Ortotopowy model mysiego raka pęcherza moczowego

To jest profesor WT Godbe i wraz z dr Georginą Dobe chcielibyśmy przedstawić metodę tworzenia ortotopowego modelu raka pęcherza moczowego. Zacznijmy od kroków, które podejmujemy, aby przygotować nasze zwierzęta do tego zabiegu. Myszy, które dzisiaj pokazujemy, to samice C 57 Black, zakupione w Jackson Laboratories.

Wybraliśmy kobietę ze względu na łatwość cewnikowania. Są one skąpe w wieku od trzech do pięciu tygodni i zwykle ważą od 16 do 20 gramów, skąpiec i zjada za pomocą respiratora, który jest ustawiony na dostarczanie fluoru w ilości 2% tlenu przy natężeniu przepływu od 0,8 do jednego litra na minutę. Częstość oddechów jest stale monitorowana, aby zapobiec wysuszeniu rogówki.

Podczas tej procedury, która trwa ponad półtorej godziny, oczy są smarowane maścią okulistyczną ze sztucznymi łzami, którą nakłada się bezpośrednio na oczy, a następnie zwija się w dół do oczu futra, dolna część pleców jest przycinana, aby ułatwić kontakt z metalową płytką uziemiającą, która będzie używana podczas procedury elektrokoagulacji, która spowoduje oparzenia w pęcherzu. Same miejsca oparzeń będą służyć jako punkty adhezji dla dostarczonych komórek nowotworowych po ich wprowadzeniu do światła pęcherza. Pozostałe techniki stosowane w tym protokole opierają się w dużej mierze na cewnikowaniu, do którego używamy cewników dożylnych o rozmiarze 24.

Po bezpiecznym wyjęciu i wyrzuceniu rysika osłonki cewników są smarowane substancją, taką jak galaretka KY lub astroglide, aby pomóc w wytworzeniu lub zapobieganiu urazom cewki moczowej. W celu cewnikowania srom jest stabilnie utrzymywany za pomocą kleszczy. Podczas wprowadzania cewnika należy zwrócić uwagę na technikę cewnikowania cewki moczowej, więc zostanie to szczegółowo pokazane.

Zalecamy stosowanie pętli chirurgicznych, aby pole było bardziej przejrzyste. Tutaj widzimy zewnętrzną anatomię miednicy myszy. Wskazujemy teraz srom, który fałduje się wokół zewnętrznego ujścia cewki moczowej.

Tendencja do cewnikowania polega na próbie wprowadzenia cewnika do środka struktury, ale otwór cewki moczowej znajduje się na dole. Odkryliśmy, że łatwiej jest chwycić ulfę za pomocą kleszczy niż delikatnie rozwinąć strukturę na zewnątrz i do góry, aby cewka moczowa była łatwiej dostępna. Uważaj, aby nie cewnikować pochwy, która znajduje się bezpośrednio pod ujściem cewki moczowej.

Kolejnym parametrem, na który należy zwrócić uwagę, jest kąt cewnikowania. Otóż naturalną tendencją jest poruszanie się w linii prostej, równolegle do osi podłużnej zwierzęcia. Jednak bardziej stromy kąt sprawia, że wprowadzenie cewnika jest nieco łatwiejsze po jego początkowym wprowadzeniu.

Następnie możesz zmniejszyć kąt cewnikowania, aby zapobiec urazowi zwierzęcia. Tutaj Dr.Beck wchodzi pod ostrym kątem. Zauważ, że cewnik zostanie wprowadzony na dnie sromu.

Skręcenie cewnika czasami pomaga nasmarować cewkę moczową i pomóc we wprowadzaniu, a po jego początkowym wprowadzeniu kąt jest mniej stromy i możemy włożyć go bezpośrednio do pęcherza. Zwróć uwagę, ile czasu zajmuje to wprawnemu użytkownikowi. Jednak nie każde włożenie potrwa tak długo.

Oto, jak długo trwa procedura w najlepszym przypadku. Teraz, gdy jesteśmy w stanie skutecznie cewnikować mysz, wróćmy do protokołu instalacji komórek nowotworowych. Następnym krokiem jest opróżnienie pęcherza z większości moczu, a robimy to poprzez wywieranie ogólnego nacisku na obszar miednicy, w którym mocz będzie wypychany przez cewnik, a koniec cewnika służy jako obszar zbierania.

Cewnik zostanie następnie usunięty i opróżniony. Następnie przygotowujemy drut platynowy, który posłuży do przeprowadzenia prądu do pęcherza moczowego w celu wywołania urazu obciążeniowego. Zauważ, że ten platynowy drut ma haczyk na końcu, a to służy do celów pomiarowych.

Po całkowitym wprowadzeniu przez cewnik chcemy, aby po wewnętrznej stronie cewnika odsłonięto od dwóch do trzech milimetrów drutu. To właśnie ta odsłonięta część wejdzie w kontakt ze ścianą pęcherza moczowego i spowoduje oparzenie. Po cewnikowaniu myszy osobno włożymy przewód.

Cewnik jest lekko wyciągnięty, aby zapewnić dodatkową przestrzeń na wystanie drutu z końca cewnika bez przebijania pęcherza. Prąd dostarczamy za pomocą jednostki do elektrokoagulacji. Używamy jednostki do elektrokoagulacji Bovie o mocy 2,5 wata i koagulacji, a prąd dostarczamy za pomocą odczepu.

Zewnętrzna część drutu. Żel do przewodzenia prądu elektrycznego został umieszczony między myszą a płytką uziemiającą. Jest to przykład tego, ile czasu faktycznie poświęcamy na dostarczanie prądu.

To mniej niż 0,5 sekundy. Ze względu na krótki czas trwania dostarczymy drugie oparzenie. Zmieniliśmy położenie drutu w cewniku, a następnie ponownie stuknęliśmy w przewód.

Po zainstalowaniu urazu po oparzeniu, M natychmiast otrzyma komórki nowotworowe, które zostaną wykonane poprzez kolejne cewnikowanie. Z tą różnicą, że tym razem cewnik zostanie podłączony do strzykawki, która jest załadowana stu mikrolitrami zawiesiny komórkowej. Ogniwa, których będziemy tutaj używać, to ogniwa MB 49 o stężeniu 1 miliona komórek na mililitr, co daje łącznie 100 000 komórek do dostarczenia.

Wyciągamy nadmiar 100 mikrolitrów i mierzymy ilość, którą dostarczamy, przez oznaczenia z boku strzykawki. Po załadowaniu strzykawki komórkami smarujemy cewnik i ponownie cewnikujemy zwierzę. Jak widać, nie każde cewnikowanie przebiegnie tak gładko, jak w optymalnych warunkach, które pokazaliśmy wcześniej.

Należy zachować ostrożność, aby nie zranić zwierzęcia. Po pomyślnym cewnikowaniu myszy sto mikrolitrów zawiesiny komórkowej zostanie dostarczone przez strzykawkę, przez cewnik i do światła pęcherza moczowego. Całe urządzenie będzie utrzymywane na miejscu przez 90 minut, podczas których szybkość podawania fluoru zostanie zmniejszona do 1% jako dawki podtrzymującej.

Komórkom nowotworowym pozwala się przekształcić w guzy przez trzy do pięciu dni przed rozpoczęciem badań ultrasonograficznych Aby monitorować wzrost komórek nowotworowych, futro na brzuchu jest przycinane, aby poprawić kontakt między sondą ultradźwiękową a pacjentem. W tym momencie myszy zostaną cewnikowane, a sto mikrolitrów sterylnej normalnej soli fizjologicznej zostanie wkroplone do pęcherzy, aby poprawić widoczność pęcherza i wizualizację guza. Po wykonaniu ultradźwięków na brzuch nakłada się żel przewodzący ultradźwięki i stwierdziliśmy, że przetarcie go mokrą gazą pomaga zapobiec staczaniu się.

Podczas samego zabiegu ultrasonograficznego na głowicę sondy nakłada się również dużą ilość żelu przewodzącego ultradźwięki. Ultradźwięki są następnie wykonywane i monitorowane w czasie rzeczywistym. Jest to przykład danych, które można uzyskać podczas zabiegu USG.

W tym przypadku sonda znajdowała się w aspekcie podłużnym, co pozwala na wizualizację cewnika w pęcherzu moczowym. Wskazujemy teraz na tkankę nowotworową, która rozwinęła się w czasie inkubacji. Cały pęcherz moczowy jest zwykle dobrze widoczny i jest wyznaczony ostrą obwódką, jak pokazano tutaj.

Tutaj możemy zobaczyć dowody na ustanowienie modelu nowotworu.