Name: Indukcja i monitorowanie aktywnej nadwrażliwości typu opóźnionego (DTH) u szczurów (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 26 s
Description: Poznaj metodę indukcji aktywnej nadwrażliwości typu opóźnionego u szczurów Lewis przy użyciu emulsji antygenu KLH z adiuwantem Freunda. Technika ta umożliwia badanie odpowiedzi zapalnej i dynamiki reakcji immunologicznej.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

1. Przygotowanie emulsji
<ol>
<li>Emulsja jest mieszaniną w stosunku 1:1 antygenu (DTH można indukować za pomocą różnych antygenów: owalbuminy, toksoidu tężcowego, hemocjaniny z małży kluczowatego...) w roztworze wodnym dodanego do pełnego adiuwantu Freunda. Bardzo ważne jest, aby dodawać antygen do adiuwantu, a nie odwrotnie!!! </li>
<li>Przy przygotowywaniu i wstrzykiwaniu emulsji powstaje dużo odpadów, dlatego należy zawsze przygotować 1,5 lub 2 razy więcej niż jest potrzeba. </li>
<li>Rozpuścić antygen w soli fizjologicznej, aby przygotować roztwór o stężeniu 2 mg/ml. Nie filtrować, aby nie utracić agregatów!!! </li>
<li>Umieścić pełny adiuwant Freunda H37Ra (Difco, katalog nr 231131) w probówce i wymieszać na wortexie z dużą prędkością. Dodawać antygen kropla po kropli podczas wortexowania. Po dodaniu całego antygenu mieszać na wortexie przez kolejne 5 minut. Mieszanina powinna stać się biała. </li>
<li>Przenieść emulsję do szklanej strzykawki i połączyć ją z drugą szklaną strzykawką za pomocą łącznika 18G (katalog Fisher nr 14-825-17L). Przepompowywać emulsję z jednej strzykawki do drugiej, aż stanie się gęsta (5-10 min). Najlepiej użyć dwóch strzykawek o pojemności 5 ml. Jeśli wymagane jest więcej niż 5 ml emulsji, należy użyć kilku zestawów strzykawek 5 ml. </li>
<li>Emulsję można przechowywać w strzykawkach w temperaturze 4°C przez 3 tygodnie.</li>
</ol>
2. Immunizacja szczurów
<ol>
<li>Mieszać emulsję w strzykawkach przez kilka minut, a następnie przenieść ją do strzykawki przeznaczonej do iniekcji. Wstrzyknąć 200 ml podskórnie w 1-2 miejscach u nasady ogona, używając igieł 23G i strzykawki 3 ml z końcówką Luer-Lok.</li>
</ol>
3. Podanie antygenu w okolicy grzbietowej
<ol>
<li>Siedem dni po immunizacji należy ogolić dwa miejsca na grzbietach szczurów i wstrzyknąć śródskórnie 20 ml roztworu antygenu o stężeniu 1 mg/ml w jedno miejsce oraz sól fizjologiczną (lub nieistotny antygen) w drugie miejsce. NIE należy filtrować roztworu antygenu, ponieważ może to spowodować utratę agregatów nasilających reakcję zapalną. </li>
<li>Szczury powinny zostać poddane znieczuleniu, aby uniknąć ruchów. Roztwór należy wstrzyknąć śródskórnie, używając igieł 27G ½ i strzykawek 1 ml. Należy wymieniać igły pomiędzy iniekcjami. Uwaga: w celu uzyskania bardziej precyzyjnych pomiarów wyzwanie można przeprowadzić w małżowinie usznej zamiast na grzbiecie. Zobacz wideo pod adresem <a href="https://www.jove.com/index/Details.stp?ID=325">https://www.jove.com/index/Details.stp?ID=325</a> </li>
</ol>
4. Pomiar DTH
<ol>
<li>Miejsce wstrzyknięcia zacznie czerwienieć i puchnąć, co jest oznaką stanu zapalnego. Należy zmierzyć średnicę stanu zapalnego za pomocą linijki lub, najlepiej,&nbsp;suwmiarki. Maksymalny obrzęk powinien wystąpić między 24 a 72 godziną.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Beeton, C., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+and+monitoring+of+adoptive+delayed-type+hypersensitivity+in+rats.">Induction and monitoring of adoptive delayed-type hypersensitivity in rats.</a> Journal of Visualized Experiments. 8, (2007).</li></ol>

Autorzy są współzałożycielami i konsultantami firmy Airmid Inc.

Aby uzyskać dokładniejszy pomiar reakcji DTH, zaleca się podanie antygenu szczurom do małżowiny usznej. Reakcję można następnie zmierzyć jako różnicę w obrzęku ucha między uchem poddanym działaniu odpowiedniego antygenu a uchem poddanym działaniu samego soli fizjologicznej lub nieistotnego antygenu. Demonstracja podania antygenu do ucha została przedstawiona w 1.

<table><tbody><tr><td>Kompletny adiuwant Freunda &amp;rsquo; H37Ra</td><td>Odczynnik</td><td>Difco Laboratories</td><td>231131</td><td>Dystrybuowane przez Fisher pod numerem katalogowym DF 311-360-5</td></tr><tr><td>Hemocyjanina z Keyhole Limpet</td><td>Odczynnik</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H-5654</td><td></td></tr><tr><td>Owalbumina</td><td>Odczynnik</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A-5503</td><td></td></tr><tr><td>Szklane strzykawki 5 ml</td><td>Narzędzie</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-823-10 B</td><td>Wymagane dwie strzykawki 5 ml dla każdej partii 5 ml emulsji</td></tr><tr><td>Metalny łącznik 18G</td><td>Narzędzie</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-825-17L</td><td></td></tr><tr><td>Szczury rasy Lewis</td><td>Zwierzę</td><td>Harlan Laboratories</td><td></td><td>Samice szczurów w wieku 7-9 tygodni</td></tr><tr><td>Igły 23G 1&quot;</td><td>Narzędzie</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-826 AA</td><td>Zaleca się wymianę igieł między szczurami</td></tr><tr><td>Strzykawki 3 ml Luer Lock</td><td>Narzędzie</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-561-63</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Odczynnik</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>14040-182</td><td></td></tr><tr><td>Strzykawki z końcówką standardową 1 ml</td><td>Narzędzie</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-257-154</td><td></td></tr><tr><td>Igły 27G 1/2&quot;</td><td>Narzędzie</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-826-48</td><td></td></tr><tr><td>Elektryczna bezprzewodowa maszynka do strzyżenia</td><td>Narzędzie</td><td>Braintree Scientific, Inc.</td><td>CLP-32130</td><td>Do golenia grzbietów szczurów przed podaniem antygenu.</td></tr><tr><td colspan="5">Należy stosować sterylne roztwory, odczynniki i strzykawki. Szklane strzykawki i łączniki 18G można autoklawować. Przed pierwszym użyciem odczynnika należy zapoznać się z kartą charakterystyki materiału i założyć odpowiedni sprzęt ochronny.</td></tr></tbody></table>

indukcja i monitorowanie aktywnej nadwrażliwości opóźnionej (dth) u szczurów

Induction and Monitoring of Active Delayed Type Hypersensitivity (DTH) in Rats

Nadwrażliwość opóźniona (DTH) to reakcja zapalna pośredniczona przez limfocyty T pamięci efektorowej wykazujące ekspresję CCR7, które infiltrują miejsce wstrzyknięcia antygenu, przeciwko któremu układ odpornościowy został uprzednio uwrażliwiony. Reakcja zapalna charakteryzuje się zaczerwienieniem i obrzękiem w miejscu podania antygenu. Jest to wygodny model do określania skuteczności in vivo leków immunosupresyjnych. skórną reakcję DTH można wywołać albo poprzez adoptywny transfer antygenowo swoistych limfocytów T, albo poprzez aktywne uodpornienie antygenem, a następnie wewnątrzskórne podanie tego antygenu w celu wywołania reakcji zapalnej w określonym obszarze skóry. Odpowiedzi DTH można indukować w stosunku do różnych antygenów, np. owalbuminy, tuberkuliny, toksoidu tężcowego lub hemocyjaniny z małża klucznika (KLH).
W niniejszej pracy demonstrujemy, jak wywołać aktywną reakcję DTH u szczurów linii Lewis. W pierwszej kolejności przygotujemy emulsję woda-w-oleju z KLH, będącego badanym antygenem, w pełnym adjuwancie Freunda, a następnie wstrzykniemy tę emulsję podskórnie szczurom. Pozwoli to uwrażliwić układ odpornościowy na wytworzenie komórek T pamięci skierowanych przeciwko KLH. Siedem dni później wykonamy próbę prowokacyjną poprzez wstrzyknięcie w skórę grzbietu szczurów KLH po jednej stronie oraz owalbuminy, będącej antygenem nieistotnym, po drugiej stronie. Reakcja zapalna będzie widoczna po 16–72 godzinach, a obszar zaczerwienienia i obrzęku zostanie zmierzony jako wskaźnik nasilenia reakcji DTH.

Opóźniona nadwrażliwość (DTH) jest reakcją zapalną pośredniczoną przez CCR7-efektorowe limfocyty T pamięci. W niniejszej pracy demonstrujemy, jak indukować aktywną reakcję DTH u szczurów linii Lewis oraz monitorować odpowiedź zapalną.

Indukcja i monitorowanie aktywnej nadwrażliwości opóźnionej (DTH) u szczurów

Opóźniona nadwrażliwość (DTH) jest reakcją zapalną pośredniczoną przez efektorowe limfocyty T pamięci wykazujące ekspresję CCR7, które naciekają miejsce wstrzyknięcia...

Witam, nazywam się Christine Beaton. Pracuję w laboratorium George'a Chandiego w Katedrze Fizjologii i Biofizyki na UCI. Dzisiaj pokażę Państwu, jak indukować aktywną reakcję nadwrażliwości opóźnionej (DTH) u szczurów.W tym celu przygotuję emulsję KLH, który jest moim antygenem, w adjuwancie Freonda. Następnie wstrzyknę tę emulsję w nasadę ogona szczurów linii Lewis. Spowoduje to immunizację szczurów przeciwko KLH. Po tygodniu podam szczurom dawkę przypominającą KLH i zmierzę reakcję DTH poprzez pomiar obrzęku.Jest to miejsce wywołania reakcji i wykorzystujemy je w laboratorium, aby zaobserwować wpływ blokerów kanałów PO na reakcje zapalne, takie jak DTH. Oto niepełny adiuwant trans, którego użyję do przygotowania emulsji. Mogłabym również użyć pełnego adiuwanta trans.Oto kwarc KLH, który jest dzisiaj moim antygenem, oraz roztwór o stężeniu 2 mg/ml w PBS. Użyję tej strzykawki 5 ml, aby pobrać niekompletny adjuwant Incomplete Freund's Adjuvant i przenieść go do probówki 15 ml. Następnie umieszczę probówkę na wortexie i podczas mieszania będę dodawać antygen kropla po kropli do adjuwantu.Następnie będę mieszać próbkę w wirówce typu vortex przez kolejne pięć minut. Po zakończeniu tej czynności napełnię szklaną strzykawkę o pojemności 5 ml przygotowaną mieszaniną; musi to być strzykawka szklana, ponieważ adiuwant wykazuje tendencję do rozpuszczania plastiku. Ustaliliśmy, że strzykawki o pojemności 5 ml są najlepsze do przygotowania emulsji.Mniejsze lub większe nie są tak dobre. Po napełnieniu strzykawki mieszaniną, użyję tego metalowego łącznika, aby połączyć szklaną strzykawkę z drugą szklaną strzykawką o pojemności 5 ml. Następnie będę wywierać nacisk na strzykawki, aby mieszanina przemieszczała się z jednej strzykawki do drugiej tak szybko, jak to możliwe, aż do momentu, gdy emulsja stanie się naprawdę gęsta, i wtedy będzie gotowa do wstrzyknięcia.Wprowadzę 2,5 ml adiuwantu. Najpierw wstrzyknę powietrze, aby łatwiej było pobrać adiuwant, a następnie przeleję cały adiuwant do probówki. Teraz pobiorę 2,5 ml tej zawiesiny i dodam ją do probówki, mieszając na wortexie.Ponieważ pobrałem 2,5 ml adiuwantu, pobiorę również 2,5 ml KLH. W miarę jak będę dodawać go kropla po kropli, zobaczą Państwo, że mieszanina zmieni kolor na biały. W ten sposób dodałem cały antygen do adiuwantu.W związku z tym wymieszam zawiesinę w wirówce vortex przez kolejne pięć minut. Ponieważ nie chcę trzymać probówki w ręku przez cały ten czas, przymocuję ją do urządzenia taśmą. Należy ustawić szybkość wirowania tak, aby w probówce powstał wir, ale jednocześnie nie była ona zbyt duża, by zawartość nie wypłynęła. Pozostawię ją w ten sposób na pięć minut.Pięć minut minęło. Teraz zatrzymuję wortex, a moja mieszanina ma biały kolor. Wyjmuję zatem probówkę. Ups.Mieszanina jest już całkowicie biała, ale wciąż pozostaje dość płynna. Do iniekcji potrzebowałem gęstszej konsystencji, dlatego teraz przeleję całą mieszaninę do szklanej strzykawki o pojemności 5 ml.Strzykawki zostały poddane autoklawowaniu. Łączę zatem kompletną strzykawkę z moim mostkiem, a z drugiej strzykawki podłączam tylko cylinder.Zostawiam tłok wyjęty, a następnie wlewam mieszaninę do górnej strzykawki. Przenoszę całą zawartość do dolnej strzykawki. Następnie muszę usunąć pęcherzyk powietrza, który tutaj pozostał.Odłączę teraz górną strzykawkę i usunę pęcherzyk powietrza. Pęcherzyk jest trudny do zauważenia, ale znajduje się tutaj. Zatem usuwam pęcherzyk powietrza.Wypycham go również poza mostek, a następnie ponownie łączę górną strzykawkę. Upewniam się, że wszystkie elementy są szczelnie połączone, a potem przenoszę mieszaninę z jednej strzykawki do drugiej. Na początku jest to łatwe, ale wkrótce mieszanina zacznie twardnieć.Zatem dzisiejszego wieczoru staje się to trudniejsze i nie chcę przerwać mostka, więc po prostu obracam strzykawki. Czasami zajmuje to więcej czasu. Różni się to w zależności od emulsji.Prawdopodobnie zależy to również od temperatury i poziomu wilgotności. Myślę jednak, że moja emulsja jest już gotowa. Jest znacznie gęstsza niż w momencie, gdy ją wlewałem.Jest całkowicie białe. Występuje tylko jedna faza. Nie powinno dojść do oddzielenia fazy ACO od oleju.Roztwór jest teraz gotowy do wstrzyknięcia. Do aplikacji wykorzystam 200 µL na jedną sztukę.W tym celu będę używać strzykawek o pojemności 3 ml. Stosuję strzykawki z systemem Luer-Lock, aby mieć pewność, że igła nie wysunie się, ponieważ emulsja może być bardzo gęsta i trudna do wstrzyknięcia. W kwestii igieł staram się używać najcieńszych możliwych, które wciąż pozwalają na przepływ emulsji.Uznałem, że strzykawki 20 G są wystarczające dla tej emulsji. W przypadku gęstszych emulsji może być konieczne zastosowanie większych strzykawek. Obecnie wykonujemy to w taki sposób, że jedna osoba trzyma szczura, a druga wykonuje iniekcję.Dla zapewnienia maksymalnego bezpieczeństwa osoba trzymająca szczury – mimo że są one bardzo spokojne i przyzwyczajone do kontaktu z człowiekiem – używa rękawic odpornych na ugryzienia gryzoni, aby uniknąć potencjalnego pogryzienia. Następnie wprowadzam całą emulsję do jednej szklanej strzykawki, a pustą szklaną strzykawkę odłączam od mostka. W jej miejsce wkładam plastikową strzykawkę 3 ml typu Luer-Lock.Teraz przenoszę więcej materiału, niż jest wymagane dla jednej rynienki emulsji. Wypycham pęcherzyk powietrza. Ponieważ zamierzam wstrzyknąć 200 µL na rynienkę, pozostawiam w strzykawce 300 µL.Odłączam mostek, nakładam igłę na plastikową strzykawkę, a następnie napełniam igłę i przesuwam tłok do poziomu 200 µL. W ten sposób upewniam się, że w układzie nie ma pęcherzyków powietrza. Teraz jesteśmy gotowi do wstrzyknięcia.Musimy upewnić się, że szczur się nie rusza. Chwytam zwierzę, kładąc jeden palec nad barkiem, a drugi pod nim, a drugą ręką trzymam tylne łapy i ogon. Wykonamy iniekcje w boki: 10 µL po jednej stronie i 10 µL po drugiej. W zeszłym tygodniu zimmunizowałem szczury emulsją zawierającą KLH jako antygen.Dzisiaj wykonam u nich wewnątrzskórnie na grzbiecie challenge przy użyciu KLH, który jest moim antygenem, oraz albuminy jaja kurzego, która jest odpowiednim antygenem; aby jednak móc wykonać wstrzyknięcia wewnątrzskórne na grzbiecie, muszę je najpierw ogolić. W tym celu używam zwykłej golarki elektrycznej. Wymieniam igły pomiędzy poszczególnymi szczurami, aby upewnić się, że igła nie jest tępa.Ułatwia to znacznie wstrzykiwanie wewnątrzskórne, szczególnie że wstrzykuję małe objętości, po 20 µL każdego antygenu. Wstrzyknęłam oba antygeny wszystkim szczurom i zostawię je w klatkach do jutra. Jutro będziemy mogli zaobserwować stan zapalny.W miejscu wstrzyknięcia pojawi się zaczerwienienie i obrzęk, co pozwoli nam zmierzyć średnicę obszaru zapalnego jako miarę stanu zapalnego. Wczoraj podano szczurom do skóry grzbietu odpowiedni antygen, którym jest KLH, oraz antygen nieistotny, czyli albuminę. Teraz, 24 godziny później, sprawdzę szczury, aby ocenić, czy wystąpił stan zapalny.Oczekuję zatem wystąpienia stanu zapalnego wyłącznie w miejscu wstrzyknięcia KLH, który objawi się zaczerwienieniem i obrzękiem. Po stwierdzeniu stanu zapalnego zmierzę obszar zapalny, mierząc po prostu średnicę tej strefy. Tutaj znajduje się miejsce wstrzyknięcia KLH i można wyraźnie zauważyć silny stan zapalny.Jest ono bardzo czerwone w porównaniu do normalnej skóry i jest opuchnięte. Jeśli teraz spojrzymy na drugie miejsce, w które podano albuminę, można dostrzec miejsce wstrzyknięcia, ale nie występuje tu znaczące zaczerwienienie ani obrzęk. Zatem kontrola negatywna zadziałała.Teraz zmierzę obszar stanu zapalnego. W tym celu użyję zwykłej linijki i wykonam pomiar w milimetrach. Ten obszar ma 6 mm, a następnie wykonuję drugi pomiar.Ten obszar ma pięć milimetrów. Obrzęk jest niewielki, dokonam pomiaru, ale wynosi on ledwie jeden milimetr. Przedstawiłam zatem sposób przygotowania emulsji z antygenem, metodę immunizacji szczurów tą emulsją, a następnie sposób na ich stymulację po tygodniu za pomocą antygenu użytego do immunizacji oraz antygenu odpowiedniego, a także metodę wizualizacji i pomiaru stopnia stanu zapalnego w laboratorium Chan.Stosujemy tę technikę rutynowo jako prosty test w celu pomiaru wpływu blokerów kanałów potasowych na stan zapalny u szczurów.

induction-monitoring-active-delayed-type-hypersensitivity-dth

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Indukcja i monitorowanie czynnej opóźnionej hiperreaktywności typu IV (DTH) u szczurów

Opóźniona nadwrażliwość (DTH) jest reakcją zapalną pośredniczoną przez limfocyty T pamięci efektorowej (TEM) wykazujące ekspresję CCR7. W niniejszym materiale demonstrujemy, jak aktywować swoiste dla antygenu komórki TEM, indukować adopcyjną reakcję DTH u szczurów linii Lewis oraz monitorować odpowiedź zapalną.

Indukcja i monitorowanie adoptywnej nadwrażliwości opóźnionej u szczurów

W niniejszym materiale prezentujemy metodę indukowania oraz rejestrowania przebiegu reakcji nadwrażliwości opóźnionej (DTH) w uchu szczura. Następnie demonstrujemy przygotowanie tkanki ucha szczura do obrazowania dwufotonowego odpowiedzi efektorowych i pamięciowych limfocytów T.

Obrazowanie limfocytów T pamięci efektorowej w uchu po indukcji adoptywnej reakcji nadwrażliwości opóźnionej

Test aktywacji bazofilów jest potężnym narzędziem do wykrywania alergii zależnych od IgE in vitro. W niniejszej pracy zoptymalizowany protokół testu aktywacji bazofilów został wykorzystany do badania nadwrażliwości na leki. Opisano metodę wydajnej produkcji kowalencyjnych koniugatów lek-białko oraz ich charakterystykę fizykochemiczną.

Test aktywacji bazofili w badaniu mechanizmów zależnych od IgE w nadwrażliwości na leki

Opisujemy wartościowy test diagnostyczny, który mógłby potencjalnie służyć do podejmowania decyzji o odstawieniu immunosupresji po transplantacji, bez zwiększania ryzyka odrzucenia przeszczepu. Test ten opiera się na zasadach nadwrażliwości opóźnionej i umożliwia dokładną ocenę zarówno efektorowych, jak i regulacyjnych odpowiedzi immunologicznych specyficznych dla dawcy, generowanych przez biorców.

Test opóźnionej nadwrażliwości trans-vivo w badaniu regulacji specyficznej dla antygenu

Reakcje alergiczne, charakteryzujące się aktywacją komórek tucznych i bazofilów, są napędzane przez sieciowanie IgE i uwalnianie mediatorów prozapalnych. Ilościową ocenę reakcji alergicznych można uzyskać, stosując barwnik Evans Blue do monitorowania zmian przepuszczalności naczyń krwionośnych po prowokacji alergenem.

Pomiar miejscowej anafilaksji u myszy

Tutaj prezentujemy nową metodę dokładnego pomiaru różnic temperatur ciała w modelach myszy z pasywną anafilaksją układową (PSA) i alergią pokarmową za pomocą termometru na podczerwień. Procedura ta została dokładnie odwzorowana w poprzednich wynikach PSA.

Pomiar temperatury ciała myszy za pomocą termometru na podczerwień podczas pasywnej ogólnoustrojowej anafilaksji i oceny alergii pokarmowej

Opisujemy model immunizacji in vivo, translacyjnego zapalenia wątroby u myszy BALB/c, który może być wykorzystany do badania patogenezy indukowanego lekami autoimmunologicznego zapalenia wątroby, w tym różnic płci obserwowanych w tej chorobie. Opiszemy, w jaki sposób model ten demonstruje powtarzalne analizy przy użyciu technik eksperymentalnych in vivo i in vitro.

Indukcja indukowanego przez leki, autoimmunologicznego zapalenia wątroby u myszy BALB/c w celu zbadania jego mechanizmów patogennych

Nadwrażliwość kontaktowa (CHS) to mysi eksperymentalny model alergicznego kontaktowego zapalenia skóry (ACD). CHS opiera się na uczuleniu na reaktywny hapten poprzez malowanie ogolonej skóry klatki piersiowej i brzucha, a następnie prowokację skóry ucha rozcieńczonym haptenem, powodując reakcję obrzęku, która jest oceniana na różne sposoby.

Nadwrażliwość kontaktowa jako mysi model alergicznego kontaktowego zapalenia skóry

Próby wyizolowania podjednostki katalitycznej telomerazy, TERT, w ilościach wystarczających do badań strukturalnych, przez ponad dekadę przynosiły ograniczone rezultaty. W niniejszej pracy przedstawiamy metody izolacji rekombinowanej białka TERT z Tribolium castaneum (TcTERT) oraz rekonstrukcji aktywnego kompleksu rybonukleoproteinowego (RNP) telomerazy T. castaneum in vitro.

In vitro Rekonstytucja aktywnej telomerazy T. castaneum

W niniejszym materiale proponujemy proste metody indukcji hipoksji w hodowlach komórkowych oraz proste testy służące do oceny stanu hipoksyjnego hodowli.

Indukcja i badanie hipoksji w hodowlach komórkowych

Poznaj metodę indukcji aktywnej nadwrażliwości typu opóźnionego u szczurów Lewis przy użyciu emulsji antygenu KLH z adiuwantem Freunda. Technika ta umożliwia badanie odpowiedzi zapalnej i dynamiki reakcji immunologicznej.

Indukcja i monitorowanie aktywnej nadwrażliwości opóźnionej (DTH) u szczurów

Przeglądaj więcej filmów