płuc myszy. Szczególny nacisk położono na izolację podgrupy konwencjonalnych komórek dendrytycznych.

Izolacja komórek dendrytycznych z płuc myszy

Ten film opisuje przygotowanie zawiesiny komórek płuc myszy do analizy metodą cytometrii przepływowej w celu zbadania ekspresji PD-L1 komórek gruczolakoraka płuc.

Przygotowanie płuc myszy do cytometrii przepływowej: generowanie zawiesiny komórkowej z tkanki płucnej do analizy cytometrii przepływowej

Ta praca opisuje standaryzację metody uzyskiwania oczyszczonych populacji komórek rozrodczych z tkanki jąder różnych gatunków ssaków. Jest to prosty protokół, który łączy mechaniczną dysocjację jąder, barwienie za pomocą Hoechst-33342 i jodku propidyny oraz sortowanie FACS, z szerokim zastosowaniem w badaniach porównawczych biologii rozrodu mężczyzn.

Ustandaryzowane podejście do wielogatunkowego oczyszczania męskich komórek rozrodczych ssaków za pomocą mechanicznej dysocjacji tkanek i cytometrii przepływowej

To badanie przedstawia dwie kluczowe techniki eksperymentalne: budowę mysiego modelu rany do oceny zamknięcia rany oraz przygotowanie zawiesin jednokomórkowych z mysiej skóry w celu zachowania żywotności komórek.

Modele ran u myszy i przygotowanie zawiesin pojedynczych komórek

Dostarczamy szczegółowy protokół do izolowania i identyfikacji rzadkich populacji limfocytów T specyficznych dla antygenu w płucach myszy poprzez magnetyczne wzbogacanie limfocytów T na bazie kulek magnetycznych i tetramery peptydu:głównego kompleksu zgodności tkankowej (MHC).

Identyfikacja rzadkich limfocytów T specyficznych dla antygenu z płuc myszy za pomocą peptydów: głównych tetramerów kompleksu zgodności tkankowej

Ten protokół szczegółowo opisuje izolację żywych populacji immunologicznych i nieimmunologicznych z płuc myszy w stanie ustalonym i po zakażeniu grypą. Zapewnia również strategie bramkowania do identyfikacji podzbiorów komórek nabłonkowych i szpikowych.

Izolacja żywych populacji komórek szpikowych i nabłonkowych z płuc myszy

Protokół opisany poniżej jest prostym i skutecznym sposobem na izolację komórek zawierających retinoidy z wysoce heterogenicznych populacji komórek płuc poprzez wykorzystanie specyficznej autofluorescencji retinoidów i zastosowanie sortowania komórek aktywowanego fluorescencją.

Izolacja komórek płuc zawierających retinoidy przez sortowanie komórek

Protokół ten przedstawia szczegółową metodę izolowania wysokiej jakości zawiesin pojedynczych komórek zarówno ze zdrowej, jak i z guzowymi tkankami płuc myszy. Protokół ten może być stosowany w scRNA-seq, analizie cytometrii przepływowej oraz izolacji komórek pierwotnych.

Optymalizacja przygotowania całej tkanki płucnej z guzem myszy do cytometrii przepływowej i sekwencjonowania RNA pojedynczego komórkowego

Naucz się przygotowywać zawiesiny jednokomórkowe z tkanki płucnej myszy za pomocą dysocjatora gentleMACS. Ta metoda zapewnia wysoką liczbę żywych leukocytów i komórek śródbłonowych do dalszych badań.

Standaryzowane przygotowanie zawiesin pojedynczych komórek z tkanki płuc myszy przy użyciu dysocjatora gentleMACS

Przeglądaj więcej filmów