$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
- Melanocyty wytwarzają ciemny pigment zwany eumelaniną, który pochłania szkodliwe promieniowanie UV, chroniąc skórę. Aby zmierzyć wrażliwość na promieniowanie UV, zacznij od pobrania znieczulonego modelu myszy. Przygotuj mysz, usuwając jej futro grzbietowe, aby odsłonić warstwę naskórka. Przymocuj kawałek taśmy blokującej promieniowanie UV z określoną liczbą otworów na odsłoniętej skórze. Przymocuj małe odpinane taśmy do wszystkich otworów, z wyjątkiem jednego, aby zamaskować otwór.
Teraz poddaj mysz działaniu promieniowania UV przez żądany czas. W okresie ekspozycji demaskuj pozostałe otwory sekwencyjnie w określonych punktach czasowych. Ułatwia to kolejno eksponowanym plamom skórnym otrzymywanie coraz mniejszych dawek promieniowania UV. Otwory umożliwiają miejscowe przenikanie promieni UV w głąb naskórka myszy.
Po ekspozycji komórki naskórka uwalniają cząsteczki prozapalne. Cząsteczki te dyfundują w kierunku skóry właściwej i rozszerzają naczynia krwionośne skóry, powodując rumień lub zaczerwienienie skóry. Następnie leukocyty naciekają skórę właściwą i powodują obrzęk lub obrzęk w odsłoniętym obszarze.
W eksperymentalnym punkcie końcowym zatrzymaj promieniowanie i usuń taśmę, aby zaobserwować rumień i obrzęk. W poniższym protokole zmierzymy wrażliwość na promieniowanie UV w humanizowanym modelu myszy leczonym forskoliną - lekiem wytwarzającym melaninę - określając minimalną dawkę rumieniową.
- Aby określić minimalną dawkę rumieniową (MED), każde zwierzę będzie narażone na różne dawki promieniowania UV. Zacznij od przygotowania kawałka taśmy okluzyjnej UV, używając wytrzymałego dziurkacza z okrągłym wycięciem o długości 1 centymetra kwadratowego, aby wybić otwory w taśmie. Na każdy otwór w taśmie nałóż mały, ale łatwo odczepiony kawałek taśmy, który można usunąć w celu naświetlenia promieniami UV. Umieść taśmę na grzbietowej powierzchni znieczulonej myszy.
Jeśli oczy zwierzęcia są otwarte, zastosuj sztuczne łzy, aby zapobiec obrażeniom spowodowanym wysuszeniem i ekspozycją na promieniowanie UV. Włącz źródło UV składające się z dwóch lamp UVB o szczytowej mocy wyjściowej 313 nanometrów i zakresie od 280 do 370 nanometrów. Poczekaj, aż lampa zrównoważy się do stałej mocy UV przed użyciem fotometru UV z czujnikiem UVB w celu sprawdzenia mocy wyjściowej.
Na podstawie szybkości transmisji promieniowania UV zmierzonej przez fotometr UV oblicz czas ekspozycji na promieniowanie UV dla każdej żądanej dawki. Na przykład moc wyjściowa UVB Twojej lampy wynosi 2,4 miliwata na centymetr kwadratowy. Dlatego, aby podać 5 kilodżuli na metr kwadratowy, skóra musiałaby być wystawiona na 208 sekund promieniowania UVB, jak obliczono tutaj.
Następnie umieść uspokojoną powierzchnię brzuszną zwierzęcia w dół, aby zapewnić równomierną ekspozycję na promieniowanie UV. Aby podać wybraną dawkę promieniowania, należy w odpowiednim czasie kolejno usunąć małe kawałki taśmy zakrywające otwory.
Na przykład, jeśli 40 kilodżuli na metr kwadratowy jest największą dawką, mysz będzie pod lampą przez 27 minut i 47 sekund, a otwór na tę dawkę będzie odsłonięty od początku. Jednak w przypadku warunku 5 kilodżuli na metr kwadratowy taśma zostałaby usunięta, gdy pozostało 208 sekund czasu naświetlania. Po ekspozycji na promieniowanie UV ostrożnie usuń taśmę i umieść zwierzęta w ciepłym, cichym miejscu, aby doszły do siebie po znieczuleniu, zanim włożysz je z powrotem do klatek.
Minimalna dawka rumieniowa (MED) odpowiada minimalnej dawce promieniowania UV, która powoduje stan zapalny zdefiniowany jako rumień i/lub obrzęk całego odsłoniętego kręgu skóry. Monitoruj mysz przez 24 do 48 godzin, aby poszukać dyskretnych obszarów rumienia lub obrzęku w obszarach wystawionych na promieniowanie UV.
Czasami resztki zarostu zaburzają interpretację testów MED, maskując leżący pod spodem rumień lub obrzęk skóry. Zwilżenie skóry 70% etanolem sprawia, że skóra jest znacznie łatwiejsza do interpretacji. Udokumentuj fotograficznie wszelkie ślady skóry, a następnie zwróć myszy do obiektu dla zwierząt.