Name: Wykorzystanie systemu frakcjonowania GELFREE 8100 do frakcjonowania na podstawie masy cząsteczkowej z odzyskiem fazy ciekłej (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-12-03T16:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 57 s
Description: Poznaj frakcjonowanie białek metodą GELFREE 8100 w oparciu o masę cząsteczkową z wysokim odzyskiem fazy ciekłej. Technika ta umożliwia analizę złożonych próbek białkowych w proteomice.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

1. Przygotowanie próbki białka
<ol>
 <li>W probówce do wirówki o pojemności 500 μl połączyć następujące składniki:</li>
</ol>
<table border="1">
<tbody >
 <tr >
 <td >Odczynnik</td>
 <td >Objętość do dodania:</td>
 </tr>
 <tr >
 <td >*Próbka białka (do 1 mg)</td>
 <td >Do 112 μL</td>
 </tr>
 <tr >
 <td >Bufor do próbek (5X) dołączony do zestawu z kartridżem</td>
 <td >30 μL</td>
 </tr>
 <tr >
 <td >DTT 1M</td>
 <td >8μL</td>
 </tr>
 <tr >
 <td >18 Ω H2O</td>
 <td >x μL do uzyskania całkowitej objętości próbki 150μL**</td>
 </tr>
</tbody>
</table>
<ol start="2">
 <li>Próbki poddać denaturacji w temperaturze 95°C przez 5 minut. Schłodzić do temperatury pokojowej.</li>
</ol>
*Całkowita ilość białka do rozdzielenia będzie zależeć od złożoności próbki. W przypadku bardziej złożonych próbek, takich jak homogenat tkankowy, zaleca się 150-200 μg na kanał.
**Jeśli objętość próbki jest mniejsza niż 112 μL, należy dodać 18 Ω H2O, aby uzyskać objętość końcową 150 μL.
2. Załadunek kartridża GELFREE
<ol>
 <li>Wyjmij kartridż GELFREE 8100 z foliowej torebki.</li>
 <li>Zdejmij i wyrzuć uszczelniacz płytki.</li>
 <li>Usuń bufor do przechowywania z komór kartridża za pomocą pipety. Jeśli używane będą wszystkie 8 komór kartridża, można go odwrócić, aby zlać bufor do przechowywania z komór.</li>
 <li>Przygotuj kartridż do załadunku, dodając bufor do elektroforezy GELFREE do każdej z komór kartridża w następujący sposób:</li>
</ol>
<table border="1">
<tbody >
 <tr >
 <td >Komora kartridża GELFREE</td>
 <td >Objętość buforu do elektroforezy GELFREE do dodania</td>
 </tr>
 <tr >
 <td >Rezerwuar buforu anodowego</td>
 <td >8 mL</td>
 </tr>
 <tr >
 <td >Rezerwuar buforu katodowego</td>
 <td >6 mL</td>
 </tr>
 <tr >
 <td >Komory zbiorcze</td>
 <td >po 100 μL każda</td>
 </tr>
</tbody>
</table>
<ol start="5">
 <li>Usuń i zutylizuj wszelki bufor z komory ładowania próbek.</li>
 <li>Nanieś próbki o objętości 150 μL do komór ładowania, używając pipety 8-kanałowej.</li>
 <li>Umieść załadowany kartridż w stacji frakcjonującej GELFREE 8100. Opuść układy elektrod i zamknij pokrywę.</li>
</ol>
3. Uruchomienie kartridża
 <ol>
 <li>Używając ekranu dotykowego urządzenia, naciśnij przycisk method, aby wyświetlić listę zaprogramowanych metod. Każda z zaprogramowanych metod składa się z określonych napięć i przerw czasowych zaprojektowanych w celu rozdzielenia białek w konkretnym zakresie mas cząsteczkowych. System GELFREE 8100 automatycznie zatrzyma pracę w celu pobrania frakcji w odstępach czasu określonych w metodzie.</li>
 <li>Po zidentyfikowaniu odpowiedniej metody naciśnij przycisk retrieve i wprowadź numer żądanej zaprogramowanej metody za pomocą klawiatury ekranowej. Naciśnij ok, a następnie przycisk apply. Zastosowana metoda pojawi się w dolnej części głównego ekranu.</li>
 <li>Aby wybrać kanały (liczbę próbek), które będą wykorzystane w przebiegu, naciśnij przycisk channel na głównym ekranie. Aby wybrać wszystkie osiem kanałów, naciśnij all. Następnie naciśnij done, aby powrócić do głównego ekranu.</li>
 <li>Upewnij się, że pokrywa zabezpieczająca jest zamknięta, a kontrolka na dole ekranu świeci na zielono.</li>
 <li>Aby rozpocząć rozdział białek, naciśnij start. Stacja frakcjonowania automatycznie zatrzyma pracę, gdy nadejdzie czas pobrania frakcji. Uwaga: Podczas pracy systemu okręgi widoczne w polu po lewej stronie ekranu obrazują status każdego kanału. Zielony okrąg oznacza, że kanał jest aktywny, żółty okrąg oznacza, że urządzenie zostało wstrzymane, a czerwony okrąg oznacza awarię kanału. Przyłożone napięcia i natężenia prądu są wyświetlane po prawej stronie okręgów stanu kanałów. Frakcje należy usuwać tylko wtedy, gdy okręgi stanu zmienią kolor na żółty i na ekranie urządzenia pojawi się powiadomienie tekstowe.</li>
 <li>Aby usunąć frakcje, otwórz pokrywę urządzenia i za pomocą pipety 8-kanałowej pobierz 150 μL z każdej z komór zbiorczych.</li>
 <li>Po usunięciu frakcji przemyj dwukrotnie komorę zbiorczą buforem do elektroforezy GELFREE Running Buffer, dodając 100 μl na kanał i pipetując w górę i w dół dwukrotnie.</li>
 <li>Po przemyciu dodaj ponownie 100 μL buforu GELFREE Running Buffer do komór zbiorczych, zamknij pokrywę i naciśnij przycisk resume.</li>
 <li>System GELFREE 8100 będzie pracować do następnego odstępu czasu. Całkowity pozostały czas eksperymentu jest wyświetlany po prawej stronie ekranu. Aby przełączać widok między time remaining, time elapsed a time to pause, naciśnij przycisk nad polem wyświetlającym czas.</li>
 <li>Po zebraniu wszystkich frakcji można je natychmiast wykorzystać do dalszego przygotowania, takiego jak ogniskowanie izoelektryczne lub elektroforeza w żelu, lub do analizy z wykorzystaniem chromatografii cieczowej sprzężonej z spektrometrią mas lub immunoafinności.</li>
</ol>
4. Reprezentatywne wyniki
200 μg homogenatu wątroby bydlęcej podzielono na 12 frakcji przy użyciu systemu frakcjonowania GELFREE. 6 μL każdej frakcji naniesiono na standardowy żel SDS PAGE 1D i zabarwiono srebrem. Jak pokazano na Rysunku 1, próbka białka została rozdzielona na 12 oddzielnych frakcji, obejmujących zakres masy cząsteczkowej od 3,5kDa do 150kDa. W ścieżkach 1 i 14 przedstawiono również marker masy cząsteczkowej (ColorBurst, Sigma). Przedstawiony żel podkreśla wysoką wydajność odzyskiwania białek osiągniętą dzięki zastosowaniu systemu GELFREE 8100 do frakcjonowania białek. Widoczny żel reprezentuje 4% białka odzyskanego z 200 μg.
<img src="/files/ftp_upload/1842/1842fig1tmb.jpg" alt="Wynik elektroforezy żelowej SDS-PAGE, prążki białkowe, markery masy cząsteczkowej, rozdział białek." border="0" data-altupdatedat="1761735611000" data-alt="Rysunek 1"> Rysunek 1. Białka z homogenatu wątroby bydlęcej rozdzielone za pomocą systemu frakcjonowania GELFREE. Na żel do elektroforezy 1D SDS-PAGE naniesiono i przeprowadzono 6 μL z każdej frakcji o objętości 150 μL, a następnie zastosowano barwienie srebrem. Zgodnie z oznaczeniem naniesiono również wzorzec masy cząsteczkowej (MW). Prosimy <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1842/1842fig1.jpg">kliknąć tutaj</a>, aby zobaczyć powiększoną wersję rysunku 1.

<ol><li>Tran, J. C., Doucette, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+Size+Separation+of+Intact+Proteins+in+Solution+Phase+for+Mass+Spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem.%22%5BJournal%5D)">Multiplexed Size Separation of Intact Proteins in Solution Phase for Mass Spectrometry.</a> Anal Chem.. , (2009).</li>
</ol>

Autorzy tego artykułu są zatrudnieni w firmie Protein Discovery, która produkuje odczynniki i instrumenty wykorzystane w niniejszym artykule.

System frakcjonowania GELFREE 8100 zapewnia szybką, prostą i powtarzalną metodę podziału złożonych próbek białek na oddzielne frakcje w oparciu o masę cząsteczkową. Ta nowatorska metoda frakcjonowania eliminuje konieczność wycinania prążków lub plamek, umożliwiając izolację białek z szerokiego zakresu mas w ciągu 90 minut. Możliwość naniesienia stosunkowo dużych ilości próbki i odzyskania frakcji w fazie ciekłej jest szczególnie użyteczna przy izolacji i analizie białek o niskiej obfitości, które są zazwyczaj trudniejsze do wykrycia. Uzyskane frakcje mogą być następnie wykorzystane w szerokim spektrum zastosowań, takich jak LC-MS, MALDI-TOF oraz immunoblotting.

wykorzystanie systemu frakcjonowania gelfree 8100 do frakcjonowania w oparciu o masę cząsteczkową z odzyskiem w fazie ciekłej

Using the GELFREE 8100 Fractionation System for Molecular Weight-Based Fractionation with Liquid Phase Recovery

System frakcjonowania GELFREE 8100 to nowoczesny system frakcjonowania białek zaprojektowany w celu maksymalizacji odzysku białek podczas frakcjonowania opartego na masie cząsteczkowej. System składa się z jednorazowych kartridży o pojemności 8 próbek oraz laboratoryjnego instrumentu do frakcjonowania GELFREE. Podczas rozdziału między zbiornikami anody i katody przyłożone jest stałe napięcie, a każda mieszanina białek jest przemieszczana elektroforetycznie z komory załadunkowej do specjalnie zaprojektowanej kolumny żelowej. Białka są zagęszczane w wąskim pasmie w żelu koncentrującym, a następnie rozdzielane na podstawie ich odpowiednich ruchliwości elektroforetycznych w żelu rozdzielczym. W miarę jak białka wypłukiwane są z kolumny, są one wychwytywane i zagęszczane w fazie ciekłej w komorze zbiorczej, wolne od żelu. Następnie instrument jest zatrzymywany w określonych odstępach czasu, a frakcje są pobierane za pomocą pipety. Proces ten jest powtarzany do momentu zebrania wszystkich pożądanych frakcji. Jeśli w kartridżu analizowanych jest mniej niż 8 próbek, niewykorzystane komory mogą zostać użyte w kolejnych rozdziałach.
Ta nowatorska technologia umożliwia szybkie i proste, jednoczesne rozdzielanie do 8 złożonych mieszanin białek i oferuje szereg zalet w porównaniu do wcześniej dostępnych metod frakcjonowania. System ten pozwala na frakcjonowanie do 1mg całkowitego białka na kanał, co daje łącznie 8mg na wkład. Nienaruszone białka z szerokiego zakresu mas są rozdzielane na podstawie masy cząsteczkowej, przy zachowaniu istotnych właściwości fizykochemicznych analitytu. Pułapkowanie w fazie ciekłej zapewnia wysoką odzyskalność, eliminując jednocześnie konieczność wycinania prążków lub plamek, co sprawia, że proces frakcjonowania jest wysoce powtarzalny1.

Dołączony film opisuje sposób wykorzystania systemu frakcjonowania GELFREE 8100, który rozdziela złożone próbki białek na podstawie masy cząsteczkowej i odzyskuje frakcje w fazie ciekłej. Film wyjaśnia zasadę działania tej technologii, sposób jej zastosowania oraz przedstawia uzyskane dane z analizy frakcjonowanego homogenatu wątroby bydlęcej za pomocą elektroforezy w żelu poliakryloamidowym.

Wykorzystanie systemu frakcjonowania GELFREE 8100 do frakcjonowania w oparciu o masę cząsteczkową z odzyskiem w fazie ciekłej

System frakcjonowania GELFREE 8100 to nowatorski system frakcjonowania białek, zaprojektowany w celu maksymalizacji odzysku białek podczas procesu opartego na masie cząsteczkowej...

Witam, nazywam się Jay Harkins. Jestem naukowcem w Protein Discovery. Dzisiaj zaprezentuję, jak łatwo jest korzystać z nowego systemu frakcjonowania gel free 8, 100, aby uzyskać frakcjonowanie oparte na masie cząsteczkowej z wysokim odzyskiem.Korzystając z systemu GelFree, można nałożyć do 1 mg całkowitego białka na kanał i w sposób powtarzalny przeprowadzić frakcjonowanie do ośmiu próbek w około 90 minut. System obejmuje urządzenie, jednorazowy kartridż oraz wszystkie bufory niezbędne do przeprowadzenia eksperymentu. Przejdźmy zatem do pracy.Rozpocznij procedurę od przygotowania i oznakowania do ośmiu probótek o pojemności 500 µL. Do każdej probówki dodaj do 1 mg próbki białka w objętości do 112 µL. Ilość białka w próbce zależy od stopnia jej złożoności.W przypadku bardziej złożonych próbek, takich jak homogenat tkankowy użyty w tym pokazie, najlepsze wyniki uzyskamy przy zastosowaniu od 150 do 200 µg na kanał. Następnie należy dodać 30 µL pięciokrotnego buforu do próbek, który znajduje się w zestawie z kartridżem bezżelowym. Do każdej próbki białka należy dodać 8 µL 1 M DTT.Następnie uzupełnić każdą próbkę wodą do objętości końcowej 150 µL. Następnie ogrzewać fiolki przez pięć minut w temperaturze 95 °C, aby zdenaturować próbkę. Pozostawić podgrzane próbki do ostygnięcia w temperaturze pokojowej.Wyjmij kartridż GelFree 8, 100 z foliowego opakowania. Zdejmij i wyrzuć uszczelniacz płytki. Usuń bufor do przechowywania z komór kartridża za pomocą pipety.Jeśli używane będą wszystkie osiem komór wkładu, należy go odwrócić, aby odprowadzić bufor do przechowywania z przegród. Następnie do każdego z anodowych zbiorników buforu dodaje się 8 mL buforu do elektroforezy bezżelowej. Do każdego z katodowych zbiorników buforu dodaje się 6 mL, a do każdej z komór zbierających pipetuje się 100 µL.Używając ośkanałowej pipety o objętości od 100 do 200 µL, należy usunąć i odrzucić cały bufor, który przepłynął z rezerwuaru buforu katodowego do komory ładowania próbek, a następnie niezwłocznie nanieść próbki do komór ładowania. Po naniesieniu próbek należy umieścić kartridż w stacji do frakcjonowania GelFree 8, 100. Następnie należy opuścić macierze elektrod i zamknąć pokrywę; korzystając z łatwego w obsłudze graficznego interfejsu użytkownika na ekranie dotykowym urządzenia, należy przejść do listy dostępnych zaprogramowanych metod.Wybierz odpowiednią metodę, naciskając przycisk metody. Naciśnij przycisk pobierania i wprowadź numer żądanej zaprogramowanej metody. Używając klawiatury ekranowej, zatwierdź wybór przyciskiem OK. Następnie naciśnij przycisk zastosuj.Zastosowana metoda pojawi się w dolnej części ekranu głównego. Każda z zaprogramowanych metod składa się z określonych napięć oraz przerw czasowych, zaprojektowanych w celu rozdzielenia białek w konkretnym zakresie mas cząsteczkowych. Po wybraniu odpowiedniej metody należy nacisnąć przycisk kanału na ekranie głównym.Następnie należy wybrać kanały, które będą wykorzystywane podczas analizy. Aby wybrać wszystkie osiem kanałów, należy nacisnąć przycisk „wybierz wszystko”. Następnie należy nacisnąć przycisk „gotowe”.Aby powrócić do ekranu głównego, należy upewnić się, że pokrywa zabezpieczająca jest zamknięta, a kontrolka na dole ekranu świeci na zielono. Następnie należy nacisnąć start, aby rozpocząć eksperyment; podczas pracy systemu kółka wyświetlane w ramce po lewej stronie ekranu obrazują status każdego kanału. Zielone kółko oznacza, że kanał jest aktywny.Przyłożone napięcia i natężenia prądu są wyświetlane po prawej stronie kół stanu kanału. Urządzenie gel free 8, 100 automatycznie zatrzyma pracę w celu zbierania frakcji w odstępach określonych w metodzie. Gdy instrument zostanie wstrzymany w celu zebrania frakcji, pojawi się pole tekstowe powiadamiające o przerwie, a koła stanu zmienią kolor na żółty.Wewnątrz kartridża między zbiornikami anody i katody przyłożone jest stałe napięcie. Pod wpływem tego potencjału mieszanina białek jest przemieszczana elektroforetycznie z komory załadunkowej do specjalnie zaprojektowanej, precyzyjnej formy. Białka w żelu najpierw koncentrują się w postaci wąskiego pasma w żelu kondensującym, a następnie są rozdzielane w żelu rozdzielczym na podstawie ich masy cząsteczkowej.W miarę jak białka eluują z żelu, są one wychwytywane i zagęszczane w fazie ciekłej. W komorze zbierającej znajduje się roztwór wolny od żelu. Następnie urządzenie zostaje zatrzymane.Na podstawie wcześniej wybranych odstępów czasowych frakcje są pobierane za pomocą pipety. Następnie ponownie przyłożone zostaje napięcie, aby uwięzić drugą interesującą frakcję masy cząsteczkowej. Proces ten jest powtarzany do momentu zebrania wszystkich pożądanych frakcji.Każdy kartridż zawiera osiem niezależnych kanałów elektroforetycznych, dzięki czemu użytkownik może wykorzystać taką liczbę kanałów, jaka jest mu potrzebna, a niewykorzystane kanały zachować do późniejszego użycia. Aby pobrać frakcje, należy otworzyć pokrywę urządzenia, a następnie użyć wbudowanej pipety do kanałów. Przenieś 150 µL cieczy z każdej z komór zbierających do probówek zbiorczych lub płytki wielodołkowej.Po usunięciu frakcji należy dwukrotnie przemyć komorę zbierającą buforem do elektroforezy bezżelowej, dodając 100 µL na kanał i dwukrotnie pipetując roztwór w górę i w dół. Po przemyciu do komór zbierających należy ponownie dodać 100 µL buforu do elektroforezy bezżelowej. Następnie należy zamknąć pokrywę i nacisnąć przycisk wznowienia.Urządzenie GelFree 8, 100 będzie pracować do następnego przedziału czasowego. Całkowity pozostały czas eksperymentu jest wyświetlany po prawej stronie ekranu. Naciśnij przycisk nad polem wyświetlającym czas, aby przełączać się między czasem pozostałym, czasem, który upłynął, a funkcją wstrzymywania.Po zebraniu wszystkich frakcji można je natychmiast wykorzystać do dalszych etapów przygotowania, takich jak ogniskowanie izoelektryczne, elektroforeza w żelu lub analiza z wykorzystaniem chromatografii cieczowej, spektrometrii mas lub powinowactwa immunologicznego. W niniejszej demonstracji osiem próbek białek o masie 200 µg każda zostało podzielonych na 12 frakcji, co dało łącznie 96 frakcji. Aby zwizualizować wyniki frakcjonowania, alikwot z każdej z 12 frakcji próbki homogenatu wątroby bydlęcej naniesiono następnie na standardowy żel 1D i poddano barwieniu srebrem.Jak pokazano na tej rycinie, próbka białka została rozdzielona na 12 odrębnych frakcji obejmujących zakres mas cząsteczkowych od 3,5 kilodaltonów do 150 kilodaltonów. Przedstawiony tutaj żel podkreśla zdolność systemu gel free 8, 100 do rozdzielania dużej ilości białka na wyraźne frakcje o różnej masie cząsteczkowej. Jest to niezwykle potężne narzędzie w proteomice top-down i bottom-up z wykorzystaniem spektrometrii mas, a także w eksperymentach z powinowactwem immunologicznym, gdzie wymagana jest pojedyncza, oczyszczona frakcja nienaruszonego białka o określonej masie cząsteczkowej.Mamy nadzieję, że pokazanie, jak łatwo jest korzystać z systemu frakcjonowania gel free 8, 100 w celu powtarzalnego rozdzielenia próbki na dyskretne frakcje o określonej masie cząsteczkowej i uzyskania wysokiego odzysku fazy ciekłej, było dla Państwa pomocne. To wszystko na dziś. Dziękujemy za uwagę i życzymy powodzenia w przeprowadzaniu eksperymentów.

using-gelfree-8100-fractionation-system-for-molecular-weight-based

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Wykorzystanie systemu frakcjonowania GELFREE 8100 do frakcjonowania na podstawie masy cząsteczkowej z odzyskiem fazy ciekłej

Przedstawiono zautomatyzowaną metodę identyfikacji odpowiednich wypełnień do chromatografii oddziaływań hydrofobowych (HIC) do wykorzystania w procesie oczyszczania białek. Metoda ta wykorzystuje system średniociśnieniowej chromatografii cieczowej obejmujący zautomatyzowane mieszanie buforów, dynamiczny wtrysk próbki z pętli, sekwencyjny wybór kolumn, analizę wielodługościową oraz rozdzielcze zbieranie frakcji eluatu.

Zautomatyzowany dobór kolumny do hydrofobowej chromatografii oddzielania w celu oczyszczania białek

Ten film opisuje technikę oddzielania złożonych cząsteczek od ekstraktów roślinnych za pomocą ogniskowania izoelektrycznego w fazie ciekłej. Technika ta pomaga oczyścić złożone biomolekuły w ich stanie naturalnym, które mogą być wykorzystywane do różnych dalszych zastosowań.

Ogniskowanie izoelektryczne w fazie ciekłej: technika elektroforezy oddzielająca cząsteczki bioaktywne od surowego ekstraktu Gymnema sylvestre

Wiarygodność wyników eksperymentów metabolomicznych zależy od skuteczności i powtarzalności przygotowania próbki. Opisana jest rygorystyczna i dogłębna metoda, która umożliwia ekstrakcję metabolitów z płynów biologicznych z możliwością późniejszej analizy do tysięcy związków lub tylko klas związków będących przedmiotem zainteresowania.

Wieloetapowa technika przygotowania do odzyskiwania wielu klas związków metabolitów w celu dogłębnej i pouczającej analizy metabolomicznej

Ten protokół opisuje, jak przygotować i przeprowadzić przezroczystą elektroforezę uwięzienia frakcji płynnej z natywną żelową (CN-GELFrEE), natywną technikę separacji niekowalencyjnych zespołów biomolekularnych i białek z heterogenicznych próbek, która jest kompatybilna z różnymi technikami analizy białek.

CN-GELFrEE - Przezroczysta, natywna, eluowana w żelu, elektroforeza z uwięzieniem frakcji cieczy

Przedstawiono protokół kompleksowej ekstrakcji lipidów, metabolitów i białek z tkanek biologicznych przy użyciu jednej próbki.

Prosta metoda ekstrakcji frakcjonowanej do kompleksowej analizy metabolitów, lipidów i białek z pojedynczej próbki

Tutaj prezentujemy bezstronną kwantyfikację specyficznej dla miejsca acetylacji białek i/lub zajętości sukcynylacji (stechiometria) całego proteomu poprzez analizę ratiometryczną endogennych modyfikacji modyfikacji wprowadzonych po ilościowym acylowaniu chemicznym przy użyciu stabilnych bezwodników znakowanych izotopami. W połączeniu ze spektrometrią mas akwizycji niezależnym od wrażliwych danych, uzyskuje się dokładne pomiary zajętości obiektu.

Kwantyfikacja stechiometrii stechiometrii lizyny białek specyficznych dla miejsca przy użyciu spektrometrii mas z akwizycją niezależną od danych

U, lipidy skórne od przedstawicieli tego samego gatunku są kluczowe dla sygnalizacji seksualnej, z potencjalnym zastosowaniem w zarządzaniu gatunkami inwazyjnymi. W tym miejscu opisujemy protokoły ekstrakcji lipidów skóry ze zrzuconej skóry lub całych zwierząt, określania i analizowania całkowitej masy lipidów oraz oddzielania lipidów za pomocą frakcjonowania za pomocą chromatografii kolumnowej.

Izolacja chemiczna, kwantyfikacja i separacja lipidów skóry

Szczegółowa metoda jest tutaj opisana jako oczyszczanie, ponowne fałdowanie i charakterystyka samoorganizujących się nanocząstek białkowych (SAPN) do wykorzystania w opracowywaniu szczepionek.

Wytwarzanie samoorganizujących się nanocząstek białkowych z ekspresją E. coli do szczepionek wymagających prezentacji epitopów trymerycznych

Celem jest frakcjonowanie i izolowanie bioaktywnych małych cząsteczek, peptydów z złożonego ekstraktu roślinnego oraz białek z drobnoustrojów chorobotwórczych za pomocą metody ogniskowania izoelektrycznego w fazie ciekłej (IEF). Ponadto zidentyfikowano oddzielone cząsteczki i potwierdzono ich bioaktywność.

Separacja bioaktywnych małych cząsteczek, peptydów ze źródeł naturalnych i białek od drobnoustrojów metodą preparatywnego ogniskowania izoelektrycznego (IEF)

Prezentujemy szybką i opłacalną metodę produkcji rekombinowanego, bezkomórkowego systemu TX-TL PURE przy użyciu standardowego sprzętu laboratoryjnego.

System OnePot PURE bezkomórkowy

Poznaj frakcjonowanie białek metodą GELFREE 8100 w oparciu o masę cząsteczkową z wysokim odzyskiem fazy ciekłej. Technika ta umożliwia analizę złożonych próbek białkowych w proteomice.

Wykorzystanie systemu frakcjonowania GELFREE 8100 do frakcjonowania w oparciu o masę cząsteczkową z odzyskiem w fazie ciekłej

Przeglądaj więcej filmów