Name: Test odpowiedzi na wydłużenie trąby (PER) u Drosophila (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-04-29T00:00:00.000+00:00
Duration: 28 min 40 s
Description: Poznaj test odpowiedzi na wydłużenie trąby (PER) u Drosophila do badania zachowań smakowych. Ta metoda pozwala analizować preferencje pokarmowe owadów w kontrolowanych warunkach laboratoryjnych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dziękujemy Paulowi Grahamowi za pracę w charakterze operatora kamery podczas prezentacji wideo.

Głodzenie
<ol>
<li>Najpierw należy zagłodzić muchy.</li>
<li>Do pustej fiolki włóż mały kawałek chusteczki Kim-wipe nasączonej wodą.</li>
<li>Przenieś 20-30 dobrze odżywionych much do pustej fiolki.</li>
<li>Co 12-24 godzin sprawdzaj, czy papier jest wilgotny.</li>
<li>Głodź muchy przez 36-72 godziny.</li>
</ol>
Unieruchom muchę
<ol>
<li>Pochwyć jedną muchę za pomocą aspiratora.</li>
<li>Umieść żółty końcówkę o pojemności 200 µl nad otworem. Jednocześnie obracając aspirator i dmuchając w niego, wtłocz muchę do wnętrza żółtej końcówki.</li>
<li>Delikatnie dmuchnij, aby przesunąć muchę w górę do punktu, w którym nie będzie mogła się już poruszać.</li>
<li>Używając żyletki, zrób zaznaczenie mniej więcej na wysokości oka muchy, następnie wciągnij muchę z powrotem i odetnij końcówkę.</li>
<li>Delikatnie wydmuchaj muchę z powrotem na miejsce, ale tuż przed dotarciem do samego końca wykonaj skośne cięcie w miejscu, w którym będzie znajdować się trąba. Można pominąć to skośne cięcie, ale z pewnością ułatwi ono kolejny etap procesu.</li>
</ol>
Przygotuj knoty sacharozowe
<ol>
<li>Skręć pasek papieru Kimwipes® o szerokości 6 mm w nić, a następnie rozerwij go na małe kawałki w kształcie stożkowych knotów (&lt; 1 cm).</li>
<li>Knoty te zanurzano w roztworach sacharozy lub wodzie, a następnie przykładano do trąbki owada, umożliwiając kontakt.</li>
</ol>
Przygotuj zwierzęta kontrolne i doświadczalne
<ol>
<li>Przed testowaniem jakichkolwiek substancji smakowych podaj muszce 4% roztwór sacharozy. Służy on jako kontrola pozytywna. Odrzuć każdą muszkę, która nie zareagowała.</li>
<li>Następnie przetestuj dH2O na muszce. Służy to jako kontrola negatywna. Odrzuć muszkę, jeśli zareagowała.</li>
<li>Kontrole te należy przeprowadzić po przetestowaniu substancji smakowych.</li>
</ol>

<ol><li>Dethier, V. G. The Hungry Fly. , Harvard University Press. Cambridge. (1976).</li>
</ol>

W niniejszej prezentacji omówiliśmy wszystkie etapy badania odruchu wyprostnego trąbka (Proboscis extension response assay). Metoda ta wydaje się dość prosta, jednak podobnie jak w wielu innych testach behawioralnych, wiele drobnych szczegółów może wpłynąć na niepowodzenie badania. Przeanalizowaliśmy wiele takich kroków, które wymagają szczególnej uwagi. Poniżej ponownie podkreślam niektóre z najważniejszych czynników.
Jednym z takich czynników jest kształt knota. Przedstawiłem kilka bardzo d...

<table><tbody><tr><td>HDR-HC1</td><td>Kamera</td><td>Sony Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SMZ800</td><td>Mikroskop</td><td>Nikon Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>P-IBSS</td><td>Adapter kamery</td><td>Nikon Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1x DC10LN</td><td>Adapter kamery</td><td>Optem, Qioptiq Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>257010</td><td>Adapter kamery</td><td>Optem, Qioptiq Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>TREKKER Mk2</td><td>Statyw</td><td>BENBO</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gorillapod SLR</td><td>Statyw</td><td>Joby</td><td></td><td></td></tr><tr><td>iMac G5</td><td>Komputer</td><td>Apple</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Power Mac G5</td><td>Komputer</td><td>Apple</td><td></td><td></td></tr><tr><td>iMovie</td><td>Oprogramowanie</td><td>Apple</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MPEG Streamclip</td><td>Oprogramowanie</td><td>SQUARED 5</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

test odpowiedzi wyciągania trąbka (per) u drosophila

Proboscis Extension Response (PER) Assay in Drosophila

Odruch wyciągania trąbki (PER) to test zachowania smakowego, który był stosowany zarówno u much, jak i u pszczół miodnych.
Na powierzchni aparatu gębowego muchy (labellum) znajdują się struktury przypominające włoski, zwane sensillami, w których znajdują się neurony smakowe. Gdy substancja atrakcyjna styka się z labellum, mucha wysuwa trąbek, aby spożyć materiał. Test reakcji wysuwania trąbki (Proboscis Extension Response, PER) pozwala zmierzyć tę behawioralną odpowiedź smakową i jest użyteczną metodą badania preferencji pokarmowych pojedynczej muchy. Roztwory różnych cukrów, takich jak sacharoza, glukoza i fruktoza, są dla muchy bardzo atrakcyjne. Można również testować wpływ substancji awersyjnych, obserwując redukcję PER po ich zmieszaniu z roztworem słodkim.Mimo prostoty podstawowej procedury, istnieje wiele czynników, które mogą utrudnić jej prawidłowy przebieg. Jednym z aspektów wymagających uwagi jest stan reaktywności muchy. Wymagany czas głodzenia w celu doprowadzenia muchy do odpowiedniego stanu reaktywności znacznie się różni i wynosi od 36 do 72 godzin. Wprowadziliśmy serię kontroli służących do oceny stanu muchy, co pozwala na odrzucenie osobników niereaktywnych lub nadreaktywnych. Kolejnym istotnym czynnikiem jest siła uderzenia oraz miejsce kontaktu z labellum, co byłoby trudne do opisania słowami. Niniejsza prezentacja wideo demonstruje wszystkie te elementy wraz z kilkoma innymi ulepszeniami, które zwiększą powtarzalność tej metody.

Odruch wysuwania cycylka, znany jako PER, to test zachowań smakowych stosowany u muszek oraz pszczół miodnych. Gdy cycylek zetknie się z substancją atrakcyjną, mucha wysuwa go, aby spożyć tę substancję. Roztwory różnych cukrów są dla muchy bardzo atrakcyjne.

Test odpowiedzi wyciągania trąbka (PER) u Drosophila

Odruch wysuwania trąbka (PER) to test behawioralny smaku, który był stosowany zarówno u much, jak i u pszczół miodnych.
Na powierzchni aparat otworu gębowego muchy...

Witajcie. W tej prezentacji chcielibyśmy pokazać Wam, jak przeprowadzić badanie reakcji wysuwania proboscis u muszkach owocowych. Badanie reakcji wysuwania proboscis, znane jako PER (proboscis extension response), to test zachowań smakowych stosowany zarówno u muszek, jak i u pszczół miodnych. Gdy proboscis styka się z substancją atrakcyjną, mucha wysuwa proboscis, aby skonsumować tę substancję.Roztwory różnych cukrów, takich jak sacharoza, glukoza i fruktoza, są bardzo atrakcyjne dla muchy. Odpowiedź proboscis (PR) może być również obserwowana w wyniku kontaktu z nogą, jednak w tej prezentacji chcielibyśmy skupić się na kontakcie proboscis. Dlatego pierwszym krokiem w badaniu PR jest zagłodzenie muchy.Optymalizacja warunków głodzenia jest jednym z najważniejszych czynników w tym teście. Istnieją tutaj dwie kluczowe kwestie. Pierwszą jest czas głodzenia, a drugą wielkość ciała muchy przed rozpoczęciem głodzenia.Wydaje się, że między tymi dwiema wartościami istnieje dodatnia korelacja. Jeśli mucha jest duża i tuczna, należy ją dłużej głodzić. Wielkość ciała zależy od pożywienia muchy oraz gęstości populacji much w fiolce.Pozwólcie, że pokażę wam dobry przykład. W tej fiolce widać, ż

proboscis-extension-response-per-assay-in-drosophila

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Test reakcji wydłużania trąbki (PER) u muchówek owocowych

Muszka owocówka, Drosophila melanogaster, wysuwa swój trąbek w celu żerowania w odpowiedzi na bodziec cukrowy działający na trąbek lub tarsus. Połączyłem obserwacje reakcji wysuwania trąbka (PER) z techniką obrazowania wapnia, co pozwala nam monitorować aktywność neuronów w mózgu równocześnie z obserwacją behawioralną.

Jednoczesna rejestracja sygnałów wapniowych z zidentyfikowanych neuronów i zachowań żerowania Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster to genetycznie i behawioralnie podatny system modelowy, który od ponad wieku jest wykorzystywany do zrozumienia molekularnych i komórkowych podstaw wielu ważnych procesów biologicznych 1. Drosophila została szeroko wykorzystana w celu uzyskania wglądu w genetyczne podstawy zachowania much.

Metody oceny zachowania Drosophila

Ten film demonstruje metodę wykrywania reakcji neuronów czuciowych u Drosophila za pomocą wiązania ligandów i obrazowania fluorescencyjnego. Ligandy wiążą się z receptorami neuronów, powodując napływ wapnia. Wapń wiąże się z kompleksami wskaźnikowymi, co prowadzi do emisji fluorescencji, która potwierdza odpowiedź neuronalną na ligand.

Wykrywanie reakcji fizjologicznych neuronów czuciowych u Drosophila

W tym artykule wideo opisujemy zautomatyzowany test do pomiaru wpływu głodu lub sytości na zależne od węchu zachowanie związane z poszukiwaniem pokarmu u dorosłej muszki owocowej Drosophila melanogaster.

Test pojedynczej muchy na zachowania żerowe u Drosophila

Protokół warunkowania Proboscis Extension Response (PER), opracowany dla pszczół miodnych (Apis mellifera), dostarcza ekologicznie istotnych i łatwo mierzalnych środków do badania kilku różnych mechanizmów uczenia się u wielu gatunków owadów.

Protokół odpowiedzi na wydłużenie trąby do badania plastyczności behawioralnej u owadów: zastosowanie do badań podstawowych, biomedycznych i rolniczych

Aby zidentyfikować nowe mutacje wpływające na mechanosensację, zaprojektowaliśmy test, który mierzy reakcję behawioralną na stymulację dotykową szczeciny muchy u zmutowanych klonów generowanych metodą MARCM. Połączenie technik pozwala na identyfikację mutacji mechanowrażliwych, które w przeciwnym razie byłyby śmiertelne.

Test behawioralny do mechanosensacji klonów opartych na MARCM u Drosophila melanogaster

Opisujemy tutaj konfigurację behawioralną i metodę analizy danych do oceny reakcji węchowych do 100 muszek octowych (Drosophila melanogaster). System ten może być stosowany z pojedynczymi lub wieloma bodźcami węchowymi i może być przystosowany do optogenetycznej aktywacji lub wyciszania podzbiorów neuronów.

Zachowania węchowe oceniane za pomocą komputerowego śledzenia Drosophila w czterokwadrantowym olfaktometrze

Ogólnym celem tego protokołu jest pokazanie, jak prezentować substancje zapachowe o niskiej lotności do rejestracji pojedynczej sensyllum z neuronów receptora węchowego Drosophila, które reagują na długołańcuchowe feromony kutykularne.

Zapis elektrofizjologiczny z Drosophila trichoid Sensilla w odpowiedzi na substancje zapachowe o niskiej lotności

Ten protokół analizuje zachowanie nawigacyjne larwy Drosophila w odpowiedzi na jednoczesną optogenetyczną stymulację jej neuronów węchowych. Światło o długości fali 630 nm służy do aktywacji pojedynczych neuronów węchowych wyrażających rodopsynę z przesuniętym ku czerwieni kanałem. Ruch larw jest jednocześnie śledzony, rejestrowany cyfrowo i analizowany za pomocą specjalnie napisanego oprogramowania.

Śledzenie zachowań larw Drosophila w odpowiedzi na optogenetyczną stymulację neuronów węchowych

Celem tego protokołu jest pokazanie, jak przeprowadzić ulepszony test mechanicznej nocycepcji u larw Drosophila. Używamy tutaj testu, aby wykazać, że nadwrażliwość mechaniczna (allodynia i hiperalgezja) występuje u larw Drosophila.

Ulepszony test i narzędzia do pomiaru mechanicznej nocycepcji u larw Drosophila

Ten artykuł przedstawia metody manipulacji optogenetycznej u Drosophila melanogaster, wykorzystując CsChrimson i GtACR2 do aktywacji i wyciszania określonych neuronów. Opisano cztery eksperymenty wykorzystujące optogenetykę do badania zachowań termotaktycznych i smakowych, dostarczając wglądu w podstawowe mechanizmy neuronalne rządzące tymi procesami.

Testy behawioralne do optogenetycznej manipulacji obwodami neuronalnymi u Drosophila melanogaster

Poznaj test odpowiedzi na wydłużenie trąby (PER) u Drosophila do badania zachowań smakowych. Ta metoda pozwala analizować preferencje pokarmowe owadów w kontrolowanych warunkach laboratoryjnych.

Test odpowiedzi wyciągania trąbka (PER) u Drosophila

Przeglądaj więcej filmów