Izolacja keratynocytów ludzkiej skóry: metoda hodowli pierwotnych keratynocytów z próbek skóry

- Keratynocyty są najbardziej widocznymi komórkami obecnymi w naskórku, czyli najbardziej zewnętrznej warstwie skóry. Układają się w wiele warstw nad skórą właściwą, związaną z różnymi innymi typami komórek, takimi jak melanocyty, komórki dendrytyczne i komórki Merkla.

Aby wyizolować keratynocyty, zacznij od pobrania tkanki naskórka z ludzkiej skóry. Następnie potraktuj buforem do trawienia enzymatycznego. Enzymy w buforze degradują białka macierzy zewnątrzkomórkowej obecne w tkance naskórka, inicjując w ten sposób dysocjację komórek. Teraz dodaj odpowiednią pożywkę i mechanicznie rozerwij tkankę.

Aby uwolnić zdysocjowane komórki do zawiesiny, przefiltruj zawiesinę komórek naskórka przez sitko, aby usunąć wszelkie grudki komórek lub zanieczyszczenia. Odwirować w celu granulacji komórek naskórka i oddzielenia ich od supernatantu zawierającego enzym. Usunąć supernatant i ponownie zawiesić komórki za pomocą preferowanej pożywki wzrostowej keratynocytów. Hoduj komórki przez żądany czas.

Podczas hodowli zoptymalizowane podłoża wzbogacają ekspansję keratynocytów, promując ich selektywny wzrost w stosunku do innych typów komórek naskórka. W poniższym protokole pokażemy izolację keratynocy