Demonstracja zastosowań nowatorskiego spektrometru sił grawitacyjnych do rozciągania i pomiaru białek włóknistych

Układ do pomiaru siły grawitacyjnej składa się z podstawy epi, zwykłego mikroskopu świetlnego, kamery cyfrowej oraz komputera. Wykorzystujemy go do badania pojedynczych cząsteczek kwasu. Możemy rejestrować równowagę sił lub przyłożyć siłę stopniowo poprzez opuszczanie.

Na początek musimy przygotować szkiełko mikroskopowe, aby można było przeprowadzić tego typu proces. Aby odważyć około 10 mg ziaren, których będziemy używać, zazwyczaj przygotowuję 2K. Tutaj mamy pięć ml, z których użyjemy trzech triologii.

W tym miejscu pobierzemy nasz terminal Put One. Wymieszaj go dokładnie za pomocą pipety transferowej, a następnie przenieś 2 mL mieszaniny na wierzch kulek z agarozy (bead cakes). Pozostaw kulki z agarozy na 2 minuty, a następnie poddaj je dokładnemu mieszaniu w wirówce typu vortex przez 2 sekundy.

Dół zjadł mokrą dwójkę. Potrzebna jest jedna puryna w wodzie dwukrotnie destylowanej. Sprzęganie przy pH 6.

Należy po prostu dodać 5 mL buforu sprzęgającego do każdego zestawu kulek; proces ten umożliwia sprzęgnięcie kulek. Następnie dodaje się przeciwciała, ponownie wirując próbkę w vortexie przez minutę. Pozostawia się je na pięć minut, a jeśli zamrażarka pozwala na uzyskanie odpowiedniego stężenia, należy je rozcieńczyć do 5% za pomocą buforu sprzęgającego.

Następnie pobieramy dwa mililitry tego roztworu i dodajemy go, co pozwoli na sprzężenie TER z terminalami znajdującymi się już w naszym wirCzerpaku. Wykonać to dwukrotnie, rotować przez trzy. Procedura buforu sprzęgającego.

Ponownie dodaj pięć mililitrów buforu sprzęgającego do swojej kolumny z wypełnieniem. Ponownie wymieszaj, odwiruj i odessaj nadsącz. Przy czwartym razie pozostaw niewielką ilość nadsączu na górze wypełnienia, aby przeciwciało mogło swobodnie krążyć.

Oto nasze przeciwciała. Odmierz tę objętość. Przeciwciała w roztworze, np. 1 µL, rozcieńczono w wodzie dwukrotnie destylowanej, a mieszaninę rotowano przez 30 minut lub przez odpowiedni czas.

Aby zneutralizować cały niewykorzystany klej, oko w oko. Należy go odwirować, aby pozbyć się S. Następnie należy przygotować zawartość, którą stanowi protokół. Pobierz pięć mililitrów, weź kuleczki, oto kuleczki, włóż je do dołka.

Powtórz ten krok trzy razy, a następnie postąp analogicznie w przypadku każdego wykonywanego testu. Aby rozpocząć przygotowania, w pierwszej kolejności musimy pobrać białko. W tym przypadku należy udać się do zamrażarki -70 °C, gdzie przechowywane jest białko; ważne jest, aby to białko pobrać i doprowadzić do odpowiedniej temperatury.

To będzie teraz znacznie bardziej skoncentrowane niż to, czego chcemy użyć w naszym teście. Zatem zmniejszymy objętość do około piętnastu i pobierzemy to do końcówki. Jednakże musi to być dokładna objętość; po zmniejszeniu objętości do około 5 µL w przypadku dużych kulek, pobierzemy większą objętość, która w tym przykładzie z kuleczkami wyniesie 10 µL.

I w ten sposób otrzymamy odpowiednią mieszankę; dodajemy około 350 µL buforu do testu do probówki typu microcentrifuge, aby uzyskać końcowe stężenie. Teraz wykonamy to w sposób analogiczny do poprzedniego kroku; obracamy probówkę i mieszamy zawartość. Nadszedł czas na właściwe przygotowanie przepływu, w którym znajdować się będą nasze kuleczki.

Umieszczam standardne szkiełko przedmiotowe w 1%, które zostało docięte z użyciem kleju, aby kotwice mogły przytwierdzić się do powierzchni szklanego nacięcia oraz szkiełek przedmiotowych i nakrywek. Przygotowałem już krawędzie, a następnie nałożę ten cieńszy kawałek szkła na grubsze szkiełko. Komora ta będzie stosunkowo mała.

Oto niewielki obszar, który jest uszkodzony. To jeden z tych przypadków spotykanych każdego dnia. Substancja czynna sprawia, że stan się poprawia, staje się lepszy.

Tutaj przekażemy ostatnie dwie 25-letnie próbki do ewentualnej degustacji, zanim zaczniemy dodawać krakersy i ser. Pominięto słońce. Tylko nieliczni spróbowali, zaledwie kilku.

A tutaj, przy bliższym przyjrzeniu się, można faktycznie zobaczyć kuleczkę. W kwestii końcówki, zaczynam od zwykłego opukiwania obszaru kuleczki, a następnie, po wykonaniu tego, wypełniam resztę powierzchni szkiełka przedmiotowego, mniej więcej do 40, abyśmy mogli umieszczać szkiełko w różnych orientacjach i nie martwić się o to, że kuleczki mogą przemieścić się w dół. Nie potrzebujecie żadnej śruby do pobrania próbek z mojego bukietu dla niektórych moich win, tył linii i mogę zamocować szkiełko, a następnie używam dodatkowego klipsa, aby zwiększyć stabilność. Teraz możemy założyć obiektyw.

Jest to pilot zdalnego sterowania, którego używamy do pozycjonowania preparatu; wszystko zostało włączone, w tym kamera. Możemy rozpocząć monitorowanie pod kątem potencjalnych kulek, robiąc to po prostu poprzez obserwację ekranu wideo. Ten po lewej stronie ma mniejszą kulkę, która wygląda podobnie do innych mniejszych kulek znajdujących się na powierzchni pętli.

Jednakże w przypadku pary kulek, mamy kuleczkę, która znajduje się w ogniskowej powierzchni kuleczki poza obszarem LOP, co wskazuje, że kuleczka ta znajduje się w innej płaszczyźnie ogniskowania niż pozostała kuleczka na preparacie; para ta, zatem kuleczka po prawej stronie A, pokazuje, w jaki sposób pary mogą funkcjonować na preparacie. Umieszczamy preparat, przechodząc przez rotację pod różnymi kątami, co pozwala uzyskać różne długości, a następnie wykorzystujemy rotację. Widzimy wizualizację tego, jak para kulek mogłaby wyglądać przy użyciu komputera.

Znajdujemy oba. W tym przypadku obliczamy, że możemy pominąć podany pomiar, a tutaj pominięto F, a także usunięto. Dziękujemy za oglądanie.

Powodzenia z zakłóceniem. Jest czas na taniec. Poza tym, nie myśl, że ktoś nie zdobędzie mojego.

Moi znajomi są zajęci próbą zdobycia go. Wszystko zostaje w tyle za mną. Gdzie jest ta dziewczyna, z którą przyszedłem?

Ona odchodzi z moim przyjacielem. Naprawdę tak uważa. Czyż ona nie zna prawdziwego mężczyzny?

Jedź ponownie, w prawo ponownie, mechaniczny byk. Puść go. Prawo, prawo, prosto do Meksyku.

Uwielbiam to, jak idzie nam dzisiaj w tych cholernych rundach. Mechaniczny byk. Nawet nie zwalniaj.

Daj mi 5, kiedy skończysz z moją lewą ręką. Żebym mógł użyć prawej. Tak, z lewą ręką po prostu będę używać prawej.