Name: Izolacja komórek jamy otrzewnowej myszy (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-01-28T16:45:00.000+00:00
Duration: 4 min 32 s
Description: Naucz się izolować komórki jamy otrzewnowej myszy do badań immunologicznych. Ta metoda pozwala uzyskać 5-10 milionów komórek zawierających limfocyty B, makrofagi i komórki T.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Praca ta była częściowo finansowana z grantu NIH nr AI069358 oraz przez BloodCenter Research Foundation.

<ol><li>Przed rozpoczęciem procesu należy zebrać i przygotować następujące elementy:
<ul>
 <li>Lód</li>
 <li>Strzykawka 5ml z igłą 27g</li>
 <li>Strzykawka 5ml z igłą 25g</li>
 <li>Blok styropianowy i piny do unieruchomienia myszy</li>
 <li>Taca, na której można umieścić blok montażowy</li>
 <li>Nożyczki i pęseta</li>
 <li>Probówki do zbierania próbek</li>
 <li>70% etanol</li>
 <li>PBS z 3% płodową surowicą cielęcą (FCS) (Wstępnie schłodzony i przechowywany w lodzie)</li>
 </ul>
</li>
<li>Uśmierć mysz, spryskaj ją 70% etanolem i unieruchom na bloku styropianowym na grzbiecie.</li>
<li>Za pomocą nożyczek i pęsety przetnij zewnętrzną skórę otrzewnej i ostrożnie odsun ją, aby odsłonić wewnętrzną wyściółkę jamy otrzewnej.</li>
<li>Wstrzyknij 5 ml lodowatego PBS (z 3% FCS) do jamy otrzewnej, używając igły 27g. Wprowadzaj igłę powoli do otrzewnej, uważając, aby nie przebić żadnego z organów.</li>
<li>Po wstrzyknięciu delikatnie masuj otrzewną, aby uwolnić przytwierdzone komórki do roztworu PBS.</li>
<li>Wprowadź do otrzewnej igłę 25 g (skosem do góry) przymocowaną do strzykawki 5 ml i zbierz płyn, delikatnie przesuwając końcówkę igły, aby uniknąć zapchania przez tkankę tłuszczową lub inne organy. Zbierz jak najwięcej płynu, a po odłączeniu igły od strzykawki przelej zebraną zawiesinę komórkową do probówek przechowywanych w lodzie. Opcjonalnie: Powtórz kroki 4-6</li>
<li>Wykonaj nacięcie w wewnętrznej skórze otrzewnej i, podtrzymując skórę pęsetą, użyj plastikowej pipety Pasteura, aby zebrać pozostały płyn z jamy.</li>
<li>Jeśli w kroku 6 lub 7 zostanie wykryte widoczne zanieczyszczenie krwią, zanieczyszczoną próbkę należy odrzucić.</li>
<li>Wiruj zebraną zawiesinę komórkową przy 1500 RPM przez 8 minut, odlej nadsącz i resuspenduj komórki w wybranym medium lub PBS w celu ich policzenia.</li>
</ol>
Alternatywny protokół otrzymywania makrofagów indukowanych tioglikolanem:
Metoda ta jest stosowana w celu uzyskania wyższej wydajności makrofagów.
<ol>
<li>Wstrzyknij 5 ml 3% (w/v) podłoża tioglikolanowego Brewera (7) do jamy otrzewnowej każdej myszy.</li>
<li>Odczekaj 3-5 dni, a następnie przejdź do kroku 1 opisanego powyżej w celu pobrania komórek.</li>
</ol>
W porównaniu do metody bez stymulacji można zebrać około 10 razy więcej makrofagów. Jedyną kwestią jest to, że makrofagi uzyskane tą procedurą różnią się niektórymi właściwościami fizjologicznymi.
Reprezentatywne wyniki:
Z niepoddanego manipulacjom myszy, przy zastosowaniu odpowiedniego protokołu izolacji, można uzyskać od 5 do 10 milionów komórek jamy otrzewnej. Wśród wszystkich żywych komórek 50-60% stanowią limfocyty B, ~30% makrofagi oraz 5-10% limfocyty T (Ryc. 1).
<img src="/files/ftp_upload/1488/1488fig1.jpg" alt="Analiza fenotypu komórek, wykresy rozrzutu cytometrycznego, limfocyty B i T, identyfikacja makrofagów, jama otrzewnowa." data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Rysunek 1"> Rysunek 1. Fenotyp komórek izolowanych z jamy otrzewnowej. Po izolacji komórek z jamy otrzewnowej barwiono je przeciwciałami anti-mouse TCRβ-FITC, B220-PE-Texas red, CD11b-Pacific blue, CD23-PE-Cy7 oraz CD5-APC. Reprezentatywne wykresy z cytometrii przepływowej przedstawiają odsetki limfocytów B i T (a), makrofagów (b), komórek B1 i B2 (c) oraz komórek B1a i B1b (d).

<ol><li>Zhang, X., Goncalves, R., Mosser, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+isolation+and+characterization+of+murine+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">The isolation and characterization of murine macrophages.</a> Current Protocols in Immunology. , (2008).</li>
<li>Boes, M., Prodeus, A. P., Schmidt, T., Carroll, M. C., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+role+of+natural+immunoglobulin+M+in+immediate+defense+against+systemic+bacterial+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">A critical role of natural immunoglobulin M in immediate defense against systemic bacterial infection.</a> J. Exp. Med. 188, 2381-2386 (1998).</li>
<li>Mc Daniel, L. S., Benjamin, W. H., Forman, C., Briles, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+clearance+by+anti-phosphocholine+antibodies+as+a+mechanism+of+protection+in+experimental+pneumococcal+bacteremia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Blood clearance by anti-phosphocholine antibodies as a mechanism of protection in experimental pneumococcal bacteremia.</a> J. Immunol. 133, 3308-3312 (1984).</li>
<li>Paciorkowski, N., Porte, P., Shultz, L. D., Rajan, T. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B1+B+lymphocytes+play+a+critical+role+in+host+protection+against+lymphatic+filarial+parasites%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">B1 B lymphocytes play a critical role in host protection against lymphatic filarial parasites.</a> J. Exp. Med. 191, 731-736 (2000).</li>
<li>Mercolino, T. J., Arnold, L. W., Hawkins, L. A., Haughton, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normal+mouse+peritoneum+contains+a+large+population+of+Ly-1%2B+%28CD5%29+B+cells+that+recognize+phosphatidyl+choline%3A+relationship+to+cells+that+secrete+hemolytic+antibody+specific+for+autologous+erythrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">Normal mouse peritoneum contains a large population of Ly-1+ (CD5) B cells that recognize phosphatidyl choline: relationship to cells that secrete hemolytic antibody specific for autologous erythrocytes.</a> J. Exp. Med. 168, 687-698 (1988).</li>
<li>O'Garra, A., Chang, R., Go, N., Hastings, R., Haughton, G., Howard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ly-1+B+%28B-1%29+cells+are+the+main+source+of+B+cell+derived+interleukin+10%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Ly-1 B (B-1) cells are the main source of B cell derived interleukin 10.</a> Eur. J. Immunol. 22, 711-717 (1992).</li>
<li>Hoover, D. L., Nacy, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+activation+to+kill+Leishmania+tropica%3A+Defective+intracellular+killing+of+amastigotes+by+macrophages+elicited+with+sterile+inflammatory+agents%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Macrophage activation to kill Leishmania tropica: Defective intracellular killing of amastigotes by macrophages elicited with sterile inflammatory agents.</a> J. Immunol. 132, 1487-1491 (1984).</li>
<li>Austin, P. E., McCulloch, E. A., Till, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+factor+in+L-cell+conditioned+medium+capable+of+stimulating+colony+formation+by+mouse+marrow+cells+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Characterization of the factor in L-cell conditioned medium capable of stimulating colony formation by mouse marrow cells in culture.</a> J. Cell Physiol. 77, 121-134 (1971).</li>
<li>Stanley, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+macrophage+colony-stimulating+factor%2C+CSF-1%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">The macrophage colony-stimulating factor, CSF-1.</a> Methods Enzymol. 116, 564-587 (1985).</li>
<li>Baumgarth, N., Chen, J., Herman, O. C., Jager, G. C., Herzenberg, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+B-1+and+B-2+cells+in+immune+protection+from+influenza+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Top.+Microbiol.+Immunol%22%5BJournal%5D)">The role of B-1 and B-2 cells in immune protection from influenza virus infection.</a> Curr. Top. Microbiol. Immunol. 252, 163-169 (2000).</li>
<li>Baumgarth, N., Herman, O. C., Jager, G. C., Brown, L. E., Herzenberg, L. A., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B-1+and+B-2+cell-derived+immunoglobulin+M+antibodies+are+nonredundant+components+of+the+protective+response+to+influenza+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">B-1 and B-2 cell-derived immunoglobulin M antibodies are nonredundant components of the protective response to influenza virus infection.</a> J. Exp. Med. 192, 271-280 (2000).</li>
<li>Berland, R., Wortis, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origins+and+functions+of+B-1+cells+with+notes+on+the+role+of+CD5%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Origins and functions of B-1 cells with notes on the role of CD5.</a> Annu. Rev. Immunol. 20, 253-300 (2002).</li>
</ol>

Izolacja komórek z jamy otrzewnej jest istotną techniką w badaniu różnych komórek odpornościowych, przede wszystkim makrofagów oraz specyficznych subpopulacji limfocytów B. Choć jest to proces prosty, wiąże się on z kilkoma krytycznymi etapami. Aby uzyskać czystą populację komórek z jamy otrzewnej, należy unikać obecności zanieczyszczającej krwi w pobranej próbce. Eutanazję poprzez zwichnięcie stawów kręgowych szyi należy przeprowadzić ostrożnie, aby zapobiec przedostaniu się krwi do jamy otrzewnej. Alternatywnie można zastosować CO2. Ponadto podczas procedury należy zachować szczególną ostrożność, aby nie przebić pęcherza moczowego ani żadnego innego organu w jamie otrzewnej. Odzyskanie większości wstrzykniętego płynu jest również istotne dla uzyskania wysokiej wydajności komórek.
Procedura ta jest powszechnie stosowana w badaniach nad biologią makrofagów, ponieważ z jamy otrzewnej można łatwo uzyskać umiarkowaną liczbę rezydentnych, niestymulowanych makrofagów, co stanowi alternatywę dla żmudnego procesu różnicowania mieloidalnych komórek progenitorowych w dojrzałe makrofagi in vitro przy użyciu czynnika stymulującego kolonie makrofagów (8,9). Wydajność uzyskiwania makrofagów z jamy otrzewnej można zwiększyć, stosując metodę wywoływania tioglikolanem, choć użycie tioglikolanu może zmienić właściwości fizjologiczne makrofagów (7).
Limfocyty B stanowią istotną część naszego układu odpornościowego, odgrywając kluczowe role zarówno w odporności wrodzonej, jak i nabytej. Wśród różnych subpopulacji limfocytów B, komórki B1 stanowią unikalny podzbiór zaangażowany w odporność wrodzoną, autoimmunizację oraz regulację immunologiczną. Limfocyty B1 znajdują się głównie w jamie otrzewnowej i ulegają samoodnowie. Są one jednym z głównych producentów naturalnego IgM, który zapewnia pierwszą linię ochrony przed licznymi wirusami i bakteriami (10-12). Limfocyty B1 są również głównym źródłem IL-10 (6), która jest ważną cytokiną zaangażowaną w regulację immunologiczną. Mimo przeprowadzenia wielu badań nad komórkami B1, wciąż istnieje przestrzeń do dalszej oceny ich przeciwstawnych funkcji, w szczególności ich roli regulacyjnej. Metoda izolacji komórek z jamy otrzewnowej daje unikalną możliwość badania funkcji limfocytów B1.

<table><tbody><tr><td>Pożywka tioglikolanowa, modyfikacja Brewera</td><td>BD Biosciences</td><td>211716</td><td></td></tr></tbody></table>

izolacja komórek z jamy otrzewnej myszy

Isolation of Mouse Peritoneal Cavity Cells

Jama otrzewna to wyścielona błoną i wypełniona płynem jama brzuszna ssaków, w której znajdują się wątroba, śledziona, większość przewodu pokarmowego oraz inne narządy wewnętrzne. Zamieszkuje ona szereg komórek odpornościowych, w tym makrofagi, limfocyty B i limfocyty T. Obecność dużej liczby naiwnych makrofagów w jamie otrzewnej sprawia, że jest ona preferowanym miejscem pozyskiwania naiwnych makrofagów tkankowych (1). Jama otrzewna jest również istotna dla badań nad limfocytami B ze względu na obecność unikalnej subpopulacji limfocytów B rezydujących w jamie otrzewnej, znanych jako komórki B1, oprócz konwencjonalnych komórek B2. Komórki B1 dzielą się na komórki B1a i B1b, które można rozróżnić na podstawie ekspresji powierzchniowej CD11b i CD5. Komórki B1 są ważnym źródłem naturalnych IgM, zapewniającym wczesną ochronę przed różnymi patogenami (2-4). Komórki te są z natury autoreaktywne (5), jednak mechanizmy ich kontroli zapobiegające autoimmunizacji nie są jeszcze w pełni zrozumiałe. Przeciwnie, CD5+Komórki B1a posiadają pewne właściwości regulacyjne dzięki swojej zdolności do produkcji IL-10 (6). W związku z tym limfocyty B1 z jamy otrzewnej stanowią interesującą populację komórek do badań ze względu na ich zróżnicowaną funkcję oraz wiele nierozwiązanych kwestii związanych z ich rozwojem i regulacją. Izolacja komórek odpornościowych rezydujących w jamie otrzewnej jest trudna z powodu braku zdefiniowanej struktury wewnątrz tej jamy. Nasz protokół opisuje procedurę pozyskiwania żywych komórek odpornościowych z jamy otrzewnej myszy, które następnie mogą zostać wykorzystane do analizy fenotypowej metodą cytometrii przepływowej oraz do różnych testów biochemicznych i immunologicznych.

Jama otrzewnowa u ssaków zawiera różne populacje komórek odpornościowych, które są kluczowe dla wrodzonych odpowiedzi immunologicznych. Do biochemicznych i funkcjonalnych analiz tych komórek niezbędna jest wydajna metoda izolacji. W niniejszej pracy przedstawiamy kompleksową metodę izolacji komórek jamy otrzewnowej u myszy.

Izolacja komórek z jamy otrzewnej myszy

Jama otrzewna jest ograniczoną błoną i wypełnioną płynem jamą brzuszną ssaków, w której znajdują się wątroba, śledziona, większość przewodu pokarmowego...

Izolację komórek jamy otrzewnej rozpoczyna się od ułożenia uśpionej myszy na grzbiecie. Nacięto skórę zewnętrzną otrzewnej i delikatnie odchylono ją, aby odsłonić skórę wewnętrzną. Do jamy otrzewnej wstrzyknięto PBS z 3% FBS, a następnie delikatnie masowano otrzewną. Ciecz zawierająca komórki otrzewnej zebrano i umieszczono w probówce o pojemności 15 mililitrów na lodzie.Komórki przemywa się raz, a następnie zlicza za pomocą cytometru hematologicznego. Cześć, jestem Oji z laboratorium dr. Bona w Instytucie Badań nad Krwią w Blood Center of Wisconsin. Dzisiaj przedstawimy procedurę izolacji komórek z jamy otrzewnej myszy.Stosujemy tę procedurę w naszym laboratorium w celu pozyskania komórek do różnych analiz fenotypowych, biochemicznych i immunologicznych. Interesują nas przede wszystkim populacje limfocytów B z otrzewnej. Zatem przejdźmy do realizacji.Przed rozpoczęciem izolacji komórek odpornościowych z jamy otrzewnej należy przygotować wszystkie niezbędne materiały. W pierwszej kolejności należy zgromadzić wiaderko z lodem, strzykawkę o pojemności 5 ml z igłą 27 G, strzykawkę o pojemności 5 ml z igłą 25 G, blok styropianowy oraz piny do unieruchomienia myszy. Przed sekcją należy przygotować również tackę do umieszczenia bloku montażowego, nożyczki, pęsetę oraz probówki do zbierania materiału.Wstępnie schłodź PBS zawierający 3% płodowej surowicy cielęcej. Przechowuj ten roztwór oraz probówki do pobierania próbek w lodzie przez cały czas trwania eksperymentu. Po podaniu środka znieczulającego i przeprowadzeniu odpowiedniej eutanazji, spryskaj mysz 70% etanolem i ułóż ją na grzbiecie na bloku styropianowym lub podkładce sekcyjnej. Za pomocą pęsety i nożyczek rozetnij skórę zewnętrzną otrzewnej.Delikatnie odciągnij skórę, aby odsłonić wewnętrzną warstwę wyścielającą jamę otrzewną. Zachowując ostrożność, by nie przebić żadnego z narządów, powoli wprowadź igłę 27 G do otrzewnej. Wstrzyknij 5 mL lodowatego PBS do jamy otrzewnej.Teraz delikatnie masuj otrzewną, aby pobudzić komórki do odłączenia się od ściany otrzewnej i opadnięcia do roztworu PBS. Następnie załóż na strzykawkę o pojemności 5 ml igłę 25 G ściętym końcem do góry i wprowadź igłę do otrzewnej. Zbierz jak najwięcej płynu, aby zwiększyć uzysk komórek.Podczas wykonywania tej czynności należy delikatnie poruszać końcówką, aby zapobiec zapchaniu igły przez tkankę tłuszczową lub inne organy. Należy usunąć igłę i przelać zawiesinę komórkową do polipropylenowych probówek zbiorczych. Pozostały płyn z jamy należy zebrać, wykonując nacięcie wewnętrznej warstwy skóry otrzewnej.Użyj pęsety, aby rozsunąć skórę, a następnie za pomocą plastikowej pipety tylnej pobierz pozostałą ciecz. Na koniec odwiruj zawiesinę komórkową przez osiem minut przy 1500 RPM, odlej nadsącz i ponownie zawieś komórki w pięciu mililitrach PBS. Wykonaj zliczenie komórek za pomocą komory licznikowej krwi.Zastosowanie metody wykluczania błękitu trypanu pozwoli na oznaczenie liczby komórek. Zazwyczaj z niepoddanej manipulacjom myszy można wyizolować od 5 do 10 milionów komórek z jamy otrzewnej. Od 50 do 60% całkowitej populacji komórek będą stanowiły limfocyty B.Około 40% będą stanowić makrofagi i granulocyty, a od 5 do 10% limfocyty T. Właśnie zaprezentowaliśmy sposób izolacji komórek z jamy otrzewnej myszy. Podczas stosowania tej procedury ważne jest ograniczenie ilości krwi w populacji komórek z jamy otrzewnej poprzez ostrożną eutanazję myszy i unikanie przebijania organów znajdujących się w jamie otrzewnej.Należy pamiętać o utylizacji wszystkich próbek, które zostaną zanieczyszczone krwią. To wszystko. Dziękujemy za oglądanie i życzymy powodzenia w przeprowadzaniu eksperymentów.

isolation-of-mouse-peritoneal-cavity-cells

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia i infekcje

Izolacja komórek jamy otrzewnej myszy

Opisano metodę otrzymywania wysoce oczyszczonej preparacji komórek dendrytycznych z płuc myszy. Szczególny nacisk położono na izolację podgrupy konwencjonalnych komórek dendrytycznych.

Izolacja komórek dendrytycznych z płuc myszy

W tym filmie pokazujemy izolację limfocytów z pobranej myszy łaty Peyera. Wyizolowane limfocyty można wykorzystać do dalszej analizy.

Izolacja limfocytów z mysiego plastra Peyera

Ten film demonstruje metodę płukania otrzewnowej do izolowania dojrzałych komórek tucznych typu tkanki łącznej z jamy otrzewnowej dorosłych myszy. Po wyizolowaniu mieszaniny pierwotnych komórek odpornościowych z jamy otrzewnej przeprowadza się selektywną proliferację komórek tucznych w odpowiednich warunkach hodowli.

Technika izolowania pierwotnych komórek tucznych z mysiej jamy otrzewnowej

Rośnie zainteresowanie zrozumieniem funkcji immunologicznych określonych subpopulacji komórek w łatach Peyera (PP), głównych miejscach indukcyjnych tkanek limfatycznych związanych z jelitami.  W tym miejscu przedstawiamy równoległe protokoły przygotowania preparatów pojedynczych komórek PP do analizy cytometrii przepływowej i kriosekcji PP do barwienia immunologicznego.

Izolowanie i barwienie immunologiczne limfocytów i komórek dendrytycznych z mysich plastrów Peyera

Opisujemy tutaj prosty protokół izolacji mysich makrofagów otrzewnowych. Po tej procedurze następuje ekstrakcja RNA w celu przeprowadzenia analizy ekspresji genów po stymulacji receptorów Toll-podobnych.

Izolacja mysich makrofagów otrzewnowej w celu przeprowadzenia analizy ekspresji genów po stymulacji receptorów toll-podobnych

Tutaj prezentujemy protokół izolacji i hodowli mysich komórek tucznych otrzewnej. Opisujemy również dwa protokoły ich funkcjonalnej charakterystyki: obrazowanie fluorescencyjne wewnątrzkomórkowego stężenia wolnego Ca2 + oraz test degranulacji oparty na kolorymetrycznej ocenie ilościowej uwolnionej β-heksozaminidazy.

Izolacja komórek tucznych pochodzących z otrzewnej i ich charakterystyka funkcjonalna za pomocą Ca2+-obrazowania i testów degranulacji

Komórki enterochromafiniczne (EC) stanowią mały podzbiór komórek nabłonka przewodu pokarmowego. Komórki EC są elektrycznie pobudliwe i uwalniają serotoninę, jednak trudności w hodowli i identyfikacji komórek EC mają ograniczone badania fizjologiczne. Przedstawiona tutaj metoda ustanawia model hodowli pierwotnej, który można badać pojedyncze komórki EC za pomocą elektrofizjologii.

Elektrofizjologia całych komórek pierwotnych hodowanych mysich komórek enterochromafinowych

Tutaj przedstawiamy i demonstrujemy protokół izolacji pierwotnych komórek śródbłonka sinusoidalnego wątroby myszy (LSEC). Protokół opiera się na perfuzji kolagenazy wątrobowej, oczyszczaniu komórek niemiąższowych przez wirowanie z niską prędkością oraz selekcji kulek magnetycznych CD146. Zajmujemy się również fenotypowaniem i charakteryzacją tych izolowanych LSEC za pomocą cytometrii przepływowej i skaningowej mikroskopii elektronowej.

Izolacja i charakterystyka pierwotnych sinusoidalnych komórek śródbłonka wątroby myszy

Tutaj prezentujemy protokół izolacji mysich mezenchymów jelitowych, w tym telocytów. Mogą one być wykorzystywane do kilku zastosowań, takich jak współhodowla z organoidami pochodzącymi od myszy lub ludzi, w celu wsparcia wzrostu i lepszego odzwierciedlenia sytuacji w oryginalnej tkance.

Izolacja mysiej mezenchymy jelitowej skutkująca wysoką wydajnością telocytów

Obecny protokół opisuje izolację i hodowlę makrofagów pochodzących ze szpiku kostnego od myszy.

Izolacja i hodowla makrofagów pochodzących ze szpiku kostnego od myszy

Ten artykuł opisuje metodę izolacji mysich komórek śródbłonka z naczyń włosowatych limfatycznych skóry za pomocą kulek magnetycznych. Wyizolowane komórki śródbłonka limfatycznego można wykorzystać do dalszych eksperymentów in vitro i analizy ekspresji białek.

Mysia izolacja komórek śródbłonka limfatycznego skóry

Naucz się izolować komórki jamy otrzewnowej myszy do badań immunologicznych. Ta metoda pozwala uzyskać 5-10 milionów komórek zawierających limfocyty B, makrofagi i komórki T.

Izolacja komórek z jamy otrzewnej myszy

Przeglądaj więcej filmów