Name: Indukcja i ocena kliniczna przewlekłego nawrotowego eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-04T00:00:00.000+00:00
Duration: 26 min 48 s
Description: Poznaj metodę indukcji i oceny klinicznej przewlekłego nawrotowego eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia u szczurów DA. Ten model zwierzęcy umożliwia badanie stwardnienia rozsianego i testowanie nowych terapii.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Indukcja i monitorowanie przewlekłego nawracającego EAE
Emulsja jest mieszaniną w stosunku 1:1 antygenu w roztworze wodnym dodanego do uzupełnionego pełnego adjuwantu Freunda. Bardzo ważne jest, aby dodawać antygen do adjuwantu, a nie odwrotnie!!!
Podczas przygotowywania i wstrzykiwania emulsji powstaje dużo odpadów. Zawsze przygotowuj 1,5 lub 2 razy więcej materiału, niż jest potrzebne.
Należy używać autoklawowanego moździerza, tłuczka, szklanych strzykawek i mostków. Wszystkie elementy plastikowe powinny być sterylne. Przygotowanie można przeprowadzić na zwykłym stole laboratoryjnym.
1.&nbsp;Przygotowanie suplementowanego adiuwantu
Odważ 30 mg Mycobacterium tuberculosis (numer katalogowy Difco # 231141) i umieść w moździerzu. Rozetrzyj na drobny proszek, nie naciskając zbyt mocno, aby uniknąć rozbicia bakterii. Dodaj 10 ml kompletnego adjuwantu Freunda H37Ra (numer katalogowy Difco # 231131) i wymieszaj. Tak uzupełniony adjuwant zawiera obecnie 4 mg/ml Mycobacterium tuberculosis. Przenieś zawartość do probówki.
2. Przygotowanie homogenatu rdzenia kręgowego
Pobrać rdzenie kręgowe od szczurów DA (bez względu na wiek i płeć) i przechowywać je w zamrożeniu w temperaturze -80°C. Zważyć zamrożone rdzenie kręgowe, aby uzyskać ilość pozwalającą na zmieszanie w stosunku 1:1 (masa:objętość) z uzupełnionym adiuwantem. Posiekać rdzenie kręgowe tak drobno, jak to możliwe, za pomocą żyletki, przenieść do moździerza użytego w sekcji 1 i przygotować pastę za pomocą tłuczka.
3.&nbsp;Przygotowanie emulsji
<ol>
<li>Do probówki wlać uzupełniony kompletny adiuwant Freunda. Mieszać w wortexerze z wysoką prędkością. Kroplami dodawać homogenizat rdzenia kręgowego podczas wortexowania. Po dodaniu całego homogenizatu rdzenia kręgowego wortexować przez kolejne 5 minut. Mieszanina powinna zmienić kolor na jasnoróżowy. </li>
<li>Emulsję przenieść do szklanej strzykawki o pojemności 5 ml i połączyć ją z drugą szklaną strzykawką 5 ml za pomocą mostka 18G (katalog Fisher nr 14-825-17L). Przesyłać emulsję z jednej strzykawki do drugiej, aż stanie się gęsta (5-10 min). Jeśli przygotowano więcej niż 5 ml emulsji, należy użyć kilku strzykawek 5 ml; NIE używać większych strzykawek. </li>
<li>Emulsję można przechowywać w strzykawkach w temperaturze 4°C przez 3 tygodnie. Zaleca się jej przygotowanie co najmniej 12 godzin wcześniej, aby sprawdzić, czy nie uległa rozwarstwieniu. Powinna pozostać gęsta i nie rozdzielać się na dwie fazy. Kolor w ciągu nocy zmieni się na jasnoyellow lub beżowy.</li>
</ol>
4.&nbsp;Immunizacja szczurów
<ol>
<li>Mieszaj emulsję w strzykawkach przez kilka minut, a następnie przenieś ją do strzykawki przeznaczonej do iniekcji. Wstrzyknij 200 µl podskórnie u samej nasady ogona, używając igieł 23G i strzykawek 3 ml Luer-Lock w krótkotrwałej narkozie. </li>
<li>Odbiorcami są samice szczurów DA w wieku 7-9 tygodni. Szczury pozyskiwane są z Harlan-Sprague Dawley. </li>
<li>Szczury należy obserwować dwa razy dziennie i ważyć codziennie. Objawów klinicznych należy spodziewać się od 7 do 15 dni po wstrzyknięciu emulsji. </li>
</ol>
Ocena kliniczna:
0:         brak choroby
0,5:      dystalny wiotki ogon
1:         wiotki ogon
2:         łagodna parapareza, ataksja
3: umiarkowana parapareza, szczury od czasu do czasu potykają się
3.5: jedna kończyna tylna jest sparaliżowana, druga się porusza
4: całkowity paraliż kończyn tylnych
5:         całkowity paraliż kończyn tylnych i nietrzymanie moczu
6:         stan agonalny, trudności w oddychaniu, brak przyjmowania pokarmu i wody. Bezzwłocznie przeprowadzić eutanazję.

CB i KGC są współzałożycielami i konsultantami w firmie Airmid Inc.

Niniejszy protokół wiąże się z kilkoma istotnymi kwestiami.
Genetyka szczurów DA będzie się nieco różnić w zależności od hodowcy, od którego zostaną zakupione. Różnice te mogą zwiększać lub zmniejszać podatność szczurów na indukcję EAE. Jeśli szczury są bardziej podatne na EAE, należy zmniejszyć siłę immunizacji, stosując nieuzupełniony kompletny adiuwant Freunda lub nawet niekompletny adiuwant Freunda. Można również rozważyć zmniejszenie ilości wstrzykiwanej emulsji lub rozcieńczenie homogen...

<table><tbody><tr><td>Kompletny adiuwant Freunda &amp;rsquo;</td><td>Odczynnik</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF 311-360-5</td><td>Wyprodukowano przez Difco</td></tr><tr><td>Mycobacterium tuberculosis H37Ra</td><td>Odczynnik</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF3114-33-8</td><td>Wyprodukowano przez Difco</td></tr><tr><td>Szczur DA</td><td>Zwierzę</td><td>Harlan Laboratories</td><td></td><td>Samice, wiek 7-9 tygodni.</td></tr><tr><td>Strzykawki szklane - 5 ml</td><td>Narzędzie</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-823-10 B</td><td></td></tr><tr><td>Igły metalowe - 18G</td><td>Narzędzie</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-825-17L</td><td></td></tr><tr><td>Plastikowe strzykawki Luer Lok - 3 ml</td><td>Narzędzie</td><td>BD Biosciences</td><td>309585</td><td></td></tr><tr><td>Igły - 20G 1 1/2</td><td>Narzędzie</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-826-5C</td><td></td></tr></tbody></table>

indukcja i ocena kliniczna przewlekłej postaci nawrotowej eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia

Induction and Clinical Scoring of Chronic-Relapsing Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Stwardnienie rozsiane (SM) jest przewlekłą chorobą zapalną ośrodkowego układu nerwowego (OUN), która najczęściej dotyka młodych dorosłych. Charakteryzuje się demielinizacją i bliznowaceniem glejowym w obszarach rozproszonych w mózgu i rdzeniu kręgowym. Zmiany te zaburzają przewodzenie nerwowe i wywołują upośledzające deficyty neurologiczne, które różnią się w zależności od lokalizacji zdemielinizowanych blaszek w OUN (np. parapareza, paraliż, ślepota, nietrzymanie moczu).
Eksperymentalne autoimmune zapalenie mózgu i rdzenia (EAE) jest modelem stwardnienia rozsianego (MS). EAE po raz pierwszy wywołano przypadkowo u ludzi podczas szczepienia przeciwko wściekliźnie przy użyciu wirusów hodowanych na rdzeniu kręgowym królików. Pozostałości rdzenia wstrzyknięte wraz z inaktywowanym wirusem wywołały chorobę OUN. W następstwie tych obserwacji, w 1935 roku Rivers i Schwenther opisali pierwszy model EAE u naczelnych immunizowanych homogenatem OUN. Od tego czasu EAE generowano u wielu gatunków i może ono przebiegać w różny sposób w zależności od gatunku/szczepu oraz użytego antygenu immunizującego. Na przykład immunizacja szczurów linii Lewis białkiem podstawowym mieliny w emulsji z adiuwantem indukuje ostry model EAE, podczas gdy ten sam antygen wywołuje chorobę przewlekłą u świni morskich.
Opisany tutaj model EAE jest indukowany poprzez immunizację szczurów szczepu DA przeciwko rdzeniowi kręgowemu szczura DA w emulsji z kompletnym adiuwantem Freunda. U szczurów rozwija się wstępujący wiotki porażenie w ciągu 7-14 dni po immunizacji. Objawy kliniczne przebiegają w sposób rzutowo-remisyjny przez kilka tygodni. Patologia wykazuje duże nacieki immunologiczne w OUN oraz blaszki demielinizacyjne. Specjalne zalecenia dotyczące opieki nad zwierzętami z EAE zostały opisane na końcu filmu.

W tym filmie zaprezentowano indukcję oraz ocenę kliniczną modelu zwierzęcego stwardnienia rozsianego: przewlekłego nawracającego eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia u szczurów linii DA. Choroba, wywołana immunizacją szczurów emulsją zawierającą cały rdzeń kręgowy szczura i pełny adiuwant Freunda, wykazuje objawy kliniczne przypominające przebieg choroby u ludzi.

Indukcja i ocena kliniczna przewlekłej postaci nawrotowej eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia

Stwardnienie rozsiane (MS) jest przewlekłą chorobą zapalną ośrodkowego układu nerwowego (OUN), która najczęściej dotyka młodych dorosłych. Charakteryzuje się ona...

Nazywam się Christine Beaton. Jestem asystentką badawczą w laboratorium George'a Chen w Katedrze Fizjologii i Biofizyki na Uniwersytecie Kalifornijskim w Irvine. W ciągu najbliższych dni pokażę Państwu, jak indukować i monitorować przewlekłe nawracające EAE, czyli eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie mózgu i rdzenia, u szczurów DA.Jest to model zwierzęcy stwardnienia rozsianego, a właściwie jeden z modeli zwierzęcych tej choroby. Charakteryzuje się on u tych zwierząt wstępującym wiotkim porażeniem oraz cechami histologicznymi przypominającymi obraz choroby u ludzi. Cały proces zajmie kilka dni.W pierwszym dniu pokażę Państwu, jak przygotować emulsję geniczną z homogenatem rdzenia kręgowego naiwnych szczurów w kompletnym adjuwancie T. Drugiego dnia zaprezentuję sposób immunizacji szczurów w celu wywołania EAE, a następnie odczekamy od siedmiu do 15 dni, aż u tych zwierząt pojawią się pierwsze objawy kliniczne; wtedy pokażę różne stadia progresji EAE u poszczególnych osobników. Na początek przedstawię wszystkie odczynniki i materiały niezbędne do przygotowania emulsji.Stosuję kompletny adiuwant front H 37 ra, jednak mimo że zawiera on już Mycobacterium tuberculosis, uzupełnię

induction-clinical-scoring-chronic-relapsing-experimental-autoimmune

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Indukcja i punktowanie kliniczne przewlekło-nawracającego doświadczalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia

W tym filmie demonstrujemy, jak izolować komórki mononuklearne z ośrodkowego układu nerwowego szczurów z eksperymentalnym autoimmunologicznym zapaleniem mózgu i rdzenia kręgowego.

Izolacja komórek mononuklearnych z ośrodkowego układu nerwowego szczurów z EAE

Film demonstruje indukcję eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia u myszy poprzez wstrzyknięcie kombinacji glikoprotein oligodendrocytów mielinowych i inaktywowanych Mycobacterium tuberculosis. Model umożliwia naukowcom badanie mechanizmów chorobowych i testowanie interwencji terapeutycznych.

Indukcja eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia kręgowego w modelu mysim

W tym filmie mysi model stwardnienia rozsianego jest tworzony za pomocą eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia (EAE). Myszowi wstrzykuje się emulsję zawierającą peptyd neuronalny i adiuwant, wywołując odpowiedź immunologiczną, która aktywuje autoreaktywne limfocyty T. Następnie podaje się wstrzyknięcie toksyny krztuścowej (PTX) w celu zwiększenia przepuszczalności bariery krew-mózg, umożliwiając autoreaktywnym limfocytom T infiltrację mózgu. Ten naciek inicjuje kaskadę...

Ten manuskrypt opisuje metody indukcji i oceny eksperymentalnego modelu autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia kręgowego (EAE), wraz z oceną rozmieszczenia komórek odpornościowych i poziomów cytokin mRNA w węzłach chłonnych, śledzionie, krwi i rdzeniu kręgowym za pomocą cytometrii przepływowej i ilościowego PCR, odpowiednio, w różnych fazach choroby.

Indukcja eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia kręgowego u myszy i ocena zależnej od choroby dystrybucji komórek odpornościowych w różnych tkankach

Tutaj prezentujemy protokoły do badania upośledzenia jednostki nerwowo-naczyniowej podczas eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia in vivo. W szczególności zajmujemy się tym, jak określić przepuszczalność bariery krew-mózg i aktywność żelatynazy zaangażowaną w migrację leukocytów przez limity gleju.

Wizualizacja upośledzenia barier śródbłonkowych i glejowych jednostki nerwowo-naczyniowej podczas eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia mięśniowego in vivo

Ten manuskrypt przedstawia protokół indukcji aktywnego eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia (EAE) u myszy. Przedstawiono również metodę izolacji i charakterystyki naciekających limfocytów w ośrodkowym układzie nerwowym (OUN), aby pokazać, w jaki sposób limfocyty są zaangażowane w rozwój choroby autoimmunologicznej OUN.

Analiza cytometryczna przepływowa nacieku limfocytów w ośrodkowym układzie nerwowym podczas eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia kręgowego

Niniejszy protokół opisuje indukcję eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia w modelu mysim przy użyciu glikoproteiny oligodendrocytów mieliny i monitorowanie procesu chorobowego za pomocą systemu punktacji klinicznej. Eksperymentalne objawy związane z autoimmunologicznym zapaleniem mózgu i rdzenia kręgowego są analizowane za pomocą analizy mikrotomografii komputerowej kości udowej myszy i testu terenowego w celu kompleksowej oceny procesu chorobowego.

Indukcja i zróżnicowane wskaźniki oceny eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia kręgowego

Eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie mózgu i rdzenia (EAE) służy jako zwierzęcy model stwardnienia rozsianego. W tym artykule opisano podejście do oceny zapalenia rdzenia kręgowego, demielinizacji i uszkodzenia aksonów w EAE. Dodatkowo przedstawiono metodę ilościowego określania poziomu rozpuszczalnego światła neurofilamentów w surowicy myszy, ułatwiającą ocenę uszkodzenia aksonów u żywych myszy.

Ocena zapalenia ośrodkowego układu nerwowego, demielinizacji i uszkodzenia aksonów w eksperymentalnym autoimmunologicznym zapaleniu mózgu i rdzenia

Eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie mózgu i rdzenia jest jednym z najczęściej stosowanych mysich modeli stwardnienia rozsianego. W obecnym protokole myszy C57BL/6J obu płci są immunizowane peptydem glikoproteinowym oligodendrocytów mielinowych, co skutkuje głównie wznoszącym się niedowładem ogona i kończyn. W tym miejscu omówiono protokół indukcji i oceny EAE.

Modelowanie stwardnienia rozsianego u obu płci: eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie mózgu i rdzenia wywołane MOG35-55

Eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie mózgu i rdzenia (EAE) to zwierzęcy model stwardnienia rozsianego (MS), który dzieli z ludzką chorobą silną humoralną odpowiedź autoimmunologiczną. W tym miejscu przedstawiamy prosty i elastyczny protokół ELISA do ilościowego oznaczania autoprzeciwciał w surowicy myszy uodpornionych na EAE.

Kwantyfikacja przeciwciał autoreaktywnych u myszy po eksperymentalnym autoimmunologicznym zapaleniu mózgu i rdzenia kręgowego

Poznaj metodę indukcji i oceny klinicznej przewlekłego nawrotowego eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia u szczurów DA. Ten model zwierzęcy umożliwia badanie stwardnienia rozsianego i testowanie nowych terapii.

Indukcja i ocena kliniczna przewlekłej postaci nawrotowej eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia

Przeglądaj więcej filmów