Test immunofluorescencji CTC: technika charakteryzowania krążących komórek nowotworowych

- Na początek rozcieńczyć izolowane krążące komórki nowotworowe lub CTC do wymaganego stężenia za pomocą roztworu zapobiegającego wiązaniu, który chroni komórki przed ścinaniem płynu i uszkodzeniem ciśnieniowym. Następnie zmontuj szkiełko mikroskopowe pokryte polilizyną i kartę filtrującą do cytowirówki w zespole lejka do cytowirówki. Przenieść zawiesinę komórek do portu lejkowego zespołu, a następnie przeprowadzić cytowirowanie.

Siła odśrodkowa koncentruje i osadza monowarstwę komórek na okrągłym obszarze na szkiełku. Odizoluj obszar zdeponowany komórkami za pomocą izolatora silikonowego. Po wyschnięciu utrwal komórki za pomocą paraformaldehydu. Następnie inkubuj komórki z odpowiednim roztworem blokującym zawierającym białka, które łatwo wiążą się z dowolnymi niespecyficznymi miejscami wiązania na powierzchni komórki.

Teraz oznacz komórki roztworem przeciwciał znakowanym fluorescencyjnie, który Cię interesuje. Przeciwciała znakowane fluoroforem rozpoznają i wiążą się ze specyficznymi cząsteczkami docelowymi na powierzchni komórki. Umyj próbkę w celu usunięcia wszelkich niezwiązanych przeciwciał. Dodaj roztwór montażowy, aby przygotować próbkę do obrazowania.

Użyj mikroskopu fluore