Dysocjacja mechaniczna: metoda uzyskiwania żywotnych komórek z tkanki

Najpierw zważ fragment tkanki i zmierz jego długość, szerokość i wysokość. Umieść tkankę w naczyniu hodowlanym z pożywką hodowlaną i pokrój ją na małe kawałki za pomocą skalpela. Przenieś wszystko do rurki C w celu homogenizacji za pomocą pipety Pasteura.

Umieść rurkę w dysocjatorze mechanicznym i uruchom cykle zgodnie z wymaganiami. Aparatura wykorzystuje siły mechaniczne do ekstrakcji żywotnych pojedynczych komórek z próbki tkanki przy zachowaniu integralności komórkowej, w tym białek powierzchniowych. Zdekantować homogenat przez sitko komórkowe zamocowane na probówce wirówkowej.

Ponownie homogenizować pozostałą tkankę i przecedzić homogenat przez sitko do komórek do probówki. Odwirować homogenat i usunąć supernatant. Teraz ponownie zawieś osad komórkowy w pożywce hodowlanej i przenieś niewielką ilość zawiesiny komórkowej do probówki zawierającej barwienie błękitem trypanowym.

Po zabarwieniu przenieś komórki na szkiełko hemocytometryczne. Policz przezroczyste żywe komórki. Martwe komórki przyjmują plamę, ponieważ ich błona komórkowa nie jest nienaruszona. W poniższym protokole przeprowadzimy nieenzymatyczną dysocjację świeżej tkanki ludzkiej w celu analizy ilościowej i jakościowe