Name: Montaż, ładowanie i wyrównywanie analitycznej celi próbki ultrawirówki (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-11-05T16:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 36 s
Description: Naucz się montażu, ładowania i wyrównywania analitycznej celi próbki ultrawirówki. Ta metoda pokazuje prawidłową technikę przygotowania komórek próbkowych dla niezawodnych pomiarów biologicznych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Podziękowania za wsparcie badawcze kierujemy do Intramural Research Program organizacji NIBIB, NIH.

Montaż celi próbnej i moment obrotowy
<ol>
<li>Konstrukcję ogniwa z próbką rozpoczynamy od złożenia dwóch zestawów okiennych. 
Włóż uszczelkę okna do uchwytu okna. Umieść wkładkę okna (czasami nazywaną podkładką okna) wewnątrz uchwytu okna w taki sposób, aby otwór wkładki znajdował się naprzeciwko wpustu uchwytu. Pod lekkim kątem włóż okno do uchwytu, dopasowując znak rylcowy na oknie do wpustu uchwytu okna. Delikatnie dociśnij krawędzie po obu stronach okna.</li>
<li>Aby zapewnić prawidłowe uszczelnienie i dokładny moment dokręcenia ogniwa z próbką, lekko smarujemy uszczelkę obudowy oraz pierścieńy śruby smarem Spinkote. Rozprowadź bardzo niewielką ilość Spinkote między kciukiem a palcem wskazującym. Pokryj gwinty pierścienia śruby cienką, niewidoczną warstwą Spinkote. W ten sam sposób pokryj uszczelkę obudowy. Wytrzyj nadmiar widocznego smaru.</li>
<li>Montaż ogniwa z próbką rozpocznij od wsunięcia jednego zestawu okiennego (oknem skierowanym do góry, w Twoją stronę) do obudowy ogniwa, dopasowując wpust do klucza obudowy. Dopasuj wpust elementu środkowego do klucza obudowy i pozwól mu delikatnie opaść na zestaw okienny wewnątrz ogniwa.</li>
<li>Nigdy nie używaj żadnych narzędzi do wpychania elementu środkowego do obudowy ogniwa. Może to spowodować trwałe uszkodzenie CP, co doprowadzi do wycieków podczas eksperymentów. Obróć drugi zestaw okienny tak, aby okno było skierowane w stronę elementu środkowego (od Ciebie), dopasuj wpust do klucza obudowy i wsuń go na element środkowy. Na górze umieść uszczelkę obudowy, a następnie pierścień śruby tak, aby napis „Out” był widoczny. Używając palców i narzędzia do wyrównywania, ręcznie dokręć pierścień śruby. 
Jeśli CP nie wsuwa się łatwo do tulei obudowy, najpierw go wyrównaj, a następnie umieść na nim drugi zestaw okienny. Wywierając delikatny nacisk w dół na zestaw okienny, wsuń oba elementy do obudowy ogniwa jednocześnie. W ten sposób unikamy bezpośredniego nacisku na CP. 
To dobry moment, aby sprawdzić, czy wewnątrz ogniwa nie ma kurzu, kłaczków i odcisków palców. Zauważysz również pierścienie Newtona, które wskazują, że między CP a oknami wciąż znajduje się powietrze. Znikną one po zastosowaniu momentu dokręcania.</li>
<li>Przy założonym pierścieniu śruby z widocznym napisem „out”, wsuń ogniwo z próbką całkowicie do zacisku momentowego statywu pomiarowego. Przytrzymaj ogniwo w miejscu, wywierając stały nacisk na uchwyt statywu. Jednym ciągłym ruchem dokręć pierścień śruby do wartości między 120-140 in-lbs. W przypadku użycia regulowanego klucza dynamometrycznego z mikrometem, ustaw go na wartość między 120-140 in/lbs i dokręcaj pierścień śruby, aż klucz „kliknie”, co oznacza osiągnięcie ustawionego momentu. Zwolnij uchwyt statywu i ostrożnie wyjmij ogniwo z próbką, nie dotykając okien.
</li>
</ol>
Załadunek i uszczelnianie celi z próbką
<ol start="6">
 <li> W eksperymentach z prędkością sedymentacji rutynowo wprowadzamy objętość 400ul do każdego sektora elementu centralnego o średnicy 12mm, używając pipety 200ul. Należy ustawić kuwetę z otworami do ładowania skierowanymi do góry, tak aby na pierścieniu z nakrętką widoczny był napis „out”. Wsunąć końcówkę pipety do połowy wysokości do LEWEGO sektora elementu centralnego przez otwory do ładowania i powoli dozować 200ul roztworu referencyjnego. Powtórzyć czynność raz, aby uzyskać łącznie 400ul. Korzystając z tej samej końcówki pipety i tej samej techniki, ostrożnie i powoli wypełnić PRAWY sektor elementu centralnego 400ul roztworu próbki. W eksperymentach z równowagą sedymentacji stosuje się objętości 150-180 ul, jednak należy zachować tę samą ostrożność i technikę. 
Kluczowe jest jak najdokładniejsze dopasowanie objętości roztworów referencyjnego i próbki. Mocne osadzenie końcówki na pipecie, powolne ładowanie i dozowanie roztworów, unikanie wprowadzania pęcherzyków powietrza oraz użycie tej samej końcówki pipety dla obu roztworów pomagają w utrzymaniu jak największej równości objętości.</li>
 <li>Uszczelnić kuwetę, umieszczając 2 nowe czerwone uszczelki nasadek obudowy ściśle w każdym otworze do ładowania, upewniając się, że znajdują się one pomiędzy elementem centralnym a aluminiową obudową. Przykryć każdą z nich nasadką obudowy. Dokręcić ręcznie małym śrubokrętem płaskim.
</li>
</ol>
Ustawianie próbki komórkowej w rotorze
<ol start="8">
<li>Przed załadowaniem rotora należy upewnić się, że przeciwwaga jest lżejsza od komórki z próbką w przeciwległej pozycji o nie więcej niż .5g, na wypadek wycieku z tej komórki. Rozpocząć należy od ustawienia wagi na zero. Najpierw zważyć komórkę z próbką, która znajdzie się w pozycji przeciwległej do przeciwwagi. Tarować wagę, aby odjąć masę komórki z próbką, a następnie zważyć przeciwwagę. Dodać lub odjąć obciążenie z otworu montażowego przeciwwagi. Należy upewnić się, że obciążniki nie wystają ponad górną krawędź. Zważyć ponownie, aby upewnić się, że końcowa masa przeciwwagi jest lżejsza od przeciwległej komórki z próbką o nie więcej niż .5g.</li>
<li>W przypadku rotora 4-miejscowego umieścić przeciwwagę w pozycji 4 tak, aby biała strzałka była widoczna i wskazywała kierunek siły odśrodkowej. Należy upewnić się, że przeciwwaga jest całkowicie osadzona wewnątrz rotora. Delikatnie dokręcić śrubę blokującą, znajdującą się na górze przeciwwagi naprzeciwko białej strzałki, aż przeciwwaga zostanie stabilnie zamocowana, ale wciąż będzie można ją wyrównać. Umieścić zrównoważoną komórkę z próbką tak, aby zaślepki obudowy były skierowane w stronę centrum rotora, a napis „out” na pierścieniu śruby był widoczny.</li>
<li>Patrząc od spodu rotora, należy za pomocą narzędzia do wyrównywania dopasować wewnętrzną kreskę pomocniczą (kreskę najbliższą centrum rotora) do kreski pomocniczej na przeciwwadze. Dokręcić śrubę blokującą, aby unieruchomić wyrównaną przeciwwagę. W ten sam sposób wyrównać kreskę pomocniczą komórki z próbką z wewnętrzną kreską pomocniczą w pozycji 2 na rotorze.</li>
</ol>
Więcej informacji można znaleźć na stronie <a href="https://sedfitsedphat.nibib.nih.gov/default.aspx">https://sedfitsedphat.nibib.nih.gov/default.aspx</a>

<ol><li>Brown, P. H., Balbo, A., Schuck, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterizing+protein-protein+interactions+by+sedimentation+velocity+analytical+ultracentrifugation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Immunol%22%5BJournal%5D)">Characterizing protein-protein interactions by sedimentation velocity analytical ultracentrifugation.</a> Curr Protoc Immunol. Chapter 18, Unit 18.15-Unit 18.15 (2008).</li>
<li>Balbo, A., Brown, P. H., Braswell, E. H., Schuck, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+protein-protein+interactions+by+equilibrium+sedimentation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Immunol%22%5BJournal%5D)">Measuring protein-protein interactions by equilibrium sedimentation.</a> Curr Protoc Immunol. Chapter 18, Unit 18.8-Unit 18.8 (2007).</li>
<li>analytical ultracentrifugation direct boundary modeling with sedfit [Internet]. , Peter Schuck. Available from:
 
 <a target="_blank" href="http://www.analyticalultracentrifugation.com/default.htm">http://www.analyticalultracentrifugation.com/default.htm</a> Forthcoming.</li>
<li>Home - Workshops [Internet]. , National Institutes of Health. Available from:
 
 <a target="_blank" href="https://sedfitsedphat.nibib.nih.gov/workshop/default.aspx">https://sedfitsedphat.nibib.nih.gov/workshop/default.aspx</a> Forthcoming.</li>
</ol>

Prawidłowy montaż komórki, wprowadzenie próbki i ustawienie komórki w rotorze są kluczowe dla uzyskania wysokiej jakości eksperymentów AUC. Ma to szczególne znaczenie w przypadku doświadczeń wymagających bardzo szczegółowej analizy pozyskanych danych dotyczących profili sedymentacji makrocząsteczek, na przykład podczas badania oddziaływań białkowych i wyznaczania ilości śladowych agregatów. Często to właśnie jakość przygotowania eksperymentalnego ogranicza dokładność i precyzję wyników badania AUC. Szczegółowe informacje na temat praktycznego projektowania i dalszego przeprowadzania eksperymentów AUC znajdują się w referencjach 1 – 3. Warsztaty obejmujące praktyczne przygotowanie, teorię i analizę danych eksperymentów AUC odbywają się dwa razy w roku w naszym laboratorium w National Institutes of Health [4].

<table><tbody><tr><td>4-miejscowy analityczny rotor Ti</td><td>Beckman Coulter Inc.</td><td>361964</td><td></td></tr><tr><td>Zestaw statywu momentowego</td><td>Beckman Coulter Inc.</td><td>361318</td><td></td></tr><tr><td>Narzędzie do wyrównywania komórki</td><td>Beckman Coulter Inc.</td><td>362340</td><td></td></tr><tr><td>Smar Spinkote</td><td>Beckman Coulter Inc.</td><td>306812</td><td></td></tr><tr><td>Przeciwwaga</td><td>Beckman Coulter Inc.</td><td>360219</td><td></td></tr><tr><td>Zestaw obudowy komórki</td><td>Beckman Coulter Inc.</td><td>334602</td><td></td></tr><tr><td>Uszczelka okna</td><td>Beckman Coulter Inc.</td><td>327021</td><td></td></tr><tr><td>Wkładka okna</td><td>Beckman Coulter Inc.</td><td>362329</td><td></td></tr><tr><td>Okno, szafirowe</td><td>Beckman Coulter Inc.</td><td>307177</td><td></td></tr><tr><td>Okno, kwarcowe</td><td>Beckman Coulter Inc.</td><td>301730</td><td></td></tr><tr><td>Uchwyt okna</td><td>Beckman Coulter Inc.</td><td>305037</td><td></td></tr><tr><td>12mm dwusektorowy element środkowy z Epon</td><td>Beckman Coulter Inc.</td><td>306493</td><td></td></tr><tr><td>Uszczelki korka komórki</td><td>Beckman Coulter Inc.</td><td>327022</td><td></td></tr><tr><td>Korek obudowy komórki</td><td>Beckman Coulter Inc.</td><td>362327</td><td></td></tr></tbody></table>

montaż, napełnianie i centrowanie celi pomiarowej analitycznej ultrawirówki

Assembly, Loading, and Alignment of an Analytical Ultracentrifuge Sample Cell

Analityczna ultracentryfuga (AUC) jest potężnym narzędziem biofizycznym, które umożliwia rejestrowanie profili sedymentacji makrocząsteczek podczas wirowania z wysoką prędkością. Przy odpowiednim zaplanowaniu i wykonaniu, eksperyment AUC z zakresu prędkości sedymentacji lub równowagi sedymentacyjnej może dostarczyć wielu informacji o białku w odniesieniu do jego rozmiaru i kształtu, czystości próbki, współczynnika sedymentacji, stanów oligomeryzacji oraz oddziaływań białko-białko.
Technika ta wymaga jednak ścisłego przestrzegania rygorów technicznych. Ogniwa z próbkami zawierają podzielony na sektory element środkowy, umieszczony pomiędzy dwoma zestawami okiennymi. Są one uszczelniane z momentem dokręcania wynoszącym około 120-140 in/lbs. Bufor referencyjny oraz próbka są wprowadzane do sektorów elementu środkowego, a następnie po uszczelnieniu ogniwa są precyzyjnie montowane w rotorze tytanowym w taki sposób, aby systemy detekcji optycznej skanowały zarówno próbkę, jak i bufor referencyjny po tej samej linii środkowej ścieżki radialnej przez każdy sektor elementu środkowego, podczas rotacji z prędkością do 60 000 rpm w warunkach bardzo wysokiej próżni
Prawidłowy montaż celi pomiarowej jest nie tylko krytyczny, ale jej komponenty są bardzo kosztowne i wymagają odpowiedniej pielęgnacji, aby zapewnić ich optymalny stan techniczny i zapobiec wyciekom oraz uszkodzeniom podczas eksperymentów. Okna należy obsługiwać ostrożnie, ponieważ nawet najmniejsza rysa lub pęknięcie może doprowadzić do rozbicia celi w wirówce. Styk między elementem centralnym a oknami musi być jak najściślejszy; oznacza to, że po przyłożeniu momentu obrotowego nie powinny być widoczne pierścienie Newtona. Kurz, kłaczki, rysy i tłuszcze na oknach lub elemencie centralnym pogarszają ten kontakt i mogą bardzo łatwo doprowadzić do wycieku roztworów z jednego sektora do drugiego lub całkowitego wycieku z elementu centralnego. Prowadzi to nie tylko do utraty cennych próbek, ale wycieki roztworów podczas eksperymentu spowodują niezrównoważenie ciśnienia w celi, co często skutkuje pęknięciem okien i elementów centralnych. Ponadto uszczelki korków i zaślepki obudowy muszą być szczelnie zamontowane, aby zapobiec wysysaniu roztworów z sektora elementu centralnego przez otwory załadowcze przez wysoką próżnię w komorze wirówki. Podkładki pod okna i uszczelki muszą być wolne od pęknięć i szczelin, które mogłyby spowodować przemieszczenie elementów, prowadząc do rozbicia okien.
W tym filmie zaprezentowano procedury montażu komórki z próbką, dokręcania, ładowania oraz wyrównywania rotora, aby pomóc zminimalizować uszkodzenia komponentów, wycieki roztworu i pęknięcia podczas przeprowadzania eksperymentu AUC.

Komora pomiarowa analitycznej ultrawirówki (AUC) mieści próbkę oraz bufor referencyjny i podczas eksperymentów jest poddawana działaniu wysokiej próżni oraz prędkościom rotacji do 60 000 rpm. Niniejszy film zaprezentuje rygorystyczną dbałość o szczegóły, która jest niezbędna podczas montażu, napełniania i centrowania tego kluczowego elementu eksperymentu AUC.

Montaż, napełnianie i centrowanie celi pomiarowej analitycznej ultrawirówki

Analityczna ultrawirówka (AUC) jest potężnym narzędziem biofizycznym, które pozwala na rejestrowanie profili sedymentacji makrocząsteczek podczas wysokich prędkości...

Witam, nazywam się Andrea Balbo. Pracuję w grupie Petera Shucksa w National Institutes of Health. W tym filmie zaprezentujemy procedury montażu, ładowania i wyrównania rotora celi pomiarowej analitycznej ultrawirówki.Zacznijmy. Oto elementy celi próbki w analitycznej ultrawirówce. Wewnątrz obudowy celi znajduje się 12 milimetrowy dwusektorowy wkład z eponu i węgla aktywnego, który zostanie umieszczony pomiędzy dwoma zestawami okiennymi. Każdy zestaw okienny składa się z uszczelki okna, wkładki okiennej oraz okna zamocowanego w uchwycie okiennym.Elementy te należy następnie wsunąć do wnętrza obudowy ogniwa, dopasowując ich wpusty do klinującego wypustu znajdującego się wewnątrz tulei obudowy; następnie należy założyć uszczelkę obudowy i zamknąć ogniwo z próbką za pomocą pierścienia śrubowego, przy zastosowaniu momentu obrotowego od 120 do 140 inch pounds. Po załadowaniu próbki, dwa uszczelki korka obudowy oraz uszczelnienie korka obudowy zamykają otwory załadowcze ogniwa, aby zapobiec powstawaniu artefaktów skanowania, wyciekom i uszkodzeniom podczas eksperymentów. Kluczowe jest, aby wszystkie komponenty były czyste, suche, wolne od kurzu i w jak najlepszym stanie; należy je często sprawdzać i w razie potrzeby wymieniać. Będą również potrzebne następujące elementy: ultrawirówka analityczna, tytanowy rotor czterootworowy, waga laboratoryjna, klucz dynamometryczny z czytelną tarczą i podstawką do klucza, przeciwwaga oraz obciążenia do przeciwwagi, śrubokręt płaski, pęseta, pipeta 200 µL z długą stożkową końcówką, narzędzia do centrowania oraz smar do powlekania wirowego.Konstrukcję komórki pomiarowej rozpoczynamy od złożenia dwóch zestawów okiennych. Najpierw umieść uszczelkę okienną na dnie uchwytu okna. Następnie ustaw wkładkę okienną, zwaną czasem podkładką okienną, wewnątrz uchwytu okna w taki sposób, aby otwór wkładki znajdował się naprzeciwko wpustu uchwytu pod niewielkim kątem.Następnie umieść okno w uchwycie, dopasowując znak rylcowy na oknie do wpustu uchwytu okna. Delikatnie dociśnij krawędzie po obu stronach okna. Aby zapewnić odpowiednią szczelność i dokładne osadzenie ogniwa z próbką, lekko smarujemy uszczelkę obudowy w pierścieniu śruby.Używając smaru do powlekania rotacyjnego, rozprowadź bardzo niewielką ilość środka między kciukiem a palcem wskazującym. Pokryj gwinty pierścienia śruby cienką, niewidoczną warstwą smaru. W ten sam sposób pokryj uszczelkę obudowy.Wytrzyj cały widoczny smar. Aby rozpocząć montaż celi pomiarowej, wsuń jeden zespół okna oknem skierowanym do góry w stronę użytkownika do obudowy celi, dopasowując wpust do klucza obudowy.Wyrównaj wpust elementu centralnego z kluczem obudowy i pozwól mu delikatnie opaść na zespół okna wewnątrz obudowy. Nigdy nie używaj żadnych narzędzi do wciskania elementu centralnego do obudowy celi. Może to spowodować trwałe uszkodzenie elementu centralnego, co doprowadzi do nieszczelności podczas przeprowadzanych eksperymentów.Obróć drugi zespół okienny tak, aby okno było skierowane w stronę elementu centralnego i z dala od Ciebie. Dopasuj wpust do klucza obudowy i nasuń go na element centralny. Na górze umieść uszczelkę obudowy.Następnie przykręć pierścień śruby tak, aby napis „out” był widoczny, używając do tego palców. Następnie za pomocą narzędzia do wyrównywania dokręć pierścień śruby ręcznie.Czasami element centralny nie wsuwa się łatwo do tulei obudowy. Można go najpierw wyrównać, a następnie umieścić na nim drugi zespół okienny. Należy przy tym wywrzeć delikatny nacisk w dół na zespół okienny.Oba elementy można wsunąć do obudowy komórki jednocześnie. W ten sposób unikamy bezpośredniego nacisku na element centralny. Jest to odpowiedni moment, aby sprawdzić, czy wewnątrz komórki nie znajdują się kurz, kłaczki lub odciski palców.Zauważą Państwo również pierścienie Newtona, które wskazują na obecność powietrza pomiędzy elementem centralnym a okienkami. Znikną one po dokręceniu pierścienia dociskowego, gdy napis „out” będzie widoczny. Wsuńcie kuwetkę z próbką całkowicie do wnętrza komory.Tulejka zaciskowa stojaka do dokręcania. Przytrzymaj ogniwo w miejscu, wywierając stały nacisk na uchwyt stojaka. Jednym płynnym ruchem dokręć pierścień śruby z momentem od 120 do 140 inch pounds.Zwolnić uchwyt statywu do dokręcania i ostrożnie wyjąć celę z próbką. Rutynowo ładujemy objętość 400 µL do każdego sektora 12 mm elementu centralnego. Używając pipety 200 µL, ustawić celę z próbką tak, aby otwory do ładowania znajdowały się u góry, a napis „out” na pierścieniu śruby był widoczny.Wsuń końcówkę pipety do połowy wysokości w lewy sektor elementu centralnego przez otwory do załadunku i powoli nanieś 200 µL roztworu referencyjnego. Powtórz tę czynność raz, aby łącznie nanieść 400 µL, używając tej samej końcówki pipety oraz tej samej techniki, czyniąc to ostrożnie i powoli. Wypełnij prawy sektor elementu centralnego 400 µL roztworu próbki.Kluczowe jest jak najdokładniejsze dopasowanie objętości roztworów referencyjnych i próbkowych. Mocne osadzenie końcówki na pipecie, powolne pobieranie i dozowanie roztworów, unikanie pęcherzyków powietrza oraz stosowanie tej samej końcówki do obu roztworów pomagają utrzymać równe objętości w celu zamknięcia celi.Umieść dwie czerwone uszczelki korków obudowy ściśle w każdym otworze załadowczym, upewniając się, że są one starannie rozmieszczone pomiędzy elementem centralnym a aluminiową obudową. Przykryj każdy otwór załadowczy korkiem obudowy i dokręć go ręcznie za pomocą małego śrubokręta płaskiego. Przed załadowaniem rotora upewnij się, że przeciwwaga oraz probówka znajdująca się naprzeciwko niej różnią się wagą nie więcej niż o 0.5 grama.Zacznij od ustawienia wagi na zero. Najpierw zważ kuwetkę z próbką, która zostanie umieszczona w pozycji przeciwległej do przeciwwagi. Taruj wagę, aby odjąć masę kuwetki z próbką.Następnie zważ przeciwwagę. W tym przypadku przeciwwaga jest lżejsza od celi z próbką o 4,193 grama. Wybierz odważnik przeciwwagi o masie czterech gramów i wkręć go w otwór mocujący przeciwwagi, upewniając się, że nie wystaje on ponad jej górną krawędź.Zważ przeciwwagę, aby upewnić się, że końcowa masa mieści się w przedziale 0,5 g. Korzystając z rotora czteroodworowego, umieść przeciwwagę w pozycji czwartej w taki sposób, aby biała strzałka była widoczna i skierowana w stronę siły odśrodkowej. Za pomocą narzędzia do wyrównywania upewnij się, że przeciwwaga została całkowicie osadzona wewnątrz rotora.Umieść komórkę równoważącą tak, aby zaślepki obudowy były skierowane w stronę środka rotora, a napis „out” na pierścieniu śruby był widoczny. Ponownie, używając narzędzia do wyrównywania, upewnij się, że komórka jest całkowicie osadzona wewnątrz rotora. Patrząc od spodu rotora.Wyrównaj wnętrze. Za pomocą narzędzia do wyrównywania zaznacz kreską znacznik znajdujący się najbliżej środka rotora względem kreski na przeciwwadze. W ten sam sposób wyrównaj komórkę z próbką w pozycji drugiej.Po wyrównaniu wszystkich probówek rotor jest gotowy do umieszczenia w komorze wirówki.

assembly-loading-alignment-an-analytical-ultracentrifuge-sample

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Montaż, ładowanie i wyrównanie komórki próbki ultrawirówki analitycznej

Przedstawiono metodę rekonstytucji modelowych macierzy nukleosomalnych z rekombinowanych histonów rdzeniowych i tandemowo powtarzanego DNA do pozycjonowania nukleosomów.  Opisujemy również, w jaki sposób eksperymenty z prędkością sedymentacji w ultrawirówce analitycznej i mikroskopia sił atomowych (AFM) są wykorzystywane do monitorowania stopnia nasycenia macierzy nukleosomalnej po rekonstytucji.

Składanie macierzy nukleosomalnych z rekombinowanych histonów rdzenia i pozycjonowania nukleosomów DNA

Zaprojektowaliśmy nowatorski bioreaktor obciążenia mechanicznego, który może zastosować jednoosiowe lub dwuosiowe naprężenie mechaniczne do biokompozytu chrząstki przed przeszczepem do ubytku chrząstki stawowej.

Projekt dwuosiowego bioreaktora obciążenia mechanicznego dla inżynierii tkankowej

Komórka ścinająca jest przeznaczona do pomiarów rozpraszania neutronów pod małym kątem w płaszczyźnie gradientu prędkości-prędkości ścinania i służy do charakteryzowania złożonych płynów. Pomiary przestrzennie rozdzielcze w kierunku gradientu prędkości są możliwe do badania materiałów z pasmami ścinania. Zastosowania obejmują badania dyspersji koloidalnych, roztworów polimerowych i struktur samoorganizujących się.

Pomiar mikrostruktury materiału pod przepływem za pomocą rozpraszania neutronów w 1-2 płaszczyznach przepływu i małym kącie

Równowaga sedymentacji (SE) może być wykorzystana do badania interakcji białko-białko w środowisku fizjologicznym. Niniejszy artykuł opisuje zastosowanie tej techniki do określenia wpływu pH na stabilność homo-pentameru utworzonego przez małe białko hydrofobowe (SH) kodowane przez ludzkiego syncytialnego wirusa oddechowego (hRSV).

Równowaga sedymentacji małego białka błonowego tworzącego oligomer: wpływ protonacji histydyny na stabilność pentamieryczną

Tutaj prezentujemy protokół do badania miękkiej materii i systemów biofizycznych w szerokiej mezoskopowej skali długości, od nm do μm, która obejmuje użycie dyfraktometru KWS-2 SANS o wysokiej intensywności i regulowanej rozdzielczości.

Badanie miękkiej materii i układów biologicznych w szerokiej skali długości od rozmiarów nanometrów i mikrometrów na małokątowym dyfraktometrze neutronowym KWS-2

Tutaj prezentujemy protokół dla nanolitografii sond skanujących na dużym obszarze, który jest możliwy dzięki iteracyjnemu dostosowaniu układów sond, a także wykorzystaniu wzorów litograficznych do badań interakcji komórka-powierzchnia.

Nanolitografia sondy skanującej o dużym obszarze ułatwiona dzięki automatycznemu wyrównaniu i zastosowaniu do wytwarzania substratów do badań nad kulturami komórkowymi

Zintegrowana platforma do manipulacji komórkami została opracowana do użytku w połączeniu z jednosondowym zestawem spektrometrii mas do analizy on-line pojedynczych komórek zawiesinowych w warunkach otoczenia.

Zintegrowana platforma do manipulacji komórkami w połączeniu z pojedynczą sondą do analizy spektrometrii mas leków i metabolitów w pojedynczych komórkach zawiesinowych

Tutaj prezentujemy przebieg procesu ekspresji, oczyszczania i wiązania liposomów heterodimerów SNX-BAR w drożdżach.

Ekspresja, oczyszczanie i wiązanie liposomów pączkujących heterodimerów SNX-BAR drożdży

Stosunek sygnału do szumu danych jest jednym z najważniejszych czynników przy wykonywaniu pomiarów dyfrakcji rentgenowskiej z mikrokryształów. Linia badawcza VMXm zapewnia środowisko o niskim poziomie hałasu i mikrowiązkę do takich eksperymentów. W tym miejscu opisano metody przygotowania próbek do montażu i chłodzenia mikrokryształów dla VMXm i innych linii badawczych do krystalografii makromolekularnej mikrofokusowej.

Rurociąg przygotowania próbek mikrokryształów na linii badawczej VMXm

Ładowanie koralików wprowadza białka, plazmidy i cząsteczki do przylegających komórek ssaków. Ta technika ładowania komórek jest niedroga, szybka i nie wpływa znacząco na zdrowie komórek. Najlepiej nadaje się do obrazowania żywych komórek.

Ładowanie kulek białek i kwasów nukleinowych do przylegających komórek ludzkich

Ten protokół opisuje tworzenie się komórek naśladujących pęcherzyki jedno- i wielolipidowe, dwuwarstwy lipidowe wspierane i dwuwarstwy lipidowe zawieszone. Te modele in vitro można dostosować do różnych typów lipidów i można je wykorzystać do badania różnych interakcji molekuł i makrocząsteczek.

Montaż dwuwarstwowych modeli lipidowych naśladujących i zawieszonych w powietrzu do badania oddziaływań molekularnych

Naucz się montażu, ładowania i wyrównywania analitycznej celi próbki ultrawirówki. Ta metoda pokazuje prawidłową technikę przygotowania komórek próbkowych dla niezawodnych pomiarów biologicznych.

Montaż, napełnianie i centrowanie celi pomiarowej analitycznej ultrawirówki

Przeglądaj więcej filmów