Izolacja komórek macierzystych czerniaka: metoda uzyskiwania dodatnich i ujemnych komórek czerniaka CD133 za pomocą sortowania komórek aktywowanych magnetycznie
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 5:40 min. • April 30th, 2023
- Czerniak zawiera niewielką subpopulację nowotworowych komórek macierzystych posiadających zarówno zdolność do samoodnawiania, jak i inicjacji guza. CD133 lub Prominina-1, transbłonowa glikoproteina pentaspanu, jest jednym z kluczowych markerów wyrażanych przez komórki macierzyste raka czerniaka z przerzutami. Aby wyizolować komórki CD133-dodatnie, należy rozpocząć od zawieszenia pierwotnych komórek czerniaka w odpowiednim buforze.
Inkubować z odczynnikiem blokującym zawierającym białka, które blokują niespecyficzne miejsca wiązania na powierzchni komórki. Potraktuj komórki biotynylowanymi przeciwciałami pierwotnymi CD133. Przeciwciała te wiążą się z antygenami CD133 ulegającymi ekspresji na komórkach CD133-dodatnich. Teraz dodaj do zawiesiny mikrokulki magnetyczne antybiotyny. Inkubuj, aby mikrogranulki związały się z komórkami znakowanymi biotyną.
Na koniec przepuść inkubowaną zawiesinę przez kolumnę umieszczoną w polu magnetycznym. Pod wpływem magnetycznym wszystkie komórki CD133-dodatnie znakowane mikrogranulkami przyklejają się do kolumny, podczas gdy nieznakowane komórki przechodzą przez. Zbierz te nieoznakowane komórki CD133-ujemne. Usuń kolumnę z pola magnetycznego. Przepł
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych