Name: Test inwazji guza FluoroBlok in vitro (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 53 s
Description: Poznaj metodę pomiaru inwazji komórek nowotworowych przy użyciu systemu FluoroBlok z barwieniem fluorescencyjnym. Technika ta pozwala badać migrację przez błonę podstawną w badaniach nad rakiem.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Post-etykietowanie i pomiar z użyciem barwnika fluorescencyjnego BD calcein AM
Komórki są znakowane w celu ilościowego oznaczenia po tym, jak przejdą przez macierz BD Matrigel i membranę BD FluoroBlok. W konsekwencji możliwe jest uzyskanie jedynie pomiaru końcowego inwazji komórkowej.
<ol>
<li>Hodować komórki do uzyskania ok. 80% konfluencji.</li>
<li>Przygotować i rehydratyzować system wkładkowy.<ol style="list-style-type:lower-alpha;">
<li>Wyjąć opakowanie z przechowywania w temperaturze -20°C i doprowadzić je do temperatury pokojowej.</li>
<li>Otworzyć foliowe opakowanie i dodać 500 μL ciepłego (37°C) medium do wnętrza studni wkładkowych. Pozostawić płytkę do rehydratyzacji na 2 godziny w temperaturze 37°C, w atmosferze 5% CO2. Uwaga: Nie ma potrzeby rehydratyzowania niepowlekanego systemu wkładkowego BD Falcon FluoroBlok 24-Multiwell Insert System, który będzie służył jako kontrola migracji komórek.</li>
<li>Po rehydratyzacji ostrożnie usunąć medium ze studni wkładkowych, nie naruszając warstwy BD Matrigel Matrix na membranie. System jest teraz gotowy do użycia.</li>
</ol></li>
<li>Przygotować zawiesiny komórkowe poprzez trypsynizację monowarstw komórkowych i resuspensję komórek w bezserowym DMEM w stężeniu 5 x 104 komórek/mL. Uwaga: W przypadku użycia innego typu komórek należy wyznaczyć optymalną gęstość wysiewu. Aby wyznaczyć optymalną gęstość wysiewu dla danego typu komórek na porowatej powierzchni wzrostu, należy zastosować zakres gęstości wysiewu (komórek/cm2), który obejmuje gęstość wysiewu stosowaną na powierzchniach nieporowatych (np. w kolbach, naczyniach i płytkach). Na przykład, jeśli obecnie stosuje się wysiew w gęstości 2,5 x 105 komórek/cm2, należy wysiać komórki w różnych stężeniach między 5 x 104 a 5 x 105 komórek/cm2, aby wyznaczyć optymalną początkową gęstość wysiewu.</li>
<li>Dodać 500 μL zawiesiny komórkowej (2,5 x 104 komórek) do komór apikalnych.</li>
<li>Dodać 750 μL chemoatraktanta (5% FBS w DMEM) do każdej z komór bazalnych, korzystając z portów próbkowych w celu uzyskania dostępu.</li>
<li>Inkubować system BD BioCoat Tumor Invasion System oraz niepowlekaną płytkę wkładkową BD Falcon FluoroBlok 24-Multiwell Insert Plate przez 20-22 godziny w temperaturze 37°C, w atmosferze 5% CO2.</li>
<li>Po inkubacji ostrożnie usunąć medium z komór apikalnych. Można to zrobić, wylewając zawartość do pojemnika na odpady. Nie dotykać dolnej powierzchni systemu wkładkowego.</li>
<li>Przenieść system wkładkowy do drugiej płytki 24-dołkowej zawierającej 500 μL/studnię roztworu 4 μg/mL Calcein AM w HBSS. Inkubować przez 1 godzinę w temperaturze 37°C, 5% CO2. Roztworu Calcein AM nie usuwa się z dolnej komory przed odczytem fluorescencji, ponieważ jest to niewykazujący fluorescencji barwnik witalny, który jest przekształcany w zieloną fluorescencyjną kalceinę przez esterazy cytozolowe.</li>
<li>Fluorescencję komórek, które dokonały inwazji, odczytuje się przy długościach fal 494/517 nm (Ex/Em) za pomocą fluorescencyjnego czytnika płytek z odczytem od dołu. Wartość wzmocnienia (gain) może wymagać empirycznego ustalenia, jednak średnia wartość wzmocnienia powinna być wystarczającym punktem wyjścia. Zbyt wysokie ustawienie wzmocnienia może prowadzić do nasycenia detektora w przypadku próbek o silnej fluorescencji, co może uniemożliwić uzyskanie wiarygodnych wyników. Nie zaleca się stosowania funkcji autogain (jeśli jest obsługiwana przez czytnik). Do weryfikacji wyników można użyć odwróconego mikroskopu fluorescencyjnego; jest to szczególnie pomocne przy pierwszym wykonaniu tego testu. Uwaga: Jest niezwykle ważne, aby odczyty z systemów wkładkowych były wykonywane przy użyciu poprawnego mapowania płytki. Informacje na temat ładowania map płytek znajdują się w biuletynie technicznym BD nr 436 na stronie www.bdbiosciences.com lub można skontaktować się z pomocą techniczną BD (labware@bd.com). Prawidłowa orientacja płytki to studnia A1 w lewym górnym rogu i logo BD Falcon skierowane w prawo podczas wsuwania płytki do czytnika.</li>
</ol>
Redukcja danych
Dane przedstawiono w następującym równaniu: <img src="/files/ftp_upload/1475/1475eqa.jpg" alt="Obliczenie inwazji komórek; równanie dla % inwazji z użyciem wartości RFU, analiza migracji i chemotaksji." data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Równanie "> Tło można odjąć przed obliczeniem procentowej inwazji komórek RFU = względne jednostki fluorescencji.

<ol><li>Sethi, G., Ahn, K. S., Pandey, M. K., Aggarwal, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Celastrol%2C+a+novel+triterpene%2C+potentiates+TNF-induced+apoptosis+and+suppresses+invasion+of+tumor+cells+by+inhibiting+NF-%CE%BAB-regulated+gene+products+and+TAK1-mediated+NF-%CE%9AB+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Celastrol, a novel triterpene, potentiates TNF-induced apoptosis and suppresses invasion of tumor cells by inhibiting NF-κB-regulated gene products and TAK1-mediated NF-ΚB activation.</a> Blood. 109, 2727-2735 (2007).</li>
<li>Takada, Y., Kobayashi, Y., Aggarwal, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evodiamine+Aboloishes+Constitutive+and+Inducible+NF-%CE%BAB+Activation+by+Inhibiting+I%CE%BAB%CE%B1+Kinase+Activation%2C+Thereby+Suppressing+NF-%CE%BAB-regulated+Antiapoptotic+and+Metastatic+Gene+Expression%2C+Up-regulating+Apoptosis%2C+and+Inhibiting+Invasion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Evodiamine Aboloishes Constitutive and Inducible NF-κB Activation by Inhibiting IκBα Kinase Activation, Thereby Suppressing NF-κB-regulated Antiapoptotic and Metastatic Gene Expression, Up-regulating Apoptosis, and Inhibiting Invasion.</a> J. Biol. Chem. 280, 17203-17212 (2005).</li>
<li>Harikumar, K. B., Kunnumakkara, A. B., Ahn, K. S., Anand, P., Krishnan, S., Guha, S., Aggarwal, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modification+of+the+cysteini+residues+in+I%CE%BAB%CE%B1+kinase+and+NF-%CE%BAB+%28p65%29+by+xanthohumol+leads+to+suppression+of+NF-%CE%BAB-regulated+gene+products+and+potentiation+of+apoptosis+in+leukemia+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Modification of the cysteini residues in IκBα kinase and NF-κB (p65) by xanthohumol leads to suppression of NF-κB-regulated gene products and potentiation of apoptosis in leukemia cells.</a> Blood. , 113-2003 (2009).</li>
<li>Nair, A. S., Sishodia, S., Ahn, K. S., Kunnumakkara, A. B., Sethi, G., Aggarwal, B. B. D. eguelin <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((an+Akt+Inhibitor%2C+Suppresses+I%CE%9AB%CE%B1+Kinase+Activation+Leading+to+Suppression+of+NF-%CE%BAB-Regulated+Gene+Expression%2C+Potentiation+of+Apoptosis%2C+and+Inhibition+of+Cellular+Invasion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">an Akt Inhibitor, Suppresses IΚBα Kinase Activation Leading to Suppression of NF-κB-Regulated Gene Expression, Potentiation of Apoptosis, and Inhibition of Cellular Invasion.</a> J. Immunol. , 177-5612 (2006).</li>
<li>Partridge, J., Qian, S. Quantitative and High-Throughput Screening of Tumor Cell Invasion using a Cell-based Model. Society for Biomolecular Screening 2005 Conference. 2005 Sept 11-15, Geneva, Switzerland, , (2005).</li>
<li>An Improved In Vitro Device For Measuring Cell Invasion and Method for its Formation. US patent. , 6,740,501,B2 (2004).</li>
<li>Flaherty, P., Goldberger, A., Dery, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+Fluorescent+Cell+Labeling+on+Tumor+Invasion+and+Screening+of+Anti-Metastatic+Compounds%5BTitle%5D)+AND+%22Mole.+Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Effect of Fluorescent Cell Labeling on Tumor Invasion and Screening of Anti-Metastatic Compounds.</a> Mole. Biol. Cell. 12, 46a-46a (2001).</li>
<li>Flaherty, P., Mannuzza, F., Ilsley, S., Maliakal, J., Wu, M. Screening of Anti-Metastatic Compounds by a Fluorescence Based Tumor Invasion Assay. Screentech 2001 Conference. 2005 Mar 12-16, San Diego, CA, , (2005).</li>
<li>Mannuzza, F., Flaherty, P., Wu, M., Ilsley, S. Development of a Quantitative, High-Throughput Assay System for the Discovery of Anti-Cancer Drugs. Proceedings of the Society for Biomolecular Screening. 1999 Sept 13-16, Edinburgh, SC, UK, , (1999).</li>
</ol>

Autorzy są pracownikami firmy BD Biosciences, która produkuje odczynniki i narzędzia wykorzystane w niniejszym artykule.

<table><tbody><tr><td>System Inwazji Guzów BD BioCoat</td><td>BD Biosciences</td><td>354165 lub 354166</td><td></td></tr><tr><td>komórki HT-1080 i NIH/3T3</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&amp;rsquo;podłoże DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium; bezsurowicze)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&amp;rsquo;bufor fosforanowy z solą, bez wapnia i magnezu (DPBS)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>System wkładkek 24-dołkowych BD Falcon FluoroBlok do zastosowania jako kontrola migracji komórek</td><td>BD Biosciences</td><td>351157 lub 351158</td><td></td></tr><tr><td>5% płodowa surowica bydlęca w DMEM</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Barwnik fluorescencyjny BD Calcein AM</td><td>BD Biosciences</td><td>354216 lub 354217</td><td></td></tr><tr><td>Hanks&amp;rsquo; Zrównoważony roztwór soli (HBSS)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>płytki BD Falcon z 24 dołkami do znakowania po inwazji komórek</td><td>BD Biosciences</td><td>351147</td><td></td></tr><tr><td>Fluorescencyjny czytnik płytek z możliwością odczytu od dołu</td><td>PerkinElmer EnVision (R), TECAN Infinite (R), Molecular Devices SpectraMax (R), BioTek Synergy (TM), BMG LABTECH PHERAstar.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

test inwazyjności guza fluoroblok in vitro

An In vitro FluoroBlok Tumor Invasion Assay

Cechą charakterystyczną komórek przerzutowych jest ich zdolność do naciekania przez błonę podstawną i migrowania do innych części ciała. Aby komórki mogły być inwazyjne, muszą być zdolne zarówno do wydzielania proteaz rozkładających błonę podstawną, jak i do migracji. System BD BioCoat Tumor Invasion System zapewnia komórkom warunki umożliwiające ocenę ich właściwości inwazyjnych.in vitro1,2Składa się z płytki wkładkowej BD Falcon FluoroBlok 24-Multiwell z membraną PET o rozmiarze porów 8,0 mikrona, która została równomiernie pokryta BD Matrigel Matrix. Ta jednolita warstwa BD Matrigel Matrix służy jako zrekonstytuowana błona podstawnain vitro tworząc rzeczywistą barierę dla komórek nieinwazyjnych, jednocześnie prezentując odpowiednią strukturę białkową do badania inwazji. Proces powlekania zamyka pory membrany, blokując migrację komórek nieinwazyjnych przez membranę. Z kolei komórki inwazyjne są w stanie oderwać się i migrować przez powleczoną membranę. Ilościowe określenie inwazji komórek można przeprowadzić poprzez znakowanie barwnikiem fluorescencyjnym, takim jak DiIC, albo przed, albo po inwazji komórek12(3) lub odpowiednio calcein AM, i pomiar fluorescencji komórek naciekających. Ponieważ membrana BD FluoroBlok skutecznie blokuje przejście światła z zakresu 490-700 nm z wydajnością &gt;99%, komórki znakowane fluorescencyjnie, które nie naciekły, nie są wykrywane przez czytnik płytek fluorescencyjnych z odczytem od dołu. Natomiast komórki, które naciekły na dolną stronę membrany, nie są już osłonięte przed źródłem światła i zostają wykryte przez odpowiedni czytnik płytek. W niniejszym filmie zaprezentowano końcowy test inwazyjności komórek z wykorzystaniem calcein AM do wykrywania komórek, które naciekły.

W niniejszym filmie zaprezentowano sposób pomiaru inwazji komórek przez wkładki do hodowli komórkowych z wykorzystaniem metody fluorescencyjnej.

Test inwazyjności guza FluoroBlok In vitro

Cechą charakterystyczną komórek przerzutowych jest ich zdolność do naciekania przez błonę podstawną i migrowania do innych części ciała. Komórki muszą być zdolne do...

Inwazja komórkowa jest istotnym etapem progresji nowotworu oraz angiogenezy. Testy inwazji in vitro zazwyczaj oceniają zdolność komórek do rozkładu zrekonstytuowanej błony podstawnej, takiej jak macierz BD, macierz żelowa, oraz do migracji przez wkłady do hodowli komórkowej. Test inwazji guza rozpoczyna się w momencie dodania komórek do wkładów Fluor block pokrytych matrigelem.Do komory dolnej dodaje się chemoatraktant do zrekonstytuowanej błony podstawnej, a następnie system inkubuje. W ciągu nocy komórki inwazyjne będą w stanie zdegradować barierę z Matrigelu i przeniknąć przez membranę bloku Fluor, specjalistyczną membranę chroniącą Fluor przed światłem zewnętrznym. Zawartość komory górnej zostaje usunięta, a wkład wielodołkowy przeniesiona do drugiej płytki zawierającej Fluor.Po inkubacji żywe komórki zostają zabarwione i mogą być wykrywane zarówno wizualnie, jak i za pomocą czytnika mikropłytek. Cześć, nazywam się Jeff Partridge z BD Biosciences Discovery LabWare. Dzisiaj zaprezentujemy procedurę badania inwazji nowotworowej w bloku fluorowym.Poniższą procedurę stosujemy do badania inwazji komórek nowotworowych przez błonę podstawną w kierunku chemoatraktanta. Zacznijmy zatem od przygotowania. Hoduj komórki do testu inwazji nowotworowej do osiągnięcia około 80% konfluencji.W tym doświadczeniu będziemy wykorzystywać linie komórkowe HT 10 80 oraz NIH 3T3. Udowodniono, że komórki HT 10 80 migrują i naciekają barierę z Matrigelu w tym układzie, przez co stanowią dobre kontrole pozytywne dla tego testu. Komórki NIH 3T3 nie wykazują zdolności do naciekania, ale migrują, w związku z czym służą jako odpowiednie kontrole negatywne dla tej procedury.Aby rozpocząć badanie, należy nawodnić system, wyjmując opakowanie systemu inwazji nowotworowej BD bio coat z przechowywania w temperaturze -20 °C i doprowadzając go do temperatury pokojowej. Ponieważ badanie wymaga zachowania zasad sterylności, należy pozostawić wkład w dygestorium do hodowli tkanek do czasu osiągnięcia temperatury pokojowej. Po osiągnięciu przez opakowanie temperatury pokojowej należy je otworzyć, aby nawodnić błonę podstawwną, przez którą będą przechodzić badane komórki.Po dodaniu 500 µL ciepłej pożywki do wnętrza studzienek wkładki, pozostawić płytkę do rehydratacji przez dwie godziny w temperaturze 37 °C i 5% CO2. Nie ma potrzeby rehydratowania niepowlekanej wielostudzienkowej płytki z wkładką BD Falcon Flora Block 24, ponieważ zostanie ona wykorzystana jako kontrola migracji komórek w celu przygotowania komórek do testu inwazji. Trypsynizować monowarstwy komórkowe, a następnie resuspender komórki w DMEM bez surowicy w stężeniu 5 × 10⁴ komórek/mL.W przypadku zastosowania innego typu komórek, optymalna gęstość wysiewu musi zostać określona drogą empiryczną. Po rehydratacji powlekonej płytki ostrożnie usuń medium z dołków wkładki, nie naruszając warstwy żelu MA na membranie. System jest teraz gotowy do użycia.Nie dopuścić do wyschnięcia warstwy żelu MA. Aby rozpocząć test inwazji komórek, dodać 500 µL każdej zawiesiny komórkowej do komór apikalnych systemu inwazji nowotworowej w obu konfiguracjach: z powłoką z Matrigelu oraz bez niej. Następnie, korzystając z portów próbkowych, dodać 750 µL chemoatraktanta do komór bazalnych w obu typach płytek (powlekanych i niepowlekanych).Niezwykle ważne jest, aby podczas napełniania komór podstawowych nie wprowadzić żadnych pęcherzyków powietrza. Jako kontrolę migracji, należy dodać każdą zawiesinę komórkową oraz chemoatraktant do niepowlekanej płytki wkładkowej BD Falcon Flora Block 24 Multi WA. System inwazji nowotworowej oraz niepowlekaną płytkę wkładkową Falcon Flora Block 24 Multi WA należy inkubować przez 20 do 22 godzin w temperaturze 37°C w atmosferze 5% carbon dioxide w dniu następnym.Po zakończeniu inkubacji komórki są gotowe do znakowania fluorescencyjnym barwnikiem calcium am. Ostrożnie usuń medium z komór apikalnych, wylewając zawartość do pojemnika na odpady. Następnie niezwłocznie przenieś system insertów do drugiej płytki 24-dołkowej zawierającej 500 µL na dołek roztworu o stężeniu 4 µg/mL.Wapń w zrównoważonym roztworze soli Hanksa. Powtórz te kroki dla kontroli migracji. Inkubuj płytki przez jedną godzinę w temperaturze 37 °C i 5% dwutlenku węgla.Nie należy dotykać dolnej powierzchni systemu wkładki. Po zakończeniu jednogodzinnej inkubacji z wapniem można zmierzyć fluorescencję komórek inwazyjnych. Jest niezwykle ważne, aby systemy wkładek były odczytywane zgodnie z odpowiednim schematem płytki.Prawidłowa orientacja płytki polega na umieszczeniu dołka A1 w lewym górnym rogu oraz skierowaniu logo BD Falcon w prawo; po włożeniu płytki do czytnika fluorescencja jest pomiarowana przy długościach fal 494 i 517 nanometrów za pomocą fluorescencyjnego czytnika płytek z odczytem od dołu. Należy zweryfikować uzyskane wyniki za pomocą odwróconego mikroskopu fluorescencyjnego, aby upewnić się, że dane z czytnika płytek są zgodne z wynikami wizualnymi. Przedstawione dane są typowymi wynikami z czytnika płytek dla płytki powlekanej oraz niepowlekanej płytki kontrolnej, uzyskanymi z testów inwazji komórkowej dla dwóch linii komórkowych HT 10 80 oraz NIH three T three.Dane z dołków pozbawionych komórek reprezentują tło, które można odjąć przed obliczeniem procentu inwazji komórek. Oblicz procent inwazji, korzystając z następującego równania. Procent inwazji jest równy średniej liczbie względnych jednostek fluorescencji (rfu) komórek, które przeniknęły przez membranę pokrytą matrigielem w kierunku chemoatraktanta.Wartość tę dzieli się przez średnią RFU komórek, które migrowały przez niepowlekaną membranę bloku VD flua w kierunku chemoatraktanta. Następnie wynik mnoży się przez 100. Wykres ten przedstawia porównanie procentowej inwazji komórek HT 10 80 oraz NIH three T three; jak widać, komórki HT 10 80 wykazują zdolność do inwazji, podczas gdy komórki NIH three T three nie wykazują takiej zdolności.Podczas badania komórek pod odwróconym mikroskopem fluorescencyjnym wyniki są zgodne z tymi uzyskanymi za pomocą czytnika płytek. Inwazyjne komórki HT 10 80 przeniknęły przez matrigel, a także migrowały przez niepowlekaną membranę. W przeciwieństwie do nich, nieinwazyjne komórki NIH three T three nie przeniknęły przez matrigel, lecz migrowały przez niepowlekaną membranę.Właśnie zaprezentowaliśmy sposób przeprowadzenia testu inwazji nowotworowej w blokach kwiatowych. Podczas wykonywania tej procedury ważne jest, aby utrzymać płytki w pozycji poziomej i zminimalizować powstawanie pęcherzyków powietrza. Mogłyby one wpłynąć na uzyskane wyniki.To już wszystko. Dziękujemy za oglądanie i życzymy powodzenia w przeprowadzaniu eksperymentów.

an-in-vitro-fluoroblok-tumor-invasion-assay

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Badanie penetracji nowotworów In vitro FluoroBlok

Opisany tutaj test oczyszczania mezotelium wykorzystuje komórki znakowane fluorescencyjnie oraz mikroskopię wideo poklatkową do wizualizacji i ilościowego pomiaru interakcji między wielokomórkowymi sferoidami raka jajnika a monowarstwami komórek mezoteliów. Test ten modeluje wczesne etapy przerzutowania raka jajnika.

Test oczyszczania mezotelialnego in vitro modelujący wczesne etapy przerzutowania raka jajnika

Przepływ płynu śródmiąższowego jest zwiększony w guzach litych i może modulować inwazję komórek nowotworowych. W niniejszej pracy opisujemy technikę nakładania przepływu płynu śródmiąższowego na komórki zatopione w macierzy, a następnie pomiaru jego wpływu na inwazję komórek. Technika ta może być łatwo zaadaptowana do badania innych układów.

Trójwymiarowy model hodowli komórkowej do pomiaru wpływu przepływu płynu śródmiąższowego na inwazję komórek nowotworowych

Ten film opisuje technikę wykorzystania natywnej matrycy do badania inwazji komórek nowotworowych. Technika zastosowana w tym teście zapewnia możliwość oceny interakcji komórek nabłonkowo-mezenchymalnych w warunkach 3D bez konieczności stosowania syntetycznej lub obcej matrycy.

Test inwazji komórek nowotworowych: natywna metoda 3D oparta na macierzy in vitro do oceny interakcji komórek nabłonkowo-mezenchymalnych

Opisano powszechnie stosowane, wysoce dostępne metody badania migracji komórek i inwazji in vitro. Pierwszą metodą jest test zamykania ran komórkowych, który mierzy ruchliwość komórek. Drugą metodą jest test migracji i inwazji transwell, który ocenia zdolność komórek do chemotakcji i inwazyjności.

Metody in vitro Testy migracji i inwazji komórek

Ten artykuł wideo opisuje zmodyfikowaną metodę in vitro do badania roli hormonów, cytokin i/lub czynników wzrostu w napędzaniu inwazji komórek rakowych.

Zmodyfikowany test inwazji in vitro w celu określenia potencjalnej roli hormonów, cytokin i / lub czynników wzrostu w pośredniczeniu w inwazji komórek rakowych

Inwazja otaczających normalnych tkanek jest cechą charakterystyczną nowotworów złośliwych. Przedstawiamy tutaj prosty, półautomatyczny test mikropłytki inwazji do naturalnej biomatrycy 3D, który został zilustrowany za pomocą wielu modeli zaawansowanych nowotworów u ludzi.

Trójwymiarowy (3D) test inwazji sferoidów guza

Fluorescencyjna tomografia molekularna do obrazowania in vivo ksenoprzeszczepów glejaka

Tutaj opisujemy techniki obrazowania żywych komórek, aby ilościowo zmierzyć migrację i inwazję komórek macierzystych glejaka mózgu w czasie i w wielu warunkach leczenia.

Testy obrazowania żywych komórek w celu zbadania migracji i inwazji komórek macierzystych glejaka wielopostaciowego guza mózgu

Procesy rządzące inwazją raka pęcherza moczowego stanowią okazję do rozwoju biomarkerów i terapii. Poniżej przedstawiamy model inwazji raka pęcherza moczowego, który obejmuje hodowlę 3D sferoid guza, obrazowanie poklatkowe i mikroskopię konfokalną. Technika ta jest przydatna do definiowania cech procesu inwazyjnego oraz do badań przesiewowych środków terapeutycznych.

System hodowli komórkowych 3D do badania inwazji i oceny terapii w raku pęcherza moczowego

Test inwazji komórkowej in vitro służy do pomiaru potencjału przerzutów raka poprzez ilościowe określenie potencjału komórkowego do inwazji i migracji za pomocą wkładek do hodowli komórkowych zawierających matrycę białkową. Komórki są zmuszane do migracji przez matrycę białkową i porowatą błonę w kierunku chemoatraktantu, a następnie określane ilościowo za pomocą mikroskopii świetlnej.

Zastosowanie mysich komórek nowotworowych sutka w teście inwazji in vitro jako miary zachowania komórek onkogennych

Ten protokół opisuje stworzenie mysiego modelu z guzem do monitorowania progresji guza i angiogenezy w czasie rzeczywistym za pomocą podwójnego obrazowania bioluminescencyjnego.

Podwójne obrazowanie bioluminescencyjne progresji guza i angiogenezy

Poznaj metodę pomiaru inwazji komórek nowotworowych przy użyciu systemu FluoroBlok z barwieniem fluorescencyjnym. Technika ta pozwala badać migrację przez błonę podstawną w badaniach nad rakiem.

Test inwazyjności guza FluoroBlok In vitro

Przeglądaj więcej filmów