Name: Podstawowe techniki chirurgiczne u świnki w Getyndze: intubacja, cewnikowanie pęcherza moczowego, cewnikowanie naczynia udowego i perfuzja przezsercowa (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 26 s
Description: Poznaj podstawowe techniki chirurgiczne u świnki w Getyndze: intubację, cewnikowanie pęcherza i naczyń udowych oraz perfuzję przezsercową. Te metody zwiększają bezpieczeństwo i skuteczność badań biomedycznych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Badanie było finansowane przez Fundację Lundbeck, Fundację Karen Elise Jensen, Fundusz Badań nad Zdrowiem Regionu Centralnej Danii oraz Instytut Medycyny Klinicznej Szpitala Uniwersyteckiego w Aarhus. Z wdzięcznością dziękujemy za fachową pomoc Donaldowi F. Smithowi, Andersowi Steen Soerensenowi, Henrikowi Soerensenowi, Asbjoernowi Ettrup-Christensenowi oraz personelowi Paaskehoejgaard.

1. Intubacja
<ol>
	<li>Wyposażenie niezbędne do intubacji endotrachealnej: zestaw do wentylacji wspomaganej, rozwieracze do otwierania pyska, ssak niskociśnieniowy z tępą końcówką, laryngoskop weterynaryjny z prostym ostrzem o długości od 17 do 25 cm, prowadnik (stylet), strzykawka z powietrzem, stetoskop i taśma klejąca. Dla dorosłych minipigów rasy Göttingen odpowiednia jest rurka endotrachealna o rozmiarze od 5 do 7 mm10. W niniejszym filmie zastosowano rurkę 5,5 mm 10.</li>
	<li>Minipiga kładzie się na plecach i odpowiednio stabilizuje, aby zapewnić zachowanie linii prostej przejścia krtaniowego.</li>
	<li>Język jest lekko wysuwany, a żuchwa utrzymywana w otwartej pozycji przez asystenta, bez nadmiernego wyprostu głowy. Rotacja dróg oddechowych lub nadmierne wyprosty głowy mogą doprowadzić do niedrożności dróg oddechowych, co utrudnia identyfikację wejścia do krtani i komplikuje wprowadzenie rurki do tchawicy.</li>
	<li>Laryngoskop wprowadza się do jamie gardłowej i używa do odepchnięcia języka, aby odsłonić nagłośnię. Końcówkę ssaka wykorzystuje się do odsunięcia nagłośnika od podniebienia miękkiego. Następnie za pomocą końcówki laryngoskopu uciska się nagłośnię w górę, w kierunku nasady języka, odsłaniając wejście do krtani.</li>
	<li>W polu widzenia pojawiają się chrząstki przynadgłośniowe i struny głosowe, a rurkę endotrachealną wprowadza się delikatnie, z lekkim obrotem, do tchawicy podczas wydechu.</li>
	<li>Manżet rurki nadmuchuje się zgodnie ze specyfikacją producenta, dbając o to, aby uniknąć nadmiernego napompowania, które może spowodować obrzęk i wysięki w drogach oddechowych. Świnie posiadają oskrzele wentylujące prawy płat kranialny płuca. Dlatego ważne jest umieszczenie rurki powyżej rozwidlenia tchawicy. Ułatwia to zastosowanie odpowiedniego rozmiaru rurki oraz, co istotne, przymocowanie proksymalnego końca rurki na poziomie ryjka za pomocą taśmy klejącej.</li>
	<li>Po prawidłowej intubacji minipiga należy wyczuć swobodny przepływ powietrza przez rurkę, a osłuchiwanie klatki piersiowej powinno wykazać dźwięki oddechowe po obu stronach klatki piersiowej.</li>
	<li>Po podłączeniu respiratora z systemem monitorowania do minipiga powinny być mierzalne fizjologiczne wartości wydychanego dwutlenku węgla i powinna być widoczna krzywa dwutlenku węgla, która odpowiada wzorowi oddychania określonemu przez ustawienia respiratora6,10.</li>
	<li>Wartości dwutlenku węgla i oksymetrii mogą być początkowo zaburzone przez premedykację i indukcję znieczulenia. Wartości te powinny jednak szybko wrócić do normy przy prawidłowej wentylacji6,10. Jakikolwiek objaw sinicy mimo wentylacji wspomaganej wskazuje na nieprawidłowe umieszczenie rurki. Najczęstszym błędem jest przypadkowe wprowadzenie rurki do przełyku.</li>
</ol>
2. Cewnikowanie pęcherza przezcewkowe
<ol>
	<li>Niniejsza procedura dotyczy wyłącznie loch. W przypadku dorosłych minipigów odpowiedni jest cewnik Foleya o rozmiarze French 8 lub 10. Ze względu na krzywiznę i rozmiar zewnętrznego ujścia cewki moczowej preferowany jest cewnik ze zgłębnikiem. U małych minipigów można zastosować rozwierak nosowy, natomiast u dużych zwierząt użyteczny może być rozwierak z dłuższymi ramionami. Niezbędny sprzęt obejmuje również kleszczyki tępym końcem, strzykawkę z solą fizjologiczną, lubrykant oraz zamknięty system worka do drenażu moczu.</li>
	<li>Aby zapewnić najlepszą wizualizację zewnętrznego ujścia cewki moczowej podczas cewnikowania, minipiga kładzie się na plecach z podparciem w odcinku lędźwiowym, podczas gdy asystent odciąga tylne kończyny w kierunku głowowym.</li>
	<li>Smarowany lubrykantem rozwierak zostaje wprowadzony i otwarty w celu wizualizacji ściany pochwy. Zewnętrzne ujście cewki moczowej u samicy znajduje się w podłodze pochwy, w odległości około jednej trzeciej do połowy drogi do szyjki macicy (Rys. 1A). Jednak ze względu na ułożenie zwierzęcia na plecach, pozycja ujścia cewki moczowej będzie wydawać się odwrócona.</li>
	<li>Cewnik jest prowadzony za pomocą kleszczyków tępym końcem, tak aby czubek cewnika stanowił przedłużenie kleszczyków. Ostrożnie wprowadź cewnik do ujścia cewki moczowej (Rys. 1B). Cewka moczowa jest podatna na urazy, jeśli podczas cewnikowania zostanie użyta zbyt duża siła. Początkowo może być jednak odczuwalny lekki opór, dopóki cewnik nie przejdzie przez zewnętrzny zwieracz cewki moczowej. Jeśli problem ten będzie się utrzymywał, może to wskazywać na niewystarczające sedowanie zwierzęcia. Rozwiązaniem jest odczekanie chwili, aż znieczulenie zacznie działać.</li>
	<li>Gdy cewnik dotrze do pęcherza, należy usunąć zgłębnik, co spowoduje wypłynięcie moczu.</li>
	<li>Należy napełnić balonik solą fizjologiczną zgodnie ze specyfikacją producenta i delikatnie wyciągnąć cewnik, aż balonik zablokuje się na szyjce pęcherza.</li>
	<li>Podłącz zamknięty system worka do drenażu moczu.</li>
	<li>Przyklej cewnik taśmą do ogona, aby uniknąć przypadkowego przemieszczenia cewnika podczas manipulacji ze zwierzęciem.</li>
</ol>
3. Kanulacja tętnicy i żyły udowej
<ol>
	<li>Niezbędny sprzęt obejmuje: skalpel, tępe nożyczki chirurgiczne, pęsetę anatomiczną, małą tępą pęsetę chirurgiczną, mały samoutrzymujący się rozwieracz tkanek, igłotrzymacz, tampony chirurgiczne, nici z igłą, sól fizjologiczną z heparyną jako płyn do przepłukiwania w celu utrzymania drożności cewnika, dwie kaniule do żył obwodowych 18-gauge oraz dwie osłonki 4-French z wprowadnikiem i prowadnikiem Seldingera.</li>
	<li>Przed rozpoczęciem procedury należy ocenić głębokość znieczulenia, sprawdzając odruch bólowy przestrzeni międzycyfrowych.</li>
	<li>Dostęp do tętnicy i żyły udowej wykonuje się u minipig ułożonego na plecach, z tylną kończyną odciągniętą bocznie. W fałdzie skóry między mięśniem smukłym a mięśniem krawieckim należy zidentyfikować miejsce, w którym zanika pulsacja powierzchownej części tętnicy odpiszczelowej przyśrodkowej.</li>
	<li>W miejscu tym należy wykonać podłużne, powierzchowne nacięcie skóry w kierunku kranialnym, aby uniknąć przypadkowego uszkodzenia naczyń tętnicy odpiszczelowej przyśrodkowej.</li>
	<li>Używając tępych nożyczek, należy rozdzielić leżącą poniżej tkankę podskórną.</li>
	<li>Powięź mięśnia krawieckiego i smukłego rozcina się w kierunku kranialnym od miejsca penetracji naczyń tętnicy odpiszczelowej przyśrodkowej, najpierw za pomocą małej tępej pęsety chirurgicznej, a następnie palcem.</li>
	<li>Dwie grupy mięśni rozsuwa się za pomocą małego samoutrzymującego się rozwieracza tkanek, dbając o to, aby nie uszkodzić nerwu udowego i naczyń.</li>
	<li>Tętnicę izoluje się na długości około 1 do 2 cm za pomocą rozdzielania tępego.</li>
	<li>Należy obrócić ściętą igłę kaniuli tak, aby światło było skierowane ku górze. Igłę należy lekko wygiąć, aby łatwiej dopasowała się do krzywizny naczynia. Należy upewnić się, że igła nadal może swobodnie przesuwać się w przód i w tył.</li>
	<li>Następuje nakłucie tętnicy, wycofanie igły i wprowadzenie prowadnika Seldingera przez rurkę kaniuli.</li>
	<li>Rurkę kaniuli usuwa się, delikatnie uciskając tętnicę, aby zapewnić stabilizację prowadnika.</li>
	<li>Osłonkę z wprowadnikiem wprowadza się po prowadniku Seldingera i posuwa do pożądanej pozycji, po czym usuwa się wprowadnik i prowadnik Seldingera.</li>
	<li>Żyła udowa znajduje się tuż poniżej i przyśrodkowo od tętnicy. Po wyizolowaniu żyły metodą rozdzielania tępego, przeprowadza się kaniulację żyły w sposób opisany wcześniej dla tętnicy.</li>
	<li>Aby zweryfikować poprawność kaniulacji tętnicy i żyły, należy pobrać krew z obu osłonek i porównać kolor próbek. Przy każdym pobieraniu krwi należy pamiętać o następującym przepłukaniu cewników solą fizjologiczną z heparyną w celu utrzymania ich drożności.</li>
	<li>Cewniki zostają zabezpieczone, a skórę zamyka się kilkoma szwami.</li>
	<li>W celu unieruchomienia naczyń przed nakłuciem wokół tętnicy i żyły można umieścić pętlę naczyniową. Pomimo zalet, zazwyczaj unikamy tego dodatkowego kroku, ponieważ wymaga on nadmiernego rozdzielania naczyń i może zwiększyć ryzyko uszkodzenia gałęzi bocznych i głębokich.</li>
</ol>
4. Perfuzja transkardialna
<ol>
	<li>Do procedury niezbędny jest następujący sprzęt: system perfuzyjny (Rys. 2), odpowiednie płyny perfuzyjne, skalpel, chirurgiczne nożyczki z tępym końcem, kleszcze do kości oraz dwie duże kleszczyki samozaciskowe, z czego co najmniej jeden musi mieć zakrzywioną końcówkę. Samozaciskowy rozwierak mostka nie jest absolutnie niezbędny, ale znacznie ułatwia procedurę. </li>
	<li>Perfuzję transkardialną należy przeprowadzić w dobrze wentylowanym pomieszczeniu z wydajnym systemem odciągu oparów oraz zapleczem umożliwiającym zbieranie płynów perfuzyjnych i krwi w celu ich późniejszej bezpiecznej utylizacji.</li>
	<li>Po dożylnym wstrzyknięciu śmiertelnej dawki pentobarbitalu, przed kontynuacją należy sprawdzić odruch bólowy między palcami. </li>
	<li>Najlepszy dostęp do serca i aorty zapewnia medianowa sternotomia. Wykonaj głębokie podłużne nacięcie skóry, rozciągając je od manubrium do wyrostka xifoidego mostka. Uzyskaj dostęp do jamy klatki piersiowej, wykonując niewielkie nacięcie w przeponie tuż poniżej wyrostka xifoidego.</li>
	<li>Wprowadź kleszcze do kości do jamy klatki piersiowej i przetnij mostek na pół. Podczas wykonywania tej procedury należy zachować ostrożność, ponieważ serce może być w niektórych miejscach przylegać do wewnętrznej strony mostka. Dlatego należy upewnić się, że ostrze kleszczy do kości spoczywa przez cały czas wewnątrz jamy klatki piersiowej, opierając się o wewnętrzną ścianę mostka. </li>
	<li>Po rozdzieleniu mostka wprowadź samozaciskowy rozwierak mostka i otwórz jamę klatki piersiowej. </li>
	<li>Jeśli jest nienaruszone, wykonaj niewielkie nacięcie w osierdziu w okolicy wierzchołka serca, a następnie palcami otwórz worek osierdziowy. </li>
	<li>Zidentyfikuj lewą komorę, prawy przedsionek oraz aortę wraz z żyłą główną górną (Rys. 1C)</li>
	<li>Wykonaj niewielkie, powierzchowne nacięcie w pobliżu wierzchołka serca i uzyskaj dostęp do lewej komory, perforując mięsień sercowy instrumentem z tępym końcem. </li>
	<li>Wprowadź kaniulę perfuzyjną do lewej komory i przesuń końcówkę kaniuli w kierunku kranialnym do aorty. </li>
	<li>Gdy kaniula zostanie wyczuta palcami w aorcie, przymocuj ją w tym miejscu za pomocą zakrzywionych kleszczyków samozaciskowych. </li>
	<li>Wykonaj nacięcie w prawym przedsionku i rozpocznij wstrzykiwanie utrwalacza przez kaniulę perfuzyjną. Przepływ perfuzatu w aorcie można wyczuć, a krew będzie wypływać przez nacięty prawy przedsionek w miarę kontynuowania przepływu perfuzatu do naczyń minipig. Zauważ, że perfuzja systemowa paraformaldehydem indukuje hyperekstensję kończyn i drgania powierzchownej muskulatury z powodu sieciowania nerwów i mięśni przez aldehyd. W przypadku używania systemu perfuzyjnego zasilanego sprężonym powietrzem zamiast grawitacji, należy pamiętać o usunięciu kaniuli lub zacisnięciu przezroczystej rurki silikonowej przed opróżnieniem pojemnika, aby zapobiec przedostaniu się powietrza do układu naczyniowego.</li>
</ol>
<img src="/files/ftp_upload/2652/2652fig1.jpg" alt="Schemat sekcji ludzkiego serca z zaznaczonymi jamami serca i naczyniami, podkreślający badanie anatomiczne." data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Rycina 1"> Rycina 1. A: Zewnętrzny otwór cewki moczowej samicy miniorślep Göttingen. B: Otwór cewki moczowej po wprowadzeniu cewnika. C: Widok brzuszny serca miniorślep po medianowej sternotomii.
<img src="/files/ftp_upload/2652/2652fig2.jpg" alt="Schemat układu do perfuzji organu; przedstawiono przewody ciśnieniowe, zawór, pojemnik z perfuzatem i kaniulę." data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Rysunek 2"> Rysunek 2. A: Układ perfuzyjny składa się z przewodu wlotowego z regulowanym zaworem ciśnienia oraz dźwigni służącej do kontrolowania dopływu sprężonego powietrza do pojemnika z perfuzatem. Przezroczysty przewód silikonowy łączy pojemnik z kaniulą o tępym zakończeniu, wykonaną ze stalowej rurki o średnicy 4 mm. B i C: Poprzez naciśnięcie dźwigni wlotowej wzrasta ciśnienie w pojemniku, a perfuzat jest wypychany przez kaniulę. D: Po napełnieniu przezroczystego przewodu silikonowego i kaniuli perfuzatem, przepływ zostaje zatrzymany za pomocą zacisku, a układ jest gotowy do użycia.

<ol><li>Lind, N. M., Moustgaard, A., Jelsing, J., Vajta, G., Cumming, P., Hansen, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+pigs+in+neuroscience%3A+modeling+brain+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Biobehav+Rev%22%5BJournal%5D)">The use of pigs in neuroscience: modeling brain disorders.</a> Neurosci Biobehav Rev. 31, 728-751 (2007).</li>
<li>Ettrup, K. S., Sorensen, J. C., Bjarkam, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+anatomy+of+the+Gottingen+minipig+hypothalamus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Chem+Neuroanat%22%5BJournal%5D)">The anatomy of the Gottingen minipig hypothalamus.</a> J Chem Neuroanat. 39, 151-165 (2010).</li>
<li>Larsen, M. O., Rolin, B., Sturis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurements+of+insulin+responses+as+predictive+markers+of+pancreatic+beta-cell+mass+in+normal+and+beta-cell-reduced+lean+and+obese+Gottingen+minipigs+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Measurements of insulin responses as predictive markers of pancreatic beta-cell mass in normal and beta-cell-reduced lean and obese Gottingen minipigs in vivo.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 290, 670-677 (2006).</li>
<li>Forster, R., Ancian, P., Fredholm, M., Simianer, H., Whitelaw, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+minipig+as+a+platform+for+new+technologies+in+toxicology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Toxicol+Methods%22%5BJournal%5D)">The minipig as a platform for new technologies in toxicology.</a> J Pharmacol Toxicol Methods. , (2010).</li>
<li>Popov, A. F., Dorge, H., Hinz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+intimal+hyperplasia+in+aortocoronary+internal+mammary+vein+grafts+in+minipigs%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cardiothorac+Surg%22%5BJournal%5D)">Accelerated intimal hyperplasia in aortocoronary internal mammary vein grafts in minipigs.</a> J Cardiothorac Surg. 3, 20-20 (2008).</li>
<li>Swindle, M. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSwindle%2C+MM+%22Swine+in+the+Laboratory%3A+Surgery%2C+Anesthesia%2C+Imaging%2C+and+Experimental+Techniques%22">Swine in the Laboratory: Surgery, Anesthesia, Imaging, and Experimental Techniques</a>. , Second ed., CRC Press. (2007).</li>
<li>Bjarkam, C. R., Cancian, G., Glud, A. N., Ettrup, K. S., Jorgensen, R. L., Sorensen, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MRI-guided+stereotaxic+targeting+in+pigs+based+on+a+stereotaxic+localizer+box+fitted+with+an+isocentric+frame+and+use+of+SurgiPlan+computer-planning+software%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">MRI-guided stereotaxic targeting in pigs based on a stereotaxic localizer box fitted with an isocentric frame and use of SurgiPlan computer-planning software.</a> J Neurosci Methods. 183, 119-126 (2009).</li>
<li>Val-Laillet, D., Blat, S., Louveau, I., Malbert, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+computed+tomography+scan+application+to+evaluate+adiposity+in+a+minipig+model+of+human+obesity%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Nutr%22%5BJournal%5D)">A computed tomography scan application to evaluate adiposity in a minipig model of human obesity.</a> Br J Nutr. , 1-10 (2010).</li>
<li>Larsen, M., Bjarkam, C. R., Stoltenberg, M., Sorensen, J. C., Danscher, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+autometallographic+technique+for+myelin+staining+in+formaldehyde-fixed+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Histol+Histopathol%22%5BJournal%5D)">An autometallographic technique for myelin staining in formaldehyde-fixed tissue.</a> Histol Histopathol. 18, 1125-1130 (2003).</li>
<li>Alstrup, A. K. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anaesthesia+and+Analgesia+in+Ellegaard+G%C3%B6ttingen+minipigs%5BTitle%5D)+AND+%22Jannerup.DK%22%5BJournal%5D)">Anaesthesia and Analgesia in Ellegaard Göttingen minipigs.</a> Jannerup.DK. , (2010).</li>
<li>Jensen, K. N., Deding, D., Sorensen, J. C., Bjarkam, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+implantation+of+deep+brain+stimulation+electrodes+in+the+pontine+micturition+centre+of+the+Gottingen+minipig%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neurochir+%28Wien%29%22%5BJournal%5D)">Long-term implantation of deep brain stimulation electrodes in the pontine micturition centre of the Gottingen minipig.</a> Acta Neurochir (Wien). 151, 785-794 (2009).</li>
<li>Cumming, P., Moller, M., Benda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+PET+study+of+effects+of+chronic+3%2C4-methylenedioxymethamphetamine+%28MDMA%2C+%22ecstasy%22%29+on+serotonin+markers+in+Gottingen+minipig+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Synapse%22%5BJournal%5D)">A PET study of effects of chronic 3,4-methylenedioxymethamphetamine (MDMA, "ecstasy") on serotonin markers in Gottingen minipig brain.</a> Synapse. 61, 478-487 (2007).</li>
<li>Olsen, A. K., Keiding, S., Munk, O. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+hypercapnia+on+cerebral+blood+flow+and+blood+volume+in+pigs+studied+by+positron+emission+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Med%22%5BJournal%5D)">Effect of hypercapnia on cerebral blood flow and blood volume in pigs studied by positron emission tomography.</a> Comp Med. 56, 416-420 (2006).</li>
<li>Jonkers, B. W., Sterk, J. C., Wouterlood, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcardial+perfusion+fixation+of+the+CNS+by+means+of+a+compressed-air-driven+device%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Transcardial perfusion fixation of the CNS by means of a compressed-air-driven device.</a> J Neurosci Methods. 12, 141-149 (1984).</li>
</ol>

Wszystkie procedury zostały zatwierdzone przez duński Inspektorat Zwierząt Doświadczalnych (Danish Experimental Animal Inspectorate) przy Ministerstwie Sprawiedliwości Danii i przeprowadzono je zgodnie z „Zasadami opieki nad zwierzętami laboratoryjnymi” (publikacja NIH nr 86-23, wersja z 1985 r.).

Niniejsza prezentacja zawiera szczegółowe instrukcje wizualne krok po kroku dotyczące przeprowadzania czterech powszechnie stosowanych procedur w badaniach na miniprosiętach12,13. Opisane techniki mogą być stosowane z niewielkimi modyfikacjami lub bez nich u świń rasowych oraz u innych dużych zwierząt laboratoryjnych, takich jak psy i owce14. Podczas wykonywania opisanych procedur w badaniach na zwierzętach przeżywalniczych należy stosować technikę aseptyczną, aby uniknąć infekcji.
Indukcja znieczulenia jest istotna ze względu na dobrostan zwierząt oraz powody naukowe i powinna zapewnić brak odruchów rogówków oraz dobre rozluźnienie mięśni przed próbą intubacji endotrachealnej. Ponieważ jednak środki anestetyczne stosowane do indukcji nie są podawane w stałych dawkach, lecz aż do uzyskania pożądanego efektu, konieczne jest ścisłe monitorowanie zwierzęcia ze względu na ryzyko bezdechu, szczególnie w przypadku stosowania propofolu6,10. Przy intubacji tchawicy zastosowanie sprayu z ksylokainą lub leku rozluźniającego mięśnie może ułatwić wprowadzenie rurki, jednak blokery nerwowo-mięśniowe powinny być podawane wyłącznie przez personel przeszkolony w takich procedurach, aby zachować wymagania etyczne. Należy zachować ostrożność, aby nie urazić przejścia krtani podczas intubacji, co pozwoli uniknąć obrzęku tchawicy. Obrzęk dróg oddechowych można leczyć za pomocą NLPZ lub podobnych leków przeciwzapalnych10. Świnie można intubować w różnych pozycjach, jednak ułożenie zwierzęcia na plecach jest zazwyczaj łatwiejsze dla osób regularnie wykonujących intubację u ludzi, ponieważ drogi oddechowe są wówczas prezentowane w podobny sposób6. Najczęstszym błędem podczas intubacji jest przypadkowe wprowadzenie rurki do przełyku, który znajduje się bezpośrednio pod przejściem krtani, gdy zwierzę leży na plecach. Należy pamiętać, że rurki nie wolno wprowadzać bez uprzedniej wyraźnej identyfikacji chrząstek przynadgardzinnych i strun głosowych.
Cewnikowanie pęcherza moczowego przez cewkę moczową jest łatwe do przeprowadzenia u loch, natomiast procedura ta jest niezwykle trudna, a być może nawet niemożliwa, u samców6. Należy zwrócić uwagę, że ponieważ ujście cewki moczowej u samicy znajduje się przed pochwą, większy otwór pochwy może zostać błędnie ocewnikowany. W badaniach przeżywalności zaleca się stosowanie sterylnego i dezynfekującego środka nawilżającego. Ponadto środek nawilżający z działaniem znieczulającym miejscowo może ułatwić procedurę cewnikowania.
Podczas cewnikowania tętnicy i żyły udowej wybór cewników naczyniowych oraz sposób ich mocowania różnią się w zależności od tego, czy prowadzone są badania z przeżyciem, czy bez przeżycia, zwłaszcza gdy cewniki są implantowane na dłuższy czas6. Przykładowo, cewniki do implantacji przewlekłej powinny być wysoko biokompatybilne, posiadać kuleczki lub mankiety retencyjne służące do stabilizacji oraz nie mogą z czasem urazzać ściany naczynia, co zapobiega indukowaniu zakrzepicy lub erozji6.
W niniejszym filmie wykorzystujemy zamknięty system zasilany sprężonym powietrzem do perfuzji transkardialnej. Inną opcją jest zastosowanie systemu napędzanego grawitacyjnie. Przewagą systemów grawitacyjnych w porównaniu do systemów wykorzystujących sprężone powietrze jest ich prostota, wydajność oraz brak ryzyka przedostania się sprężonego powietrza do układu naczyniowego. Jednakże ciśnienie hydrostatyczne generowane przez systemy grawitacyjne zmienia się stale podczas perfuzji, co może wpływać na wyniki histologiczne15. W zależności od rodzaju planowanych badań histopatologicznych, korzystne może być uprzednie przeprowadzenie perfuzji zwierzęcia roztworem soli fizjologicznej z dodatkiem heparyny. Ma to szczególne znaczenie przy wykonywaniu barwienia immunofluorescencyjnego, aby uniknąć problemów z autofluorescencją wywoływaną przez erytrocyty. Ponadto, jeśli analizowanym organem jest mózg, można zacisnąć zstępującą aortę w celu oszczędności utrwalacza. Jednak w przypadku świń krok ten wiąże się z dodatkową dyssekcją i wydłuża procedurę.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Intubacja</td></tr><tr><td>Respirator</td><td>GE Healthcare</td><td>1009-9002-000</td><td></td></tr><tr><td>Odsysanie końcówką tępą</td><td>Unomedical</td><td>34091181</td><td></td></tr><tr><td>Laryngoskop</td><td>Miller</td><td>85-0045 (Zestaw laryngoskopowy)</td><td></td></tr><tr><td>Rurka endotrachealna o średnicy wewnętrznej 5,5 mm</td><td>Smiths Medical</td><td>100/199/055</td><td></td></tr><tr><td>Kaniula prowadząca</td><td>Hudson RCI</td><td>5-151001</td><td></td></tr><tr><td>Strzykawka 5 ml</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stetoskop</td><td>Martin</td><td>17-262-00</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Cewnikowanie pęcherza moczowego</td></tr><tr><td>Cewnik Foleya AquaFlate z gliceryny i silikonu, 8-French z prowadnikiem</td><td>R&amp;#252;sch</td><td>178003</td><td></td></tr><tr><td>Wziernik nosowy</td><td>Martin</td><td>36-859-50</td><td></td></tr><tr><td>Spekulum odbytnicze</td><td>Martin</td><td>30-613-15</td><td></td></tr><tr><td>Pinceta z tępymi końcówkami</td><td>Martin</td><td>13-374-16</td><td></td></tr><tr><td>Żel poślizgowy do cewników</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cathejell z lidokainą</td><td>Montavit</td><td>CJL08501</td><td></td></tr><tr><td>Instillagel Comb.</td><td>Falcon BD</td><td>08-40-200</td><td></td></tr><tr><td>Worek do drenażu moczu A4</td><td>Unomedical</td><td>38 155 1S</td><td></td></tr><tr><td>Taśma klejąca</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Kaniulacja tętnicy i żyły udowej &lt;!--&lt;/td--&gt;</td></tr><tr><td>Skalpel</td><td>Martin</td><td>10-295-11</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki chirurgiczne z tępymi końcami</td><td>Martin</td><td>11-881-18</td><td></td></tr><tr><td>Pinceta chirurgiczna</td><td>Martin</td><td>12-100-14</td><td></td></tr><tr><td>Małe chirurgiczne pęsety z tępym końcem</td><td>Martin</td><td>13-375-13</td><td></td></tr><tr><td>Mały rozwieracz tkanek samopodtrzymujący się</td><td>Martin</td><td>15-753-13</td><td></td></tr><tr><td>Igłotrzymacz</td><td>Martin</td><td>20-634-14</td><td></td></tr><tr><td>Wymazy chirurgiczne</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Szycie z igłą</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sól fizjologiczna</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heparyna</td><td>Leo Laboratories</td><td>585679</td><td></td></tr><tr><td>kaniula do infuzji typu Venflon 18G</td><td>BD Biosciences</td><td>393206</td><td></td></tr><tr><td>Osłonki do końcówek typu brite o rozmiarze 4 French z wprowadzaczem i drutem prowadzącym Seldingera</td><td>Cordis</td><td>154-2629-1/0017</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Perfuzja transkardiakalna</td></tr><tr><td>System perfuzji ciśnieniowej</td><td>Własnej produkcji</td><td></td><td></td></tr><tr><td>System odciągu oparów</td><td>Gram A/S</td><td>01750000 oraz 0303700</td><td></td></tr><tr><td>Perfusat 5 L</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki chirurgiczne z tępymi końcami</td><td>Martin</td><td>11-881-18</td><td></td></tr><tr><td>Kleszcze do kości</td><td>F.S.T.</td><td>16150-24</td><td></td></tr><tr><td>Kleszczyki samopodtrzymujące z dużym zakrzywionym końcem</td><td>Martin</td><td>13-421-18</td><td></td></tr><tr><td>Samopodtrzymujący się retraktor mostka</td><td>Rudolf Medical</td><td>7520-10</td><td></td></tr><tr><td>Pentobarbital</td><td>Królewski Uniwersytet Weterynaryjny i Rolniczy (KVL)</td><td>200 mg/ml</td><td></td></tr><tr><td>wenflon 22G</td><td>BD Biosciences</td><td>393202</td><td></td></tr></tbody></table>

podstawowe techniki chirurgiczne u miniorśca göttingenskiego: intubacja, cewzowanie pęcherza moczowego, kaniulacja naczyń udowych oraz perfuzja transkardialna

Basic Surgical Techniques in the G&ouml;ttingen Minipig: Intubation, Bladder Catheterization, Femoral Vessel Catheterization, and Transcardial Perfusion

Wykorzystanie minipig z Göttingen w badaniach nad takimi zagadnieniami jak neuronauka, toksykologia, cukrzyca, otyłość oraz chirurgia eksperymentalna wynika z dużego podobieństwa tych zwierząt do ludzkiej anatomii i fizjologii 1-6. Wielkość minipiga z Göttingen umożliwia stosowanie sprzętu chirurgicznego i zaawansowanych metod obrazowania podobnych do tych używanych u ludzi 6-8. Celem niniejszego filmu instruktażowego jest zwiększenie świadomości na temat wartości minipigów w badaniach biomedycznych poprzez zademonstrowanie sposobu wykonywania intubacji tchawicy, cewnikowania pęcherza przezcewkowej, cewnikowania tętnicy i żyły udowej, a także perfuzji transkardialnej.
Intubację endotrachealną należy przeprowadzić podczas każdej znieczulenia ogólnego minipigów, ponieważ zapewnia ona drożność dróg oddechowych, umożliwia wentylację wspomaganą i chroni drogi oddechowe przed aspiratami. Cewnikowanie pęcherza przez cewkę moczową może dostarczyć cennych informacji o stanie nawodnienia, a także o funkcji nerek i układu sercowo-naczyniowego podczas długotrwałych zabiegów chirurgicznych. Ponadto cewnikowanie pęcherza może zapobiec zanieczyszczeniu delikatnego sprzętu medyczno-technicznego oraz bolesnemu rozciągnięciu pęcherza, co mogłoby zaszkodzić zwierzęciu i niepotrzebnie wpłynąć na przebieg eksperymentu z powodu zwiększonego napięcia nerwu błędnego i zmienionych parametrów fizjologicznych. Kaniulacja tętnicza i żylna jest przydatna do pobierania wielokrotnych próbek krwi i monitorowania różnych parametrów fizjologicznych. W przypadku eksperymentów obejmujących neurochirurgię stereotaktyczną w ramie oraz obrazowanie mózgu, preferowana jest kaniulacja naczyń udowych ze względu na łatwiejszy dostęp niż w przypadku naczyń szyjnych. Podczas kaniulacji naczyń w badaniach przeżywalności należy stosować ścisłą technikę aseptyczną, aby uniknąć infekcji6. Perfuzja transkardialna jest najskuteczniejszą metodą utrwalania i daje najlepsze wyniki przy przygotowywaniu organów minipigów do badań histologicznych i histochemicznych2,9. Po więcej informacji na temat znieczulenia, chirurgii i technik eksperymentalnych u świń w ogóle odsyłamy do publikacji Swindle 2007. Uzupełniające informacje dotyczące premedykacji i indukcji znieczulenia, wentylacji wspomaganej, analgesji oraz opieki przed- i pooperacyjnej nad minipigami rasy Göttingen są dostępne w internecie pod adresem <a href="http://www.minipigs.com">http://www.minipigs.com</a>10. W celu uzyskania szczegółowych informacji na temat anatomii świń odsyłamy do Nickel et al. Vol. 1-511.

Wykorzystanie świń domowych i miniaturowych w nauce znacząco wzrosło w ostatnich latach. Poprzez zaprezentowanie sposobu przeprowadzania intubacji, cewnikowania pęcherza przezcewkowej, cewnikowania tętnicy i żyły udowej, a także perfuzji przezsercowej, dążymy do dalszego zwiększenia wartości miniswiń rasy Göttingen w badaniach biomedycznych.

Podstawowe techniki chirurgiczne u miniorśca göttingenskiego: intubacja, cewzowanie pęcherza moczowego, kaniulacja naczyń udowych oraz perfuzja transkardialna

Wprowadzenie świń miniaturowych rasy Göttingen do badań nad takimi zagadnieniami jak neuronauka, toksykologia, cukrzyca, otyłość oraz chirurgia eksperymentalna odzwierciedla ...

Intubację endotrachealną należy przeprowadzić podczas każdej narkozy ogólnej mini świni w celu ułatwienia zabiegu chirurgicznego, ponieważ zapewnia ona drożność dróg oddechowych, umożliwia wentylację wspomaganą oraz chroni drogi oddechowe przed aspiracją. Mini świnie mogą być intubowane w różnych pozycjach, jednak ułożenie zwierzęcia na plecach jest zazwyczaj łatwiejsze dla osób regularnie wykonujących intubację u ludzi, ponieważ drogi oddechowe są prezentowane w podobny sposób, podobnie jak w przypadku metod wentylacji wspomaganej. Sprzęt niezbędny do intubacji endotrachealnej to: troki do otwierania pyska, odsysacz niskociśnieniowy z tępą końcówką, laryngoskop weterynaryjny z prostym ostrzem o długości od 17 do 25 cm, strzykawka z powietrzem, stetoskop oraz taśma klejąca.Dla dorosłych świń rasy Gutting oraz mini pig. Odpowiednia jest rurka endotrachealna o rozmiarze od 5 do 7 mm. W tym filmie użyto rurki o rozmiarze 5,5 mm.Mini piggy zostaje ułożone na plecach i odpowiednio podparte. Aby zapewnić prosty przebieg drogi krtaniowej, język jest lekko wysunięty, a żuchwa utrzymywana w pozycji otwartej przez asystenta. Należy unikać nadmiernego obrotu głowy, ponieważ zbyt duże wyprostowanie dróg oddechowych może doprowadzić do ich niedrożności, co utrudnia zlokalizowanie otworu krtani.Laryngoskop służy do odgięcia języka, a końcówka ssaka do odsunięcia nadgłośni od podniebienia miękkiego. Następnie końcówką laryngoskopu uciska się nadgłośnię ku górze, w stronę nasady języka, odsłaniając otwór krtani. Po rozwarciu chrząstek pierściennych widoczne stają się więzadła głosowe, a rurka endotrachealna zostaje delikatnie wprowadzona do tchawicy przy lekkim obrocie.Podczas wydechu mankiet rurki zostaje napompowany zgodnie ze specyfikacją producenta. Należy uważać, aby uniknąć nadmiernego napompowania, które może spowodować obrzęk i wysięk w drogach oddechowych; świnie posiadają oskrzela umożliwiające wentylację prawego górnego płata płuca. Dlatego ważne jest umieszczenie rurki powyżej rozwidlenia tchawicy.Ułatwia to zastosowanie rurki o odpowiedniej średnicy oraz przymocowanie jej proksymalnego końca na wysokości ryja za pomocą taśmy klejącej. Po prawidłowym wprowadzeniu rurki intubacyjnej u mini pigi należy wyczuć swobodny przepływ powietrza przez rurkę, a osłuchiwanie klatki piersiowej powinno wykazać odgłosy oddechowe po obu stronach klatki piersiowej. Po podłączeniu respiratora z systemem monitorowania do zwierzęcia, możliwe powinno być zmierzenie fizjologicznych wartości wydychanego dwutlenku węgla oraz zaobserwowanie krzywej dwutlenku węgla zgodnej z rytmem oddychania ustalonym przez ustawienia respiratora.Intubacja endotrachealna minipigów może być trudna ze względu na wąskie przejście krtaniowe oraz łatwą urazowość błony śluzowej strun głosowych. Jeśli użyta rurka jest zbyt duża lub zastosowano zbyt dużą siłę, wprowadzenie rurki może ułatwić zastosowanie sprayu z ksylokainą lub leku rozluźniającego mięśnie. Jednakże stosowanie blokerów nerwowo-mięśniowych powinno być przeprowadzane wyłącznie przez personel dobrze przeszkolony w takich procedurach.Cewnikowanie pęcherza moczowego może być stosowane jako metoda monitorowania produkcji moczu, co może dostarczyć przydatnych informacji o stopniu nawodnienia organizmu, a także o funkcji nerek i układu sercowo-naczyniowego podczas długich zabiegów chirurgicznych. Cewnikowanie pęcherza moczowego przez cewkę moczową jest łatwo wykonywalne u loch. Choć procedura ta jest niezwykle trudna, a być może nawet niemożliwa u dorosłych samców mini pig, odpowiedni będzie cewnik Foleya w rozmiarze French 8 lub 10, ze względu na krzywiznę i rozmiar zewnętrznej cewki moczowej.Zaleca się wprowadzenie cewnika z prowadnikiem. Niezbędny sprzęt obejmuje kleszczyki rozdzielcze z tępym końcem, strzykawkę z lubrykantem solfizologicznym oraz worek do drenażu moczu w układzie zamkniętym. Aby uzyskać najlepszą widoczność zewnętrznego ujścia cewki moczowej podczas cewnikowania, mini piga umieszcza się na plecach, stosując podparcie w odcinku lędźwiowym.Podczas gdy asystent odciąga tylne kończyny w kierunku głowowym, zewnętrzny otwór cewki moczowej u samicy znajduje się w dnie pochwy, w odległości około jednej trzeciej do połowy drogi do szyjki macicy. Jednak ze względu na to, że zwierzę znajduje się w pozycji grzbietowej, położenie otworu cewki będzie wydawać się odwrócone. Cewnik jest prowadzony za pomocą pęsety z tępymi końcami, tak aby końcówka cewnika stanowiła przedłużenie pęsety.Ostrożnie wprowadź cewnik do ujścia cewki moczowej. Cewka moczowa jest podatna na urazy w przypadku zastosowania zbyt dużej siły podczas cewnikowania, jednak początkowo może być wyczuwalny lekki opór, aż cewnik przejdzie przez zewnętrzny zwieracz cewki moczowej. Jeśli problem ten będzie się utrzymywał, może to świadczyć o niewystarczającym stopniu sedacji zwierzęcia.Należy odczekać chwilę, aż znieczulenie zacznie działać. Gdy cewnik dotrze do pęcherza, należy wyjąć prowadnik, co spowoduje wypływ moczu. Należy napompować balonik solą fizjologiczną zgodnie ze specyfikacją producenta i delikatnie wycofać cewnik, aż balonik zatrzyma się na szyjce pęcherza.Podłączyć worek do drenażu moczu w systemie zamkniętym, a cewnik przykleić taśmą do ogona, aby uniknąć jego przypadkowego przesunięcia. Przy zachowaniu odpowiedniego przeszkolenia i doświadczenia w obchodzeniu się ze zwierzętami, cewnikowanie pęcherza przez cewkę moczową można przeprowadzić bez większych trudności. Ten minimalnie inwazyjny zabieg pozwala zapobiec zanieczyszczeniu delikatnego sprzętu medycznego oraz bolesnemu rozciągnięciu pęcherza, co mogłoby zaszkodzić zwierzęciu i wpłynąć na przebieg eksperymentu ze względu na zwiększony napięcie nerwu błędnego i zmianę parametrów fizjologicznych.Kaniulacja tętnicza i żylna jest przydatna do wielokrotnego pobierania próbek krwi oraz monitorowania różnych parametrów fizjologicznych. Podczas wykonywania kaniulacji naczyń w badaniach przeżywalności należy stosować rygorystyczną technikę aseptyczną, aby uniknąć infekcji. Niezbędny sprzęt obejmuje skalpel, nożyczki chirurgiczne stępowane, pęsetę tkankową, małą pęsetę stępowaną, mały samopodtrzymujący się rozwieracz tkanek, uchwyt igłowy, gaziki chirurgiczne, szew z igłą oraz sól fizjologiczną z heparyną jako płyn do przemywania w celu utrzymania drożności cewnika.Dwie kaniule do żył obwodowych o rozmiarze 18 G, dwie pochwy z jasnym końcem rozmiaru 4 Fr z wprowadzakiem i drutem prowadzącym Seldingera G. Głębokość znieczulenia ocenia się poprzez badanie odruchu bólowego między palcami. Dostęp do tętnicy i żyły udowej wykonuje się z mini świnią ułożoną na plecach, z tylną nogą odciągniętą bocznie.Zidentyfikuj w fałdzie skóry między mięśniem smukłym a krawieckim miejsce, w którym zanika pulsacja powierzchownej części tętnicy odpiszczelowej przyśrodkowej. Wykonaj podłużne powierzchowne nacięcie skóry powyżej tego punktu, aby uniknąć przypadkowego uszkodzenia naczyń tętnicy odpiszczelowej przyśrodkowej. Użyj nożyczek z tępym końcem, aby rozdzielić leżącą poniżej tkankę podskórną.Powięź mięśnia krawieckiego i smukłego przecina się kranialnie względem miejsca wniknięcia naczyń saphenous przyśrodkowych. Najpierw za pomocą małej pęsety chirurgicznej z tępym końcem, a następnie palcami, rozsuwa się dwie grupy mięśniowe przy użyciu małego samopodtrzymującego się rozwieraka do tkanek, uważając, aby nie uszkodzić nerwu udowego i naczyń; tętnicę izoluje się na długości około jeden do dwóch centymetrów. Stosując rozcięcie tępe, należy obrócić ściętą igłę typu venflon tak, aby światło igły było skierowane ku górze.Lekko wygnij igłę, aby łatwiej dopasowała się do krzywizny naczynia. Pamiętaj, aby sprawdzić, czy igła wciąż może swobodnie poruszać się w przód i w tył. Tętnica zostaje nakłuta.Igłę wycofano, a prowadnicę Seldingera wprowadzono przez kaniulę typu venflon. Należy usunąć kaniulę venflon, delikatnie uciskając tętnicę, aby zapewnić stabilnąy położenie prowadnika. Pochwę wraz z wprowadnikiem wsuwa się po prowadniku i przesuwa do pożądanego miejsca, po czym wprowadnik oraz prowadnik zostają usunięte.Żyła udowa znajduje się nieco poniżej i przyśrodkowo w stosunku do tętnicy. Po wyizolowaniu żyły za pomocą rozdzielania tępego, przeprowadza się kaniulację żyły zgodnie z opisem zastosowanym wcześniej dla tętnicy. Aby zweryfikować, czy zarówno tętnica, jak i żyła zostały prawidłowo ocatezowane, należy pobrać krew z obu pochewek i porównać kolor próbek.Przy każdym pobieraniu próbki krwi należy pamiętać o późniejszym przemyciu cewników roztworem soli fizjologicznej z heparyną. W celu zachowania drożności cewników zostają one zabezpieczone, a skóra zamknięta. Za pomocą kilku szwów wokół tętnicy i żyły można umieścić pętlę naczyniową, aby unieruchomić naczynia przed nakłuciem.Pomimo tych zalet, zazwyczaj unikamy tego dodatkowego etapu, ponieważ wymaga on nadmiernej preparacji naczyń i zwiększa ryzyko uszkodzenia gałęzi bocznych i głębokich. Niniejszy materiał wideo demonstruje sposób kaniulacji naczyń udowych. Kaniulacja naczyń udowych jest preferowana w stosunku do kaniulacji naczyń szyjnych ze względu na łatwość dostępu.Podczas przeprowadzania eksperymentów obejmujących stereotaksyczną chirurgię neurologiczną w ramie oraz obrazowanie mózgu, perfuzja przezsercowa jest najskuteczniejszą metodą fiksacji i zapewnia najlepsze wyniki. Podczas przygotowywania organów mini pig do badań histologicznych i histochemicznych, do przeprowadzenia procedury niezbędny jest następujący sprzęt. System perfuzyjny, odpowiednie płyny perfuzyjne, kaniula do dożylnego podawania, strzykawka, pentobarbital, skalpel, tępym końcem, nożyczki chirurgiczne, kleszcze do kości oraz dwie duże kleszczyki samozaciskowe, z których co najmniej jeden musi mieć zakrzywiony czubek.Samozaciskający retraktor mostka nie jest absolutnie niezbędny, ale znacznie ułatwia procedurę. Perfuzja transsercowa musi być przeprowadzona w dobrze wentylowanym pomieszczeniu z wydajnym systemem odciągu oparów oraz zapleczem umożliwiającym zbieranie obfitych ilości płynów i krwi w celu ich późniejszej bezpiecznej utylizacji. Po wstrzyknięciu śmiertelnej dawki pentobarbitalu należy sprawdzić odruch bólowy z przestrzeni międzycyfrowych.Najlepszy dostęp do serca i aorty zapewnia mediana sternotomia. Wykonaj głębokie podłużne nacięcie skóry, rozciągając się od manubrium do wyrostka mieczykowatego mostka. Uzyskaj dostęp do jamy klatki piersiowej, wykonując niewielkie nacięcie w przeponie tuż poniżej wyrostka mieczykowatego.Wprowadź nożyce do kości do jamy klatki piersiowej i przeciąć mostek wzdłuż jego osi; podczas wykonywania tej procedury należy zachować szczególną ostrożność, ponieważ serce może być w niektórych miejscach przylegać do wewnętrznej strony mostka. Po rozcięciu mostka umieść samozatrzaskowy rozwieracz mostka i otwórz jamę klatki piersiowej. Jeśli jest ona wciąż nienaruszona, wykonaj niewielkie nacięcie osierdzia w okolicy wierzchołka serca, a następnie palcami otwórz worek osierdziowy. Zidentyfikuj lewą komorę, prawy przedsionek oraz aortę.Wraz z żyłą główną górną, wykonaj małe powierzchowne nacięcie w pobliżu wierzchołka serca i uzyskaj dostęp do lewej komory, przebijając mięsień sercowy narzędziem z tępym końcem. Wprowadź kaniulę perfuzyjną do lewej komory i przesuń końcówkę kaniuli kranialnie do aorty. Gdy kaniula będzie wyczuwalna między drugim a trzecim palcem w obrębie aorty, zaciśnij kaniulę w tej pozycji.Trzymając zakrzywioną pęsetę, wykonaj nacięcie prawego przedsionka i rozpocznij wstrzykiwanie utrwalacza przez kaniulę perfuzyjną. Można wyczuć przepływ perfuzatu w aorcie, a krew będzie wypływać przez naciętego prawego przedsionka w miarę kontynuowania przepływu perfuzatu do naczyń mini pig. Zauważ, jak perfuzja systemiczna paraformaldehydem indukuje hiperekstensję kończyn i drżenia powierzchownych mięśni w wyniku sieciowania nerwów i mięśni przez aldehyd.Podczas korzystania z systemu perfuzji zasilanego sprężonym powietrzem należy pamiętać o usunięciu kaniuli lub zaklampowaniu przezroczystej rurki silikonowej przed opróżnieniem kanistra, aby zapobiec przedostaniu się powietrza do układu naczyniowego. W niniejszym filmie stosujemy system perfuzji zasilany sprężonym powietrzem zamiast grawitacyjnego. Zaletą systemów wykorzystujących sprężone powietrze jest to, że wywierane ciśnienie hydrostatyczne pozostaje stałe podczas całego procesu, co w efekcie zapewnia optymalną perfuzję narządu.

basic-surgical-techniques-gttingen-minipig-intubation-bladder

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Podstawowe Techniki Chirurgiczne u Miniświnki Göttingen: Intubacja, Cewnikowanie Pęcherza, Cewnikowane Naczyń Udkowych i Perfusja Przez Przegrodę Serca

Opisano metodę zasiewania autologicznymi komórkami biomateriałów tytanowych mających kontakt z krwią oraz testowania ich biokompatybilności. Metoda ta wykorzystuje komórki progenitorowe śródbłonka oraz rurki tytanowe, zasiewane na kilka minut przed chirurgiczną implantacją do żył głównych świni. Technika ta może zostać dostosowana do wielu innych implantowalnych urządzeń biomedycznych.

Technologia zasiewiania autologicznych komórek progenitorowych śródbłonka oraz badanie biokompatybilności urządzeń sercowo-naczyniowych w modelu dużych zwierząt

Film przedstawia procedurę uzyskiwania dostępu naczyniowego u znieczulonej świni pod kontrolą ultrasonograficzną. Po zdezynfekowaniu miejsca i podaniu znieczulenia miejscowego za pomocą sondy ultradźwiękowej uwidacznia się naczynia krwionośne. Pod kontrolą ultrasonograficzną igłę wprowadza się do światła tętnicy, prowadnik tworzy ścieżkę, a następnie wprowadza się osłonkę i przepłukuje antykoagulantem. Na koniec podłączany jest przewód ciśnieniowy, a osłonka jest zabezpieczona szwami, aby...

Procedura dostępu naczyniowego pod kontrolą USG u znieczulonej świni

Powtarzające się płukanie płuc u znieczulonych świń powoduje uszkodzenie płuc przypominające główne aspekty zespołu ostrej niewydolności oddechowej u ludzi (ARDS). W tym celu płuca są wielokrotnie przepłukiwane 0,9% solą fizjologiczną w temperaturze 37 °C. Celem protokołu jest powtarzalne łagodzenie wymiany gazowej i hemodynamiki do badań w ARDS.

Niedobór środków powierzchniowo czynnych wywołany płukaniem u świń jako model zespołu ostrej niewydolności oddechowej (ARDS)

Wykorzystanie modelu prosiąt do badania neurotoksyczności rozwojowej wywołanej znieczuleniem (AIDN): podejście neurologiczne translacyjne

Przedstawiamy protokół tworzenia dysfunkcji prawej komory u świni poprzez indukowanie ARDS. Wykazano inwazyjne monitorowanie rzutu serca lewej i prawej komory za pomocą sond przepływu wokół aorty i tętnicy płucnej, a także pomiary ciśnienia krwi w aorcie i tętnicy płucnej.

Inwazyjne monitorowanie hemodynamiczne hemodynamiki aorty i tętnic płucnych w dużym modelu zwierzęcym ARDS

Protokół jest opisany dla perfuzji in situ dolnej części ciała myszy, w tym pęcherza, prostaty, narządów płciowych, kości, mięśni i skóry stóp.

Ustalanie in situ perfuzji w obiegu zamkniętym dolnych narządów jamy brzusznej i kończyn tylnych u myszy

Współczynnik filtracji kłębuszkowej (GFR) jest idealnym markerem do oceny funkcji nerek. Jednak standardowa metoda pomiaru polegająca na wstrzykiwaniu inuliny z seryjną analizą krwi i moczu jest niepraktyczna. W artykule przedstawiono praktyczną metodę transdermalnego pomiaru GFR u prosiąt.

Transdermalny pomiar szybkości filtracji kłębuszkowej u prosiąt wentylowanych mechanicznie

W niniejszym badaniu zaproponowano przedkliniczny ortotopowy model przeszczepu serca u miniaturowych świń Bama, wykorzystujący technikę dwuprzedsionkową. Model ma zastosowanie w immunologii transplantacyjnej, ocenie leków i optymalizacji technik chirurgicznych, zapewniając wsparcie dla klinicznych zastosowań transplantacji serca.

Przedkliniczny model ortotopowego przeszczepienia serca u miniaturowych świń z Bama z wykorzystaniem techniki dwuprzedsionkowej

Niniejsze badanie przedstawia metodę chirurgiczną interwencji w strukturze zastawki aortalnej podzastawkowej za pomocą ukierunkowanego cięcia tkanki przez przejście przez aortę u normalnych świń Bama.

Metoda chirurgiczna interwencji w strukturze podzastawkowej przez dostęp przez aortalny u normalnych świń rasy Bama

Mapowanie naczyniowe łożysk bliźniąt jednojajowych (MC) po porodzie umożliwia szczegółowe wykazanie połączeń naczyniowych między układami krążenia bliźniąt. Uważa się, że niezrównoważenie tych połączeń odgrywa kluczową rolę w rozwoju powikłań związanych z bliźnięciem MC, w tym zespołu przetoczenia bliźniąt.

Cewnikowanie z wykorzystaniem drutu prowadzącego i wtryskiwanie barwnika do mapowania naczyniowego łożysk w bliзняtach jednołożyskowych

Poznaj podstawowe techniki chirurgiczne u świnki w Getyndze: intubację, cewnikowanie pęcherza i naczyń udowych oraz perfuzję przezsercową. Te metody zwiększają bezpieczeństwo i skuteczność badań biomedycznych.

Podstawowe techniki chirurgiczne u świnki w Getyndze: intubacja, cewnikowanie pęcherza moczowego, cewnikowanie naczynia udowego i perfuzja przezsercowa (Wideo) | JoVE Journal

Podstawowe techniki chirurgiczne u miniorśca göttingenskiego: intubacja, cewzowanie pęcherza moczowego, kaniulacja naczyń udowych oraz perfuzja transkardialna

Przeglądaj więcej filmów