Test tworzenia kuli: metoda in vitro do identyfikacji komórek macierzystych raka trzustki i terapii przesiewowych

- Gruczolakorak przewodowy trzustki (PDAC) zawiera podzbiór wyłącznie rakotwórczych komórek macierzystych raka (CSC). CSC są samoodnawialne, pluripotencjalne i zdolne do tworzenia nowotworów. Wyrażają białka antyapoptotyczne, a także zawierają geny oporności wielolekowej, dzięki czemu są odporne na chemioterapię. Aby zidentyfikować nowotworowe komórki macierzyste i zbadać wpływ leków na nie, przeprowadzamy test tworzenia kuli.

Najpierw zawiesić wyekstrahowane rakowe komórki macierzyste w żądanym pożywce do hodowli komórek. Następnie wysiewaj zawiesinę komórkową na płytkę wielodołkową i inkubuj przez żądany czas. Dodaj wymaganą ilość interesującego narkotyku do kilku studzienek i placebo w innych studzienkach jako kontrolę negatywną. Inkubuj komórki przez żądany czas. Rakowe komórki macierzyste tworzą kolonie w kształcie kuli w nieprzylegającym środowisku hodowlanym.

Po inkubacji odpipetować niewielką ilość zawiesiny komórek na hemocytometr i umieścić ją w automatycznym liczniku komórek. Teraz policz liczbę utworzonych kul. Komórki leczone lekami zwykle wykazują znaczne zmniejszenie rozmiaru i liczby kulek. W poniższym protokole przeprowadzimy test tworzenia kuli w celu identyfikacj