Name: Wstrzyknięcie dokomorowe in utero i elektroporacja zarodków szczurów E16 (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 19 min 4 s
Description: Naucz się techniki wstrzyknięcia dokomorowego in utero i elektroporacji zarodków szczurów E16. Ta metoda umożliwia manipulacje genetyczne w badaniach nad rozwojem układu nerwowego.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

wewnątrzkomorowe wstrzykiwanie i elektroporacja in utero embrionów szczura w 16. dniu rozwoju (e16)

In Utero Intraventricular Injection and Electroporation of E16 Rat Embryos

In-utero in-vivo iniekcja i elektroporacja embrionalnego neocortex szczura stanowią potężne narzędzie do manipulacji pojedynczymi progenitorami wyścielającymi ściany komór bocznych. Technika ta jest obecnie szeroko stosowana do badania procesów zaangażowanych w kortykogenezę poprzez nadekspresję lub wyciszanie genów oraz obserwację efektów w zakresie proliferacji, migracji i różnicowania komórkowego. W porównaniu do tradycyjnych strategii knockoutu, elektroporacja in-utero zapewnia szybki sposób manipulacji populacją komórek w określonym oknie czasowym. W niniejszym protokole wideo przedstawiamy metodologię eksperymentalną przygotowania szczurów do zabiegu, odsłaniania rogów macicy poprzez laparotomię, wstrzykiwania DNA do komór bocznych rozwijającego się zarodka, elektroporacji DNA do progenitorów wyścielających ścianę boczną oraz opieki nad zwierzętami po operacji. Nasze laboratorium stosuje ten protokół w zabiegach na szczurach w dniach E15–E21, jednak najczęściej jest on wykonywany w dniu E16, jak pokazano w tym filmie.

Wewnątrzkomorowe wstrzykiwanie i elektroporacja in utero embrionów szczura w 16. dniu rozwoju (E16)

Wewnątrzmaciczna iniekcja in vivo oraz elektroporacja nowokory embrionalnego szczura stanowią potężne narzędzie do manipulacji pojedynczymi komórkami progenitorowymi...

Witam, nazywam się William Ti. Pochodzę z laboratorium Arnold Creek Stein Lab. Dzisiaj wraz z zespołem zaprezentujemy metodę wewnątrzmacicznej iniekcji embrionów szczura w 16. dniu rozwoju (E16). Witam, nazywam się Laura Elias.Dzisiaj pokażę Państwu, jak przygotować pipety do mikroiriekcji oraz jak napełnić pipety do inwentrykularnych wstrzykiwań i elektroporacji, które będziemy dziś przeprowadzać. Pokażę również, jak wykonać inwentrykularne wstrzykiwania i elektroporację u embrionów szczura w 16. dniu rozwoju (E16). In utero wstrzykiwania i elektroporacja u szczura są szczególnie użyteczne, ponieważ szczur jest systemem, w którym nie można łatwo przeprowadzać manipulacji genetycznych.W tej procedurze wykorzystujemy szereg narzędzi chirurgicznych. Używamy kurety, dwóch par pęset – jednej ząbkowanej i drugiej z małym ząbkiem na końcówce – oraz pary kleszczyków hemostatycznych.To są nożyczki, a następnie używamy tych dwóch zszywaczy. Ten większy jest używany do szczurów. Ten mniejszy jest używany do myszy, wykorzystuje zszywki rozmiaru 7, a ten drugi wykorzystuje zszywki rozmiaru 9; oba są sprężynowe.Niektóre z narzędzi, których używamy podczas operacji, to proste źródło światła świa

in-utero-intraventricular-injection-electroporation-e16-rat

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Wstrzyknięcie do komory wewnątrzmacmicowej i elektroporacja zarodków szczurów w dniu E16

In-utero in-vivo iniekcja i elektroporacja zarodkowego neokortyksu myszy stanowią potężne narzędzie do manipulacji pojedynczymi komórkami progenitorowymi ...

Wewnątrzkomorowe wstrzyknięcie i elektroporacja in utero embrionów myszy w 15. dniu rozwoju (E15)

In utero elektroporacja jest cenną metodą transfekcji neuronalnych komórek progenitorowych in vivo. W zależności od rozmieszczenia elektrod oraz momentu rozwojowego przeprowadzenia elektroporacji, można ukierunkować proces na określone podgrupy komórek kory mózgowej. Następnie komórki docelowe można analizować in vivo lub in vitro pod kątem efektów modyfikacji genetycznych.

Elektroporacja in utero z następującą po niej pierwotną hodowlą neuronów w celu badania funkcji genów w podzbiorze neuronów korowych

Kontrola ekspansji somatycznych komórek macierzystych jest głównym czynnikiem utrudniającym ich badanie oraz zastosowanie w terapii. W niniejszym opracowaniu opisujemy system czasowej kontroli ekspansji neuronalnych komórek macierzystych podczas rozwoju oraz w wieku dorosłym, który może zostać wykorzystany do zwiększenia liczby neuronów generowanych w mózgu myszy.

Ekspansja embrionalnych i dorosłych komórek macierzystych układu nerwowego poprzez elektroporację in utero lub stereotaksycyjne wstrzyknięcie wirusowe

Źródło: Koza, P., et al. Generation of Transgenic Rats using a Lentiviral Vector Approach. J. Vis. Exp. (2020)Niniejszy film demonstruje dostarczanie wektorów lentiwirusowych do zapłodnionych embrionów szczura za pomocą mikroiniekcji w celu uzyskania stabilnej integracji transgenu do generowania szczurów transgenicznych.

Transdukcja zapłodnionych zarodków szczura z wykorzystaniem wektora lentiwirusowego

Ten film demonstruje dostarczanie plazmidowego DNA do komórek neuronalnych móżdżku mysich zarodków za pomocą elektroporacji in utero. Metoda ta jest przydatna do zrozumienia funkcji genów in vivo w prawidłowym rozwoju mózgu oraz zmian w ekspresji genów komórek neuronalnych podczas progresji guza.

Dostarczanie genów oparte na elektroporacji in utero: technika wstrzykiwania plazmidowego DNA do embrionalnych komórek móżdżku mysich zarodków

Geny mogą być manipulowane podczas rozwoju kory mózgowej lub hipokampa szczura za pomocą elektroporacji in utero (IUE) w E16, aby umożliwić szybkie i ukierunkowane modyfikacje połączeń neuronalnych do późniejszych badań zachowania lub neuropatologii u dorosłych zwierząt. Poporodowe obrazowanie in vivo w celu kontroli powodzenia IUE wykonuje się za pomocą bioluminescencji aktywacji kotransfekowanej lucyferazy.

Wytwarzanie miejscowo transgenicznych szczurów za pomocą elektroporacji in utero i badań przesiewowych bioluminescencji in vivo

Ten protokół opisuje szczegółowo, jak specyficznie transfekować różne regiony w ośrodkowym układzie nerwowym C57BL/6 za pomocą elektroporacji in utero. W tym protokole zawarte są szczegółowe instrukcje dotyczące transfekcji regionów, które rozwijają się w korę, hipokamp, wzgórze, podwzgórze, jądro przegrody bocznej i prążkowie.

Kora mózgowa, hipokamp, wzgórze, podwzgórze, jądro przegrody bocznej i jądro prążkowia specyficzne dla macicy elektroporacja u myszy C57BL/6

Okołokomorowa heterotopia guzkowa (PNH) jest najczęstszą formą wady rozwojowej kory mózgowej (MCD) w wieku dorosłym, ale jej podłoże genetyczne pozostaje nieznane w większości sporadycznych przypadków. Niedawno opracowaliśmy strategię identyfikacji nowych genów kandydujących do MCD i bezpośredniego potwierdzenia ich przyczynowej roli in vivo.

Nowatorska strategia łącząca macierz CGH, sekwencjonowanie całego eksomu i elektroporację in utero u gryzoni w celu identyfikacji genów odpowiedzialnych za wady rozwojowe mózgu

Podwójna elektroporacja w macicy pozwala na celowanie w populacje komórek, które są przestrzennie i czasowo oddzielone. Technika ta jest przydatna do wizualizacji interakcji między tymi populacjami komórek przy użyciu białek fluorescencyjnych w normalnych warunkach, ale także po eksperymentach funkcjonalnych w celu zakłócenia interesujących genów.

Podwójna elektroporacja in utero w celu ukierunkowania na czasowo i przestrzennie oddzielone populacje komórek

Ten protokół przedstawia zoptymalizowane podejście do produkcji genetycznie modyfikowanych modeli szczurów. Wirus związany z adenowirusem (AAV) służy do dostarczania matrycy naprawy DNA, a elektroporacja służy do dostarczania odczynników CRISPR-Cas9 w celu zakończenia procesu edycji genomu w zarodku 2-komórkowym.

CRISPR-Cas9 Edycja genomu zarodków szczurów przy użyciu wirusa związanego z adenowirusem (AAV) i elektroporacją zarodków 2-komórkowych

Naucz się techniki wstrzyknięcia dokomorowego in utero i elektroporacji zarodków szczurów E16. Ta metoda umożliwia manipulacje genetyczne w badaniach nad rozwojem układu nerwowego.

Wewnątrzkomorowe wstrzykiwanie i elektroporacja in utero embrionów szczura w 16. dniu rozwoju (E16)

Przeglądaj więcej filmów