Wytwarzanie eksperymentalnych tętniaków aorty brzusznej u myszy z wykorzystaniem elastazy

Ta procedura chirurgiczna stosowana do wytwarzania tętniaka aorty brzusznej rozpoczyna się od cięcia w linii pośrodkowej brzucha. Zawartość jamy brzusznej zostaje odsunięta, a wszystkie odgałęzienia aorty zostają podwiązane. Proksymalna i dystalna część aorty zostają zamknięte za pomocą więzadeł.

Serce nakłuwa się igłą, a następnie podaje się dużą ilość elastazy przez zwężaną termicznie rurkę polietylenową. Po zakończeniu podaży zamyka się autotomię AOR. Przewiązki zostają usunięte, aorta wypełnia się krwią, a jamę brzuszną zamyka się.

Następnie pozwala się myszy na regenerację, a tętniak ulegnie całkowitemu rozszerzeniu w ciągu 14 dni. Cześć, nazywam się Julian Asma z laboratorium Fetal Cell w Katedrze Medycyny Sercowo-Naczyniowej na Uniwersytecie Stanforda. Dzisiaj zaprezentuję procedurę indukowania eksperymentalnego tętniaka aorty brzusznej za pomocą elastazy.

W naszym laboratorium stosujemy tę procedurę do badania tętniaków tętnicy brzusznej. Zacznijmy zatem. Aby rozpocząć eksperymenty, wybierz odpowiednią mysz, na przykład szczep C 57 black six, i zpodaj jej izofluran drogą wziewną aż do utraty przytomności. Należy pamiętać, że tempo wzrostu tętniaka może różnić się w zależności od szczepu myszy.

Wyjąć znieczuloną mysz z komory i umieścić ją na odpowiednio oświetlonym stanowisku preparacyjnym. Wygoić sierść z brzucha, od końca kości krzyżowej do nasady kończyn. W celu usunięcia pozostałej sierści zastosować krem do depilacji.

Przetrzyj odsłoniętą skórę 70% alkoholem, aż wszystkie włosy zostaną usunięte z ogolonego obszaru. Następnie przemyj skórę Betadyną co najmniej trzy razy, przecierając ją alkoholem pomiędzy kolejnymi aplikacjami. Teraz ułóż mysz na plecach w polu operacyjnym, aby utrzymać ją w stanie nieprzytomności.

Podczas operacji należy umieścić w nozdrzach rurkę podającą izofluran z tym samym przepływem, który był stosowany podczas indukcji znieczulenia. Elastazę należy przechowywać w lodzie, a następnie pobrać do strzykawki. Strzykawkę należy zacisnąć i umieścić obok pola operacyjnego, a następnie podłączyć cewnik.

Ważne jest, aby końcówka cewnika pozostała sterylna, co osiąga się poprzez umieszczenie jej w sterylnej fiolce. Przed rozcięciem myszy należy upewnić się, że zastosowana zostanie technika sterylna. Pracę należy rozpocząć od założenia sterylnych rękawiczek.

Instrumenty chirurgiczne, nożyczki, igłotrzymacze i pęsety muszą zostać zdezynfekowane przed operacją. Należy poświęcić chwilę na zweryfikowanie przygotowań i spróbować wyeliminować wszelkie inne potencjalne źródła zanieczyszczeń podczas zabiegu. Jeśli w trakcie procedury zostanie naruszona technika sterylna, należy ponownie wysterylizować instrument w sterylizatorze koralikowym.

Po przygotowaniu wszystkich elementów rozpocząć operację od długiego cięcia w linii pośrodkowej brzucha w obrębie jamy brzusznej. Przesunąć zawartość jamy brzusznej do wolnej przestrzeni lub odsunąć ją na zewnątrz brzucha za pomocą sterylnej gazy, aby odsłonić aortę brzuszną. Następnie za pomocą pęsety ostrożnie wyizolować aortę brzuszną na odcinku od poziomu lewej żyły nerkowej do miejsca jej rozwidlenia.

W przedstawionym przypadku występuje pojedyncza gałąź znajdująca się powyżej miejsca ligacji aorty, w związku z czym nie wymaga ona podwiązania. Jeśli między miejscami dystalnej i proksymalnej ligacji aorty znajdują się odgałęzienia aorty, należy podwiązać te gałęzie w odległości jednego centymetra od rozwidlenia za pomocą szwów 10-0. W częściach proksymalnej i dystalnej aorty należy umieścić tymczasowe podwiązania z jedwabiu 6.0, aby zatrzymać przepływ krwi.

Następnie przeprowadź autotomię w miejscu rozwidlenia. Rozpocznij od nakłucia rozwidlenia igłą o rozmiarze 30 G. Przez miejsce autotomii AOR można wprowadzić termicznie zwężaną rurkę polietylenową i zabezpieczyć ją węzłem.

Za pomocą pęsety ostrożnie i delikatnie wprowadź rurkę do aorty. Należy uważać, aby nie uszkodzić warstwy śródbłonka, stosując ciśnienie 100 milliliters. Aortę perfundowano elastazą z worka z solą fizjologiczną zawieszonego na wysokości 136 centimeters.

Należy upewnić się, że w probówce nie ma powietrza, w przeciwnym razie ciśnienie nie będzie dokładne. Sól fizjologiczna zawiera 4,5 jednostek na mililitr elastazy trzustkowej świni typu jeden; wypełnienie aorty powinno zająć od 5 do 15 minut.

Podczas perfuzji aorta zazwyczaj rozszerza się do około 140% swojej pierwotnej średnicy. Po zakończeniu procedury należy usunąć układ perfuzyjny i zamknąć aortotomię szwem 10-0, aby uniknąć zwężenia. Po zamknięciu aortotomii należy również usunąć ligaturę dystalną.

Jeśli z naprawionego otworu nie występuje krwawienie lub jest ono niewielkie, usuwa się podwiązkę proksymalną. W przypadku wystąpienia krwawienia należy założyć dodatkowe tymczasowe podwiązki nasiąknięte o rozmiarze 6.0 w częściach proksymalnej i dystalnej aorty oraz dodać kolejny szew, aby całkowicie zamknąć autotomię aortą. Po usunięciu podwiązki proksymalnej rozszerzona aorta natychmiast wypełni się krwią.

Po zakończeniu procedury na aorcie, należy wprowadzić jelita z powrotem do jamy brzusznej. Jeśli zostały one odsunięte, jelita wsuną się jako jedna duża całość, więc nie ma potrzeby przejmować się ich ułożeniem. Po umieszczeniu wszystkich organów na ich właściwych miejscach, ranę zewnętrzną można zamknąć w dwóch warstwach, używając sześciu szwów z nylonu oraz polipropylenu.

Następnie należy podać myszy znieczulenie miejscowe, np. jedną kroplę 0,25%boop ICAN na każdy centymetr cięcia. Podaje się również jedną dawkę leku przeciwzapalnego Carin w dawce 5 mg/kg drogą podskórną. Zabieg chirurgiczny jest zakończony, a mysz należy umieścić w ciepłym miejscu, aby mogła odzyskać przytomność.

Wybudzenie następuje zazwyczaj w ciągu 15 minut. Gdy mysz odzyska przytomność, zostaje umieszczona w pojedynczej klatce i poddana okresowej obserwacji aż do pełnego powrotu do sprawności. Po zabiegu aorta zazwyczaj rozszerza się do około 140 do 160% jej pierwotnej średnicy.

Wstępna dylatacja jest obserwowana wraz ze stabilizacją do siódmego dnia. Szybka dylatacja wtórna następuje między siódmym a czternastym dniem. W czternastym dniu tętniak może być zaobserwowany w aorcie podnerkowej.

Właśnie zaprezentowałem sposób indukowania tętniaka aorty brzusznej za pomocą elastazy u myszy. Podczas przeprowadzania tej procedury ważne jest, aby uniknąć powstawania zakrzepów krwi wewnątrz aorty brzusznej. To wszystko.

Dziękujemy za obejrzenie materiału i życzymy powodzenia w przeprowadzaniu eksperymentu.