Nowa aparatura i metoda wzmacniania leków

Ten film pokazuje nowe podejście do badania nadużywania narkotyków poprzez połączenie tradycyjnego warunkowego wyboru miejsca i procedur samodzielnego podawania. Najpierw określane są preferencje punktu odniesienia dla dwóch odrębnych środowisk operacyjnych. Następnie rozpoczynają się sesje samodzielnego podawania, podczas których szczury samodzielnie podają kokainę tylko w jednym z charakterystycznych środowisk operacyjnych.

Po kondycjonowaniu mierzy się ilość czasu, jaką zwierzęta decydują się spędzić w jednym ze środowisk operacyjnych, a następnie można zmierzyć i skorelować zmiany w miejscu, preferencjach i wskaźnikach samodzielnego podawania leków. Cześć, nazywam się Allison Fiducia i pracuję w laboratorium dr Christine Elle w College of Pharmacy, wydziale farmakologii i toksykologii na Uniwersytecie Teksańskim w Austin. A ja nazywam się Christine Elle.

Dzisiaj chcielibyśmy pokazać Państwu nowatorskie urządzenie, które można wykorzystać na kilka różnych sposobów do badania wzmocnienia i uzależnienia od narkotyków u szczurów. Stosujemy tę procedurę w naszym laboratorium do badania wpływu samodzielnego podawania kokainy na stan zdrowia. Więc zacznijmy.

Aby rozpocząć przygotowania do eksperymentów ze wzmocnieniem leku, najpierw wytrenuj samce szczurów, aby naciskały dźwignię, aby otrzymać nagrodę w postaci jedzenia. Następnie skonstruuj cewniki dożylne, które będą używane do samodzielnego podawania leków. Cewniki są wykonane z kaniuli ze stali nierdzewnej i rurki Celeste i należy je przepłukiwać metanolem i wodą.

Następnie wysuszyć je na powietrzu podczas ich przygotowania w dniu zabiegu, wykąpać w 70% etanolu. Po zakończeniu cewników szczury przechodzą zabieg chirurgiczny cewnikowania szyjnego, aby umożliwić samodzielne podawanie leku. Podczas eksperymentów znieczulij szczura dwoma i pół do 4% izofluoru.

Następnie ogol głowę i klatkę piersiową, zdezynfekuj miejsca roztworem Betadyne. Następnie umieść go na sterylnej podkładce po operacji. Monitoruj szczura przez kilka godzin przed powrotem do kolonii zwierząt.

Utrzymuj drożność cewnika poprzez codzienne przepłukiwanie 0,1 mililitra 0,9% roztworu soli fizjologicznej, heparyny i mentonu w celu przygotowania kokainy użytej w eksperymentach, rozpuszczenia jej w izotonicznym roztworze soli fizjologicznej w odpowiednich stężeniach dawek zgodnie z wagą zwierząt i przygotowanym podawaniem leku. Przyjrzyjmy się aparaturze, która jest używana podczas eksperymentów. Aparatura wykorzystywana podczas eksperymentów zbudowana jest z dwóch pojedynczych komór dźwigniowych, wyposażonych w oświetlenie domowe i stymulacyjne oraz trzech zestawów wiązek fotograficznych, które służą do pomiaru aktywności ruchowej.

Komory połączone są ze sobą usypaną alejką z pleksi. Aleja składa się z dwóch czarnych ścian z białymi pasami i dwóch metalowych ścian, przezroczystego blatu z pleksi i białej podłogi z pleksi. Dwie komory operacyjne mają podłogi z prętów stalowych z zainstalowanymi zdejmowanymi metalowymi dnami klatki.

Sygnały wizualne i węchowe są umieszczane w komorze operacyjnej, aby stworzyć unikalne, wyróżniające się środowiska. W jednym ze środowisk zagrożenie będzie miało dostęp do zastrzyków z kokainy. W alternatywnym środowisku zagrożenie będzie miało dostęp tylko do zastrzyków z soli fizjologicznej.

Wskazówki wizualne składają się z białego lub czarnego filcu przymocowanego do przedniej i tylnej ściany oraz nad górną częścią klatki. Sygnały węchowe to oparte na oleju wyczucie rzędów lub cynamon nasycający wacik znajdujący się pod podłogą pręta komory. Podczas eksperymentów reakcje Libra i dane dotyczące aktywności lokomotorycznej są rejestrowane za pomocą komputera Med Pentium 100 megaherców wyposażonego w oprogramowanie medyczne PC.

Teraz, gdy widzieliśmy już aparaturę eksperymentalną, zobaczmy, jak zbierać dane. Procedura eksperymentalna trwa wiele dni, rozpoczynając od podstawowych testów preferencji trwających dwa dni, następnie sesji samodzielnego podawania leków trwających osiem lub 16 dni, a kończąc na warunkowym teście preferencji miejsca. Aby rozpocząć zbieranie podstawowych pomiarów preferencji, umieść szczura w środkowej alejce z dostępem do obu komór operacyjnych na 20 minut.

Natychmiast po umieszczeniu szczura w komorze należy jednocześnie aktywować kamerę wideo, oprogramowanie komputerowe i timer. Po 20 minutach wyjmij szczura z komory i umieść go z powrotem w klatce domowej. Dzień po ostatnim teście wyjściowym rozpocznij sesje samodzielnego podawania leków.

Najpierw umieść wskazówki sensoryczne, a następnie umieść panel, aby zablokować dostęp z centralnej alejki z pleksi do komory. Teraz przymocuj wlot cewnika zwierzęcia do zamontowanej strzykawki z lekiem, aby rozpocząć sesję. Najpierw umieść zwierzę w komorze.

Po zamknięciu drzwi komory operacyjnej uruchom program medyczny i timer, aby dostęp do kokainy był dostępny przez jedną godzinę. Kokaina jest podawana przy użyciu progresywnego schematu proporcji wzmocnienia. Schemat ten wymaga coraz większej liczby reakcji dźwigniowych, aby otrzymać każdy kolejny zastrzyk kokainy.

Każde wstrzyknięcie składa się z dawki 0,75 miligrama na kilogram na zmianę dni. W środowisku alternatywnym schemat proporcji progresywnych jest również stosowany do wstrzykiwań soli fizjologicznej. Pod koniec każdej sesji samodzielnego podawania odłącz folię od rurki leku, wyjmij ją z komory i umieść z powrotem w klatce domowej.

Dzień po ostatniej sesji samodzielnego podawania przeprowadź test preferencji miejsca warunkowego. Procedura tego badania jest taka sama, jak w przypadku pomiarów podstawowych. Zobaczmy teraz, jak oceniać i analizować dane.

Podczas oceny danych i przypisania eksperymentatora do ślepych grup określa ilość czasu, jaką zwierzę spędziło w każdym przedziale. Eksperymentator przegląda taśmę wideo, aby policzyć wejścia i wyjścia między komorami przez okres 15 minut, rozpoczynając pięć minut po umieszczeniu w aparacie. Te same procedury, które są używane do określania preferencji wyjściowych i wyników testu CPP.

Różnice między pomiarami wyjściowymi a wynikami CPP po kondycjonowaniu są wykorzystywane do określenia efektów kondycjonowania leku. Wyniki różnic po kondycjonowaniu są obliczane przez odjęcie ilości czasu spędzonego w istotnym sparowanym przedziale od ilości czasu spędzonego w sparowanym przedziale leku podczas testu CPP. Wyjściowe wyniki różnic są podobnie obliczane i odejmowane od wyników różnic CPP.

Można przeprowadzić analizę statystyczną różnych zmian wyniku od wartości wyjściowej do sesji testowych w celu określenia skutków kondycjonowania leku. Poniżej przedstawiono reprezentatywny wykres wyników testów bazowych i CPP. Wyniki testów CPP były znacznie wyższe niż wyniki wyjściowe, co wskazuje na preferencję dla środowiska kokainowego.

Po uwarunkowaniu analiza korelacji dla całkowitej liczby odpowiedzi na pozostawienie leku i wyniki testu różnic CPP są zilustrowane tutaj. Grupa długoterminowa zażywająca kokainę była jedyną grupą, która wykazała istotną pozytywną korelację między reakcjami na opuszczenie narkotyków a wynikami testów CPP. Właśnie pokazaliśmy, jak połączyć tradycyjne metody leczenia, preferencji dotyczących miejsca i samodzielnego podawania, aby uzyskać nowatorskie podejście do badania wzmacniania leków u szczurów.

Podczas wykonywania tej procedury ważne jest, aby dobrze prowadzić dokumentację. Więc to wszystko. Dziękujemy za oglądanie i życzymy powodzenia w eksperymentach.