Eskalacja dawki: metoda rozwoju oporności na leki w komórkach nowotworowych

- Inhibitory kinazy tyrozynowej (TKI) blokują wiązanie receptora kinazy z ATP, zapobiegając fosforylacji. Zacznij od posiewu komórek rakowych w pożywce wzrostowej. Pozwól im osiągnąć korzystną gęstość i przenieś komórki do wielu dołków. Po nocnym wzroście dozuj różne stężenia leku do wielu dołków i pozwól komórkom rosnąć przez pożądany czas. Dodaj MTT, barwnik rozpuszczalny w wodzie, aby zmierzyć żywotność komórek. Enzymy mitochondrialne przekształcają MTT w nierozpuszczalny fioletowy formazan w żywych komórkach.

Zatrzymać reakcję poprzez dodanie odpowiedniego środka solubilizującego i zmierzyć formazan spektrofotometrycznie. Ta metoda nazywa się testem MTT. Narysuj wykres żywych komórek wskazanych przez formazan w stosunku do stężeń leku. Oblicz stężenie hamujące, IC₅₀, znajdując stężenie leku, które zabija 50% komórek za pomocą oprogramowania.

Następnie hoduj komórki rakowe w pożywce wzrostowej i rozprowadź je na trzech różnych płytkach. Po osiągnięciu przez komórki subkonfluencji dodać 1/10 rozcieńczenia o stężeniu IC₅₀. Pozwól komórkom rosnąć i wykonaj test MTT. Powtórz ten proces ze zwiększaniem dawki leku. Komórki nowotworowe powoli rozwijają oporność na TKI z powodu mutacji