Name: Pozyskiwanie hemocytów z hawajskiej kałamarnicy bobtail Euprymna scolopes i obserwowanie ich przylegania do bakterii symbiotycznych i niesymbiotycznych (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-02-11T04:52:00.000+00:00
Duration: 5 min 29 s
Description: Naucz się izolować hemocyty z hawajskiej kałamarnicy Euprymna scolopes i obserwować ich przyleganie do bakterii symbiotycznych. Ta metoda fluorescencyjna umożliwia badanie interakcji komórkowych w biologii morskiej.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Źródła finansowania: University of Connecticut Research Foundation oraz Department of Molecular and Cell Biology dla SVN, Sigma Xi Grant-in-Aid-of Research oraz Antonio H. and Majorie R. 
Romano Graduate Education Fellowship dla AJC

<ol>
 <li>Przygotować 500 mL sterylnej sztucznej wody morskiej filtrowanej przez filtr 0,22 μm (FSW; zasolenie 35 ppt). Przefiltrować sztuczną lub naturalną wodę morską przez filtr 0,22 μm w celu usunięcia cząsteczek i bakterii.</li>
 <li>Zanurzyć jednego dorosłego mątwy hawajskiej (Euprymna scolopes) w 2% roztworze etanolu w FSW w celu znieczulenia. Pozostawić zwierzę w środku znieczulającym przez około 10 minut. Mątwa przestanie pływać i nie będzie aktywnie reagować na dotyk. Należy nadal obserwować oddychanie, objawiające się ruchem płaszcza, oraz aktywność chromatoforów.</li>
 <li>Umieścić mątwę stroną brzuszną do góry na standardowej woskowanej kuwecie do sekcji. Zanurzyć zwierzę w FSW zawierającym 2% etanolu.</li>
 <li>Używając standardowego końcówki do pipety 200 μl, odsunąć lejek i płaszcz, aby odsłonić główny naczynie krwionośne głowy znajdujące się pomiędzy oczami.</li>
 <li>Za pomocą sterylnej strzykawki 1 mL z igłą 26,5 G nakłuć naczynie krwionośne głowy i pobrać od 50 do 100 μl hemolimfy. Przenieść hemolimfę do sterylnej probówki 1,5 mL i umieścić na lodzie. Uwaga: Jeśli zwierzę ma służyć jako dawca wielokrotnie, należy pobierać jednorazowo tylko 10-20 μl hemolimfy. Przenieść zwierzę do zbiornika z normalną wodą morską. Zwierzę odzyska sprawność w ciągu 30 min.</li>
 <li>Świeżo pobrane hemocyty należy przemyć i ponownie zawiesić w 500 μl roztworu Ringera dla mątwy (S-Ringers; 530 mM NaCl, 10 mM KCl, 25 mM MgCl2, 10 mM CaCl2 oraz 10 mM bufor HEPES, pH 7,5). </li>
 <li>Stężenie hemocytów należy określić za pomocą hemocytometru, a następnie nanieść około 2000 komórek na komorowe szkiełka nakrywkowe i pozostawić do przylegania do szkła przez 10 min w temperaturze pokojowej. Przy takim zagęszczeniu hemocyty tworzą jednorodną monowarstwę na powierzchni szkiełka.</li>
 <li>Aby zaobserwować wiązanie bakterii z hemocytami gospodarza, hemocyty poddaje się działaniu szczepów bakteryjnych znakowanych fluorescencyjnie, takich jak Vibrio fischeri ES114 i/lub Vibrio harveyi B392, z których każdy zawiera zielony reporter fluorescencyjny. V. fischeri ES114 oraz V. harveyi B392 hoduje się do środkowej fazy logarytmicznej w pożywce tryptonowo-morskiej (SWT) w temperaturze 28°C w inkubatorze orbitalnym. Gęstość optyczną przy 600 nm mierzy się spektrofotometrycznie w celu określenia zagęszczenia komórek. Bakterie osadza się przez wirowanie (5000 rpm przez 5 min), odrzuca nadsącz, a osad zawiesza ponownie w S-Ringers.</li>
 <li>Do każdej komory dodaje się 100 000 komórek bakteryjnych, tak aby średnio na jeden hemocyt przypadało 50 bakterii. Mieszaniny hemocytów i bakterii inkubuje się w roztworze S-Ringers w temperaturze 25°C przez 1 h, co jest czasem ustalonym dla uzyskania maksymalnego poziomu wiązania. </li>
 <li>Cytoplazmę hemocytów barwi się następnie fluorescencyjnie barwnikiem 0,005% CellTracker Orange (Invitrogen), a następnie przemywa w S-Ringers w celu wizualizacji komórek. </li>
 <li>Zbarwione hemocyty wraz z powiązanymi bakteriami obserwuje się w świetle fluorescencyjnym przy użyciu stereoskopu fluorescencyjnego Zeiss Discovery V20 lub spektralnego konfokalnego mikroskopu laserowego Leica SP2, a następnie zlicza się je na całej powierzchni komórki zwierzęcej.</li>
</ol>
Reprezentatywne wyniki
Ponieważ hemolimfa głowonogów zawiera zewnątrzkomórkową hemocyjaninę, a nie hemoglobinę, po natlenieniu hemolimfa przybierze ciemnoniebieski kolor. Przy zastosowaniu tej metody uzyska się średnio ~5000 hemocytów na μl hemolimfy. Po przyleganiu do komorowych szkiełek nakrywkowych i barwieniu fluorescencyjnym hemocyty powinny wykazywać intensywną czerwoną fluorescencję i mieć kształt ameboidalny. W przypadku adhezji bakteryjnej V. fischeri będą słabo przylegać do hemocytów (1-2 komórki bakteryjne na komórkę krwi), podczas gdy V. harveyi będą przylegać silnie (10-15 komórek bakteryjnych na hemocyt).
<img src="/files/ftp_upload/1714/1714fig1.jpg" alt="Anatomia głowonoga ze strzałką wskazującą strukturę oka, diagram biologii morskiej." data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Rysunek 1"> Rysunek 1. Dorosła mątwka hawajska Euprymna scolopes z zaznaczonym położeniem naczynia krwionośnego głowy.
<img src="/files/ftp_upload/1714/1714fig2.jpg" alt="Obraz z mikroskopii fluorescencyjnej, struktury komórkowe na czerwono, cząsteczki obce na zielono, badanie komórkowe." data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Rycina 2"> Rycina 2. Wyniki ekspozycji hemocytów na Vibrio fischeri (A) oraz Vibrio harveyi (B). Czerwony: Cell Tracker Orange; Zielony: bakterie znakowane GFP.

<ol><li>Koropatnick, T. A., Kimbell, J. R., McFall-Ngai, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Responses+of+host+hemocytes+during+the+initiation+of+the+squid-Vibrio+symbiosis%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Bull%22%5BJournal%5D)">Responses of host hemocytes during the initiation of the squid-Vibrio symbiosis.</a> Biol. Bull. 212, 29-39 (2007).</li>
<li>McFall-Ngai, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unseen+forces%3A+the+influence+of+bacteria+on+animal+development%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Unseen forces: the influence of bacteria on animal development.</a> Dev. Biol. 242, 1-14 (2002).</li>
<li>McFall-Ngai, M. J., Ruby, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Symbiont+recognition+and+subsequent+morphogenesis+as+early+events+in+an+animal-bacterial+mutualism%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Symbiont recognition and subsequent morphogenesis as early events in an animal-bacterial mutualism.</a> Science. 254, 1491-1494 (1991).</li>
<li>Nyholm, S. V., Stewart, J. J., Ruby, E. G., McFall-Ngai, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recognition+between+symbiotic+Vibrio+fischeri+and+the+haemocytes+of+Euprymna+scolopes%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Recognition between symbiotic Vibrio fischeri and the haemocytes of Euprymna scolopes.</a> Environ. Microbiol. 11, 483-493 (2009).</li>
<li>Nyholm, S. V., McFall-Ngai, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+winnowing%3A+establishing+the+squid-Vibrio+symbiosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The winnowing: establishing the squid-Vibrio symbiosis.</a> Nat. Rev. Microbiol. 2, 632-642 (2004).</li>
<li>Nyholm, S. V., Stabb, E. V., Ruby, E. G., McFall-Ngai, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+an+animal-bacterial+association%3A+recruiting+symbiotic+Vibrios+from+the+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Establishment of an animal-bacterial association: recruiting symbiotic Vibrios from the environment.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 97, 10231-10235 (2000).</li>
<li>Nyholm, S. V., McFall-Ngai, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sampling+the+light-organ+microenvironment+of+Euprymna+scolopes%3A+description+of+a+population+of+host+cells+in+association+with+the+bacterial+symbiont+Vibrio+fischeri%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Bull%22%5BJournal%5D)">Sampling the light-organ microenvironment of Euprymna scolopes: description of a population of host cells in association with the bacterial symbiont Vibrio fischeri.</a> Biol Bull. 195, 89-97 (1998).</li>
<li>Visick, K. L., Ruby, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vibrio+fischeri+and+its+host%3A+it+takes+two+to+tango%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Vibrio fischeri and its host: it takes two to tango.</a> Curr. Opin. Microbiol. 9, 632-638 (2006).</li>
</ol>

Badania dotyczące roli układu odpornościowego w pośredniczeniu sygnałów molekularnych między korzystnymi bakteriami a ich gospodarzami wniosły w ostatnich latach istotny wkład w nasze zrozumienie koewolucji eukariotów z ich mikrobiotą. System mątwica/vibrio okazał się być praktycznym modelem badawczym pozwalającym na udzielenie odpowiedzi na fundamentalne pytania w tej dziedzinie2,3,5,6,8. Organ świetlny mątwicy Euprymna scolopes umożliwia kolonizację wyłącznie przez luminescencyjną bakterię Vibri...

<table><tbody><tr><td>System szkiełek nakrywek z borokrzemianu Lab-Tek z komorami #1.0 (8 komór)</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>155411</td><td></td></tr><tr><td>Strzykawka insulinowa 1 ml 26.5 G bez lateksu</td><td>BD Biosciences</td><td>C34551</td><td></td></tr><tr><td>Cell Tracker Orange</td><td>Invitrogen</td><td>C34551</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop SteREO Discovery V20</td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop konfokalny SP2</td><td>Leica Microsystems</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

pozyskiwanie hemocytów z hawajskiej mątwy euprymna scolopes i obserwacja ich przylegania do bakterii symbiotycznych i niesymbiotycznych

Obtaining Hemocytes from the Hawaiian Bobtail Squid Euprymna scolopes and Observing their Adherence to Symbiotic and Non-Symbiotic Bacteria

Badania dotyczące roli układu odpornościowego w pośredniczeniu w przesyłaniu sygnałów molekularnych między pożytecznymi bakteriami a ich gospodarzami w ostatnich latach wniosły znaczący wkład w nasze zrozumienie koewolucji eukariotów z ich mikrobiotą. Symbiotyczna relacja między hawajską mątwą bobtail,Euprymna scolopesoraz bioluminescencyjna bakteriaVibrio fischeribył wykorzystywany jako system modelowy do zrozumienia wpływu korzystnych bakterii na rozwój zwierząt. Niedawne badania wykazały, że hemocyty o charakterze makrofagowym, będące jedynym komponentem komórkowym wrodzonego układu odpornościowego organizmu gospodarza (mątwy), prawdopodobnie odgrywają istotną rolę w pośredniczeniu w nawiązywaniu i utrzymywaniu tej asocjacji. Niniejszy protokół zademonstruje, jak pozyskać hemocyty zE. scolopesa następnie należy wykorzystać te komórki w testach wiązania bakterii. Dorosłe mątwy są najpierw znieczulane przed pobraniem hemolimfy za pomocą strzykawki z głównego naczynia krwionośnego głowy. Hemocyty gospodarza, zawarte w wyekstrahowanej hemolimfie, są przytwierdzane do szkiełek przedmiotowych z komorkami, a następnie poddawane działaniu symbiontów znakowanych zielonym białkiem fluorescencyjnymVibrio fischerii niesymbiotycznyVibrio harveyiHemocyty barwi się kontrastowo barwnikiem fluorescencyjnym (Cell Tracker Orange, Invitrogen), a następnie wizualizuje za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej.

W niniejszym filmie zaprezentowano sposób pozyskiwania hemocytów (komórek krwi) z hawajskiej mątwy, Euprymna scolopes, do wykorzystania w badaniach biologii komórki oraz testach adhezji bakteryjnej. Hemocyty zostaną zabarwione barwnikiem fluorescencyjnym i poddane działaniu bakterii znakowanych GFP.

Pozyskiwanie hemocytów z hawajskiej mątwy Euprymna scolopes i obserwacja ich przylegania do bakterii symbiotycznych i niesymbiotycznych

Badania dotyczące roli układu odpornościowego w pośredniczeniu w przekazywaniu sygnałów molekularnych między pożytecznymi bakteriami a ich gospodarzami pozwoliły w ostatnich latach na...

Po usunięciu dorosłych mątw bobtail z ich zbiorników i znieczuleniu ich 2% roztworem etanolu w filtrowanej wodzie morskiej, pobiera się krew z naczynia krwionośnego w obrębie głowy. Hemolimfa pobrana za pomocą strzykawki o rozmiarze 26,5 G ma niebieski kolor.Ze względu na obecność hemocyjaniny, hemocyty rozcieńcza się do pożądanego stężenia i nanosi w alykwotach na szkiełko podstawowe z ośmioma komorami. Po przytwierdzeniu hemocytów do szkiełka, barwi się je za pomocą Cell Tracker Orange, barwnika fluorescencyjnego, a następnie poddaje działaniu bakterii znakowanych GFP, które można wizualizować pod mikroskopem fluorescencyjnym. Witam, nazywam się Spencer Olm i pracuję w Katedrze Biologii Molekularnej i Komórkowej na Uniwersytecie Connecticut.Jestem Andrew Collins z NY Home Lab. Dzisiaj zaprezentujemy procedurę pobierania hemolimfy lub krwi z hawajskiej mątwy bobtail. Przygotowują Państwo tę opis.Mątwy bobtail są zwierzętami nocnymi występującymi u wybrzeży Hawajów w pobliżu raf koralowych; wykorzystują one światło wytwarzane przez swoje symbionty do kamuflażu w nocy, podczas polowania na ich ulubiony pokarm, którym są krewetki. Powyższą zależność wykorzystujemy w laboratorium do badania sposobu, w jaki pożyteczne bakterie kolonizują tkanki zwierząt. Procedurę tę stosujemy w naszym laboratorium do badania oddziaływań pomiędzy komponentami wrodzonego układu odpornościowego gospodarza a jego bioluminescencyjnym partnerem bakteryjnym VIO ide.Zacznijmy zatem. Przed pobraniem hemolimfy należy znieczulić jedną dorosłą mątwę w zlewce o pojemności jednego litra zawierającej świeżo przygotowany roztwór 2% etanolu w 500 mililitrach filtrowanej i sterylizowanej sztucznej wody morskiej. Po 10 minutach mątwa będzie pływać bezwładnie i nie będzie aktywnie reagować na dotyk.Należy jednak nadal obserwować proces oddychania, przejawiający się ruchami płaszcza, oraz aktywność chromatoforów, świadczącą o działaniu komórek pigmentowych. Nalać część sterylnego roztworu wody morskiej z etanolem z zlewki do standardowej woskowej kuwety do sekcji i zanurzyć w niej kalmara stroną brzuszną do góry. Za pomocą jednego standardowego końcówki do pipety 200 µL odsunąć lejek i płaszcz, aby odsłonić główne naczynie krwionośne głowy znajdujące się pomiędzy oczami.Za pomocą sterylnej strzykawki z igłą o rozmiarze 26,5 G nakłuj naczynie krwionośne w głowie i pobierz od 50 do 100 µL hemolimfy lub od 10 do 20 µL. Jeśli zwierzę ma służyć jako dawca wielokrotnie, umieść hemolimfę w sterylnej probówce o pojemności 1,5 mL na lodzie. Należy zauważyć, że w przypadku poprawnego wykonania tego kroku krew kalmara powinna mieć ciemnoniebieski kolor.Przenieś zwierzę do zbiornika z normalną wodą morską w celu reanimacji, a następnie wiruj hemolimfę w mikrocentryfudze w temperaturze pokojowej, aby odwirować hemocyty i odpipetować nadsącz. Resuspenduj hemocyty w 500 µL roztworu Ringera dla kalmarów w celu przemycia. Następnie ponownie wiruj, aby osadzić komórki i usunąć nadsącz.Na koniec resuspenduj hemos i roztwór Ringera dla kalmarów. Określ stężenie komórek za pomocą hemocytometru. Następnie nanieś około 2000 komórek do każdej komory szkiełka podstawowego.Pozostaw komórki do przywierania do szkła przez około 10 minut. Przy takim zagęszczeniu hemosy powinny utworzyć jednorodną monowarstwę na powierzchni szkła. Przechowuj hemosy w lodzie podczas przygotowywania bakterii w inkubatorze wytrząsowym w temperaturze 28 °C.Wyhodować jeden lub więcej szczepów bakterii Vireo zawierających zielony fluorescencyjny gen reporterowy do środkowej fazy logarytmicznej w pożywce seawater tritone. Za pomocą spektrofotometru zmierzyć gęstość optyczną hodowli przy 600 nm, aby określić zagęszczenie komórek; bakterie odwirować w wirówce, odrzucić nadsącz i zawiesić osad. W 1 mL roztworu Ringer'a dla kalmarów dodać bakterie do hemocytów.Na szkiełkach przedmiotowych z komorkami nanieść 100 000 bakterii na każdą komorkę. Inkubować szkiełka w temperaturze pokojowej przez jedną godzinę. Aby uzyskać maksymalne wiązanie, dodać barwnik cell tracker orange do stężenia końcowego 0,005% w celu zabarwienia cytoplazmy.Inkubować przez 30 minut, a następnie przemyć 150 µL świeżego roztworu ringera dla kalmarów. Przy użyciu mikroskopu konfokalnego obejrzeć barwione hemocyty i związane z nimi bakterie, a następnie przeprowadzić zliczenie bakterii na całej powierzchni hemocytu. Teraz zaprezentujemy reprezentatywne obrazy hemocytów poddanych działaniu niesymbiotycznej bakterii *Vibrio harveyi* znakowanej GFP oraz naturalnej bakterii symbiotycznej kalmarów *Vibrio fischeri*.Oto obraz miejsca pobrania krwi, które nie zostało poddane działaniu żadnych bakterii. Komórka ma kolor czerwony i uległa aktywacji, co pozwala zauważyć jej wypustki przypominające pseudopodia.Kiedy komórka jest poddana działaniu symbiotycznej bakterii filio fii, widać kilka bakterii wiążących się z powierzchnią komórki. Jednakże, gdy hemocyty są wystawione na działanie niesymbiotycznej bakterii filio Harvey Harveyi, wiąże się znacznie więcej bakterii. Przedstawiliśmy właśnie sposób ekstrakcji hemolimfy z mątwy bobtail, izolacji hemocytów oraz ich wykorzystania w eksperymentach w celu scharakteryzowania adhezji bakterii do tych komórek mątwy.Protokół ten można zmodyfikować pod kątem immunochemii poprzez utrwalenie hemocytów po ich przyczepieniu do powierzchni szkiełka podstawowego. Po pozyskaniu hemocytów z organizmu zwierzęcia można również przeprowadzić ekstrakcję RNA, DNA oraz białek. To wszystko.Dziękujemy za oglądanie i życzymy powodzenia w przeprowadzaniu eksperymentów.

obtaining-hemocytes-from-hawaiian-bobtail-squid-euprymna-scolopes

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Uzyskanie hemocytów z kalmara bobtail z Hawajów Euprymna scolopes i obserwowanie ich przyleganie do bakterii symbiotycznych i nie-symbiotycznych

Amerykański krab podkowy, Limulus polyphemus, jest prawdopodobnie najdogodniejszym źródłem dużych ilości krwi wśród wszystkich bezkręgowców. Krew ma prosty skład, z tylko jednym typem komórek w krążeniu ogólnym – amebocytem ziarnistym – oraz tylko trzema dominującymi białkami w osoczu: hemocyjaniną, białkami reaktywnymi C oraz α2-makroglobuliną. Krew pobierana jest z serca, a komórki krwi i osocze rozdziela się poprzez wirowanie.

Pobieranie krwi z amerykańskiego kraba podkowiastego, Limulus polyphemus

Niniejszy protokół opisuje mikrofluidyczny model kokultury do jednoczesnej i zlokalizowanej hodowli komórek nabłonkowych oraz bakterii. Model ten może być wykorzystany do badania roli różnych rozpuszczalnych sygnałów molekularnych w patogenezie, a także do oceny skuteczności potencjalnych probiotycznych szczepów bakteryjnych.

Mikrofluidyczna kokultura komórek nabłonkowych i bakterii do badania oddziaływań zapśredniczonych przez sygnały rozpuszczalne

Opisana metoda przedstawia procedurę, zgodnie z którą mątwka hawajska Euprymna scolopes oraz jej bakteryjny symbiont Vibrio fischeri są hodowane oddzielnie, a następnie łączone w celu umożliwienia specyficznej kolonizacji organu świetlnego mątwy przez bakterie. Opisano metody wykrywania kolonizacji za pomocą luminescencji bakteryjnej oraz poprzez bezpośrednie liczenie kolonii.

Kolonizacja mątwy Euprymna scolopes przez Vibrio fischeri

Hemocyty owadów pełnią wiele istotnych funkcji, zarówno immunologicznych, jak i nieimmunologicznych, na wszystkich etapach rozwoju owada. Nasza obecna wiedza na temat typów i funkcji hemocytów pochodzi z badań nad genetycznymi modelami owadów. W niniejszym opracowaniu przedstawiamy metodę izolacji, kwantyfikacji i wizualizacji hemocytów z dzikich gąsienic.

Prosty protokół ekstrakcji hemocytów z dzikich gąsienic

Ten film demonstruje test zaburzeń hemocytów, oceniając ponowne przyleganie hemocytów do kieszeni krwiotwórczych larw Drosophila. Zakłócenia mechaniczne uwalniają rezydujące hemocyty, podnosząc liczbę krążących hemocytów. Po wyzdrowieniu potwierdza się ponowne przyleganie rezydentnych hemocytów, co ilustruje odwracalność.

Test zaburzeń hemocytów w celu oceny readhezji hemocytów do kieszonek krwiotwórczych

Heligmosomoides polygyrus to mysi nicień o potężnych zdolnościach immunomodulacyjnych, które są bardzo podobne do tych z bardzo rozpowszechnionej infekcji ludzkim robakiem pasożytniczym. W tym miejscu opisujemy protokół długoterminowego utrzymania cyklu życiowego H. polygyrus.

Hodowla Heligmosomoides polygyrus: immunomodulującego pasożyta nicieni i wydzielanych przez niego produktów

Przedstawiono protokół ekstrakcji pigmentów z nanostrukturalnych granulek w chromatoforach kałamarnicy Doryteuthis pealeii.

Metoda ekstrakcji pigmentów z kałamarnicy Doryteuthis pealeii

Zachowanie związane z ochroną partnera odgrywa ważną rolę w rozmnażaniu widłonogów z rodzaju Tigriopus. Jednak metody badania tego zachowania nie zostały dobrze opisane. Poniżej opisujemy metody: 1) indywidualnej hodowli dziewiczych zwierząt Tigriopus oraz 2) ilościowej analizy ich zachowań związanych z ochroną partnerów.

Indywidualne hodowle widłonogów Tigriopus i analiza ilościowa ich zachowań związanych z ochroną partnerów

Analiza SEM jest skuteczną metodą pomagającą w identyfikacji gatunków lub dyskryminacji fenotypowej. Protokół ten opisuje metody badania określonych szczegółów morfologicznych trzech reprezentatywnych typów organizmów i miałby szerokie zastosowanie do badania cech wielu typów organizmów i tkanek.

Otrzymywanie organizmów prokariotycznych i eukariotycznych z wykorzystaniem suszenia chemicznego do analizy morfologicznej w skaningowej mikroskopii elektronowej (SEM)

Koralowce tworzą bioróżnorodne ekosystemy ważne zarówno dla ludzi, jak i organizmów morskich. Jednak nadal nie rozumiemy pełnego potencjału i funkcji wielu komórek koralowców. W tym miejscu przedstawiamy protokół opracowany do izolacji, znakowania i rozdzielania populacji kamiennych komórek koralowców.

Sortowanie komórek aktywowane fluorescencją w celu izolacji populacji komórek skleraktynów

Artykuł proponuje nowatorską metodę in vitro do szybkiej i czułej oceny toksyczności i ekotoksyczności zanieczyszczeń, w oparciu o ruchliwość hemocytów Mytilus galloprovincialis. Metoda ta ma na celu przyczynienie się do opracowania bardziej etycznych i czułych badań narażenia toksykologicznego i ekotoksykologicznego.

Test toksykologiczny i ekotoksykologiczny oparty na ruchliwości hemocytów omułka (Mytilus galloprovincialis)

Naucz się izolować hemocyty z hawajskiej kałamarnicy Euprymna scolopes i obserwować ich przyleganie do bakterii symbiotycznych. Ta metoda fluorescencyjna umożliwia badanie interakcji komórkowych w biologii morskiej.

Pozyskiwanie hemocytów z hawajskiej kałamarnicy bobtail Euprymna scolopes i obserwowanie ich przylegania do bakterii symbiotycznych i niesymbiotycznych (Wideo) | JoVE Journal

Pozyskiwanie hemocytów z hawajskiej mątwy Euprymna scolopes i obserwacja ich przylegania do bakterii symbiotycznych i niesymbiotycznych

Przeglądaj więcej filmów