Name: Pobieranie krwi od szczurów przez żyłę odpiszczelową i nakłucie serca (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-08-23T00:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 27 s
Description: Naucz się pobierania krwi od szczurów przez żyłę odpiszczelową i nakłucie serca. Te metody są kluczowe dla badań farmakokinetycznych i pozwalają na minimalizację stresu zwierząt.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Pobieranie krwi u szczurów z żyły szafena oraz poprzez punkcję serca
Uwaga: Wszystkie procedury muszą zostać zatwierdzone przez komisję ds. opieki i wykorzystania zwierząt w Twoim instytucie.
1. Pobranie krwi z żyły odpiszczelnej
<ol>
<li>Procedurę tę przeprowadza się bez znieczulenia i wymaga ona udziału dwóch osób: jednej do unieruchomienia szczura oraz drugiej do pobrania krwi.</li>
<li>Zwiń ręcznik w kształt stożka lub przytrzymaj szczura, używając rękawic do obsługi gryzoni, pozostawiając jedną tylną kończynę odsłoniętą.</li>
<li>Ogól tył nogi trymerem elektrycznym, aż żyła sapanu stanie się widoczna. Ogol obszar wystarczająco duży, aby żadne włosy nie stykały się z miejscem nakłucia. Użyj niewielkiej ilości bezzapachowego balsamu do rąk, aby odsunąć nieogoloną sierść od miejsca nakłucia.</li>
<li>Utwórz punkt ucisku u podstawy nogi, aby żyła sapanu stała się bardziej wypełniona (podobnie jak przy użyciu stazy podczas pobierania krwi od człowieka lub dużego zwierzęcia). Nakłuj żyłę igłą 20G i zbieraj wypływającą krew za pomocą mikrovetty. Delikatne uciskanie nogi pomoże pobrać więcej krwi. Po zebraniu odpowiedniej ilości krwi przyciśnij do miejsca nakłucia czysty kompres, aby zatamować krwawienie.</li>
</ol>
2. Pobranie krwi poprzez punkcję serca
<ol>
<li>Procedura ta wymaga znieczulenia i ma charakter terminalny. Zwierzęta muszą zostać niezwłocznie uśmiercone po zakończeniu punkcji serca.</li>
<li>Przygotuj strzykawkę o pojemności 5 ml z igłą 23G1.</li>
<li>Głęboko znieczul szczura i sprawdź skuteczność znieczulenia, obserwując brak spontanicznych ruchów, spowolniony oddech oraz brak reakcji na bodźce (np. uciśnięcie palca u stopy). Aby zapewnić przedłużone znieczulenie, podczas procedury umieść na nosie szczura korpus strzykawki zawierający nasączony środkiem znieczulającym lotnym ręcznik papierowy.</li>
<li>Ułóż szczura na plecach, głową skierowaną w stronę przeciwną do siebie.</li>
<li>Jeśli jesteś praworęczny, połóż lewy palec wskazujący na poziomie najniższych żeber, nie wywierając nacisku. Serce znajduje się około 1 cm powyżej tego punktu, nieco po prawej stronie.</li>
<li>Trzymając strzykawkę pod kątem 45 stopni, wprowadź igłę pomiędzy dwa żebra i obserwuj, aż do igły dostanie się kropla krwi. Jest to sygnał, że igła znajduje się w sercu. Nie przesuwając strzykawki, pociągnij tłok, aby ją napełnić. Po napełnieniu strzykawki ostrożnie odłącz ją od igły i opróżnij do probówki. Następnie można ponownie połączyć strzykawkę z igłą, aby pobrać więcej krwi. Z szczura o masie 120-180 g powinno być możliwe pobranie 5-10 ml krwi.</li>
<li>Niezwłocznie uśmierć szczura.</li>
</ol>

<ol><li>Van Herck, H., Baumans, V., Brandt, C. J. W. M., Boere, H. A. G., Hesp, A. P. M., Van Lith, H. A., Schurink, M., Beynen, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+sampling+from+the+retro-orbital+plexus%2C+the+saphenous+vein+and+the+tail+vein+in+rats%3A+comparative+effects+on+selected+behavioural+and+blood+variables%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">Blood sampling from the retro-orbital plexus, the saphenous vein and the tail vein in rats: comparative effects on selected behavioural and blood variables.</a> Laboratory Animals. 35, 131-139 (2001).</li>
<li>Luzzi, M., Skoumbourdis, E., Baumans, V., Conte, A., Sherwin, C., Kerwin, A., Lang, T., Morton, D., Barley, J., Moreau, E., Weilenmann, R. F., Reinhardt, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collecting+blood+from+rodents%3A+a+discussion+by+the+laboratory+animal+refinement+and+enrichment+forum%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Technology+and+Welfare%22%5BJournal%5D)">Collecting blood from rodents: a discussion by the laboratory animal refinement and enrichment forum.</a> Animal Technology and Welfare. 4, 99-102 (2005).</li>
<li>Angelow, O., Schroer, R. A., Heft, S., James, V. C., Noble, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+two+methods+of+bleeding+rats%3A+the+venous+plexus+of+the+eye+versus+the+vena+sublingualis%5BTitle%5D)+AND+%22Jounal+of+Applied+Toxicology%22%5BJournal%5D)">A comparison of two methods of bleeding rats: the venous plexus of the eye versus the vena sublingualis.</a> Jounal of Applied Toxicology. 4, 258-260 (2006).</li>
<li>Beeton, C., Wulff, H., Barbaria, J., Clot-Faybesse, O., Pennington, M., Bernard, D., Cahalan, M. D., Chandy, K. G., Beraud, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+blockade+of+T+lymphocyte+K%2B+channels+ameliorates+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%2C+a+model+for+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad%22%5BJournal%5D)">Selective blockade of T lymphocyte K+ channels ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis, a model for multiple sclerosis.</a> Proc. Natl. Acad. , 13942-13947 (2001).</li>
<li>Beeton, C., Pennington, M. W., Wulff, H., Singh, S., Nugent, D., Crossley, G., Khaytin, I., Chen, C. Y., Calabresi, P. A., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+effector+memory+T+cells+with+a+selective+peptide+inhibitor+of+Kv1.3+channels+for+therapy+of+autoimmune+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Targeting effector memory T cells with a selective peptide inhibitor of Kv1.3 channels for therapy of autoimmune diseases.</a> Mol. Pharmacol. , 1369-1381 (2005).</li>
<li>Beeton, C., Wulff, H., Standifer, N. E., Azam, P., Mullen, K. M., Pennington, M. W., Kolski-Andreaco, A., Wei, E., Grino, A., Counts, D. R., Wang, P. H., LeeHealey, C. J., Andrews, B. S., Sankaranarayanan, A., Homerick, D., Roeck, W. W., Tehranzadeh, J., Stanhope, K. L., Zimin, P., Havel, P. J., Griffey, S., Knaus, H. G., Nepom, G. T., Gutman, G. A., Calabresi, P. A., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kv1.3+channels+are+a+therapeutic+target+for+T+cell+mediated+autoimmune+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Kv1.3 channels are a therapeutic target for T cell mediated autoimmune diseases.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. , 17414-17419 (2006).</li>
<li>Beeton, C., Barbaria, J., Devaux, J., Benoliel, A. -M., Gola, M., Sabatier, J. -M., Bernard, D., Crest, M., Beraud, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+blocking+of+voltage-gated+K%2B+channels+treats+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+and+inhibits+T-cell+activation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Selective blocking of voltage-gated K+ channels treats experimental autoimmune encephalomyelitis and inhibits T-cell activation.</a> J. Immunol. , 936-944 (2001).</li>
<li>Devaux, J., Forni, C., Beeton, C., Barbaria, J., Beraud, E., Gola, M., Crest, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelin+basic+protein-reactive+T+cells+induce+conduction+failure+in+vivo+but+not+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Myelin basic protein-reactive T cells induce conduction failure in vivo but not in vitro.</a> Neuroreport. , 317-320 (2003).</li>
<li>Beeton, C., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+and+monitoring+of+adoptive+delayed+type+hypersensitivity+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Induction and monitoring of adoptive delayed type hypersensitivity in rats.</a> Journal of Visualized Experiments. 8, (2007).</li>
</ol>

Pobieranie krwi z żyły sapyrenous (żyły odprzypałkowej) jest wygodnym sposobem na uzyskanie niewielkich ilości krwi bez konieczności stosowania znieczulenia. W przypadku konieczności wielokrotnego pobierania próbek należy sprawdzić obowiązujące regulacje, aby upewnić się, że nie pobrano zbyt dużej ilości krwi od jednego szczura.

Pobieranie krwi poprzez punkcję serca jest wygodną metodą pozyskania dużych ilości krwi, jednak jest to procedura terminalna. Zwierzę musi zostać poddane eutanazji ...

<table><tbody><tr><td>Igła 20G 1/2</td><td>Narzędzie</td><td>BD Biosciences</td><td>305176</td><td>Do nakłucia żyły szafrenowej</td></tr><tr><td>Microvette 300</td><td>Narzędzie</td><td>Sarstedt Ltd</td><td>20.1308.100</td><td>Do pobierania krwi z żyły szafrenowej</td></tr><tr><td>Trymer elektryczny</td><td>Narzędzie</td><td>Braintree Scientific, Inc.</td><td>CLP-32130</td><td></td></tr><tr><td>Igła 23 G 1</td><td>Narzędzie</td><td>BD Biosciences</td><td>305145</td><td>Do punkcji serca</td></tr><tr><td>Plastikowa strzykawka 5 ml, końcówka typu slip</td><td>Narzędzie</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-826-12</td><td>Do punkcji serca</td></tr></tbody></table>

pobieranie krwi u szczurów z żyły saphenous oraz poprzez punkcję serca

Drawing Blood from Rats through the Saphenous Vein and by Cardiac Puncture

Pobieranie krwi od gryzoni jest niezbędne w przypadku wielu badań przeprowadzanych zarówno in vitro, jak i in vivo. Miejsca pobrania krwi u gryzoni są liczne: zatoka zaoczna, żyła szyjna, żyła szczękowa, żyła saphenous, serce. Każda technika ma swoje zalety i wady, a niektóre z nich nie są już zatwierdzone w niektórych krajach (np. pobieranie z zatoki zaocznej w Holandii). Omówienie różnych technik pobierania krwi jest dostępne w literaturze 1-3.
W niniejszym materiale przedstawiamy dwie techniki pobierania krwi od szczurów, z których każda ma swoje specyficzne zastosowania.
Pobieranie krwi z żyły odpiszczelnej, pod warunkiem prawidłowego wykonania, wywołuje minimalny stres u zwierząt i nie wymaga znieczulenia. Technika ta pozwala na wielokrotne pobieranie niewielkich ilości krwi, co jest niezbędne np. w badaniach farmakokinetycznych 4,5, ocenie składu chemicznego osocza lub morfologii krwi 6.
Punkcja serca umożliwia pobranie dużej ilości krwi od jednego zwierzęcia (od szczura o masie 150 g można pobrać do 10 ml krwi). Technika ta jest zatem bardzo użyteczna jako procedura terminalna, gdy pobranie krwi z żyły saphrenous nie zapewniłoby wystarczająco dużej próbki. Stosujemy punkcję serca, gdy potrzebujemy odpowiedniej ilości surowicy od konkretnej szczepu szczurów do hodowli linii limfocytów T in vitro 4-9.

Pobieranie krwi jest niezbędne w wielu badaniach, na przykład w celu analizy profilu farmakokinetycznego związku. W niniejszym materiale demonstrujemy, jak pobierać krew od szczurów, stosując dwie techniki: pobranie krwi z żyły saphrenous lub poprzez punkcję serca.

Pobieranie krwi u szczurów z żyły saphenous oraz poprzez punkcję serca

Pobieranie krwi od gryzoni jest niezbędne w przypadku wielu badań zarówno in vitro, jak i in vivo. Miejsca poboru krwi u gryzoni są liczne: ...

Witajcie, jestem Christine Beaton. Pracuję jako asystentka badawcza w laboratorium George'a Chen w Katedrze Fizjologii i Biofizyki na Uniwersytecie Kalifornijskim w Irvine. W filmie, który zaraz obejrzycie, pomogła mi Adriana Garcia, doktorantka pracująca w naszym laboratorium.Przedstawię dwie techniki pobierania krwi u szczurów. Pierwsza technika, którą zaprezentujemy, to pobieranie krwi z żyły saphynous. Jest to bardzo użyteczna metoda, jeśli chcą Państwo pobrać niewielkie ilości krwi od szczura bez stosowania znieczulenia.Na przykład w przypadku badania farmakokinetycznego, które wymaga pobierania niewielkich ilości krwi w regularnych odstępach czasu. Drugą techniką, którą zaprezentujemy, jest pobieranie krwi poprzez punkcję serca. Jest to metoda terminalna, co oznacza, że szczur musi zostać uśmiercony po zakończeniu poboru krwi.Zaletą tej techniki jest możliwość pobrania znacznie większych ilości krwi, sięgających kilku mililitrów. Po przygotowaniu obszaru nakładamy zwykły balsam do skóry, głównie po to, aby zapobiec rozprzestrzenianiu się sierści, która mogłaby dostać się do probówki i spowodować koagulację krwi. Następnie kciukiem wywieram ucisk, aby żyła nieco wystąpiła, a Adriana przystępuje do nakłucia; zdarza się, że żyła ucieka i nie udaje się jej trafić, w takim przypadku wykonujemy kolejne nakłucie.Po nakłuciu żyły krople krwi wypływają w regularnych odstępach, więc zbieramy je za pomocą mikropipety i powtarzamy tę czynność, aż uzyskamy ilość krwi wystarczającą do analizy lub do momentu, gdy krew przestanie wypływać. W zależności od szczura oraz jakości nakłucia, ilość krwi pozyskanej z mózgu może się różnić. Aby ułatwić wypływ krwi, wykonujemy masaż kończyny dolnej.Jest to ilość krwi, którą zazwyczaj otrzymujemy podczas pobrania krwi z żyły obwodowej. Teraz jestem gotowy pokazać Państwu, jak przeprowadzić pobranie. Do tej procedury będziemy potrzebować jedynie jednej plastikowej strzykawki 5 ml z tłokiem oraz igły o rozmiarze 23G.Szczur został głęboko znarkotyzowany alane, a następnie założyłem maskę, która stanowi strzykawkę z chusteczką Kim wipe nasączoną alane, aby upewnić się, że zwierzę się nie obudzi. Ponieważ jestem praworęczny, palec wskazujący lewej ręki przykładam na poziomie splotu słonecznego, aby ustabilizować pozycję. Następnie, aby zlokalizować serce, przesuwam się około 1 cm wyżej i nieco w prawo, wprowadzając strzykawkę pod kątem około 45 stopni.Jeśli znajduję się w sercu, powinienem mieć stały dopływ krwi. Jeśli nie jestem w sercu, mogę zagłębić się bardziej lub przesunąć bliżej powierzchni. Stosując tę technikę, powinienem być w stanie pobrać kilka ml krwi od jednego danego szczura.Oczywiście, w momencie zatrzymania akcji serca następuje jednoczesne zatrzymanie przepływu krwi. Dlatego szczur musi znajdować się w głębokiej anestezji, ale nie chcemy, aby zwierzę obumarło zbyt szybko. Po napełnieniu strzykawki odłączyłem ją od igły, przelałem zawartość do probówki i powoli ją opuściłem, aby uniknąć hemolizy, ponieważ chcę móc później wykorzystać surowicę do hodowli tkankowych lub do rozcieńczania leków do iniekcji.Ponieważ pozostawiłem igłę w miejscu, mogę spróbować sprawdzić, czy jestem w stanie pobrać więcej krwi z tej dłoni. Ponownie, jeśli przepływ jest bardzo mały, tak jak teraz, będę przesuwać igłę w górę i w dół, aby sprawdzić, czy uda mi się znaleźć miejsce, z którego można pobrać więcej krwi. Oczywiście, po znalezieniu odpowiedniego miejsca nie należy przesuwać silnika komórkowego.W ten sposób pokazaliśmy, jak pobierać krew od szczurów, zarówno z żyły ogonowej, jak i poprzez punkcję serca. Powodzenia w przeprowadzaniu eksperymentów.

drawing-blood-from-rats-through-saphenous-vein-cardiac

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Pobieranie krwi od szczurów przez żyłę odpiszczelową i nakłucie serca

Przewlekła kanulacja naczyń krwionośnych u szczura jest często wymagana w celu podawania substancji, pobierania próbek krwi w określonym czasie lub bezpośredniego pomiaru ciśnienia tętniczego u zwierząt świadomych. Przedstawiona zostanie technika kanulacji tętnicy udowej szczura oraz odpowiadające jej pomiary ciśnienia krwi u świadomego zwierzęcia.

Kaniulacja tętnicy i żyły udowej w celu pobierania krwi, podawania leków oraz pomiaru ciśnienia tętniczego i częstości akcji serca u zwierząt świadomych

Próbki krwi są przydatne do oceny biomarkerów stanów fizjologicznych lub chorób in vivo. Tutaj opisujemy metodologię pobierania krwi z bocznej żyły ogonowej u szczura. Ta metoda zapewnia szybkie pobieranie próbek przy minimalnym bólu i inwazyjności.

Pobieranie próbek krwi z bocznej żyły ogonowej szczura

Tutaj opisujemy prostą metodę pobierania próbek krwi z żyły ogonowej u szczurów nieznieczulonych za pomocą systemu probówek do ekstrakcji próżniowej. Metoda ta zmniejsza ryzyko bezpośredniego kontaktu z krwią i upraszcza pobieranie wielu próbek z jednego nakłucia żyły.

Wielokrotne pobieranie krwi z żyły ogonowej szczurów nieznieczulonych za pomocą próżniowego systemu pobierania krwi

Tutaj prezentujemy protokół pobierania próbek krwi z żyły podobojczykowej szczura.

Nakłucie żyły podobojczykowej jako alternatywna metoda pobierania próbki krwi u szczurów

Szczegółowe techniki mikrochirurgiczne zostały zademonstrowane w celu stworzenia długoterminowego modelu kaniulacji żyły szyjnej dla sekwencyjnego pobierania krwi u tego samego zwierzęcia. Parametry fizjologiczne i hematologiczne były monitorowane w fazie rekonwalescencji szczura. Model ten został zastosowany do badania farmakokinetyki polifenoli podawanych doustnie bez wywoływania stresu u zwierząt.

Umiejętności mikrochirurgiczne w zakresie zakładania stałej kaniulacji żyły szyjnej u szczurów w celu seryjnego pobierania krwi z leku podawanego doustnie

Obecny protokół opisuje prostą i efektywną metodę dynamicznego pobierania krwi z serca szczura w czasie rzeczywistym za pomocą techniki mikrodializy.

Dynamiczna ciągła ekstrakcja krwi z serca szczura za pomocą nieinwazyjnej techniki mikrodializy

Tutaj prezentujemy protokół oferujący szybkie, łatwe i niezawodne alternatywy pobierania krwi dla modelu szczurzego. Opisujemy trzy różne metody pobierania krwi w zależności od kontekstu: nakłucie żyły ogonowej w znieczuleniu lub na przytomnym zwierzęciu oraz nakłucie żyły grzbietowej prącia w znieczuleniu.

Zmodyfikowane nakłucie żyły ogonowej i żyły prącia do pobierania krwi w modelu szczurzym

Tutaj prezentujemy kombinację skutecznych metod ograniczania szczurów i nakłuwania żył podobojczykowych, które umożliwiają szybkie, bezpieczne i wielokrotne pobieranie krwi u szczurów bez znieczulenia.

Pobieranie próbek krwi z żyły podobojczykowej u przytomnych szczurów

Nakłucie serca podobojczykowego to prosta i niezawodna metoda pobierania krwi terminalnej u myszy. Jest łatwy w obsłudze i zapewnia próbki o wysokiej czystości.

Pobieranie krwi sercowej przez nakłucie podobojczykowe u myszy

Komórki natural killer stanowią niewielką populację limfocytów. W niniejszym materiale pokazujemy, jak izolować te komórki z ludzkiej krwi metodą selekcji negatywnej, wykorzystując zestaw firmy StemCell Technologies. Uzyskane komórki są żywe i nieoznaczone przeciwciałami, w związku z czym nadają się do zastosowania w wielu procedurach.

Wzbogacanie komórek NK z ludzkiej krwi za pomocą zestawu RosetteSep firmy StemCell Technologies

Naucz się pobierania krwi od szczurów przez żyłę odpiszczelową i nakłucie serca. Te metody są kluczowe dla badań farmakokinetycznych i pozwalają na minimalizację stresu zwierząt.

Pobieranie krwi u szczurów z żyły saphenous oraz poprzez punkcję serca

Przeglądaj więcej filmów