Barwienie immunohistochemiczne: metoda uzyskiwania informacji przestrzennych z cienkich skrawków tkanek

- Zacznij od umieszczenia cienkiego wycinka tkanki w roztworze amoniaku, aby umożliwić delikatne pobranie antygenu. Przenieś przekrój na szkiełko pokryte polilizyną. Ujemnie naładowane komórki wiążą się z dodatnio naładowaną polilizyną. Następnie dodaj nadtlenek wodoru, aby zablokować endogenną aktywność peroksydazy. Umyj szkiełko w soli fizjologicznej buforowanej tris, TBS.

TBS wspomaga dostęp przeciwciał do antygenów poprzez zerwanie wiązań krzyżowych białek. Przemyć skrawek roztworem blokowym, aby zmniejszyć nieswoiste wiązanie przeciwciał. Dodaj przeciwciała pierwszorzędowe do sekcji i inkubuj przez noc. Przeciwciało pierwotne wiąże się ze swoim specyficznym antygenem obecnym na powierzchni komórki. Umyj szkiełko za pomocą TBS.

Dodaj przeciwciała drugorzędowe sprzężone z biotyną, które przyłączają się do regionu Fc przeciwciała pierwszorzędowego. Umyj sekcję enzymem peroksydazy streptawidyny-biotyny. Następnie dodaj chromogenny substrat peroksydazy do tkanki. Peroksydaza przekształca chromogen w barwny produkt nierozpuszczalny.

Przeciwbarwić tkankę roztworem hematoksyliny. Hematoksylina wiąże się z kwaśnymi składnikami komórek i zmienia ich kolor na niebieski. Obserwuj tkankę p