Transgeneza wektorowa miniCoopR: technika badań przesiewowych genów indukujących czerniaka w modelu guza danio pręgowanego

- U danio pręgowanego czerniak powstaje w wyniku złośliwej transformacji melanocytów - komórek wytwarzających melaninę. Aby zbadać początek czerniaka, użyj podatnego na czerniaka i niedoboru melanocytów transgenicznego modelu danio pręgowanego. W tym modelu brakuje melanocytów z powodu mutacji powodującej utratę funkcji w specyficznym dla melanocytów promotorze mitfa.

Zacznij od pobrania jednokomórkowego zarodka tego transgenicznego modelu na płytce agarowej. Wspólnie wstrzyknąć do zarodka mieszaninę zawierającą wektor miniCoopR oparty na transpozonach i mRNA enzymu transpozazy. Wektor zawiera kasetę genów, zawierającą minigen mitfa przenoszący promotor sprzężony z genem kandydującym umieszczonym między dwoma elementami transpozonu.

Współwstrzykiwane mRNA kodują białka transpozazy. Białka te działają na elementy transpozonu i katalizują wycięcie kasety z wektora miniCoopR, a następnie jego integrację z genomowym DNA zarodka. Następnie promotor kasety steruje ekspresją zarówno genu mitfa, jak i genu kandydującego.

Gen mitfa wspomaga ratowanie i rozwój melanocytów, podczas gdy gen kandydujący, jeśli jest onkogenny, indukuje początek czerniaka. Przesiewaj rozwiniętego danio pręgowaneg